附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展

哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力.附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破.     

人附睾分泌蛋白4时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:采用时间分辨荧光免疫技术(TrFIA)建立高灵敏的人附睾分泌蛋白4(HE4)的检测方法.方法:双抗体夹心法建立HE4-TrFIA,并对该试剂的各项性能指标进行评价.结果:该法的检测范围为1.08pmol/L ~2000pmol/L,灵敏度为1.08pmol/L,HE4的回收率95.6%,批内和批间变异系数分别3.6%~7.3%,4.6%~10.2%.与CA125交叉反应率0.01%.破坏试验表明,试剂在37℃可稳定7d.62例卵巢癌患者和60例健康人血清,用该试剂盒测得卵巢癌患者血清HE4浓度显著高于健康人(P<0.001).该试剂盒检测结果与进口HE4 kit检测结果r为0.951.结论:自建的HE4-TrFIA是一种敏感度高、特异性强、准确度高的适用方法,具有良好的临床应用前景.     

人肝贮脂细胞表达结蛋白的免疫细胞化学观察

用免疫细胞化学法观察了正常人肝贮脂细胞表达结蛋白中间丝。发现结蛋白阳性细胞位于血窦旁旁狄氏间隙内,呈星形或纺锤形,于肝小叶内大致均匀分布,有些细胞内含有空泡,每高倍(400X)视野细胞数为15～25个。汇管区结缔组织内及肝静脉周围散在少数与小叶内形态相似的结蛋白阳性细胞。结果表明正常人肝贮脂细胞表达结蛋白,可作为研究该细胞的良好标志,并支持了贮脂细胞的肌源性学说。[关键词]贮脂细胞,结     

血清中人附睾上皮分泌蛋白4的测定与卵巢上皮性肿瘤患者临床病理特征的关系

为探讨卵巢上皮性肿瘤患者血清人附睾上皮分泌蛋白4（HE4）水平的变化,以及与临床病理特征的关系,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测21例良性卵巢上皮肿瘤患者、12例交界性卵巢上皮肿瘤患者和49例卵巢癌患者血清HE4水平,并分析其水平与临床病理特征的关系。卵巢癌组血清HE4水平（中位数123.00pmol/L）明显高于交界性卵巢上皮肿瘤组（中位数41.20pmol/L）和良性卵巢上皮肿瘤组（中位数32.80pmol/L）;血清HE4水平与卵巢上皮性癌患者是否绝经、年龄及有无淋巴结转移无关（P〉0.05）,而与患者的临床FIGO分期（Ⅰ＋Ⅱ、Ⅲ＋Ⅳ）、病理组织学类型及有无腹水有关（P〈0.05）,浆液性癌（中位数198.50pmol/L）和子宫内膜样癌患者的血清HE4水平（中位数139.25pmol/L）明显高于黏液性癌患者（中位数30.95pmol/L）（U值分别为17.00和2.00,P〈0.01）。血清HE4水平与卵巢上皮性癌临床病理特征密切相关,并有望成为卵巢上皮性肿瘤恶变的标志物。     

用原位杂交法研究兔附睾蛋白BE—20的基因表达

兔附睾尾液经ＨＰＬＣ纯化后，获得分子量为２０ＫＤ的附睾特异蛋白，命名为ＢＥ－２０。ＢＥ－２０的抗体具有明显抑制人精子穿去透明带仓鼠卵的能力。已获得编码ＢＥ－２０的０．５ｋｂ ｃＤ－ＮＡ片段，命名为ＲＥＤ－２０。用地高辛标记此片段，与兔睾丸、附睾、输精管和肝组织进行原位杂交，观察ＢＥ－２０在各种组织中的定位和表达。采用杂交前热变性与不用热变性组织两种方法进行原位杂交。杂交信号均为紫褐色的颗粒，分布在     

