心肌内磁标间充质干细胞磁共振活体成像的可行性研究

目的本研究探讨活体心肌内磁标干细胞磁共振成像的可行性。方法以50:1的比例将5μg／mL SHU555A-PLL培养液与猪骨髓间充质干细胞(MSCs)共孵育24 h,并以DAPI和PKH26进行荧光标记。然后将MSCs经心外膜直接注入猪急性梗死心肌内,每头猪注射3点．根据每注射点细胞数量及细胞是否以标记将12头猪随机均分为4组:2×106标记细胞组、1×106标记细胞组、5×106标记细胞组和1×106未标记细胞组。细胞移植后20-24 h行猪心脏1．5 T磁共振成像,1 h后处死并根据磁共振图像切取心肌组织行普鲁士蓝染色和免疫荧光检查．结果SHU555A标记的MSCs经普鲁士蓝染色后在光学显微镜下,细胞内可见大量蓝色颗粒,标记率为100％,而未标记的细胞胞质内未见着色颗粒。电子显微镜观察证实含铁囊泡位于细胞胞质内。DAPI和PKH26共阳性率达(93±5)％。注射标记细胞的9头猪行T2*WI-Flash2d序列扫描发现,左室壁注射部位呈边界清晰的低信号区:T2WI-FSE序列扫描仅隐约可见低信号甚至难以辨认;而TrueFrsp定位序列和T1WI-TSE序列扫描则不能显示。磁共振成像检查未标记细胞组的3头猪9个心肌注射点均未显示低信号区。心肌内低信号区域随回波时间的增加而增大,且与注射的细胞剂量无关;心肌内低信号区面积与回波时间呈线性相关(r=0．98,P<0．01);回波时间从10 ms增加到20 ms,低信号区面积增加约1倍。在回波时间相近或相同的情况下,注射点低信号区的面积大小与移植细胞数量呈正相关(P<0．01)。④磁共振低信号区心肌病理学检查见普鲁士蓝染色、DAPI和PKH26三重阳性细胞存在;虽然移植未标记细胞的心肌壁内未显示磁共振低信号区,但荧光显微镜证实,在细胞注射部位心肌中存在DAPI和PKH26阳性细胞。说明心肌壁低信号源自MSCs内的SHU555A。结论应用磁共振活体观察心脏内移植的磁标干细胞的方法可行,为将来人类心脏细胞治疗中磁标干细胞的示踪提供了实验基础。     

超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓间充质干细胞的磁共振成像研究

目的:探讨超顺磁性氧化铁纳米粒子(Superparamagnetic iron oxide,SPIO)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的适当浓度和不同标记浓度对细胞的生物学活性影响,以及经MR成像的特征等.方法:选取第5代细胞进行不同浓度SPIO标记,运用光学显微镜观察铁颗粒在细胞内的位置、分布及标记率;选取适当浓度标记量,使用1.5T磁共振进行T1wI、T2WI、T2*WI扫描,测量不同扫描序列标记细胞管的信号强度改变,并进行统计学分析.结果:标记后的铁颗粒均位于细胞质内;含量在25～50μg Fe/ml的培养液是SPIO标记干细胞的安全浓度,在此浓度阈值标记后孵育24 h即可有效标记细胞97%～100%;SPIO标记的MSCs在T1WI,T2WI及T2*WI序列信号均降低.结论:SPIO可以简便标记MSCs.并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,MR T2WI和T2*WI序列可有效显像磁性标记的干细胞,为下一步活体试验奠定基础.     

