氧化苦参碱对内毒素作用下人牙周膜细胞白细胞介素-6和白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的研究氧化苦参碱对内毒素（LPS）作用下人牙周膜细胞（PDLC）白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达的影响,探讨氧化苦参碱抑制LPS所造成的牙周炎症反应的机制。方法体外分离及培养PDLC,实验组分别为LPS和不同质量浓度的氧化苦参碱溶液的不同组合,对照组为仅含1% FBS的DMEM培养液。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-6和IL-1β mRNA的水平。结果质量浓度为25 μg·mL-1 LPS能够有效地增强IL-6和IL-1β mRNA水平的表达,实验组高于对照组,差异有统计学意义,加入氧化苦参碱进行干预后实验组与对照组IL-6和IL-1β mRNA的表达无显著差异。结论氧化苦参碱可抑制LPS所造成的PDLC IL-6和IL-1β mRNA表达。     

白细胞介素-1β对人牙周膜成纤维细胞中MCP-1表达影响的研究

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响。方法:体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞随机分为实验组和对照组,实验组细胞以不同浓度IL-1β(1、5、10、25 ng/mL)作用24 h;对照组细胞则不加IL-1β作用。分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人牙周膜成纤维细胞中MCP-1 mRNA的表达;采用免疫荧光技术观察MCP-1的表达情况;采用Western blot方法检测其蛋白表达变化。结果:对照组hPDLFs中可见微弱的MCP-1表达;实验组hPDLFs经IL-1β刺激后,MCP-1在mRNA和蛋白水平表达都增强,这种调节作用在10 ng/mL IL-1β的作用浓度时最明显(P<0.05)。结论:在IL-1β介导环境下,hPDLFs中MCP-1的表达增高,而MCP-1表达增高可能是引起外周血单核细胞向局部炎症牙周组织募集的机制之一。     

脂多糖和白细胞介素-1β对人牙周膜细胞中诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)和白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜细胞(hPDLCs)表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和一氧化氮(NO)的影响。方法应用LPS和IL-1β刺激hPDLCs后,通过实时定量PCR检测iNOS基因的表达情况,收集细胞上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定诱导后细胞中iNOS的含量变化,采用硝酸还原酶法检测NO的表达水平。结果未受刺激的hPDLCs仅能产生微量的iNOS和NO;LPS和IL-1β刺激hPDLCs后,检测到iNOS、iNOS mRNA及NO的含量随着时间和质量浓度的增加而显著增加(P<0.05),在相同时间或相同质量浓度的条件下,IL-1β单独刺激或与LPS联合刺激hPDLCs产生iNOS及NO的能力强于LPS单独刺激(P<0.05)。结论 LPS和IL-1β刺激hPDLCs可以增加iNOS和NO的表达,为动物实验中牙周局部注射LPS和IL-1β诱导iNOS和NO表达奠定实验基础。     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

脂多糖和白细胞介素-1β对人牙周膜细胞中诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察脂多糖(LPS)和白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜细胞(hPDLCs)表达诱导型一氧化氮合酶(iGNOS)和一氧化氮(NO)的影响.方法 应用LPS和IL-1β刺激hPDLCs后,通过实时定量PCR检测iNOS基因的表达情况,收集细胞上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定诱导后细胞中iNOS的含量...     

TNF-α刺激髁突软骨细胞产生白细胞介素-34的研究

目的通过观察TNF-α对髁突软骨细胞分泌白细胞介素-34(IL-34)及表达IL-34 mRNA基因的影响,探讨IL-34在颞下颌关节紊乱病中的致病机制。方法取第三代髁突软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度(0、1、10、20、50 ng/m L)的TNF-α培养24 h以及同一浓度(10 ng/m L)TNF-α分别培养1、3、6、10、24 h后,收集培养上清液及细胞,分别用ELISA和RT-PCR方法测定IL-34浓度以及IL-34 mRNA的表达情况。结果 1实验组和对照组髁突软骨细胞上清液中均能检测到IL-34。2TNF-α刺激髁突软骨细胞IL-34mRNA基因表达,并呈正相关关系。结论 TNF-α能刺激髁突软骨细胞产生IL-34。     

白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72 h后各组细胞上清液,应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测每组细胞上清液中KGF蛋白浓度的变化.提取各组细胞RNA,用聚合酶链反应(PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化.结果 ELISA及PCR结果显示:加入IL-1β的正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞培养上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均升高,同时KGF mRNA表达量较对照组有较明显的上升趋势.正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞加DEX的上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均降低,KGFmRNA表达量较对照组则有降低的趋势.结论 IL-1β对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌及表达KGF有促进作用;而DEX对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌和表达KGF有抑制作用.     

