经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生关系的探讨＊

[摘要] 目的 检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果 正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1、sFRP-1、DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为：50.0% vs 24.0% (P＜0.05)、36.4% vs 12.0% (P＜0.05)和36.4% vs 8.0% (P＜0.01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P＜0.05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81.2%,异常表达率为64.4%,且与组织学类型无关(P＞0.05)。结论 经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。 [关键词] 肺肿瘤 经典Wnt信号途径相关基因 β-连环蛋白     

Wnt／β-连环蛋白信号途径及其与肿瘤关系的研究进展

Wnt／β-连环蛋白信号途径异常与肿瘤的发生发展密切相关。近年来。随着对该信号途径及与其他信号途径关系的深入研究，对其成员的结构、功能和该途径的调控有了进一步的认识；同时。靶向该途径的抗肿瘤研究也取得了新进展。     

经典Wnt信号通路与子宫肌瘤

随着中国女性育龄期的延迟,健康查体和医学超声技术的进步,越来越多育龄期女性被发现患有子宫肌瘤。既往有症状的子宫肌瘤最主要的治疗方法是手术治疗,但子宫切除术和子宫肌瘤剔除术均会对育龄期女性生活质量产生不同程度的影响。因此,探讨子宫肌瘤发病机制,寻求新的治疗方法,对于罹患子宫肌瘤女性的诊治具有重要意义。经典Wnt信号通路是调节子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的关键途径,参与子宫肌瘤的发生、发展。因此,探讨经典Wnt信号通路在子宫肌瘤中的作用机制对疾病的诊断、治疗和患者的预后具有重要的临床意义。     

Wnt/β-连环蛋白信号途径活性的分析系统的建立

目的:建立Wnt/β-连环蛋白信号途径功能活性的分析系统.方法:首先构建一个表达β-连环蛋白-绿色荧光蛋白的融合蛋白的载体,pCMV-bcGFP;再用之转染HEK293细胞,用G418和LiCl筛选出稳定表达该融合蛋白的细胞,克隆建株并鉴定.结果:成功获得稳定表达该融合蛋白的细胞株,即293-bc-GFP细胞株;在荧光显微镜下以及蛋白质印迹分析证实:所获得的293-bc-GFP细胞株表达该融合蛋白的基础水平极低;用Wnt1和LiCl处理后可以明显地使该融合蛋白在细胞内的水平升高.结论:上述结果提示该分析系统是以Wnt依赖的方式、受β-连环蛋白调节的.该分析系统可以用作一个功能报告系统,以鉴定肿瘤发生中导致β-连环蛋白信号途径失调的潜在的上游因子,也同样可以用于筛选那些特异抑制人类肿瘤中β-连环蛋白信号途径活性的潜在的抗癌分子.     

Wnt信号转导通路与肺癌的研究近况

Wnt信号转导通路(简称Wnt通路)是一条在进化上保守的信号途径,在胚胎发育和中枢神经系统形成中起关键作用,可调控细胞的生长、迁移和分化。它主要由经典Wnt/β-连环蛋白信号途径和非经典的Wnt信号途径(Wnt/平面细胞的极性途径和Wnt/Ca2+途径)组成。近年来的研究发现,它是一条与肿瘤有密切关系的信号转导通路,其在肺癌发生、发展中所起的重要作用也逐渐被揭示。     

肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的影响

目的：分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用。方法：分离、鉴定肺癌干细胞;将分离出的SP＋肺癌干细胞分为对照组（空白血清＋生理盐水）、单纯化疗（空白血清＋DDP组）、肺岩宁方组（肺岩宁方含药血清＋生理盐水）、综合治疗组（肺岩宁方含药血清＋DDP）,予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP＋肺癌干细胞凋亡情况。结果：分离的SP＋、CD24＋IGF-1R＋、CD133＋细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整;综合治疗组诱导SP＋干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2%、肺岩宁方组21.3%、DDP组33.7%、对照组0.3%。结论：本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用。     

肺癌组织中经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化的检测

目的 检测肺癌组织中经典wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)启动子的甲基化状态及其与患者临床病理特征问的关系,探讨其在肺癌发生中的作用.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测30例纤维支气管镜活检肺癌组织、11例石蜡包埋肺癌组织和10例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化.结果 肺良性疾病患者活检标本未检测到所选基因的甲基化,肺癌患者活检标本WIF-1、sFRP-1、DKX-3基因启动子甲基化的发生率分别为:46.3%、29.3%和36.6%;重度吸烟患者肺癌组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0.05).肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态.结论 经典wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌袁观遗传干预治疗的新靶点.     

