HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用

目的：观察人上皮细胞生长因子受体2（HER2）靶向重组的活性截短型Bid（tBid）融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法：将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素（PE）的转膜结构域基因（PEII）和tbid基因连接，构建成immuno—tbid（e23 sFv—PEII-tbid）基因，将其克隆入真核表达载体pCMV中，转染SOSP-9607细胞，间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化，通过AnnexinV染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果：转染SOSP-9607细胞后，间接免疫荧光染色检测出tBid的表达．SOSP-9607细胞出现明显的固缩，核浓缩等凋亡特征。AnnexinV染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞，凋亡率为42％，对照组细胞仅6％，表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻，提示重组immuno—tbid基因表达后有促凋亡作用。结论：重组immuno—tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达，并诱导其细胞凋亡。     

Paclitaxel-induced apoptosis in osteosarcoma cell line U-2 OS

目的：研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系U2-OS的生长抑制及凋亡诱导作用。方法：将不同浓度的紫杉醇作用于成骨肉瘤细胞系U2-OS,应用形态学观察、台盼蓝染色、流式细胞术、电镜、原位末端标记（TUNEL）等方法,检测其诱导骨肉瘤细胞凋亡的时间效应和剂量效应,并与其他化疗药物进行对比。结果：紫杉醇对U2-OS细胞的生长抑制及凋亡诱导作用具有明显的时间依赖性和剂量依赖性。细胞周期分析出现G2/M期阻滞和明显的凋亡峰。形态学检查示核碎裂及染色体凝集的凋亡特征,出现大量多核细胞。经其他化疗药物诱导的U2-OS细胞未出现多核现象。免疫组织化学检测示紫杉醇诱导后细胞核中有广泛DNA断裂。结论：紫杉醇通过抑制骨肉瘤细胞有丝分裂发挥抑制细胞生长及促进细胞凋亡的作用,该作用具有时间依赖和剂量依赖性。     

邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用及机理研究

目的:研究邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素(ODE)抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用及机理.方法:采用MTT比色法测定体外抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态学;采用激光共聚焦显微镜测定SOSP-9607细胞内[Ca2 ],[Mg2 ], pH值和线粒体膜电位(MMP)的荧光强度;免疫细胞化学技术检测细胞内Bc1-2和Bax表达.结果:ODE时间、浓度依赖性地抑制SOSP-9607细胞生长,诱导细胞凋亡具有典型的凋亡形态特征如细胞膜表面微绒毛消失、核固缩、核碎裂等;剂量依赖性地增加SOSP-9607细胞内Ca2 , Mg2 浓度而降低细胞内pH值和线粒体膜电位;使SOSP-9607细胞内Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达增加.结论:邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素在体外实验中能明显抑制骨肉瘤SOSP-9607细胞生长,其作用机制可能与改变细胞内环境稳态及Bcl-2和Bax蛋白表达而诱导细胞凋亡有关.     

多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制作用

目的:研究多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制作用。方法:应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法检测和观察分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制。结果:多西紫杉醇和顺铂分别及联合用药,在一定范围内均对骨肉瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,并且联合用药组作用明显强于单独用药组(抑制率≥59.34%,P<0.05;凋亡率18.31%,P<0.01)。结论:多西紫杉醇和顺铂联合用药比单独用药对骨肉瘤细胞株增殖抑制作用更强。     

紫杉醇对HEC-1-B细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的:探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞凋亡的诱导作用. 方法:体外培养HEC-1-B细胞,用浓度2, 4, 8, 16, 20 nmol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳;消化HEC-1-B细胞并经碘化丙锭(PI)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HEC-1-B细胞进行形态学分析. 结果:体外培养的HEC-1-B细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于8 nmol/L紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7%;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变. 结论:人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对HEC-1-B细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的.     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究FasL在此过程中的作用．方法：流感病毒以20m．o．i．感染Hela、Raji、SMMC-7721和SPC-A-1等肿瘤细胞,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带,PI染色流式细胞仪检测细胞DNA含量,Annexin-V FITC／PI流式细胞仪进行凋亡定量分析,并用生物素-亲和素ELISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中sFasL浓度的变化。结果：经流感病毒诱导后,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变,细胞DNA电泳出现梯状条带,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高,且显示一定的时间效应;在上述过程中,细胞培养上清中sFasL浓度有明显增高。结论：流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡,其发生机制可能与FasL表达增加有关。     

bFGF对骨肉瘤细胞系U2-os细胞的促凋亡作用

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨肉瘤细胞系U2-os细胞增殖及生存的影响,探讨bFGF在肿瘤细胞发生发展中的作用。方法:以bFGF处理U2-os细胞,采用台盼蓝排除检测法及MTT法检测细胞存活及增殖情况;用Annexin V-EGFP/PI双染流式细胞术及DNA梯状带检测细胞凋亡情况。结果:bFGF呈浓度、时间依赖性降低U2-os细胞活力并诱导细胞凋亡。结论:bFGF可以诱导U2-os细胞发生凋亡,生长因子在细胞的生长调控方面具有双重作用。     

