多药耐药相关蛋白-3表达与肝癌耐药的相关性

目的 探讨多药耐药相关蛋白-3(MRP-3)的表达与肝癌耐药的相关性.方法 应用RT-PCR方法检测正常肝细胞L-02、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3 mRNA的差异表达,再将MRP-3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中,用MTT法、流式细胞仪及RT-PCR检测转染后细胞内阿霉素(ADM)的荧光强度、耐药指数及MRP-3 mRNA的表达情况.结果 肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3 mRNA的表达明显高于正常肝细胞L-02和肝癌细胞BEL(P<0.05).MRP-3反义转染进耐药细胞后,可明显降低细胞内ADM的耐药指数,提高细胞内ADM浓度(P<0.05),细胞内MRP-3 mRNA的表达较未转染细胞下降了62.5%(P<0.05).结论 MRP-3的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一.     

Smac基因过表达对白血病耐药细胞株K562/AO2化疗敏感性的影响

目的 探讨Smac基因过表达对K562/A02细胞株化疗敏感性的影响.方法 构建重组腺病毒载体pAdeno-Smac,转染K562/A02细胞.实验分组:A组:pAdeno-Smac转染组;B组:空载体转染对照组;C组:正常对照组.Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白的表达水平.将终浓度分别为0、0.5、1.0、1.5 mg/L的柔红霉素处理各组后,Annexin V/PI双染法经流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡率.结果 成功构建腺病毒载体pAdeno-Smac质粒.Western blot结果证实,经Smac基因全长cDNA转染后,K562/A02细胞中的Smac蛋白表达显著升高.经不同浓度柔红霉素处理后,A组的细胞早期凋亡率明显高于B组和C组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),且随着柔红霉素浓度的升高,细胞凋亡率随之升高,B组和C组之间差异无统计学意义.结论 重组腺病毒载体pAdeno-Smac可通过使K562/A02细胞中的Smac蛋白表达增高,增强细胞对化疗药物的敏感性.     

人核糖体蛋白S13与胃癌细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨人核糖体蛋白S13(RPS13)在胃癌多药耐药(MDR)机制中的作用。方法 采用RT-PCR法扩增RPS13 cDNA片段编码区序列全长，DNA重组技术构建正反义真核表达载体，经脂质体介导转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR，斑点杂交检测转染细胞mRNA水平的变化；MTT法测定细胞对化疗药物的敏感性，流式细胞仪检测细胞周期。结果 RT-PCR法成功扩增出RPS13 cDNA片段编码区序列全长，并构建正反义真核表达载体；斑点杂交试验证实：正义转染细胞RPS13 mRNA水平上调，反义转染细胞其mRNA水平下调。RPS13正义核酸转染SGC7901细胞后，细胞对阿霉素、5-氟尿嘧啶和长春新碱的敏感性降低；转染反义核酸后，耐药细胞对丝裂霉素和长春新碱的敏感性增加。细胞周期测定表明高表达RPS13后，G1期、S期和G2期细胞的比例分别为47．0％、33．2％和19．8％；低表达RPS13后，G1期、S期和G2期细胞的比例分别为62．9％、1、0％和36．1％。结论 RPS13参与胃癌耐药细胞SGC7901／VCR的多药耐药。     

靶向mdr1不同位点的siRNA对两种耐药细胞MDR的逆转效果

目的:探讨靶向mdr1 4个不同位点的siRNAs对胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和人红白血病耐药细胞K562/A02的作用效果.方法:设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNAs(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631及mdr1si3071), 分别转染SGC7901/VCR细胞和K562/A02细胞, 用RT-PCR和免疫组织化学检测mdr1 mRNA与P-gp的表达, 流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)的蓄积, MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果:4条s iRNAs对人胃癌细胞SGC7901/VCR mdr1介导的MDR逆转效果由高到低依次为mdr1si326、mdr1si2631、mdr1si3071及mdr1si1513; 对人红白血病细胞K562/A02md r1介导的MDR逆转效果由高到低依次为mdr1si326、mdr1si2631、mdr1si3071及mdr1si1513.结论:4条siRNAs对SGC7901/VCR和K562/A02两种耐药细胞作用效果趋势相似.     

