解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究

目的探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα信号,降低survivin基因的表达。结论解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药。     

蟾酥灵对HL-60/ADR作用的研究

目的 :探讨中药蟾酥灵对HL -60 /ADR耐药细胞在抑制生长、诱导凋亡方面的作用和影响。方法 :①MTT比色法观察对细胞的抑制 ;②流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :①蟾酥灵抑制HL -60 /ADR耐药细胞的生长 ,药物浓度与HL -60 /ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系 ;②随着药物浓度的增加 ,HL -60 /ADR细胞凋亡率也增加。结论 :蟾酥灵可抑制HL -60 /ADR细胞生长 ,促进细胞凋亡呈剂量依赖性     

解毒化瘀药对白血病K562/A02耐药细胞mdr1耐药基因、核因子κB信号影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞mdr1耐药基因、核因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号基因表达的影响。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞mdr1基因的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,降低mdr1耐药基因的表达。结论:解毒化瘀药对K562/A02细胞的耐药逆转作用可能是通过阻断NF-κB信号通路,影响mdr1耐药基因的表达起作用的。     

解毒化瘀药对白血病K562/A02耐药细胞mdr1耐药基因、因子κB信号影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞mdr1耐药基因、核因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号基因表达的影响.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞mdrl基因的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、N...     

白血病K562/A02细胞SurVivin基因表达及解毒化瘀药干预作用的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞Survivin基因(生成素)表达的影响.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞Survivin基因的表达,并与干扰素作对照.结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02细胞Survivin基因的表...     

解毒化瘀含药血清抗白血病多药耐药细胞株K562／A及HL-60／A的体外实验研究

目的：以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗多药耐药白血病细胞的作用。方法：采用MTT比色法,选择阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562／A及HL-60／A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果：解毒化瘀含药兔血清对K562／A和HL-60／A有明显的抑制作用,且其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论：解毒化瘀中药在抑制白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

异搏定逆转HL-60/ADR细胞株耐药机理的初步探讨

目的 :深入了解异搏定 (VER)对鬼臼乙叉甙 (VP16)耐药逆转作用的机制。方法 :以多药耐药相关蛋白 (MRP)高表达的耐阿霉素人急性髓性白血病细胞株HL 60 /ADR为研究对象 ,应用DNA电泳、流式细胞仪观测细胞凋亡现象 ,用Westernblotting方法测定凋亡相关蛋白BCL 2表达水平。结果 :在作用 2 0h后 ,5mg·L-1VER可使VP16对HL 60 /ADR诱导凋亡作用增强 2 .8倍 ,并可下调BCL 2蛋白表达水平。结论 :VER对VP16的耐药逆转作用可能与其具有增强VP16诱导HL 60细胞凋亡作用有关 ;BCL 2蛋白可能是这一作用的靶点     

扶正祛邪中药复方含药血清抗白血病细胞HL60及HL60/VCR细胞的体外实验研究

目的通过体外实验观察扶正祛邪中药复方含药血清对急性早幼粒白血病细胞HL60及长春新碱诱导的耐药细胞株HL60/VCR细胞的生长抑制率。方法采用四氮唑蓝(MTT)比色法,选择白血病敏感细胞株HL60细胞以及长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株HL60/VCR细胞为靶细胞,观察不同浓度(5%、10%、15%、20%、25%)扶正祛邪含药兔血清对其的生长抑制率。结果扶正祛邪含药兔血清对HL60/VCR及HL60均有明显的抑制作用,且其对HL60/VCR的细胞毒作用呈剂量依赖性。结论扶正祛邪复方中药具有一定的抑制白血病细胞及耐药细胞的作用。     

雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

健脾益气化瘀解毒方含药血清对结肠癌 HCT116细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的探讨健脾益气化瘀解毒方含药血清对人结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关蛋白Bcl-x L和Bax蛋白表达的影响。方法 10%、15%、20%健脾益气化瘀解毒方含药血清处理HCT116细胞12、24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖;不同浓度含药血清处理24、48 h后,碘化丙啶染色法检测细胞周期及凋亡率。蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞内Caspase-3,Bcl-x L和Bax蛋白的表达;对照组均予以相同浓度空白鼠血清及10%胎牛血清(FBS)。结果细胞增殖:12 h后15%、20%含药血清与相同浓度鼠空白组比较,对HC116细胞的抑制作用具有统计学意义(P0.05),72 h对HCT116细胞的抑制作用最强(P0.05),健脾益气化瘀解毒方含药血清对HCT116细胞增殖具有良好的抑制作用,并与时间、浓度呈正相关。细胞周期:10%及15%含药血清组G2期细胞减少,而G1期与S期细胞增多,20%含药血清组G1期与S期细胞减少,而G2期细胞增加,48 h作用明显,而空白鼠血清细胞周期则无明显变化,说明含药血清能阻滞细胞周期,与时间呈正相关。细胞凋亡:与相应浓度对照组比较,含药血清处理24、48 h后,HCT116细胞晚期凋亡率增加,并且随浓度、时间增加凋亡率增加(P0.05),说明含药血清能促使HCT116细胞凋亡,与时间、浓度呈正相关。Western blot检测显示,与空白鼠血清组相比,15%含药血清可上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3、Bcl-x L的蛋白表达(P0.05)。结论健脾益气化瘀解毒方可能通过将结肠癌HCT116细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,通过上调凋亡相关蛋白Bax,下调Caspase-3、Bcl-x L蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

复方黄黛片人含药血清对MV4-11细胞增殖和凋亡的影响

目的 探索复方黄黛片人含药血清对FMS样酪氨酸激酶3内部重复突变(FLT3-ITD)急性髓系白血病MV4-11细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集口服复方黄黛片治疗的急性早幼粒细胞性白血病患者的含药血清和健康志愿者的健康血清,分别采用20%、40%、60%的血清浓度培养FLT3-ITD阳性的MV4-11和FLT3-ITD阴性的HL60细胞48 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 含药血清的血砷浓度(0.47±0.06)μmol/L,明显高于健康血清(未检出),差异有统计学意义(t=13.035,P<0.001)。MV4-11细胞的存活率随着含药血清浓度的增高而降低,各血清浓度间比较差异均有统计学意义(40%vs. 20%:t=7.137,P=0.002;60%vs. 20%:t=10.150,P<0.001;60%vs. 40%:t=3.282,P=0.030);且20%、40%、60%含药血清浓度时均明显低于健康血清,差异均有统计学意义(t=6.476、10.450、11.110,P均<0.05)。HL60细胞...     

清肺化瘀解毒方对肺癌靶向耐药细胞的逆转作用及机制研究

目的:观察清肺化瘀解毒方对肺癌吉非替尼获得性耐药的调节作用及其机制。方法:采用大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法诱导建立人肺腺癌A549细胞株吉非替尼获得性耐药系,清肺化瘀解毒方含药血清及吉非替尼干预后,WST-1法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot、Real-time PCR技术检测CMET、Integrinβ1、IGF-1R蛋白及mRNA的表达。结果:清肺化瘀解毒方、清肺化瘀解毒方联合吉非替尼对A549/R细胞的增殖有明显抑制作用,且呈一定时效及量效关系;清肺化瘀解毒方能明显促进A549/R细胞的凋亡,与吉非替尼联用后促进作用更为明显(P0.05);清肺化瘀解毒方组、清肺化瘀解毒方联合吉非替尼组CMET、IGF-1R蛋白及mRNA表达与空白血清组及吉非替尼组相比明显下调(P0.05),Integrinβ1蛋白及mRNA表达差异不明显。结论:清肺化瘀解毒方有逆转A549吉非替尼获得性耐药的作用,其机制可能与下调CMET、IGF-1R表达有关。     

补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌A549/DDP耐药细胞内药物浓度的影响

探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内DDP浓度的作用 ,选择人肺腺癌耐药细胞株A5 4 9/DDP为模型 ,采用荷瘤动物血清药理及流式细胞法 ,结果补肾化瘀解毒方荷瘤动物含药血清能显著提高肺癌A5 4 9/DDP耐药细胞内DDP浓度 (P <0 .0 5 ) ,与正常动物含药血清无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,表明补肾化瘀解毒方含药血清能提高肺癌耐药细胞内化疗药物浓度 ,对探讨补肾化瘀解毒方逆转肺癌耐药性具有重要作用。     

白花蛇舌草提取液诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的:研究白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药白血痛细胞HL-60/ADR的抑制作用及其机制.方法:采用MTT比色试验观察白花蛇舌草乙酸乙酯提取泣对多药耐药细胞HL-60/ADR的抑制作用(HL-60/ADR的耐药倍教为204倍).采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变.利用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果:白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能明显抑制HL-60/ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药41.67 mg/ml时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半敷抑制浓度(IC50)相当于生药70.41mg/ml.流式细胞学证实白花蛇舌革乙酸乙酯提取液,能诱导多药耐药细胞HL-60/ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依籁性.结论:白花蛇舌草对多药耐药细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一.     