NS398诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡及对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS398抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖及诱导其凋亡的效应和机制。方法MTT比色法观察NS398的细胞毒性作用及其浓度依赖性；透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成。流式细胞仪检测细胞凋亡率及与NS398作用时间的关系；Western blot测定bcl-2蛋白表达。结果不同浓度（0.1～100μmol／L）NS398均可使细胞生长受到抑制；电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成；流式细胞术检测证实细胞凋亡率与NS398作用时间呈明显相关。Western blot检测显示随着NS398作用时间延长，可不同程度地降低bcl-2蛋白表达。结论NS398能抑制人MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控bcl-2蛋白表达有关。     

NIDRAN诱导脑胶质瘤细胞凋亡

目的　探讨宁得朗 (NIDRAN)对人脑胶质瘤细胞凋亡的诱导作用 .方法　用含 10 μmol· L- 1 NIDRAN的 RPMI16 40培养液 ,作用于 SHG44细胞 3h,收集细胞用于形态学检测 ,DNA电泳及流式细胞分析 .结果　 1形态学观察 :大部分瘤细胞体积缩小 ,核固缩 ,染色质浓缩在核模边缘呈月牙状聚集 ,有凋亡小体形成 . 2 DNA电泳 :在 80 0 bp以下可见明显的 DNA梯状带 . 3流式细胞分析 :出现典型的细胞凋亡峰 ,凋亡细胞占细胞总数的 32 .1% .结论　 NIDRAN可诱导人胶质瘤细胞发生凋亡 .     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

紫杉醇诱导食管癌细胞凋亡

目的：研究紫杉醇对食管细胞生长抑制及诱导凋亡的作用。方法：应用ＭＴＴ分析法，形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Ｅｃａ１０９进行了检测和观察。     

Effect of NS398 on inducing apoptosis and down-regulating Bcl-2 protein in human osteosarcoma cell MG-63 line

Objective： This study investigated the effect of NS398 on anti-proliferation and the mechanism of inducing apoptosis of human osteosarcoma cell MG-63 line in vitro. Methods： Growth suppression was detected by MTT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy （TEM） and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rates were quantified by flow cytometry （FCM）. And Bcl-2 protein level were detected by Western Blotting assay. Results： Different concentration NS398 inhibited the cell growth. Through TEM and DNA electrophoresis, the special morphological changes were observed after 24, 48 and 72 h treatment with NS398. The apoptotic rates of MG-63 cells treated with NS398 were respectively, significantly higher than that of the control group（ P 〈0.01 ）. Western blot assay showed that NS398 reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion： NS398 suppressed the proliferation of human osteosarcoma cell MG-63 line and induced apoptosis. The mechanism may be associated with down-regulation expression level of bcl-2 protein.     

鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS增殖及PCNA基因表达的影响

【目的】研究鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞增殖及PCNA表达影响。【方法】培养HOS细胞,实验随机分为正常对照组、鬼臼毒素衍生物ZM组和阳性对照组。用MTT法检测鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞的生长抑制作用,DNA Ladder凝胶电泳法分析鬼臼毒素衍生物ZM的诱导凋亡作用,RT-PCR检测PCNA基因的表达。【结果】与正常对照组相比,鬼臼毒素衍生物ZM能明显抑制HOS细胞的生长,且与浓度、时间呈依赖性,其IC50(48 h)为(1.32±0.3)μmol/L;鬼臼毒素衍生物ZM处理HOS细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带,RT-PCR结果显示PCNA表达显著下调。【结论】鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS有明显的生长抑制作用,该作用可能与诱导凋亡和PCNA基因的表达下调有关。     