脐血CIK细胞对耐药白血病细胞体外杀伤效应及其机制的研究

目的:探索干预或克服白血病细胞耐药的新策略.方法:采用抗CD3McAb联合多种细胞因子诱导的脐血杀伤细胞(CB-CIK)体外作用于K562耐药细胞株(K562/A02),用MTT比色法检测其杀伤效应;用免疫组化染色法检测杀伤前后K562/A02细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平;采用DNA凝胶电泳进行CB-CIK细胞诱导白血病细胞凋亡的检测.结果:①CB-CIK细胞杀伤K562/A02细胞活性(73.647±5.72)与杀伤K562细胞活性(75.124±4.36)相比差异无统计学意义,P＞0.05;其杀瘤活性显著高于CB-LAK细胞、CB-CD3AK细胞,P<0.05,与成人CB-CIK细胞相比差异无统计学意义,P＞0.05.②经CIK细胞杀伤后,K562/A02细胞表面mdr1表达产物P170含量明显减少.③K562/A02细胞在CIK细胞作用20 h后,其DNA结构断裂,在DNA凝胶电泳上呈现凋亡特有的梯形图谱(DNA Ladder).结论:CB-CIK细胞对K562细胞及其耐药株K562/A02细胞均有较强的杀伤作用,其杀伤机制可能与CIK细胞能下调白血病细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平,以及诱导白血病细胞凋亡有关.提示脐血CIK细胞在抗白血病多药耐药性方面具有独特的优势,若与化疗联合使用,有可能成为克服白血病细胞多药耐药性的一种可供选择的新策略,因脐血的来源较广,采制相对简便,该研究方法可能具有广泛的应用前景.     

金雀异黄素诱导K562和K562/ADM细胞的凋亡作用

目的探讨金雀异黄素(GS)对人红白血病细胞系K562与其多药耐药细胞系K562/ADM的生长抑制、诱导凋亡作用及其可能的作用机制。方法不同浓度的GS处理K562与K562/ADM细胞后,用MTT比色法检测生长增殖作用,流式细胞术检测凋亡,免疫细胞化学ABC法分析Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 GS对K562及K562/ADM细胞均有很强的生长抑制作用。同一浓度下GS诱导K562/ADM细胞凋亡率明显低于K562细胞。不同浓度GS对K562细胞的Bax蛋白呈强阳性表达,Bcl-2蛋白实验组同对照组比较颜色无明显变化;而在K562/ADM细胞中,Bcl-2在实验组和对照组中均强表达,但Bax的表达均无明显变化。结论 K562细胞对GS的反应比K562/ADM细胞敏感;GS诱导K562细胞Bax蛋白高表达可能是GS诱导K562细胞凋亡的机制之一,而K562/ADM细胞的耐药性和凋亡抑制可能与Bcl-2蛋白高表达有关。     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养对白血病耐药细胞杀伤作用的实验研究

目的探讨负载P-糖蛋白(P-gp)高表达的多药耐药(MDR)白血病K562/A02细胞冻融抗原的树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养对MDRK562/A02杀伤作用的影响。方法提取健康人骨髓单个核细胞,常规诱导出DC及CIK,将K562/A02细胞冻融物作为抗原冲击的DC,与CIK共培养作为实验组,抗原不冲击的DC与CIK共培养作为对照组,以CIK及DC单独培养分别作为空白对照组1和空白对照组2。光镜下观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表型,MTT法检测杀伤活性。结果实验组、对照组细胞增殖活性均大于CIK组(P<0.05)。实验组对K562/A02、K562的杀伤活性在效靶比5∶1、10∶1、20∶1时分别为(42.90±0.67)%、(49.85±0.28)%、(63.36±0.46)%和(23.56±0.43)%、(26.11±0.34)%、(34.46±0.35)%,均高于对照组及空白对照组1(P<0.05);实验组对K562/A02的杀伤活性高于K562和MCF7(P<0.05)。结论DC与CIK共培养物是一种增殖活性和细胞毒活性高于CIK的免疫活性细胞,而经冻融抗原冲击的DC与CIK共培养能明显提高对MDRK562/A02的杀伤活性。     

VEGF165正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节

目的构建VEGF165(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将VEGF165 cDNA从pGEM-hVEGF165克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒pCDNA3中,构建VEGF165正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和Sanger双脱氧终止DNA测序法证明VEGF165正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将VEGF165正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用RNA斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测VEGF mRNA和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及DNA测序表明VFGF165正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P＜0.05vs对照组,31.6%),转染反义表达载体后VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P＜0.05vs对照组).结论成功地构建了VEGF165正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响

目的观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞多药耐药白血病细胞株K562/阿霉素(ADM)细胞生物学行为的影响。方法硒化壳聚糖作用于体外培养的K562/ADM细胞12、24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期;应用免疫印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;应用RT-PCR法检测MDR-1 mRNA水平。结果硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P<0.05,P<0.01),下调P-gp表达和MDR-1 mRNA水平(P<0.05,P<0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越显著。结论硒化壳聚糖能够通过下调MDR-1基因和P-gp表达,阻滞细胞周期于G1期来诱导细胞凋亡,进而对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生逆转。     

三氧化二砷逆转白血病细胞多药耐药的作用及机制

以人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/ADM作为研究对象,分别加入不同浓度的三氧化二砷(AS2O3)共同培养,用台盼蓝拒染法计数细胞,四氮甲唑蓝法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测bcl-2、P-糖蛋白(P-gP)及Annexin-V /PI-凋亡细胞数量.结果显示:①AS2O3对K562/ADM细胞生长有明显抑制作用,其强度与药物浓度及作用时间呈正相关.②AS2O3作用于K562/ADM细胞,能降低阿霉素(ADM)对K562/ADM细胞的半数抑制量(IC50),部分逆转K562/ADM细胞的MDR.③浓度<2.5μmol/L的AS2O3作用于K562/ADM细胞,对K562/ADM细胞P-gP表达无明显影响.④AS2O3作用于K562/ADM细胞,能使其bcl-2表达下降、K562/ADM细胞早期凋亡数增加.提示AS2O3对逆转白血病细胞耐药有一定作用.     