Fth1基因标记对骨髓间充质干细胞生物学特性及体外MRI表现的影响

摘要 目的: 观察铁蛋白报告基因Fth1标记对骨髓间充质干细胞(MSCs)生物学特性的影响及体外MRI表现。方法：原代分离培养大鼠MSCs,构建携带铁蛋白重链基因Fth1的慢病毒载体,取第4代MSCs进行转染,并在培养基内加入柠檬酸铁进行培养。普鲁士蓝染色检测转染MSCs的摄铁能力,台盼蓝染色活细胞计数检测转染细胞的活力,CCK-8测定转染MSCs的增殖活性。应用MRI的FSE T2WI和SWAN序列观察转染MSCs和普通MSCs MRI信号的差异。结果：Fth1基因可成功转染MSCs,转染MSCs的普鲁士蓝染色标记效率为87%;未加含铁培养液的转染MSCs,活细胞比率为92.17±1.91,OD值为1.094±0.0682,与普通MSCs对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）,加入含铁培养液培养3天后的转染MSCs活细胞比率为77.47±4.10,OD值为0.4929 ±0.0239,与未加含铁培养液的标记MSCs及对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）;MRI扫描FSE T2WI和SWAN序列显示转染MSCs信号强度为847.1±10.54,与未加含铁培养液的转染MSCs及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而未加含铁培养液的转染MSCs与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：Fth1报告基因可成功转染MSCs、并高效表达与摄取铁,不影响细胞活力及增殖活性,但在铁浓度1mol/L含铁培养液中细胞活性受到一定影响;经含铁培养液培养5天后,MRI可体外检测标记MSCs,其FSE T2WI和SWAN序列呈低信号改变。     

体外纳米磁标记骨髓间充质干细胞生物学特性及其MR成像

目的 研究超顺磁性氧化铁粒子(superparamagnetic iron oxide particles,SPIO)体外标记兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)及MR细胞成像示踪可行性.方法 从兔骨髓中分离培养MSCs,体外不同浓度SPIO联合硫酸鱼精蛋白标记,未标记细胞设为对照组.普鲁士蓝染色和电镜检查鉴定细胞内铁颗粒,台盼蓝染色检测细胞存活,MTF法测定细胞生长曲线的变化,磁标记MSCs转入成骨、成脂肪培养基中进行诱导培养后进行鉴定,应用1.5T MR梯度回波T2加权(GRE T2 *WI)扫描序列和自旋回波T2加权(SE T2WI)扫描序列对磁标记细胞成像示踪.结果 普鲁士蓝染色和电镜检查显示细胞质内含致密铁颗粒,磁标记对MSCs活性和增殖无统计学差异(P<0.05),标记细胞可正常成骨、成脂肪分化.GRE T2*WI序列和SE T2WI序列提示与未标记细胞信号强度(sI)相比,1×106(标记细胞)、5×105(标记细胞)SI均显著性下降(P<0.05),其中GRE T2*WI的信号强度衰减率(△SI)显著高于T2WI序列(P<0.05).在2个序列中1×106(标记细胞)△SI均高于5×105(标记细胞)△SI,但不具有显著性差异(P>0.05).结论 SPIO联合硫酸鱼精蛋白转染剂能成功标记MSCs,磁标记对细胞存活、增殖及潜在多向分化能力无影响.磁标记细胞在MR上产生特征性的低信号改变.应用1.5T MR成像示踪标记细胞可行,以GRE T2*WI序列成像最为敏感.     

大鼠骨髓源神经干细胞的Sinerem体外标记及磁共振成像研究

目的 应用超小超顺磁性氧化铁(USPIO)Sinerem和转染试剂多聚赖氨酸(PLL)复合物标记大鼠骨髓源神经干细胞,初步评价磁共振成像活体示踪Sinerem标记干细胞的可行性.方法 分离SD大鼠骨髓基质干细胞,体外培养诱导成骨髓源神经干细胞.将制备的Sinerem-PLL复合物以浓度Sinerem 200μg/ml和干细胞共孵育培养过夜.采用普鲁士蓝染色和透射电镜确定细胞内铁的摄取、定位情况;并对细胞增殖、凋亡检测评价.体内外以SE序列T2WI与T2*WI行4.7T磁共振干细胞成像.结果 该方法标记干细胞效率为95%以上,普鲁士蓝染色显示铁颗粒存在胞质中,电镜显示铁颗粒集中于内涵体和溶酶体中;该浓度时Sinerem对细胞的活性影响与未标记细胞相比差异无统计学意义(P＞0.05).标记后细胞体内外的T2WI与T2*WI信号强度明显降低.结论 利用Sinerem对比剂经PLL介导标记骨髓源神经干细胞高效易行,磁共振可用于活体示踪神经干细胞.     