不同转移潜能骨肉瘤细胞株的建立与生物学性质的分析

目的:获得不同转移潜能的骨肉瘤细胞株. 方法:从我室建立的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中通过有限稀释法获得不同的单细胞克隆,经过侵袭试验初筛后获得5株转移潜能不同的细胞株,再通过裸鼠体内连续传代法筛选出具有不同转移能力的细胞系.并利用细胞生长曲线测定,软琼脂克隆形成试验,流式细胞仪,裸鼠体内自发转移试验分析了他们的生物学性质. 结果:获得两株转移潜能不同的骨肉瘤细胞株.其中,H9为具有低转移潜能的骨肉瘤细胞株, E10为具有高转移潜能的骨肉瘤细胞株,其染色体众数分布特征与母系SOSP-9607基本相似,保持人类染色体核型;所至皮下移植瘤及肺转移瘤均符合人成骨肉瘤组织学特征,它们具有差异明显的体外生长速度,软琼脂克隆形成率H9(22±5)明显高于E10(98±12) ,裸鼠体内试验性自发肺转移率分别为10%和100%,流式细胞仪测定H9和E10的S期细胞分别为16.8%和21.0%. 结论:这两株细胞株来源于同一亲本,他们之间的差异集中在转移表型上,为今后利用分子生物学的方法筛选出转移相关基因从而为成骨肉瘤的转移机制及临床研究奠定基础.     

紫杉醇抗人脑多形性胶质母细胞瘤BT325株实验研究

目的：通过体外实验探讨紫杉醇有否抗人脑恶性胶质瘤作用。方法：首先用ＭＴＴ法检测紫杉醇对胶质母细胞瘤ＢＴ３２５株具有明显的细胞毒作用。进一步通过形态学观察及流式细胞仪来证实紫杉醇可诱导ＢＴ３２５细胞凋亡。结果：ＢＴ３２５细胞在紫杉醇作用下,细胞生长被明显抑制;细胞分裂阻滞在Ｇ０／Ｇ１期,出现凋亡峰;具有典型的凋亡细胞形态学特征。结论：紫杉醇具有明显的抗人脑胶质瘤作用,其作用机制与诱导细胞凋亡有关。     

抗DR5单克隆抗体对NCL-H446的致凋亡作用

目的:探讨抗DR5单克隆抗体(mDRA-6)对小细胞肺癌NCL-H446的凋亡作用。方法:NCL-H446细胞常规培养24 h后分为对照组、抗DR5单克隆抗体(mDRA-6)及mDRA-6+顺铂处理组。以细胞形态学改变、流式细胞仪和DNA凝胶电泳分析为凋亡观察指标。结果:经mDRA-6处理的NCL-H446细胞出现核固缩、染色质边缘化和凋亡小体形成;琼脂糖凝胶电泳呈现细胞凋亡特征性DNA梯状带;细胞凋亡发生率与抗DR5单克隆抗体(mDRA-6)剂量及细胞表面DR5的表达呈相关性。结论:mDRA-6对小细胞肺癌NCL-H446的杀伤作用主要通过诱导凋亡实现的,细胞表面DR5受体表达上调可促进凋亡作用。     

2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖诱导人结肠癌SW1116凋亡的作用

目的：研究D-葡萄糖衍生物2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖（COPADG）对人结肠癌SW1116细胞生长增殖的影响,进而探讨COPADG诱导SW1116细胞凋亡的作用。方法：用不同浓度的COPADG处理SW1116,采用MTT法测定其对SW1116细胞生长增殖的抑制作用,通过DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察其对SW1116细胞诱导凋亡的效应。结果：COPADG能抑制SW1116细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;COPADG能诱导结肠癌SW1116细胞凋亡;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰。结论：COPADG在体外可显著诱导结肠癌SW1116细胞凋亡。     

克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒研究

目的克隆BLCAP基因并构建原核表达质粒.方法利用RT-PCR方法,从骨肉瘤细胞SOSP-9607总RNA中克隆BLCAP基因ORF,通过酶切、连接、转化等手段,获得重组原核细胞表达质粒.结果成功克隆BLCAP基因ORF并构建重组质粒pGEX-4T-BLCAP.结论克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒,为分析蛋白特性、研究基因功能创造了条件.     

化癥胶囊方剂诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的：明确化癥胶囊方剂对前列腺癌细胞PC-3的诱导凋亡作用。方法：PC-3细胞与适宜浓度化癥胶囊方剂共同孵育于1640培养液中,采用一系列细胞凋亡定性、定量检测方法研究化癥胶囊方剂诱导的PC-3细胞凋亡,如行DNA凝胶电泳、流式细胞仪DNA含量分析以检测凋亡。结果：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞发生凋亡特征性的生化改变,如DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析显示,化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞染色体DNA片段化,形成凋亡特征性的“DNA梯状(DNA ladder)”电泳图谱;流式细胞仪检测可见有低G1期细胞出现。在试验范围内凋亡比率与药物浓度呈一定相关。结论：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞凋亡,其作用与药物浓度呈一定相关性。