酿酒酵母重组人α2a干扰素补料分批培养

在 2 .6L全自动发酵罐中对人 α2 a干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究。结果表明 ,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖 ,并维持低糖浓度 ;在培养 1 0 h～ 2 0 h时 ,恒速流加 2 0 mg/L的腺嘌呤 ,能较大幅度提高表达水平 ,生物活性从原工艺的 3.1× 1 0 9IU/L提高至1 .3× 1 0 10 IU/L。表达期 p H值对生产水平有很大影响 ,宜控制在 5.0～ 5.3     

重组人干扰素α—2b工程菌的培养与发酵条件的优化研究

用均匀设计法对重组人干扰素α-2b基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,确定摇瓶培养基组成为：每升含蛋白胨10 g、葡萄糖6 g、酵母粉5 g、Na2HPO4　6　g、KH2PO4　2　g、NH4Cl　0.8　g、NaCl　4　g、CaCl2　0.01　g、MgSO4　0.2　g,发酵表达条件为：pH　6.9,温度37℃,IPTG诱导后表达时间为5　h左右,装料量为20%。三批小试结果为：湿菌体平均产率18　g/L,生物活性3.93×108　IU/L。发酵罐三批中试放大试验,湿菌体平均产率为29　g/L,生物活性为6.68×108　IU/L发酵液。     

缺锌儿童外周血诱生α干扰素能力与自然杀伤细胞活性的研究

本文对100例缺锌患儿与健康儿童外周血诱生α干扰素(IFN-α)能力、自然杀伤细胞(NK)活性、发锌和全血锌含量以及它们之间的关系进行研究。结果显示:缺锌患儿发锌(57.4±6.2μg/g)、全血锌(5.8±0.9μg/ml),诱生IFN-α水平(1.82×10~6±5.02×10~4IU/L)和NK细胞活性(29.34+4.12％)均显著低于健康儿童(发锌: 110.5±8.1μg/g、全血锌:13.7±3.9μg/ml、NK细胞活性:38.42±2.21％,IFN-α效价:2.41×10~6±4.12×10~4 IU/L),其他元素铜、铁含量同诱生IFN-α能力、NK细胞活性之间无明显相关关系。提示锌缺乏可能是导致机体抗感染免疫功能低下而致使缺锌儿童对感染性疾病抵抗力降低的重要因素之一。     

γ干扰素工程菌发酵工艺研究

在摇瓶培养及恒化培养研究的基础上,对含温度敏感型质粒γ干扰素工程菌高密度、高表达的发酵工艺作了探讨。摇瓶培养结果表明,菌体的良好生长状态对外源基因表达起着重要作用,工程菌于对数后期升温,干扰素滴度最高。以葡萄糖为限制性基质的恒化培养,得出了工程菌细胞生长得率与比生长速率之间的关系,同时表明工程菌升温表达前的比生长速率对表达后干扰素的比活有影响,比生长速率在0.10～0.15h~(-1)时比活最大。通过碳、氮、镁的间歇流加培养与连续流加培养,均使工程菌达到高密度与高表达,但以控制比生长速率为目的的连续流加培养较间歇流加比活提高近4倍,棕1.1×10~(10)IU/L。     

噬菌体表面展示人干扰素-α 2b

目的:建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台.方法:利用噬菌体表面展示(phage display)技术表达人干扰素-α 2b(hIFN-α 2b)基因.结果:生物活性测定表明,3×108 TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与5 IU基因工程IFN-α 2a的活性相当,并能被IFN-α单抗中和.结论:hIFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达,即成功地建立了噬菌体展示外源肽(hIFN-α)的技术平台.     

重组集成干扰素α体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的药效学研究

目的探讨重组集成干扰素α(IFN-Conα)在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)和Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的抑制作用.方法应用细胞病变抑制法,观察不同浓度的重组集成干扰素α对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ型病毒感染Vero细胞的抑制作用.结果IFN-Con α对Vero细胞无明显细胞毒作用,其中度毒性浓度(TC50)＞3μg/ml.对HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型的50%的抑制浓度(IC50)分别是(1.8×10-4±0.3×10-4)μg/ml和(3.5×10-4±1.5×10-4)μg/ml.其结果显著优于阳性对照药物阿昔洛韦和干扰素α(IFN-α),其IC50阿昔洛韦对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ分别为(6.4×10-1±0.6×10-1)μg/ml和(19.1±2.42)μg/ml;IFN-α则分别为(1.6×10-2±1.0×10-2)μg/ml和(3.7×10-2±7.04×10-3)μg/ml.结论IFN-Con α抗HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型的有效剂量明显低于阳性对照药阿昔洛韦和干扰素α(P＜0.01).     