PEI2k-SPIO纳米颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞的体外磁共振成像

目的明确经修饰的多聚乙烯-超顺磁性氧化铁(PEI2k-SPIO)纳米颗粒体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的最佳浓度,以及标记后BMSCs的磁共振成像(MRI)特征、可成像的最低标记细胞量和最佳成像细胞量。方法取第二代大鼠BMSCs接种于投放有盖玻片的6孔板内,分别加入浓度为5μg/mL、7μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL铁浓度的PEI2k-SPIO液,而后行普鲁士兰染色,观察不同标记浓度对细胞生物学活性的影响;采用四唑盐(MTT)比色法,分析不同浓度的PEI2k-SPIO液对大鼠BMSCs生长活性的影响,并确定PEI2k-SPIO纳米复合颗粒标记干细胞的最佳阈值;取最佳阈值的PEI2k-SPIO标记BMCSs,经磁共振成像,确定成像所需最低细胞量及最佳成像细胞量。结果 PEI2k-SPIO标记BMSCs的最佳浓度是7μg/mL,该标记浓度下细胞生物活性不受影响;在7μg/mL PEI2k-SPIO培养液标记浓度下,MRI的最低细胞量为1×104,最佳成像细胞量为1×106。结论适当浓度的PEI2k-SPIO标记BMSCs对其生物学活性没有影响,MRI可敏感显像PEI2k-SPIO标记的BMSCs。     

SPIO标记大鼠骨髓基质干细胞及体外磁共振成像研究

目的 探讨以多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)为转染介质介导超顺磁性氧化铁微粒(superparamgnetic ironoxides,SPIO)标记大鼠骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的合适条件,通过标记细胞的体外磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)获取最佳的磁共振扫描序列.方法 分离、纯化、培养大鼠BMSCs,SPIO和PLL以1:0.001 2混合配制氧化铁一多聚赖氨酸(F-PLL)混合液,用铁浓度分别为0、4.2、8.4、21、42、84μg/ml的FE-PLL复合物标记BMSCs.计算细胞标记阳性率,测量并绘制末标记细胞和不nd浓度铁标记细胞的MTT生长曲线;对不同浓度铁标记的细胞进行磁共振成像.分别用浓度为0、0.05、0.25、0.5、1.0、5.0 μg/ml的PLL同BMSCs共同培养,了解各种浓度PLL对细胞的生存是否有影响.结果 细胞的标记率分别为O%、(44.40±11.33)%、(71.97 4±8.01)%、(88.86±9.10)%、(98.24±2.94)%、100%,随着SPIO浓度的增加而增加.MTT显示在铁浓度＜42 μg/ml时FE-PLL上复合物对细胞的生长活性无明显影响,而铁浓度为84μg/ml时,细胞的生长活性受到抑制.PLL在浓度≤1.0μg/ml时对细胞的活力无明显影响;当PLL浓度为5.0μg/ml时,细胞生长明显受抑.MRI信号随FE-PLL复合物浓度的增加而增加(P＜0.05),标记细胞的信号在T1WI的改变不及在T2WI及T2*WI明显,而以T2*WI信号改变最明显(P＜0.05).结论 以PLL为转染介质,SPIO能够高效的标记BMSCs,并且在合适的浓度范围内不会影响干细胞的生长活性.     