白细胞介素-10对人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-1β的抑制作用

目的:探讨白细胞介素-10(IL-10)在牙周炎症反应中的抑制作用。方法:用细胞培养法、酶联免疫吸附分析法 (ELISA)检测细胞培养液上清中的IL-1B浓度;用MTT法检测人牙龈成纤维细胞(HGF)对细菌脂多糖(LPS)、IL-10的增殖反应。结果:LPS以剂量依赖方式诱导HGF产生IL-1B,6 h达最大分泌量;IL-1B的分泌可被IL-10抑制,10 ng/ ml IL-10作用24 h抑制效应达最大;LPS对HGF具有促增殖作用,而IL-10对HGF的增殖无影响。结论:IL-10是一种抑制牙周炎症反应的细胞因子。     

microRNA-146a对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的调节作用

目的探讨microRNA-146a (miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)脂多糖(LPS)刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的作用。方法从小鼠脾脏收集淋巴细胞。实时定量聚合酶链反应和酶联免疫反应用于检测淋巴细胞在P. gingivalis LPS、miR-146a模拟物或抑制剂处理后细胞因子的表达。结果与P. gingivalis LPS未刺激组相比,P. gingivalis LPS能促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和IL-10表达(P<0.05),虽抑制骨保护素(OPG) mRNA水平(P<0.05),但分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,P. gingivalis LPS处理的淋巴细胞中miR-146a模拟物抑制IL-1β、IL-6和RANKL表达(P<0.05),促进IL-10和OPG表达(P<0.05),miR-146a抑制剂对这些细胞因子产生相反的效果(P<0.05)。结论 miR-146a可通过抑制淋巴细胞IL-1β、...     

中药黄芩有效成分黄芩苷对IL-1β刺激人牙周膜细胞产生PGE2的影响

目的:探讨不同浓度黄芩苷对白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)刺激人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)产生前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响.方法:运用细胞培养技术和酶联免疫检测方法,观察IL-1β刺激PDLC分泌PGE2的量以及不同浓度的黄芩苷对其产生PGE2量的影响.结果:在1 ng/mL IL-1β的刺激下,PDLC产生PGE2 的量随时间的延长而增加.0.01～10 μg/mL的黄芩苷均能显著抑制1 ng/mL IL-1β对 PDLC的刺激作用(P<0.01),而不同浓度组之间比较,抑制作用无显著性差异.结论:①PDLC具有合成和分泌PGE2的功能,IL-1β能有效刺激 PDLC产生PGE2.②黄芩苷对IL-1β刺激PDLC合成和分泌PGE2有显著抑制作用.     

白细胞介素1β对人牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞骨向分化的影响

目的研究白细胞介素1β（IL-1β）作用下人牙周膜干细胞（PDLSC）和骨髓间充质干细胞（BMSC）骨向分化的差异。 方法应用茜素红染色、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、细胞增殖能力（MTT）法和实时荧光聚合酶链反应（PCR）对PDLSC和BMSC在IL-1β作用下的骨向分化能力进行检测,并比较两者之间的差异。实验组为含有IL-1β的各处理组,对照组内未加IL-1β。采用单因素方差分析和t检验对数据进行统计分析。 结果随IL-1β浓度的增高,PDLSC形成矿化结节减少,茜素红染色逐渐变浅;而BMSC骨向分化能力未见明显减弱;ALP活性实验结果表明,在7 d时PDLSC各实验组与对照组相比差异具有统计学意义（F = 2361.11,P<0.001）,BMSC各实验组与对照组相比ALP活性差异具有统计学意义（F = 240.68,P<0.001）;在14 d时PDLSC随炎症因子浓度增高,ALP活性显著降低,差异具有统计学意义（F = 1519.89,P<0.001）,BMSC在IL-1β浓度为0.001、0.01、1 ng/mL的实验组与对照组相比ALP活性差异具有统计学意义（F = 22.52,P<0.001）,两种干细胞在IL-1β最大浓度时（1 ng/mL）ALP活性最低;MTT结果表明,IL-1β能抑制干细胞的增殖能力,与PDLSC相比,BMSC增殖能力较低。实时荧光PCR结果显示,与对照组相比,两种干细胞实验组内ALP、Col-1、OCN和Runx2 mRNA表达水平均降低,BMSC内实验组中骨向分化基因表达与PDLSC内实验组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论在IL-1β作用下,BMSC的成骨能力较PDLSC高。     

