四株钩端螺旋体外膜单克隆抗体的建立、鉴定及对外膜蛋白抗原的分析

作者应用杂交瘤技术获得了四株抗黄疸出血群赖型017株钩体外膜的单克隆抗体。经免疫扩散法鉴定表明,其抗体1A7E7为IgG_2,2F9D4、1A7H12和2G3H5为IgG_1。用免疫印迹分析发现,1A7E7特异地识别017株钩体外膜42kd蛋白区带,2F9D4识别三株致病性钩体外膜42kd的蛋白区带,而2G3H5和1A7H12特异地识别三株致病性钩体外膜的31kd蛋白区带。进一步研究致病性钩体所具有的蛋白质抗原分子的性质,对于寻找特异性诊断和保护性抗原会提供一定的线索。     

问号状钩端螺旋体外膜单克隆抗体凝集反应特性的研究

作者用黄疸出血群赖型钩体外膜免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP 2/0骨髓癌细胞融合,筛选出三株抗问号状钩体外膜 McAb。显凝试验(MAT)表明 McAb的E4B11C9株与选用的黄疸出血群的13型钩体(占选用的100％)均发生凝集反应,而选用的其他18群钩体(占选用的100％)和非致病性Patoc Ⅰ株钩体,伊利尼细螺旋体均为MAT阴性,MAT效价低于1:25。从而证明 E4B11C9 McAb具有黄疸出血群钩体的群特异性。     

上期试题参考答案

1 B　　 2 B　　 3 D　　 4 D　　 5 D　　 6 C　　 7 B　　 8 B　　 9 D　　 10 C11 B 12 D 13 A 14 B 15 D 16 B 17 A 18 D 19 C 2 0 C2 1 D 2 2 A 2 3 A 2 4 C 2 5 B 2 6 A 2 7 C 2 8 A 2 9 B 30 D31 D 32 E 33 E 34 E 35 C 36 C 37 B 38 E 39 C 4 0 E4 1 E 4 2 D 4 3 C 4 4 C 4 5 D 4 6 D 4 7 D 4 8 C 4 9 D 5 0 C5 1 D 5 2 C 5 3 D 5 4 C 5 5 D 5 6 C 5 7 B 5 8 C 5 9 E 6 0 D6 1 C 6 2 D 6 3 B 6 4 B 6 5 C 6 6 A 6 7 D 6 8 D 6 9 E 70 C71 B 72 A 73 D上期试题参考答…     

单克隆抗体E4B7D5对钩端螺旋体粘附抑制作用的扫描电镜观察

作者采用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体(钩体)外膜免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合等技术,获得单克隆抗体(McAb)E4B7D5,亚类鉴定为IgG_1,凝集效价为1:25600。经被动免疫保护试验证明,对同型017株钩体具有免疫保护作用。作者采用扫描电镜观察E4B7D5 McAb对钩体粘附于正常人胚肺成纤维细胞的影响,发现不同凝集效价的E4B7D5 McAb组,其钩体粘附明显少于对照组。作者认为,E4B7D5 McAb的免疫保护作用可能与其抑制钩体的粘附有关。     

上期试题参考答案

10 9 E　 110 A　 111 C　 112 D　 113 B　 114 C　 115 D　 116 A　 117 D　 118 B　 119 D　 12 0 D12 1 D　 12 2 D　 12 3 E　 12 4 A　 12 5 E　 12 6 A　 12 7 C　 12 8 A　 12 9 E　 130 C　 131 D　 132 C133 E　 134 B　 135 D　 136 B　 137 C　 138 D　 139 C　 14 0 A　 14 1 C　 14 2 C　 14 3 D　 14 4 B14 5 D　 14 6 E　 14 7 B　 14 8 B　 14 9 E　 15 0 D　 15 1 C　 15 2 E　 15 3 A　 15 4 C　 15 5 B　 15 6 E15 7 B　 15 8 B　 15 9 C　 16 0 D　 16 1 B　 16 2 D　…     

兔出血症病毒（RHDV）McAb的研制及初步应用

用酒石酸钾-甘油梯度离心纯化的RHDV抗原免疫BALB／C小鼠．取脾细胞与SP2／0融合，获得4株稳定分泌RHDV McAb的杂交瘤细胞株(1F7，1H4，2A9．2D6)。经检测，所分泌的抗体亚类分别为IgG 2a(1F7．1H4，2D6)和IgG1(2A9)。应用双抗体夹心ELISA法检测70份标本，并与直接免疫荧光法和HA法比较．取得较好的实验结果。     