用原位杂交法研究兔附睾蛋白BE－20的基因表达

兔附睾尾液经ＨＰＬＣ纯化后，获得分子量为２０ｋＤ的附睾特异蛋白，命名为ＢＥ－２０。ＢＥ－２０的抗体具有明显抑制人精子穿透去透明带仓鼠卵的能力。已获得编码ＢＥ－２０的０．５ｋｂｃＤＮＡ片段，命名为ＲＥＤ－２０。用地高辛标记此片段，与兔睾丸、附睾、输精管和肝组织进行原位杂交，观察ＢＥ－２０在各种组织中的定位和表达。采用杂交前热变性与不用热变性组织两种方法进行原位杂交。杂交信号均为紫褐色的颗粒，分布在附睾尾的主细胞和近端输精管的上皮细胞的胞质内，表明胞质内ｍＲＮＡ与地高辛标记ＲＥＤ－２０ｃＤＮＡ探针杂交。组织经热变性后，附睾尾和近端输精管上皮细胞核出现强阳性反应，表明核内的同源ＤＮＡ与地高辛标记的ＲＥＤ－２０ｃＤＮＡ探针杂交。但在睾丸和肝脏内未见杂交信号，提示ＢＥ－２０是附睾尾和近端输精管上皮细胞合成的蛋白质。经分析证明，此蛋白是一种细胞外的蛋白酶抑制剂，可能与防止精子过早获能有关，它是否能用于制备抗生育疫苗有待深入的研究。     

大肠癌肠嗜铬细胞的免疫细胞化学研究

In a series of 130 cases of adenocarcinoma of the large intestine, enterochromaffin (EC) cells were detected in 54 cases (41.5%) by immunocytochemistry with anti-chromogranin monoclonal antibody. Among the 54 cases, 30 were found positive for serotonin, 14 for somatostatin, 11 for glucagon, 5 for pancreatic polypeptide, and only one for gastrin. The cases with EC cells (++) or polypeptide positive cells exhibited higher grade of differentiation, earlier stage of tumour extension and higher survival rate than those without EC cells. A significant difference of the EC cell population pattern among different histological grades of the tumours and nonneoplastic mucosa was found. The proportion of hormone, especially polypeptide positive cells was the highest in the mucosa and lowest in the moderately poorly differentiated carcinomas. The incidence, methodology and clinicopathological significance of EC cells found in the tumours are discussed.     

人附睾分泌蛋白4对卵巢恶性肿瘤的诊断价值

为探讨血清人附睾分泌蛋白4在卵巢癌及妇科盆腔良性疾病中的诊断价值,应用ELISA方法检测了31例卵巢癌患者、44例子宫肌腺症、32例卵巢囊肿、30例内膜异位症患者及65名正常健康人血清人附睾分泌蛋白4水平;化学发光微粒子免疫分析法检测以上各疾病组及正常对照组血清CA125水平。结果显示,卵巢癌患者血清人附睾分泌蛋白4水平较其他良性疾病组患者及正常健康人均显著升高,其差异均具有非常显著的统计学意义（P〈0.01）。结果还显示,血清CA125水平升高的妇科盆腔良性疾病组患者血清人附睾分泌蛋白4水平与正常对照组比较,其差异均无统计学意义（P〉0.05）。结果提示,人附睾分泌蛋白4是一种能区分卵巢癌与妇科盆腔良性疾病的新型标记物,可以弥补CA125作为卵巢癌诊断特异性不强的弱点,结合CA125水平,影像学检查,人附睾分泌蛋白4有可能成为卵巢癌诊断的重要标记物。     

免疫细胞中钙结合蛋白的研究

家兔阑尾(B细胞)、肠系膜淋巴结(T、B细胞)、脾脏(T、B细胞)和中性粒细胞胞浆中,分别含12、4、15和7种钙结合蛋白(CaBP),且均含120.2和40.5KD CaBP。被检免疫细胞富含小分子CaBP。钙调素(CaM)的含量是:阑尾B细胞>淋巴结淋巴细胞>脾脏淋巴细胞>中性粒细胞。     

大鼠睾丸和附睾中钙调素免疫组织化学定位的研究

用免疫组织化学ＡＢＣ法，观察了钙调素在大鼠睾丸和附睾的定位与分布。结果表明，钙调素免疫反应产物分布在精母细胞，精子细胞和精子中，而精原细胞，Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞和Ｌｅｙｄｉｇ细胞呈阴性反应。钙调素免疫反应既见于胞质中，也见于胞核中。相邻曲细精管钙调素免疫反庆强度呈明显的不均一性。不同发生阶段的生精细胞间免疫反应强度也存在差异。大附睾，钙调素免疫反应见于附睾管尾段主细胞顶端胞质内，偶见于主细胞的基底部     

输精管绝育术对实验性家兔动脉粥样硬化症的影响

本文报告家兔输精管绝育术后的免疫反应对实验性动脉粥样硬化的影响，实验动物20只，分为4组，每组5只，A，B组作输精管绝育术，而C、D 组不作手术，在绝育术20周对B组与C组一起用高脂饮食喂养25周，D组为空白对照，整个实验共为10月左右（45周），各组同时结束实验，病理组织学检查，绝育组动物（A，B）睾丸和附睾局部精子淤滞并破入间质引起反应，在高脂饮食组（B，C）中：输精管绝育B组有3只，未绝育组有2只的主动脉和颈总动脉肉眼可见粥样化斑形成，镜检10只动物皆有不同程度的类脂沉着，两组比较，无明显差异，本动物实验研究不能证明输精管绝育术能促进动脉粥样硬化的发展。     