超顺磁性氧化铁颗粒标记对大鼠骨髓间充质干细胞活力的影响

目的:探讨利用超顺磁性氧化铁颗粒(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对细胞活力的影响.方法:分别使用不同铁浓度(35、70、140和210 mg/L)的SHU555A标记大鼠BMSCs,分别于标记后1 d及1、2、3周行普鲁士蓝染色观察铁纳米颗粒进入细胞情况,台盼蓝排除试验检测细胞活力.结果:普鲁士蓝染色显示标记的大鼠BMSCs胞质内存在细小蓝色铁颗粒,标记率100%;台盼蓝染色显示标记时间对BMSCs活力无影响.铁浓度为35 mg/L时对标记的细胞活力无影响,大于该浓度则细胞活力下降.结论:35 ms/L的铁纳米颗粒可用于大鼠BMSOs标记.     

基质金属蛋白酶2靶向穿膜肽表征分析及体外显像研究

目的 构建以基质金属蛋白酶2为靶点的穿膜肽,标记荧光素及顺磁性粒子,初步探讨体外成像价值。方法 固相合成基质金属蛋白酶2（MMP-2）为靶点的可活化穿膜肽（CPPs）,标记荧光素FTTC,构建荧光素分子探针A;标记磁共振对比剂二亚乙基三胺五乙酸钆（Gd-DTPA）,构建磁共振分析探针B。高效液相色谱纯化探针及质谱测定分子量。聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测定可活化穿膜肽的等电点。400MHz磁共振谱仪翻转恢复序列测定磁共振探针B的自旋-点阵弛缓时间（T1）;制备人肺癌细胞株A549爬片,FITC和荧光素分子探针A分别孵育细胞爬片30min倒置荧光显微镜观察细胞内荧光分布;抗MMP-2单克隆抗体孵育细胞后,荧光素分子探针A孵育细胞后荧光显像及流式细胞分析细胞摄取的状况。明胶酶谱分析细胞表达MMP-2的情况;以A549为对象,120nmol／ml磁共振探针B和常规磁共振对比剂分别作用于细胞10、30、印、90min后,1．5TMRIT,WI视觉评价法分析细胞内磁共振信号,并与空白细胞组比较,方差分析各组细胞信号变化特征。透射电镜分析磁共振探针B细胞内分布。结果 采用标准的芴甲氧羰基合成方案,质谱鉴定荧光素分子探针A分子量3789．74;磁共振分子探针B分子量3911．93。测定聚丙烯酰胺等电聚焦电泳目的条带pH值为11．005,即为可活化穿膜肽的等电点。17℃400MHz磁共振谱仪测定浓度为0．5mmol／L的Gd-DTPA与磁共振探针B去离子水溶液的纵向驰豫时间T1分别为0．052s±0．01S和0．050s±0．001S,两种配合物自旋-晶格驰豫效能分别为4．998L·mmol^-1·s^-1。及6．452L·mmol^-1·S^-1。倒置荧光镜成像显示FITC作用细胞组内未见荧光素分布,荧光素探针A作用组A549细胞质和细胞核内出现明显得荧光素分布。抗MMP-2单克隆抗体孵育A549后,荧光摄取减少。以明胶酶谱分析细胞无血清培养基中MMP-2表达显示肿瘤表达酶原和活性酶两种形式。120nmol／ml磁共振探针B和常规磁共振对比剂分别作用于A54910、30、60、90min后,MRFSET,WI显示,磁共振探针B作用A549细胞组呈短T1高信号,Gd-DPTA作用组与对照组呈等T1信号。各组细胞组感兴趣区信号与背景信号比值的方差分析显示,磁共振分子探针B作用五组细胞信号间差异有统计学意义（F=267．569,P〈0．001）,两两组间信号差异也存在统计学意义（P〈0．05）,随着孵育时间增长,信号强度逐渐增强,到90min时未见到明显饱和现象出现。Gd-DTPA作用细胞组信号与空白对照细胞组差异无统计学意义（P〉0．05）。透射电镜显像示磁共振探针作用的肺癌细胞株A549胞质及胞核里出现高电子密度的钆颗粒沉积,证实肿瘤细胞摄取磁共振探针B。结论 以MMP-2为靶点的可活化穿膜肽,能够被活性基质金属蛋白酶激活,能够标记荧光探针和磁共振探针用于肿瘤细胞显像。     