针对问号钩体赖型外膜的抗原分析

作者采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术,对黄疸出血群赖型017株和601株、七日热群七日热型156株、澳洲群澳洲型620株以及塞马伦群帕托克型Patoc Ⅰ株等5株钩体外膜进行分析。检测到具有免疫保护作用和抑制钩体粘附作用的单克隆抗体E_4B_7D_5能特异地识别赖型017株和601株钩体外膜的34.5kd和39.5kd两条蛋白带,而同其余3株钩体外膜蛋白无反应。由此提示该两条蛋白带可能为钩体外膜保护性抗原。     

五株钩体外膜蛋白和脂多糖的SDS-PAGE、2D-PAGE图谱的比较研究

作者采用SDS-PAGE、2D-PAGE结合银染色法及免疫印迹技术对五株不同致病力钩体外膜蛋白和脂多糖作比较研兜。SDS-PAGE分析发现三株致病钩体外胰蛋白电泳图谱非常相似,与两株非致病性钩体电泳图谱无相关关系。强毒力017株外膜21.5kd区带的蛋白含量明显高于两株弱毒力钩体。2D-PAGE图谱差异更大,主要表现为pI的分布不同。用抗017株的McAb(LB_1)对五株外膜进行免疫印迹分析。该McAb主要识别三株致病性钩体共有的41kd抗原。三株致病性钩体外膜脂多糖电泳图谱与两株非致病钧体外膜脂多糖电泳图谱迥然不同。     

黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体外膜单克隆抗体免疫保护作用的探讨

作者采用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体(钩体)外膜免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合等技术,获得单克隆抗体E4B7D5。亚类鉴定为IgG_1,凝集效价为1:25 600。被动免疫保护试验证明:将单克隆抗体E4B7D5腹水稀释100倍,给实验组豚鼠每只每天腹腔注射1ml,连续6天,能使豚鼠在接受同型017株钩体2ml(每毫升1×10~3条)的攻击后,存活率达80％,且存活20天的豚鼠处死解剖,未见任何病变;3个对照组的存活率分别为10％,20％和10％,该三组仅有4只存活20天,经处死解剖,其中 3只发现较多的陈旧性肺出血。作者认为,单克隆抗体E4B7D5对同型017株钩体有免疫保护作用。     

执业医师资格考试试题选登

【A1型题】1 哪种物质直接作用于体温调节中枢引起发热A 病原体产生的外源性致热原B 病原体产生的内源性致热原C 血液中白细胞产生的外源性致热原D 血液中白细胞产生的内源性致热原E 血液中白细胞及病原体的代谢产物2 下列哪种疾病不是朊毒体感染A 克 -雅病B 莱姆病C 库鲁病D 裘 -斯综合征E 致命性家族失眠症3 中度发热的口腔温度是A 3 7～ 3 7 2℃B 3 7 3～ 3 7 9℃C 3 8～ 3 8 9℃D 3 9～ 40 9℃E 41℃以上4 国人咯血的常见原因是A 肺结核B 肺吸虫C 肺梗死D 肺瘀血E 肺癌5 何谓大量咯血A 日咯血量 >1 0 0mLB 日咯血量 >2 0…     

应用胶体金技术对钩体抗原超微定位的研究

The rabbit anti-mouse antibodies were successfully labelled with colloidal gold. The distribution of leptospiral antigens in ultrastructure was researched with McAbs and labelled antibodies. It was found that colloidal gold particles were mainly distributed at the outer membrane of leptospiral strain O17 cells, which indicated that the antigens recognized by McAbs 1A7E7, and 2F9D4 were localized at the outer membrane of leptospiral cells. It was thought that colloidal technique would provide a method for research on the antigen distribution of leptospiral cells in ultrastructure.     

Observation of monoclonal antibody E4B7D5 inhibitory effect on leptospiral adherence using scanning electron microscope]

BALB/c mice were immunized intraperitoneally with outer envelopes of serogroup icterohaemorrhagiae lai serovar strain 017 leptospires. Monoclonal antibody (McAb) E4B7D5 against outer envelopes (IgG1, agglutinating titre 1:25,600) was produced by hybridoma technique. Passive immunoprotection experiments have demonstrated the immunoprotection of McAb E4B7D5 against strain 017 leptospires. Effect of McAb E4B7D5 on leptospiral adherence to the surface of normal human pulmonary embryonic fibroblasts was observed by using scanning electron microscope. The results indicated that the leptospiral adherence noted in various agglutinating titre McAb E4B7D5 groups was less frequent than that in the three control groups. It was concluded that the inhibitory effect of McAb E4B7D5 on leptospiral adherence may play a role in the immunoprotection.     