Bcl-2参与的抗凋亡机制在白血病耐药中的作用

目的:肿瘤多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是目前肿瘤研究的难点及热点领域.本研究以人慢性粒细胞白血病细胞株K562和阿霉素(ADR)耐药细胞株K562/AO2为研究对象,观察两细胞株在ADR作用下Bcl-2的表达水平,借此探讨其参与的抗凋亡机制在白血病多药耐药中的作用.方法:MTT法测定K562和K562/AO2在ADR作用后的细胞活力(A值);DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况;FCM法测定细胞凋亡率、细胞周期及Bcl-2蛋白的表达.结果:MTT法测得ADR作用的K562细胞存活数下降,1.00μmol/LADR作用48h的K562细胞株A值最低,为0.803±0.032.DNA琼脂糖凝胶电泳及FCM法均显示ADR作用的K562细胞株有凋亡发生.FCM的结果表明,ADR作用的K562细胞株Bcl-2的阳性表达率低,1.00μmol/L ADR作用48 h的Bcl-2阳性表达率是(38.67±0.45)%.结论:耐药的主要机制是通过抑制细胞的凋亡途径完成,bcl-2是凋亡的主要调控基因,是一种耐药基因.     

姜黄素逆转HL60/ADR 及MCF-7/ADR的多药耐药研究

目的观察姜黄素对HL60/ADR以及MCF-7/ADR多药耐药(MDR)的逆转。方法用MTT法观察细胞的生长抑制效应,流式细胞仪检测凋亡以及细胞内阿霉素浓度,RT-PCR以及Western Blot检测Mdr1、MRP基因和Bcl-2蛋白表达。结果加入姜黄素后耐药细胞系逆转指数分别为4.18(HL60/ADR)和3.39(MCF-7/ADR),与单纯应用阿霉素相比差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示有明显的促凋亡作用,耐药细胞系内的ADR浓度明显升高;RT-PCR以及Western Blot检测发现姜黄素对上述耐药细胞系的MRP以及Bcl-2表达有抑制作用。结论姜黄素可能作为多药耐药的逆转剂应用于MDR逆转。     

姜黄素对白血病耐药细胞HL-60/ADR 的抑制及抗肿瘤作用的研究

目的 研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60／ADR的抑制作用。并且与抗癌药物阿霉素对HL-60／ADR细胞的体外杀伤作用进行了比较。方法 应用MTT法检测姜黄素对细胞的毒作用及杀伤作用，用荧光分光光度法进行细胞内阿霉素蓄积测定。结果 姜黄素明显抑制白血病耐药细胞HL-60／ADR细胞的生长，24、48和72h的IC50分别为8.94、5．21和3．82μg／mL。姜黄素与阿霉素合用，在HL60／ADR细胞中均有增敏作用。结论 姜黄素可抑制白血病耐药细胞HL-60／ADR细胞的生长，与阿霉素之间无交叉耐药。     

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用.方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90 β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性.结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P＜0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24.结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90 β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90 β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用.     

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡的影响.方法 采用流式细胞计数检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制作用.结果 随着2-甲氧雌二醇的浓度增高,HL60白血病细胞的增殖受到抑制,对照组凋亡率为(1.2±0.3)%,实验组2-ME2 10μmol/L为(9.7±2.1)%,2-ME2 30μmol/L为(11.6±3.0)%,2-ME2 50μmol/L为(15.8±2.9)%.白血病细胞凋亡明显增加.结论 2-ME对IK60细胞增殖有抑制及促凋亡作用.     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药性机制研究

探讨蟾酥注射液（CHS）对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性；流式细胞术考察 CHS 对HL60/阿霉素细胞周期的影响；免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞 NF-κB、MRP、GST-π、iNOS 蛋白表达的调节作用。结果 CHS 可将阿霉素对 HL60/阿霉素细胞的 IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L，逆转倍数为1.9609倍；FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期，降低进入S期比例，并出现凋亡峰；免疫组化结果显示，CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达，上调NF-κB、iNOS的表达。结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达，上调NF-κB、iNOS的表达，促进HL60/阿霉素细胞凋亡，从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。