磁性/荧光量子点双功能纳米粒子标记大鼠骨髓间充质干细胞

目的 利用磁性/荧光量子点双功能纳米粒子双标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),探讨标记效率和可行性.方法 分离、纯化及培养大鼠BMSC.制备二氧化硅(SiO_2)同时包裹四氧化三铁(Fe_3O_4)和碲化镉(CdTe)荧光量子点的磁性/荧光双功能纳米粒子Fe_3O_4@CdTe@SiO_2:,利用铁浓度为25μg/ml的Fe_3O_4@CdTe@SiO_2标记BMSC,未标记的BMSC作为对照组.通过荧光显微镜观察细胞内纳米粒子的荧光表达情况.双标记后的BMSC分成8个不同数量级(3×10~6～1×10~3个),应用1.5 T磁共振扫描仪进行T_1 WI、T_2 WI和T_2~* WI 3个序列成像.分光光度计测量细胞铁含量,普鲁士蓝染色显示细胞内铁.结果 荧光显微镜下可见双标记组细胞内Fe_3O_4@CdTe@SiO_2:纳米粒子显示为红色荧光,细胞标记率达到90%以上.磁共振成像可见3×10~6～5×10~4双标记组细胞较对照组T_2 WI、T_2~* WI信号减低,两组之间的信号差异随数量级减小而相应减小,T_2~* WI信号变化最明显,T_2WI次之.细胞铁含量为(14.05±4.15)pg/细胞,普鲁士蓝染色可见双标记细胞胞质内蓝染的含铁颗粒.结论 Fe_3O_4@CdTe@SiO_2,纳米粒子可同时对大鼠BMSC进行磁性和荧光双标记,有望成为磁共振和光学成像活体示踪移植后BMSC的有效手段.     

应用磁共振技术评价顺逆行心肌灌注效果

目的应用磁共振技术评估相同流量下顺、逆行心肌灌注的效果。方法应用磁共振成像比较顺、逆行灌注离体猪心期间的T2*或T1信号曲线的相关性,用磷31磁共振图谱比较两种灌注方式对心肌能量代谢的影响。结果逆行灌注期间各T2*信号曲线的相关性(0.52±0.15)明显弱于顺行灌注(0.84±0     

磁共振活体监测大鼠间充质干细胞移植治疗急性肾功能衰竭

目的 磁共振活体监测移植入急性肾功能衰竭(ARF)大鼠腹主动脉的磁标记间充质干细胞(MSCs)并检测大鼠.肾功能及肾脏病理改变.方法 磁性纳米粒子体外标记大鼠骨髓MSCs.ARF大鼠分为3组,插导管至腹主动脉,分别移植入标记细胞(10只);移植入未标记细胞(10只);灌注等量生理盐水(10只).移植后0.5 h及第1、2、5天应用MRI对移植细胞进行活体示踪,并与肾脏普鲁士蓝染色及CD68抗体染色对照.监测大鼠肾功能恢复及肾脏病理变化情况.结果 Fe2O3-PLL可有效标记大鼠MSCs.标记细胞移植后ARF大鼠.肾脏皮质区T2*WI信号强度明显下降,持续到移植后第5天.组织学分析见标记细胞分布于肾皮质肾小球内.细胞移植组肾功能优于对照组,肾损伤程度明显轻于对照组.结论 临床应用型1.5 T磁共振仪可活体监测移植入ARF大鼠腹主动脉的MSCs,移植后早期细胞分布于肾皮质肾小球内;MSCs移植后早期可促进ARF恢复.     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外的诱导分化及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记MSCs的可行性. 方法:利用密度为1.073 kg/L的percoll分离骨髓的单个核细胞,体外培养与扩增MSCs;取生长良好的第3代细胞,用成骨细胞分化培养液培养21 d,Ⅰ型胶原免疫组化染色和碱性磷酸酶(AKP)组化染色;分别以浓度为5,10和15 μmol/L的Brdu溶液标记MSCs,孵育12,24,48,72和96 h后免疫组化检测Brdu,确定最佳标记量和最佳标记时间. 结果:诱导分化第21日, AKP染色呈强阳色,Ⅰ型胶原免疫染色呈阳性. 10 μmol/L Brdu标记MSCs的效果最好,随着孵育时间的延长,Brdu标记率逐渐增高,标记72 h后标记率在90%以上. 结论:MSCs在体外一定条件下可定向诱导分化为成骨细胞,用Brdu标记MSCs的最佳浓度为10 μmol/L,最佳时间是72 h.     