摘除小鼠颌下腺其附睾内精子数的变化

为观察１４周龄雄性昆明种小白鼠施行颌小腺摘除后１～６周附睾内成熟精子数量的变化，取小鼠４８只，随机分成１２组，其中６组行颌下腺摘除手术，其余为对照。结果表明，颌下腺摘除后第４周开始，附睾内精子数量呈显著减少趋势，第５和第６周的精子数分别为０．５６±０．２６×１０７和０．５０±０．１３×１０７，与对照相比分别有显著差异（Ｐ＜０．０５）和非常显著差异（Ｐ＜０．０１）。摘除颌下腺手术后５周内小鼠的体重与对照相比无显著变化，但第６周的体重下降有明显的统计学差异（Ｐ＜０．０１）。     

性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾显微和超微结构的影响

目的 探讨性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张(EVC)附睾显微和超微结构的改变及其在不育中的作用。方法 部分结扎左肾静脉建立大鼠EVC模型，常规制作附睾各段光镜及电镜标本。结果 EVC大鼠附睾各段均出现程度不同且有区段特异性的损害。光镜下主要表现有间质血管充血扩张，淋巴细胞浸润、积聚，间质内出现精子肉芽肿。附睾管萎缩，上皮细胞变性，甚至出现空泡化，上皮内晕、亮细胞数明显增多；管腔内出现大量未成熟生精细胞、畸形精子等。电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大，残余小体增加，细胞器(内质网、线粒体、高尔基复合体等)受损，部分主细胞内出现大空泡。晕细胞、亮细胞内溶酶体也增大、增多，亮细胞常膨大，游离面突入管腔。上皮细胞游离面微绒毛稀少，可见局灶性断裂和破坏。上皮基膜增厚。结论 性成熟期大鼠EVC可致附睾管上皮显微及超微结构明显改变，这可能是精索静脉曲张相关不育的一个主要原因。     

镉对大鼠附睾体部的损伤及锌的保护作用

目的 探讨镉对大鼠附睾体部的超微结构影响及其作用机理。方法 单纯小剂量氯化镉（２ｍｇ／ｋｇ体重）及加锌腹腔内注射后,用透射电镜及硫胺素焦磷酸酶（ＴＰＰａｓｅ）电细胞化学定量分析。结果 镉注射后４ｈ,主细胞出现轻度超微结构损伤;２４ｈ至３ｄ进一步加重;７－１５ｄ退变最严重;３０－６０ｄ基本恢复。     

家兔正中神经躯体运动神经元的定位研究

本文用HRP逆行轴突追踪技术显示家兔正中神经及其各分支的躯体运动神经元。HRP标记细胞见于脊髓C_5—T_2节段前角外侧部,正中神经的臂支、前臂支和爪支的标记细胞在脊髓内分别位于C_5—C_7、C_6—T_2和C_7—T_2节段,各组标记细胞在脊髓灰质内呈明显的躯体定位排列。用图象分析仪对标记细胞分析测量,其平均值为:长径27.8±8.57微米,宽径20.0±6.40微米,面积449±260平方微米,周长为78.8±24.4微米,体积9967±8560立方微米,细胞的长、宽径比值1.41±0.29。     

家兔不同形态骨骼肌的肌内神经分布

目的探讨家兔不同形态骨骼肌的肌内神经分支分布。方法肌构筑法和改良的Sihler肌内神经染色法。结果清楚显示扁形的胸大肌接受胸前神经和胸后神经支配。胸前神经主要支配横行纤维,并在其中部形成—“U”形的神经襻。胸后神经主要支配斜行纤维,与前者的神经细分支间有吻合;羽状的跖肌由胫神经肌支支配,入肌后逐渐向肌的内、外两侧发出许多初级神经支,这些神经支又分出若干树枝状的次级支与细分支;梭形的趾长伸肌,有2条肌外神经干,上千及其分支支配止于第二趾的肌纤维,下干支配其余3趾的肌纤维。结论不同形态肌的肌内神经分支、分布与肌纤维排列有关;肌内神经分支走行有与肌束平行和,或垂直两种形式。