经典Wnt信号通路与精神分裂症

精神分裂症是一种重性精神病性障碍,病因和机制尚未明确,但目前普遍认为是由多个微效基因协同并与环境因素共同作用导致的疾病.由多基因组成的信号通路及通路间的相互作用在精神分裂症发病中可能起重要作用.与中枢神经系统发育和功能维持密切相关的经典Wnt信号通路近年来受到较多关注.许多针对Wnt信号通路与精神分裂症的关联研究均表明,精神分裂症患者细胞内Wnt信号通路异常.文章就目前针对经典Wnt信号通路在精神分裂症发病中潜在作用的相关研究作一综述.     

经典Wnt信号通路与精神分裂症

精神分裂症是一种重性精神病性障碍,病因和机制尚未明确,但目前普遍认为是由多个微效基因协同并与环境因素共同作用导致的疾病。由多基因组成的信号通路及通路间的相互作用在精神分裂症发病中可能起重要作用。与中枢神经系统发育和功能维持密切相关的经典Wnt信号通路近年来受到较多关注。许多针对Wnt信号通路与精神分裂症的关联研究均表明,精神分裂症患者细胞内Wnt信号通路异常。文章就目前针对经典Wnt信号通路在精神分裂症发病中潜在作用的相关研究作一综述。     

经典Wnt信号通路中β-catenin在细胞核内外分布的调控机制及潜在治疗靶点的研究进展

经典Wnt信号通路在肿瘤细胞的增殖分化中发挥重要作用,该信号通路中的核心蛋白分子β-catenin介导信号从细胞质传递到细胞核,并在核内参与组成转录复合体,激活下游靶基因转录.β-catenin进入细胞核内是其激活下游转录因子的重要前提,其出入细胞核的方式尚未完全解析.β-catenin入核方式主要为利用经典入核途径关...     

Hedgehog信号通路相关基因在大肠癌的表达及其临床意义

目的：研究Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI1在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：用RT-PCR检测43例大肠癌切除标本的癌组织和距离癌10cm以上的癌旁组织的SHH、SMO、GLI1 mRNA表达的阳性率,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对照,分析其与大肠癌患者临床和病理各变量的相关性。结果：大肠癌组织SHH mRNA表达阳性率为27．9％,与癌旁组织的18．6％比较,差异无显著性（P〉0．05）,但显著高于正常组织的0％（P〈0．05）。大肠癌组织SMO、GLI1 mRNA表达阳性率分别为83．7％、34．9％,显著高于癌旁组织的58．1％、16．3％及正常组织的0％、0％（P〈0．05）。SHH、SMO、GLI1 mRNA表达阳性率之间并无相关性,阳性率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、病理分型等变量均无相关性（P〉0．05）。结论：Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI1 mRNA在大肠癌组织中表达阳性率显著增高,其表达与临床和病理各变量不相关。     

Wnt信号通路的生物学效应及其与肺部疾病的关系

Wnt信号转导通路(Wnt通路)是一条在进化上保守的信号途径,它主要由经典Wnt/β-catenin信号途径和非经典的Wnt信号途径(Wnt/平面细胞的极性途径和Wnt/Ca2+途径)组成。其生物学效应广泛,可调控细胞的黏附、迁移、增生和凋亡等。作为一条与多种疾病密切关系的信号转导通路,其在肺部疾病发生、发展中所起的重要作用也逐渐被揭示。     

干扰CXCR4基因抑制胰腺癌经典Wnt通路活化的体外实验研究

目的观察CXCR4 shRNA转染胰腺癌细胞后经典Wnt通路的活性变化.方法构建CXCR4 shRNA表达载体转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,通过Realtime-PCR、WesternBlot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;通过PGL3-OT/OF荧光素酶检测方法观察CXCR4基因沉默后对胰腺癌Wnt/β-catenin经典通路活性的影响,并通过Realtime-PCR、Western Blot实验观察CXCR4 shRNA对Wnt/β-catenin通路下游靶基因的影响.结果特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70%以上,同时,特异性CXCR4干扰后能够显著抑制PGL3-OT转染后的荧光素活性（P〈0.05）以及Wnt/β-catenin下游靶基因的mRNA及蛋白的表达.结论CXCR4基因沉默能抑制Wnt/β-catenin经典通路在胰腺癌中的活性,阻遏Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达,为CXCR4作为胰腺癌治疗的分子靶点提供依据.     

Wnt信号通路与血管发生研究进展

Wnt信号通路与血管发生有着密切联系,它能够通过使血管内皮细胞增殖、血管芽生、血管丛重塑、促进脉管系统成熟等多个阶段来诱导血管发生.通过动态变化的Wnt信号来改善如缺血性脑损伤等与内皮细胞密切相关的神经病理状况成为了近来研究的热点.本文就Wnt信号通路与血管发生之间的关系做一综述.     