条件培养液体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究*

[目的]观察乳鼠心室肌成纤维细胞条件培养液干预体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制.[方法]分离培养及鉴定大鼠MSCs,对其进行分组诱导:单纯条件培养液组(TJ)、条件培养液1组(TJ-ZY)、条件培养液2(TJ-XFK),诱导,24h后继续培养4周,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4、Desmin和α-actin mRNA的表达.[结果]免疫细胞化学结果显示单纯条件培养液诱导后的MSCs不表达心肌特异性蛋白cTnT,心复康参与组则表达.实时荧光定量(RT-PCR)结果显示各组均表达心肌分化早期基因,心复康参与组诱导后的MSCs的心肌分化早期基因表达明显高于单纯条件培养液组.[结论]微环境在MSCs向心肌样细胞的分化过程中起了重要作用,心复康能够提高MSCs向心肌样细胞的分化和特化作用.     

注射用钆喷酸葡胺致过敏性休克1例的抢救护理

钆喷酸葡胺注射液是一种用于磁共振成像的顺磁性造影剂,进入体内后能缩短组织中质子的T1及T2驰豫时间,从而增强图像的清晰度和对比度.经静脉注射后迅速分布于细胞外液,约1分钟血和组织中浓度已达到高峰.其不良反应极少,个别患者有恶心、呕吐,荨麻疹,心悸,头晕,低血压,喉头水肿,休克等反应.我科于2010年3月18日发生注射钆喷酸葡胺致过敏性休克1例,现将护理体会报告如下.     

小鼠胚胎干细胞磁标记共振成像的研究

目的 应用超顺磁氧化铁（SPIO）标记小鼠胚胎干细胞（ESC）,并行磁共振成像,为心肌细胞移植体内示踪作初步准备。方法 小鼠ESC及其分化的心肌细胞与SPIO孵育后行电镜分析、细胞内铁含量测定、[Ca^2＋]共聚焦测定和MR成像。结果 铁颗粒分布在胞质吞饮小泡内;使用转染技术的铁摄取高于未使用组;T2WI和T2^＊ WI扫描序列均见标记细胞呈信号下降,程度随标记浓度的增加而增强;T2^＊ WI图像信号强度变化更大。标记心肌细胞在T2^＊ WI序列也呈显著的低信号改变。结论 SPIO可有效标记ESC及其分化的心肌细胞,对细胞活性和分化能力无明显影响。常规1．5TMR仪可进行标记细胞成像。     

碘普罗胺和碘比醇对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨碘普罗胺(IP)和碘比醇(IB)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的影响。方法:将大鼠骨髓MSCs按2×103/孔接种于96孔板培养48 h后,改为IP或IB培养液(碘浓度分别为01、0、50、1002、005、001、0002、000μmol/L)各200μl继续培养,之后于不同时间点测定OD值;另外细胞按8×103/孔接种于24孔板,加IP或IB培养液各400μl孵育3 d后,计算细胞活力。结果:不同碘浓度IP培养液培养1 d、2 d、3 d和4 d不同时间点,各组OD值相比无统计学差异(P>0.05),培养3d时,细胞活力在96.9%~98.2%之间;不同碘浓度IB培养液培养的不同时间点,各组OD值无统计学差异(P>0.05),培养3d时,细胞活力在96.5%~98.1%之间。结论:IP和IB均不影响大鼠骨髓MSCs增殖,亦不增加细胞死亡。     