肿瘤坏死因子和干扰素对大肠癌Fas配体表达的调控作用

目的 :探讨不同细胞因子对大肠癌细胞 Fas配体 (Fas L )表达水平的调控作用。方法 :采用 Western印迹法测定了两种细胞因子 (1× 10 6 U / L TNF-α或 IFN-γ)处理后大肠癌细胞 Fas L表达水平的变化。结果 :所检测的 6株大肠癌细胞全部表达 Fas L蛋白 ;TNF-α和 IFN-γ处理 DL D- 1细胞 10 h,显著上调其 Fas L蛋白的表达水平 ;TNF-α和 IFN-γ以及 PMA +离子霉素 (ionomycin)处理 SW6 2 0细胞 10 h,也显著上调 SW6 2 0细胞的 Fas L蛋白表达水平。 TNF-α和 PMA +离子霉素处理SW6 2 0细胞 48h进一步增加 SW6 2 0的 Fas L 蛋白表达 ,IFN- γ处理 SM6 2 0则表达增加不明显。结论 :TNF- α和 IFN- γ等细胞因子具有上调某些大肠癌细胞 Fas L 表达的作用     

慢性粒细胞白血病骨髓体外净化的实验研究

目的　探讨白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法　采用体外克隆形成培养技术 ,分别用白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸不同的组合方案 ,体外净化 5例慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓。结果　联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ ml)方案 ,对白血病细胞克隆形成单位 (L- CFU)抑制作用有显著差异 (P<0 .0 1) ,而相同条件下 ,GM- CFU及 L- CFU的集落存活率分别为 2 6 .91%和 3.49% (P<0 .0 1)。结论　联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ml)方案 ,选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好 ,可用于临床净化 CML 骨髓     

应用干扰素-α减弱大鼠血管内皮依赖性的舒张作用

目的 :研究急、慢性干扰素 - α(IFN- α)处理对离体大鼠胸主动脉环的影响及其可能机制。方法 :用离体血管灌流方法 ,测定离体主动脉环张力。结果 :IFN- α(10、10 0、10 0 0、10 0 0 0 U/ ml)对苯肾上腺素 (PE,10 -6mol/ L)预收缩的内皮完整血管环产生浓度依赖性的舒张作用 ,分别降低为对照的 (90 .1± 0 .91) %、(6 5 .1± 5 .2 1) %、(39.5± 8.2 2 ) %、(35 .3± 8.2 7) %。去除内皮后 IFN- α的舒张作用被取消。用一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂 L- NAME(10 -4mol/ L)、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝 (10 -5mol/ L)和诱导型 NOS抑制剂 AMG(10 -4mol/ L)预处理后 ,10 0 U/ mlIFN- α引起的血管舒张作用被阻断 ,其血管舒张幅度分别为对照的 (97.2± 5 .34) %、(95 .1± 6 .2 5 ) %、(93.7±8.82 ) %。用 IFN- α10 0 0 0 U/ ml预处理 2 h对 Ach引起的内皮依赖性主动脉环的舒张作用无显著影响 ,用IFN- α10 0万 U/ d腹腔注射 5 d后的 SD大鼠的主动脉环对 Ach引起的内皮细胞依赖性舒张作用明显降低。结论 :IFN- α可能通过诱导 i NOS合成或增强 i NOS其活性产生内皮依赖的血管舒张作用 ,慢性 IFN-α处理可能损害了血管内皮的功能或使 NO- s GC信号途径的效能降低。     

重组复合干扰素基因工程菌发酵培养条件的研究

目的:研究表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coliDH5α(pBV220/con-IFN)的发酵条件。方法:在摇瓶实验中,采用正交设计法和均匀设计法确定较佳培养基组分;使用20 L发酵罐进行补料分批发酵实验,研究影响菌体生长和con-IFN表达的因素(如溶氧、补料、温度和诱导时间)。结果:发酵培养基配方为蛋白胨10 g/L,酵母膏7.5 g/L,甘油0.5%,Na2HPO4.12H2O 20.13 g/L,KH2PO410.37 g/L,NaCl 9.31 g/L。确定了高密度发酵工艺,即优化的发酵培养基,初始pH7.2,接种量5%,溶氧15%,先经35℃培养4 h,后降温至30℃培养2 h,再以42℃诱导7 h,诱导的同时补料酵母膏0.5%。在此条件下,发酵液可得15.2 g/L湿菌体,con-IFN的表达量占菌体总蛋白的49.60%,每毫升发酵液的抗病毒活性为9.69×108IU。结论:获得了较满意的优化培养基配方和发酵条件,为下游纯化和进一步大规模生产奠定了基础。     

