胰岛素对LAK细胞的增殖和杀伤活性的影响

LAK细胞调节因素的研究对揭示LAK细胞的内在规律以及免疫过继疗法的开展与完善均具有重要意义。实验发现胰岛素能促进LAK细胞的增殖,提高细胞的产率,但是胰岛素不能替代IL-2使经短期IL-2刺激的淋巴细胞继续增殖。胰岛素还能促进LAK细胞表面IL-2R的表达。这可能是胰岛素促进LAK细胞增殖的重要机制。     

人外周血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响

从人外周血中分离出树突状细胞，体外观察了其对ＬＡＫ细胞活性的影响。发现：５×１０２～１×１０４／ｍｌ树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起增强作用，而５×１０４～１×１０５／ｍｌ树突状细胞却抑制ＬＡＫ杀伤活性。这说明人外周血树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起双相性调节作用。     

IL-2和IL-15协同调节T细胞的增殖和LAK细胞的杀伤活性

目的 探讨IL-2和IL-15在免疫调控和应答中的协同作用。方法 IL-2、IL-15和IL-2 IL-l5组刺激CTLL细胞的增殖，^3H—TdR掺入法测cpm值；IL-2、IL-15和IL-2 IL-l5组诱导PBMC中NK和LAK细胞的发育，4h^51Cr释放实验检测对K562和LiBr细胞的杀伤活性。结果 IL-2和IL-15都能诱导CTLL认细胞的增殖和NK、LAK细胞的杀伤活性，IL-2和IL-15可明显协同上调CTLL认的增殖和LAK细胞的杀伤活性。结论 IL-2和IL-15在免疫调控和应答中有一定的协同作用，为细胞因子联合应用于临床治疗肿瘤等疾病提供了实验依据。     

TNF基因转染后分泌不同水平TNF的LAK细胞克隆增殖能力和杀伤活性的比较

在逆转录病毒介导下将ＴＮＦ基因转染入小鼠ＬＡＫ细胞中，采用Ｇ４１８抗性筛选和有限稀释法，将ＬＡＫ细胞克隆化，并筛选出３株分泌不同水平ＴＮＦ的ＬＡＫ细胞克隆。结果表明，这３株ＬＡＫ细胞克隆分泌的ＴＮＦ水平、增殖能力和杀伤活性均显著高于对照组ＬＡＫ细胞。而高分泌株的ＬＡＫ细胞克隆，其增殖能力和杀伤活性最高；中分泌株次之；低分泌株相对较低。抗ＴＮＦ单抗可显著抑制此３株ＬＡＫ细胞体外杀伤活性，表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的ＴＮＦ介导的，所表达ＴＮＦ水平越高，其增殖能力和杀伤活性越高。     

PLGA微囊促进树突细胞抗原提呈作用的体外观察

本研究在体外将含卵清蛋白(OVA)的PLGA微囊与小鼠骨髓诱导的树突细胞(BM-DC)相互作用，然后用卵清蛋白特异性杂交瘤T细胞检测OVA抗原在BM-DC表面的表达，结果显示：PLGA微囊可以在体外显著促进BM-DC对OVA抗原的呈递。     

脂多糖对抗原提呈细胞作用的影响

脂多糖的免疫调节效应能辅助机体的细胞免疫和体液免疫，促进机体的抗感染能力，但是大多数细菌脂多糖同时还有强的毒性作用，引起机体病理损伤。因此，了解脂多糖在免疫应答的重要环节——抗原提呈中的作用及其机制，对开发LPS的临床应用是非常重要的。     

树突细胞对Lewis肺癌抗瘤作用的研究

目的：研究经体外骨髓细胞衍生的DC在Lewis肺癌中的抗瘤作用。方法：将肿瘤抗原MUT－1加载的DC（DC－MUT－1）经尾静脉免疫C57BL／6小鼠后，随后将肿瘤细胞接于小鼠皮下，观察DC能否诱发机体的免疫保护。同时检测DC－MUT－1免疫后小鼠脾脏T细胞的CTL活性。结果：经DC－MUT－1免疫后能诱发机体产生对相应肿瘤细胞的持久和特异性的免疫保护作用，体外检测CTL活性显示，免疫小鼠脾脏T细胞对相应肿瘤具有 特异性杀伤。结论：经DC－MUT－1免疫小鼠能诱发机体产生特异性抗肿瘤细胞免疫从而使宿主对随后的肿瘤细胞攻击产生特异性的免疫保护作用。     

负载甘露糖化抗原的DC诱导的特异性杀伤

目的：探讨甘露糖化肿瘤疫苗在抗肿瘤免疫中的作用。方法：纯化出目的蛋白HER-2／neu胞外配体第2结构域（RLD2），并对其进行糖基化修饰，自外周血单核细胞诱导产生CD83^＋的DC，利用DC表面的甘露糖受体，使DC负载甘露糖基化的目的抗原mRLD2（mL2），并致敏T淋巴细胞，观察CTL特异性杀伤SKBR-3细胞的效果。结果：较之未进行糖基化修饰的目的蛋白RLD2（T2），mL2能促进DC的成熟，并能诱导出具有更强杀伤效力的CTL。结论：本实验的结果为开展新型甘露糖化肿瘤疫苗的研制提供了理论依据。     