Pantoprazole Induces Apoptosis of Leukemic Cells by Inhibiting Expression of P-Glycoprotein/Multidrug Resistance-Associated Protein-1 Through PI3K/AKT/mTOR Signaling

This study aims to investigate the effects and mechanism of pantoprazole on multidrug resistant leukemia K562/A02 and K562/ADM cell lines. K562/A02 and K562/ADM cells at logarithmic growth phase were pre-treated with different concentration of pantoprazole (0, 50, 100, 200 μg/mL) for 24 h. Flow cytometry was used to measure the cell growth cycle and apoptosis. RT-PCR and Western blot were used to measure the expression of p-PI3K, p-AKT, p-mTOR, P-glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein-1 (MRP1). Pantoprazole pretreatment significantly increased the ratio of G0/G1 phase but decreased the S phase of K562/A02 and K562/ADM cells in dose-dependent manner (p < 0.05). Flow cytometry analysis indicated that pretreatment of leukemic cells with pantoprazole induced apoptosis in a dose-dependent manner. RT-PCR and Western blot analysis indicated that pantoprazole pretreatment inhibited the mRNA and protein expression of p-PI3K, p-Akt, p-mTOR, P-gp and MRP1 in K562/A02 and K562/ADM cells in a dose-dependent manner (p < 0.05). Pantoprazole arrested cell cycle and induced apoptosis of multidrug resistant leukemic cells by inhibiting the expression of P-gp and MRP1 through PI3K/Akt/mTOR signaling pathway.     

反义核酸逆转人白血病多药耐药细胞株耐药性的实验研究

目的 采用一段人工合成的互补于多药耐药基因的反义硫代磷酸寡核苷酸转染白血病多药耐药细胞株Ｋ５６２／ＡＤＭ,来逆转白血病细胞的多药耐药。方法 四唑蓝快速比色法检测Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对阿霉素的半数抑制量,流式细胞仪分析细胞内的柔红霉素含量,免疫细胞化学染色方法确定Ｐ１７０的表达水平,逆转录聚合酶链反应检测ｍｄｒ１－ｍＲＮＡ的相对水平。     

Transduction of Fas gene or Bcl-2 antisense RNA sensitizes cultured drug resistant gastric cancer cells to chemotherapeutic drugs

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｕｍｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｂｕｔｉｔｏｆｔｅｎｄｏｅｓｎｏｔｗｏｒｋｄｕｅｔｏｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＭＤＲ）．Ｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉ...     

核因子-κB活化抑制增强高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡

目的　研究地塞米松 (DXM)和长春新碱 (VCR)对高三尖杉酯碱 (HH)诱导白血病细胞凋亡与核因子 κB (NF κB)活化的影响。方法　采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、DNA电泳方法观察HH诱导K5 6 2 n细胞凋亡 ,采用电泳迁移率变动分析 (EMSA)观察HH诱导K5 6 2 n细胞NF κB活化。结果　用 (0 5、5、5 0 ) μmol/L的HH均能诱导K5 6 2 n细胞凋亡率分别为 (30 0 0± 3 34,4 7 13± 3 18,6 8 6 3± 8 14 ) % ,与对照组相比 ,有良好的浓度依赖关系 (P <0 0 5 ) ;DXM 1μmol/L和VCR 0 1μmol/L本身无诱导K5 6 2 n细胞凋亡的作用 ,但均能增强HH 0 5μmol/L诱导的K5 6 2 n细胞凋亡 ,凋亡增加率分别为 85 8%和 114 6 % (P值均 <0 0 5 )。K5 6 2 n细胞未经药物诱导NF κB也有轻度活化 ;HH 0 5 μmol/L可明显诱导K5 6 2 n细胞NF κB活化 ,DXM 1μmol/L和VCR 0 1μmol/L能显著抑制HH 0 5 μmol/L诱导的NF κB活化 ,抑制率分别为 32 0 %和39 4 % (P值均 <0 0 5 )。结论　HH诱导K5 6 2 n细胞凋亡的同时激活NF κB ;DXM和VCR可通过抑制NF κB活化 ,增强其诱导K5 6 2 n细胞凋亡的作用。     

Effects of multidrug resistance, antisense RNA on the chemosensitivity of hepatocellular carcinoma cells

Introduction The overexpression of the multidrug resistance gene 1 (mdr1), a product of multidrug resistance multidrug resistance, is a major obstacle in cancer chemotherapy. Being a major P-glycoproteincancer chemotherapy. Being a major P-glycoprotein (P-gp), 17 kDa transmembrane protein acts as an energy-dependent drug efflux pump and keeps the concentration and efficacy intracellular anticancer drugs low.[1-4] Hepatocellular carcinoma (HCC) represents more than 5% of all cancers in the w…