2型糖尿病人血浆肿瘤坏死因子-α测定及意义

目的　探讨 2型糖尿病人血浆肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)水平的变化。方法　选取正常对照组和 2型糖尿病 (DM2组 )为研究对象 ,再将 2型糖尿病组按体质量指数 (BMI) <2 5的分为 DM2 a组 ,≥ 2 5的分为 DM 2 b组 ;用酶联免疫法 (ELISA)测定各组的 TNF-α水平并比较。结果　正常对照组血浆 TNF-α为(0 .79± 0 .0 8)μg/L,DM 2 a组为 (1 .2 1± 0 .3 1 )μg/L ,比正常组升高 (P <0 .0 5 ) ;DM 2 b组为 (2 .46± 0 .5 7)μg/L,与正常组比较显著升高 (P <0 .0 1 ) ,DM2 a与 DM2 b相比 ,两者差异亦有显著意义 (P <0 .0 1 )。结论　 2型糖尿病人血浆 TNF- α水平显著高于正常人 ,并与肥胖有一定的关系。     

细胞因子对K562细胞HSP gp96基因及蛋白表达的影响

目的研究细胞因子与K562细胞共孵育时不同浓度与不同时间条件对gp96基因及蛋白的影响。方法分别将浓度为0kU/L、200kU/L、400kU/L、600kU/L、800kU/L、1000kU/L的IFN-α及0μg/L、2μg/L、4μg/L、6μg/L、8μg/L、10μg/L的IFN-γ与K562细胞共孵育12h,用Western blot及RT-PCR法分析其中的gp96 mRNA和蛋白。分别将浓度为600kU/L的IFN-α和6μg/L的IFN-γ与K562细胞共孵育0、3、6、9、12、18、24、36h检测gp96 mRNA含量。结果1)不同浓度IFN-α和IFN-γ分别与K562细胞共孵育12h后,hsp gp96基因及其蛋白的表达出现相似的改变,即随着浓度的增加表达量逐步增加,当浓度达IFN-α600kU/L、IFN-γ6μg/L后,表达量逐步下降。2)IFN-α 600k U/L、IFN-γ6μg/L分别与K562细胞共孵育,细胞中hsp gp96 mRNA表达量均先增加后逐步下降,在9h达高峰。结论IFN-α、IFN-γ与K562细胞共同孵育,能通过上调细胞中hsp gp96 mRNA增加HSP GP96蛋白。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的克隆与表达

目的:寻找具有更强抗肿瘤活性和(或)较低毒副作用的TNF α突变蛋白.方法:应用巨引物二轮PCR技术对rh-TNFα的第80 、9 0和92位氨基酸编码的密码子进行定点突变, 经过DNA序列测定证实DNA突变准确后,将突变基因的cDNA插入pBL载体,转化大肠杆菌DH5α,获得表达rh-TNFα-D3a的工程菌.[ HT5W 〗结果:经巨引物二轮PCR获得表达TNFα突变蛋白的基因突变,经序列测定结果与设计一致,重组蛋白表达量占细菌总蛋白18.0％,大部分为可溶性,占rh-TNFα-D3a 总量的60％以上.重组蛋白经纯化,纯度＞98％.rh-TNFα-D3a对L929细胞表现出较高的细胞毒性,比活性大于5×108 IU/mg.与野生型的rh-TNFα相比,rh-TNFα-D3a的毒性降低为野生型的1/10,同时其保留了TNFα的抗肿瘤活性.结论:rh-TN F-αD3a是一个毒性较低,具有较强抗肿瘤作用的衍生物.     

肿瘤性贫血血清Epo与Hb浓度相关性研究

目的 :了解肿瘤患儿血清促红细胞生成素 ( Epo)水平的变化。方法 :用放射免疫分析法测定 38例急性白血病 ( AL)、1 9例恶性实体瘤患儿及 1 5例健康儿童血清 Epo水平。结果 :1急性淋巴细胞白血病 ( ALL)初治组 39.79± 1 6.2 2 m IU/m L;急性髓性白血病 ( AML)初治组 33.96± 8.1 3m IU/m L,恶性实体瘤组 35 .0 6± 1 8.68m IU/m L;对照组 1 2 .2 3± 3.1 1 m IU/m L。 Epo在 ALL、AML初治组及恶性实体瘤组的水平显著高于正常对照组 ( P<0 .0 5 ) ;2 ALL缓解组 2 1 .63±1 3.2 7m IU/m L,AML缓解组 2 5 .2 2± 5 .46m IU/m L,ALL与 AML缓解组 Epo水平仍高于正常对照组 ( P<0 .0 5 ) ,但均低于初治组 ( P<0 .0 5 ) ;3血清 Epo水平与 Hb呈明显负相关关系 ( P<0 .0 5 )。结论 :肿瘤患儿贫血的产生并非完全由于 Epo水平降低而引起 ,早期红系造血的缺陷是产生贫血的主要原因。     