人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增

目的于体外从人脐血中培养扩增树突状细胞.方法从剖腹产胎盘中抽取脐血,分离单个核细胞,按程序加入细胞因子组合(SCF+GM-CSF+IL-4+TNF-α)进行培养及相应的鉴定.结果培养至6～7 d即出现较为典型的DC,15 d培养周期结束后,经流式细胞仪检测,所得的细胞中,CD1a的表达率为18.53%,并表达功能相关分子CD40、CD86、MHCⅡ-DR,能刺激同种T细增殖.结论利用细胞因子组合可以从脐血单个核细胞中诱导出DC,从而为下一步的临床应用研究奠定基础.     

Frequencies of dendritic cells (myeloid DC and plasmacytoid DC) and their ratio reduced in pregnant women: comparison with umbilical cord blood and normal healthy adults

CD11c⁺ peripheral blood myeloid dendritic cells (MDC), and CD123^bright plasmacytoid cells (PDC), are two human dendritic cell (DC) populations. In the present study, the percentages of MDC [lin⁻/HLA-DR⁺/CD123⁻/CD11c⁺] and PDC [lin⁻/HLA-DR⁺/CD123^bright] in a peripheral blood (PB) sample obtained from women at the time of delivery and in their umbilical cord blood (UCB) were compared with those in the PB of healthy volunteers. The percentages of MDC and PDC were determined by four-color flow cytometry. The percentages of MDC and PDC were significantly lower in the PB obtained at delivery (MDC, 0.11% ± 0.08%; PDC, 0.06% ± 0.06%) and in the UCB (MDC, 0.15% ± 0.03%; PDC, 0.05% ± 0.05%) than in the PB of the controls (males, 0.28% ± 0.12%, 0.11% ± 0.06%; females, 0.32% ± 0.13%, 0.11% ± 0.07%). Among the pregnant women at delivery, there were significant correlations between the percentage of MDC or percentage of PDC in the PB at delivery and the respective parameter in the UCB. The PB of other pregnant women, at 20–35 weeks of gestational age, also indicated significantly low percentages of MDC and PDC (0.1% ± 0.1%, 0.06% ± 0.07%). The ratio of MDC/PDC was not reduced in the UCB (4.25 ± 2.74), but was reduced in the PB obtained at delivery and the PB obtained during pregnancy (0.79 ± 0.91) in comparison with that in age-matched, nonpregnant females (3.96 ± 2.95). It was assumed that reduction of MDC during pregnancy plays an important role in maintaining immune tolerance against the embryo.     

Reduced LAK cytotoxicity of peripheral blood mononuclear cells in patients with bladder cancer: Decreased LAK cytotoxicity caused by a low incidence of CD56+ and CD57+ mononuclear blood cells

The cytotoxicity of unstimulated peripheral blood mononuclear cells (US-PBMC), phytohemagglutinin (PHA)-stimulated PBMC (PS-PBMC) and interleukin-2 (IL-2)-activated PBMC (LAK cells) was assessed in patients with noninvasive and invasive transitional-cell bladder cancer and compared with those determined in healthy controls. The differences in the cytotoxicities were correlated with specific changes in the subsets of peripheral blood mononuclear cells (PBMC). PBMC from 37 patients and 13 healthy controls were tested against the bladder cancer cell line T24 in⁵¹Cr-release assays. The PBMC subsets were analyzed using monoclonal antibodies against T cells, natural killer (NK) -cells, monocytes, and activation markers. The cytotoxicities of US-PBMC, PS-PBMC, and LAK cells were all significantly lower in the cancer patients than in the controls (P<0.05). The percentages of PBMC positive for the NK-cell markers CD56 and CD57 were lowest in the patients and were correlated to the decrease in cytotoxicity. Depletion of CD56⁺ or CD57⁺ cells from PBMC prior to or after 2 days stimulation with IL-2 demonstrated that these cells are the major source of LAK-cell cytotoxicity and showed that the reduced ability of bladder cancer patient PBMC to develop LAK-cell cytotoxicity is a result of a low incidence of CD56⁺ and CD57⁺ cells in the blood. These findings indicate that IL-2 therapy alone might not be a sufficient therapy of bladder cancer patients.     