WNT信号通路相关基因多态性与急性白血病遗传易感性的相关性研究

目的 探讨WNT信号通路中β-链蛋白基因（CTNNB1）rs4135385位点、轴蛋白基因（AXIN2）rs11079571位点及分泌型卷曲相关蛋白基因(SFRP1)rs7832767位点多态性与急性白血病发病风险和治疗效果的关系,为个体化治疗提供依据。方法 对372例急性髓细胞白血病（AML）及急性淋巴细胞白血病（ALL）患者在治疗前抽取骨髓液1～1.5 mL, 401例健康对照（对照组）抽取静脉血2.0 mL,提取总DNA,用高分辨熔解曲线（HRM）方法进行CTNNB1 rs4135385、AXIN2 rs11079571、SFRP1 rs7832767基因分型,并通过卡方检验分析3个单核苷酸多态性（SNP）位点的基因型和等位基因频率分布在病例组和对照组中的差异,用单因素方差检验统计不同基因型患者的临床特征的差异,用卡方检验分析不同基因型患者诱导化疗完全缓解（CR）率的差异。结果 CTNNB1 rs4135385、SFRP1 rs7832767位点的基因型及等位基因频率分布在AML、ALL患者组与对照组中的差异均无统计学意义。AXIN2 rs11079571位点携带A等位基因的个体相对于G等位基因个体,发生急性粒单核/单核细胞白血病（AML-M4/5）的发病风险较低,差异有统计学意义（P=0.016,OR=0.677,95%CI:0.439~0.930）。此外,在AML-M 4/5患者中,AA基因型患者相对于AG和GG基因型患者有较高的血小板总数（P=0.040）,且诱导化疗CR率最高（P=0.040）。结论 在AML-M4/5中AXIN2 rs11079571位点的A等位基因频率低于正常对照组,并且携带A等位基因患者伴有较高外周血小板总数和诱导化疗敏感性。     

Toll信号通路在呼吸机相关性肺损伤中的作用

呼吸机相关性肺损伤(Ventilator-associated lung injury,VILI)是机械通气引起的严重并发症,目前临床上仍然缺乏完全有效的治疗策略。随着对VILI发病机制的不断深入研究,Toll样受体依赖的信号转导通路被认为参与了VILI的发生发展。Toll样受体识别相关配体后,通过启动细胞内外信号级联反应,介导肺部炎性因子的释放及释放后的病理生理改变。深入研究Toll样受体在VILI中的作用,可为临床提供参考。     

Wnt信号通路与呼吸系统疾病的研究进展

Wnt信号通路是一条进化上保守的信号途径,其具有广泛生物学效应,可调控细胞的黏附、迁移、增殖以及凋亡。近年来,随着研究的深入,Wnt信号通路与呼吸系统疾病的关系被不断揭示,该文通过总结近年来关于Wnt信号通路的相关文献,探讨Wnt信号通路与呼吸系统慢性疾病以及肺癌的关系,为进一步探索此类疾病的临床诊治提供资料。     

Hippo信号通路相关分子与肿瘤发生的研究进展

Hippo信号通路通过调控细胞增殖及凋亡在大多数实体肿瘤的发生和生长过程中起重要作用。Hippo信号通路的激活能够影响肿瘤干细胞的发生、增殖、耐药和转移,通路中主要效应分子的表达对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用。Yes相关蛋白(YAP)/含有PDZ结合位点转录共激活因子作为共转录因子发挥作用,调控肿瘤相关下游靶基因的转录,从而影响肿瘤的发生。在多种肿瘤中,Hippo/YAP信号通路在功能上与其他多种细胞通路相互作用,并在细胞分裂的调控中充当中心节点。因此,研究肿瘤细胞中Hippo信号通路主要效应蛋白的表达可以探究肿瘤的性质及发生发展情况。     

多发性骨髓瘤中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)基因异常甲基化的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者的SOCS1基因甲基化状态及其mRNA表达情况.方法收集2009年1月至2011年6月在昆明医科大学第一附属医院和第二附属医院就诊的54例MM患者骨髓标本,采用甲基化特异性PCR法研究SOCS1基因启动子区甲基化情况;利用自动测序技术对扩增产物测序分析其碱基甲基化位点;运用荧光实时定量反转录PCR检测其mRNA表达水平.结果 54例多发性骨髓瘤患者中,存在SOCS1基因启动子区甲基化,与对照组比较具差异有统计学意义(P<0.05);测序结果也证实甲基化的存在;mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 SOCS1异常甲基化在MM的发病机制中具有一定作用,但其表达可能受到标本数量、临床治疗方案和其他免疫相关细胞因子等多因素影响.     

Wnt信号通路和中枢神经系统疾病的研究进展

Wnt信号通路作为多细胞真核生物中的重要信号通路,不仅参与神经干细胞的增殖、分化、轴突形成等过程,还调控突触发生、突触囊泡循环等生理过程。最近的研究还证实,Wnt信号通路在血管再生、血管重塑和血脑屏障的形成等生理过程中也发挥着重要作用。近年来的研究证实,Wnt信号通路在脑卒中、阿尔茨海默病和帕金森病等中枢神经系统疾病中发挥着重要的作用。因此,探讨Wnt信号通路与神经系统疾病的病理生理机制和治疗的关系有重要意义。