粪肠球菌脂磷壁酸对人牙周膜成纤维细胞表达Toll样受体2及白细胞介素-1β的影响

目的 探讨体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)在粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)刺激下表达Toll样受体2(TLR2)及白细胞介素-1β (IL-1β)的情况.方法 体外分离培养HPDLCs,采用流式细胞术检测0.1、1、10μg·mL-1粪肠球菌LTA刺激24h后HPDLCs表面TLR2表达的改变,酶联免疫吸附法检测12、24、48h后IL-1β的分泌情况,并用相同质量浓度的大肠杆菌内毒素作为对照;用TLR2中和抗体预处理HPDLCs 1 h,观察1μg·mL-1 LTA刺激24h后其IL-1β的分泌量.结果 LTA可致HPDLCs表面TLR2表达增加(P＜0.05);与对照组相比,粪肠球菌LTA可致HPDLCs分泌IL-1β增加(P＜0.05),刺激12h后可检测到IL-1β,48 h内呈上升趋势.TLR2中和抗体对粪肠球菌LTA诱导HPDLCs分泌IL-1β无明显封闭作用.结论 粪肠球菌LTA可引起HPDLCs表面TLR2表达及IL-1β分泌增加.     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及内毒素作用下IL-6表达的影响

目的初步研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLC)增殖以及在内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)作用下淫羊藿苷对h PDLC白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法组织块法原代培养并鉴定h PDLC,采用MTT方法检测淫羊藿苷(0、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)作用下h PDLC增殖的变化;利用PCR、ELISA方法检测淫羊藿苷对在LPS刺激下的人牙周膜细胞IL-6分泌的情况。结果一定浓度范围下(10-6~10-7mol/L)淫羊藿苷对h PDLC的增殖具有积极作用;在10μg/m L LPS作用下h PDLC的IL-6表达增多、活性增强,加入10-6mol/L淫羊藿苷处理后,对此加强效果有一定的抑制作用。结论在一定浓度范围作用下淫羊藿苷可促进h PDLC的增殖;同时,淫羊藿苷对LPS导致h PDLC的IL-6表达增强有一定的抑制作用。     

白细胞介素-1β对遗传性牙龈纤维瘤和正常牙龈上皮细胞β-防御素的影响

目的:比较白细胞介素1β(IL-1β)刺激体外培养的正常牙龈、遗传性牙龈纤维瘤(HGF)上皮细胞β-防御素(HBD)表达的差异,探讨该差异与遗传性牙龈纤维瘤发病机制的可能相关性。方法:体外培养3例遗传性牙龈纤维瘤病人和6例正常人牙龈上皮细胞,经0,0.01,0.1,1,10,100 ng/mL的IL-1β分别刺激12、24、36、48 h,提取细胞总RNA,逆转录后,采用HBD-1、2、3特异性引物经PCR扩增,以β-肌动蛋白为内参,计算HBD-1、2、3与内参扩增产物相对值,对HBD-1、2、3进行半定量分析,采用SPSS软件单向方差统计分析法分析结果。结果:HBD-1 mRNA在正常牙龈和遗传性牙龈纤维瘤上皮细胞中呈固有表达,不受IL-1β刺激的影响。IL-1β可上调两种牙龈上皮细胞HBD-2、3的表达,在浓度为0.1～10 ng/mL时,作用时间大于12 h,受刺激组与未受刺激组差异有显著性(P<0.01)。相同浓度IL-1β作用不同时间时,正常牙龈上皮细胞中HBD-2、3的表达水平显著高于遗传性牙龈纤维瘤上皮细胞中表达水平(P<0.05,P<0.01)。且随作用时间延长差异更加显著。结论:遗传性牙龈纤维瘤病变组织和正常牙龈组织中β-防御素的表达有差异,这种差异可能与遗传性牙龈纤维瘤上皮细胞的分化及发病机制相关。     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激口腔上皮细胞白细胞介素-8的表达