兔外周血内皮祖细胞的多功能分子影像探针标记及其在肿瘤模型中的活体示踪

目的:构建多功能分子影像探针——共轭化合物-1,体外标记兔外周血内皮祖细胞(endothelial pro-genitor cells,EPCs),并进行体内细胞示踪。方法:利用磁共振T1对比剂Gd、近红外荧光染料Cy5.5以及罗丹明合成共轭化合物-1,体外标记EPCs,采用四氮噻唑蓝(MTT)比色实验评价不同浓度bCD-PLL标记EPCs后对细胞增殖力的影响;流式细胞术分析对细胞周期的影响及不同孵育时间细胞荧光标记率。将标记共轭化合物-1的EPCs移植于乳腺癌荷瘤鼠模型,通过磁共振成像和近红外光学成像对移植细胞进行活体示踪。结果:共轭化合物-1的标记对EPCs增殖活性及细胞周期无明显影响;2μmol.L-1共轭化合物-1可有效标记细胞。磁共振成像和近红外光学成像表明标记的EPCs在移植后5 d肿瘤信号出现明显改变。结论:共轭化合物-1能有效标记兔外周血EPCs,细胞活力不受影响。两种活体成像均表明经标记的EPCs移植于乳腺癌荷瘤鼠模型后能够归巢至肿瘤组织,显示出共轭化合物-1的成像优越性。     

羧基荧光素乙酰乙酸对大鼠骨髓间质干细胞体外染色的研究

目的 探讨活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)的可行性和最适条件.方法清洁型SD大鼠20只,用密度梯度离心结合贴壁法分离、纯化、培养大鼠MSCs,取长满25 cm×25 cm培养瓶瓶底的第3代大鼠MSCs,用2.5,5,10,20,40 μmol/L的CFSE分别作用1,5,10,15,20 min后染色,通过观察染色后细胞荧光强度和细胞贴壁率筛选出CFSE标记大鼠MSCs的最佳标记时间和标记浓度.采用MTT法检测最佳条件CFSE标记的大鼠MSCs的增殖能力.结果浓度10 μmol/L的CFSE在37 ℃下孵育10 min为MSCs染色、观察和研究的最佳条件.此条件下,CFSE标记的MSCs的增殖能力不受影响.结论活体染料CFSE是一种标记率高、细胞毒性小、操作简便的标记大鼠MSCs的新方法,浓度10 μmol/L的CFSE在37 ℃下孵育10 min为CFSE标记大鼠MSCs的最佳条件.     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

目的探讨用5-氮胞苷(5-aza)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳条件.方法用Percoll密度梯度离心法分离培养、纯化大鼠MSCs,取第3代MSCs随机分为A、B、C 3组,分别加入5、10、20 μmol/L5-aza;每组分别孵育12、24、48 h,继续培养28 d.相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测细胞肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达,并通过Western印迹法对细胞cTnT进行定量分析.结果MSCs经5-aza诱导培养28 d后,电镜下见细胞胞浆有散在肌丝样结构,免疫组化检测α-actin和cTnT表达均呈阳性;5 μmol/L的5-aza孵育48 h、10 μmoL/L孵育24 h培养28 d的细胞cTnT表达量与10 μmol/L的5-aza孵育48 h、20 μmol/L 3种孵育时间各组比较无显著性差异,且细胞生物学特性未受到明显影响.结论MSCs在体外经5-aza诱导后可分化为心肌样细胞;5 μmol/L的5-aza孵育48 h和10 μmol/L的5-aza诱导24 h是MSCs体外诱导分化心肌样细胞的理想条件.