抗人黑素瘤双特异性抗体增强LAK细胞毒效应的实验研究

抗肿瘤单克隆抗体的高度特异性与杀伤细胞对肿瘤的细胞毒效应相互结合起来，是增强ＬＡＫ细胞抗肿瘤作用的重要途径。本研究用化学连接法制备了既可识别淋巴细胞表面ＣＤ３抗原又可识别ＬｉＢｒ黑素瘤细胞表面肿瘤相关抗原的双特异性抗体ＣＤ３－ＨＢ８７５９。ＦＡＣＳ分析证实，ＣＤ３－ＨＢ８７５９具有结合两种抗原的活性。４ｈ５１Ｃｒ释放细胞毒实验结果表明，ＣＤ３－ＨＢ８７５９在诱导相可显著增强ＬＡＫ对ＬｉＢｒ细胞的细胞毒效应，也能使非ＬＡＫ细胞获得细胞毒性；在杀伤相加入ＣＤ３－ＨＢ８７５９对ＬＡＫ细胞的细胞毒作用也具有促进作用。上述结果表明，ＣＤ３－ＨＢ８７５９是一种抗人黑素瘤的双特异性抗体，为体内应用提供了良好的实验基础。     

人脐血干细胞体外诱导为肥大细胞的研究进展

Mast cells (MCs) play a key role in the pathogenesis of allergic diseases. Tissue MCs are originated from hematopoiefic stem cells in bone marrow. In recent years, it was reported that human mast cells could be differentiated from stem cells of umbilical cord blood. In this review, we summarize the development in this novel area.     

双特异性抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用影响的体外研究

将抗ＣＤ３与抗ＨＢｓ的单克隆抗体经化学偶联得到双特异性抗体，观察该双特异性抗体对ＬＡＫ细胞增殖和增强细胞毒性的作用。结果显示双特异性抗体显著提高ＬＡＫ细胞与２．２．１５细胞结合率；促进淋巴细胞增殖。１２５Ｉ－ＵｄＲ释放试验检测发现双特异性抗体增强ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞的细胞毒性且与抗体浓度呈正相关。进一步对抗体的特异性研究表明，加入双特异性抗体后ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞毒性作用显著高于对照组。     

人脐血树突状细胞分泌外来体的特性及其增强CTL杀伤活性的研究

目的探讨脐血树突状细胞(UBDC)及其分泌的亚细胞结构外来体(exosomes)的特性,以及他们对细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性的增强作用。方法分离脐血单个核细胞(UBMC),用rhSCF、rhGM-CSF及rhIL-4诱导12d,加入经反复冻融提取的肿瘤细胞膜抗原,继续培养2d。收集DC并从其培养上清中通过离心(1×105g)分离外来体。用流式细胞术、SDS-PAGE、透射电子显微镜(TEM)和MTT比色法,对DC和外来体的特性及其对CTL杀伤活性的增强作用进行分析。结果用3种细胞因子体外诱导UBMC12d,可使其扩增10倍,并出现DC典型的形态特征。负载肿瘤抗原后,细胞表面可高表达MHC-I、MHC-II、CD40、CD80、CD86、CD11c和CD54。利用超速离心法能从DC培养上清中分离出外来体。混合淋巴细胞反应(MLR)和CTL杀伤活性的分析表明,脐血DC分泌的外来体能有效地刺激T细胞增殖并增强CTL的杀伤活性。结论由UBMC可诱导出大量的DC并分泌外来体。后者可有效地向CTL细胞递呈肿瘤抗原使之活化并增强其杀伤活性。     

人脐血间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞

目的从人脐血中分离单个核细胞(MNCs)、体外培养扩增间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性和定向诱导能力。方法无菌条件下采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞。用DMEM/F12培养基进行纯化和扩增培养,分别向神经元样细胞诱导,获取MSCs,显微镜下观察它的形态、尼氏体染色;取扩增2、5、7代的MSCs,免疫细胞化学法检测nestin表达和神经元样细胞特异性标记。结果诱导扩增后的MSCs尼氏体染色阳性,第2、5、7代MSCs的nestin的阳性表达率分别为(51.2±3.2)%、(34.6±2.7)%、(11.3±3.3)%;神经元特异性烯醇化酶(NSE)在原代细胞无表达,而在2、5、7代MSC的阳性表达率分别为(11.4±2.3)%、(21.78±3.1)%、(40.7±3.4)%。结论人脐血MSCs具有神经干/祖细胞的特性,在一定条件下能向神经元样细胞分化。     

抗原负载的DC诱导CIK对MDA-MB-231细胞的杀伤活性研究

探讨乳腺癌相关抗原负载后树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对MDA-MB-231乳腺癌细胞株的杀伤效应。采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),常规法诱导DC、CIK细胞;流式细胞技术分析测定细胞表型;用反复冻融法制备MDA-MB-231细胞的相关抗原,并测定抗原浓度;MTT法分别测定在四个不同效靶比时CIK、DC+CIK和抗原负载的DC+CIK三组效应细胞对MDA-MB-231乳腺癌细胞的杀伤活性。结果:CIK细胞分别与DC和Ag-DC共培养后,可见CD3+CD56+双阳性表达细胞较培养前显著增加(P<0.05);将负载肿瘤相关抗原的DC与CIK共培养后,杀瘤活性明显提高(P<0.05)。提示,抗原负载的DC与CIK细胞共同孵育培养后,在相同效靶比时,对MDA-MB-231乳腺癌细胞杀伤效应与CIK细胞和DC-CIK两组效应细胞相比有显著提高,表明抗原负载后可提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,为乳腺癌临床生物免疫治疗提供实验室基础。