目的比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）刺激下口腔上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）的表达水平,初步探讨P.gingivalis致病性与其fimA基因型的关系。方法P.gingivalis ATCC 33277（Ⅰ型fimA）、W83、47A-1（Ⅳ型fimA）和KB细胞ATCC CCL-17共同孵育24 h,以未受刺激的KB细胞作为对照组,分别在1、3、6、24 h收集细胞和培养上清液。RT-PCR检测KB细胞IL-8 mRNA的动态表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-8的动态变化。结果2种fimA基因型菌株刺激1 h,KB细胞IL-8 mRNA的表达上调至峰值,高于对照组,3~24 h IL-8 mRNA的表达水平接近对照组;P.gingivalis感染细胞后3~24 h,上清液中的IL-8水平低于对照组,Ⅳ型菌株低于Ⅰ型菌株;IL-8 mRNA及其蛋白表达不完全一致,提示IL-8的表达存在转录后水平的调节。结论fimA基因型与口腔上皮细胞IL-8的表达水平相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关。     

牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)内毒素(LPS)对成骨细胞表达炎症因子白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的影响,探讨P.e-LPS参与根尖周病变牙槽骨吸收的病理机制.方法:应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测在不同浓度P.e-LPS (0～50μg/mL)和不同作用时间(0～24h),P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的水平.应用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:当P.e-LPS浓度大于5μg/mL,作用1h后,与0μg/mL和0h组比较,IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的表达水平均显著提高(P＜0.01),表明P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA具有剂量和时间依赖性.结论:P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA,是加速根尖病变的重要毒力因子.     

微螺钉支抗周围液中白细胞介素-1β及基质金属蛋白酶-9水平的检测

目的:检测同一正畸力在不同时间微螺钉支抗周围液中白细胞介素-1β(IL-1β)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。方法:选取口腔正畸患者的39枚微螺钉,分别在种植钉植入后1周、4周和12周时收集其周围液。采用酶联免疫吸附法测定IL-1β和MMP-9的表达水平。结果:根据种植钉周围组织情况分为稳定组(n=27)和松动组(n=12),①松动组IL-1β在12周时浓度最高(P<0.05)。稳定组IL-1β在1周时表达最高,4周和12周之间的浓度无统计学差异。4周和12周时IL-1β在松动组表达水平较高(P<0.05)。②松动组MMP-9表达在12周时最高,稳定组中1周、4周和12周时MMP-9的表达无统计学差异。同一时间MMP-9表达水平在松动组表达较高(P<0.05)。结论:IL-1β和MMP-9水平能够反映种植体微环境状况及微螺钉支抗稳定性。     

单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白在牙周膜干细胞中的抗炎作用

目的:探究单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)在牙周膜干细胞(PDLSCs)炎症反应中的作用.方法:体外培养PDLSCs,用脂多糖(LPS)模拟炎症刺激,RT-PCR检测不同LPS刺激时长对SIGIRR表达水平的影响.免疫荧光与RT-PCR检测不同浓度LPS刺激下,SIGIRR表达水平的变化.将PDLS...     

白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72...     

纤维蛋白原对中性粒细胞分泌白细胞介素1β及8水平的影响

目的 研究急性期蛋白成分纤维蛋白原对中性粒细胞分泌白细胞介素(IL)-1β和IL-8水平的影响,探讨纤维蛋白原在牙周组织炎性反应破坏中的作用.方法 采用密度梯度离心分离法分离纯化、体外培养人外周血中性多形核白细胞,通过夹心ELISA法测定加入不同浓度外源性人纤维蛋白原后中性多形核白细胞分泌IL一1β和IL-8的水平.结果 加入2 g/L纤维蛋白原后中性多形核白细胞于不同时间分泌IL-1β和IL-8的水平分别为(10.41±0.37)～(35.86 ±0.30)ng/L和(93.90±13.95)～(2045.66±53.03)ng/L;加入10 g/L纤维蛋白原后中性多形核白细胞于不同时间分泌IL-1β和IL-8的水平分别为(22.81±0.45)～(57.77± 2.08)ng/L和(115.02±10.61)～(3858.69 ± 25.65)ng/L.与阴性和阳性对照组比较,中性多形核白细胞分泌IL-1β(P＜0.001)和IL-8(P≤0.016)的水平显著升高;随加入纤维蛋白原浓度的升高和作用时间的延长,分泌IL-1β和IL-8的水平升高(P＜0.001).结论 纤维蛋白原可促进中性多形核白细胞分泌促炎细胞因子,在增强炎性反应和对牙周组织的破坏中可能发挥重要的病理作用.