单核性细胞在慢性肝炎发病中的意义

以单克隆抗体-卵白素-生物素-过氧化物酶复合法(ABC法)对79例各类肝病组织内浸润的单核性细胞(Mononuclear Cells,MnC)作原位分型,发现慢性活动性肝炎(CAH)中,MnC多,其中大多为T细胞,而OKT_8阳性细胞与肝细胞环死关系密切,提示慢性肝炎肝实质损害与OKT_8~+细胞有直接关系。对OKT_4~+、OKM_1~+、Leu_7~+、B_1~+等细胞在肝病中的可能作用也作了讨论     

四株钩端螺旋体外膜单克隆抗体的建立,鉴定及对外膜蛋白抗原...

Four McAbs (1A7E7, 2F9D4, 2G3H5, 1A7H12) against outer membrane antigens of L. interrogans serovar Lai strain 017 were produced by hybridoma technique. McAb 1A7E7 was identified to be IgG2a, the rest IgG1 by immunodiffusion. Outer membrane antigens of three pathogenic leptospiral strains (017, 601, 156) and two non-pathogenic leptospiral strains (Patoc I, 3055) were analysed by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting with McAbs. It was found that McAb 1A7E7 recognized specifically the 42kd antigenic band of strain 017; McAb 2F9D4 the 42kd antigenic bands of strain 017, 601, 156, and McAbs 2G3H5 and 1A7H12 the 31 kd antigenic bands of 017, 601, 156. Further study of antigenic properties possessed by pathogenic leptospira may provide some new clues to look for specific diagnostic and protective antigens.     

胃癌单克隆抗体MG7相应抗原与DBA受体在胃癌细胞中的电镜双标记定位

作者应用两种胶体金探针,于胃癌组织冰冻超薄切片上,对胃癌单抗MG7相应抗原与DBA受体进行了电镜双标记定位.结果显示,二者在胃癌细胞中的分布基本一致,主要定位于细胞膜表面、细胞内微囊腔面及部分粘液泡内,但在同一区域内,MG7与相应抗原结合位点的数目明显多于DBA与相应受体结合位点.提示胃癌单抗MG7相应抗原的分布符合分泌性抗原的特点.表明胃癌单抗MG7与相应抗原有很强的识别和结合能力.本实验结果可为单克隆抗体应用于胃癌导向治疗提供超微形态学依据.     

120名健康人群血清钩端螺旋体抗体水平调查分析

为了解农村健康人群钩体免疫水平，随机取血１２０份以钩体显凝常规方法测定抗体，阳性率为７７．５０％，抗体几何平均滴度为１２２．３５；疫源地菌群以黄疸出血群为主，同时存在其它菌群的交叉及单独感染。表明钩体菌苗接种后，两年内仍有较高的免疫力，因此，在传染源广泛存在的情况下，加强钩体菌苗的接种，提高人群免疫水平，是减少发病和控制流行的重要手段之一。     

抗淋球菌外膜蛋白单克隆抗体的研制及应用研究

目的：制备抗淋球菌外膜蛋白单克隆抗体，建立淋病快速诊断方法。方法：采用乙酸锂提取淋球菌ＷⅠ群和ＷⅡ／ＷⅢ群外膜蛋白，以此为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，融合、筛选抗淋球菌外膜蛋白杂交瘤细胞。结果：筛选出抗ＷⅠ群外膜蛋白杂交瘤２株，分泌的单克隆抗体类别为ＩｇＧ１；抗ＷⅡ／ＷⅢ外膜蛋白杂交瘤２株，分泌的单克隆抗体类别为ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ２ｂ。腹水单克隆抗体效价达１０７以上。４株单克隆抗体与脑膜炎球菌等细菌无交叉反应。对５６例临床标本采用夹心ＥＬＩＳＡ法进行检测，结果发现敏感性达９７％，特异性达１００％。结论：该单克隆抗体可以用于淋病的快速诊断。     

庆大霉素致损后鸡耳蜗毛细胞再生的放射自显影研究

7d龄纯种伊沙鸡连续皮下注射硫酸庆大霉素10d,用药第4d开始肌肉注射氚标记胸腺嘧啶核苷（3~H-TdR）,于不同时间取出内耳基底乳头进行放射自显影（ARG）观察。发现停药当天组标记细胞多为支持细胞,位于损伤区基底膜上至表层之间,第7d时受损区可见到标记的成熟毛细胞。对照组未见标记的毛细胞和支持细胞,提示庆大霉素中毒后鸡基底乳头中细胞增殖活跃,基底乳头中某些支持细胞作为前体细胞,通过有丝分裂增殖分化为毛细胞。