维生素D对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞α干扰素JAK-STAT信号转导途径的影响

目的 研究维生素D(VD)对慢性乙型肝炎患者干扰素-α(IFN-α)JAK-STAT信号转导途径分子及其抗黏病毒A蛋白(MxA)表达的影响.方法 选择63例就诊慢性乙型肝炎患者,运用Ficoll分离液分离患者外周血单个核细胞(PBMCs),以不同浓度IFN-α和VD单独和联合处理PBMCs细胞,再采用Western blot技术分析处理后细胞内JAK-STAT信号转导途径分子STAT1、STAT2、干扰素调节因子9(IRF-9)以及MxA蛋白的表达水平.结果 经0~1 600 IU/ml IFN-α处理后,PBMCs JAK-STAT信号转导途径分子STAT1、STAT2、IRF-9及MxA蛋白表达显著增高,其中400 IU/ml IFN-α处理时,JAK-STAT信号转导途径分子表达量最高.经0~100 nmol/ml VD处理后,PBMCs JAK-STAT信号转导途径分子STAT1、STAT2、IRF-9及MxA蛋白表达增高,其中0.1 nmol/ml VD处理时,JAK-STAT信号转导途径分子表达量最高.与IFN-α单独处理相比,VD与IFN-α联合处理患者PBMCs 后,细胞内STAT1、STAT2、IRF9及MxA的蛋白表达显著升高.结论 VD可能通过上调IFN-α JAK-STAT信号转导途径分子及抗病毒蛋白的表达进而增强IFN-α 抗病毒效应.     

PKC-α反义核酸对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞周期的影响

目的 :探讨 PKC-α反义核酸对 He L a细胞增殖及细胞周期的影响。方法 :采用脂质体 (L P)介导法 ,用 0 .0 1～1.0 0μmol/L各浓度 PKC-α反义核酸 (as ODN)转染 He L a细胞 ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测 He L a细胞生长指数 (growth index,GI)及其体外增殖能力 ;流式细胞术分析细胞周期。结果 :PKC- α as ODN0 .0 5～ 1.0 0 μmol/L 各浓度组 He L a细胞 GI显著降低 (P<0 .0 5 ) ,且呈量效依赖关系 ;其中 1.0 0μmol/L和 0 .5 0μm ol/L PKC-α as ODN对He L a细胞生长有非常显著抑制作用 (P<0 .0 1) ;0 .5 0 μmol/L PKC- α as ODN组 He L a细胞软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;反义 PKC- α使细胞 G2 期百分比增高 (P<0 .0 1)。结论 :反义 PKC- α可通过阻滞细胞于 G2 期从而抑制 He L a细胞的生长。     

几种重组干扰素单独及联用阿霉素对骨肉瘤细胞的毒性研究

目的体外评价几种国产干扰素联合阿霉素的抗骨肉瘤活性及其协同效应。方法采用MTT比色法,体外对比检测阿霉素及几种国内临床常用重组干扰素（rhIFNα2a、rhIFNα1b、rhIFNα1c、rhIFNβ和rhIFNγ）的抗骨肉瘤细胞增殖活性。分别将几种干扰素与阿霉素联合用药,对比检测其抗骨肉瘤的协同作用。结果rhIFNα2a为5×104IU/L、rhIFNα1b为3.75×105IU／L、thIFNalc为1.25×105IU／L、rhIFNβ为5×105IU／L时,细胞生长抑制率均达到50％：rhIFNγ对0S732细胞生长无明显抑制作用;rhIFNα1c与ADM合用时有明显的协同增强效应。结论rhIFNα2a、rhIFNa1b、rhIFNβ、rhIFNαlc对骨肉瘤细胞的生长有明显的抑制作用,其中以rhIFNα2a和rhIFNα1c作用最为明显;上述4种IFNs与阿霉素合用均呈协同增强效应;rhIFNγ在体外对骨肉瘤细胞无明显抑制作用。     

干扰素α治疗慢性粒细胞白血病并发肾病综合征一例报告

临床资料　患者男 ,4 4岁 ,于 2 0 0 1年 6月发现脾脏肿大、体质量减轻。查外周血 WBC 13.2× 10 9/ L ;骨髓细胞学检查确诊为慢性粒细胞性白血病。予干扰素 α(IFN- α) (30万U,隔日肌注 )、羟基脲 (外周血 WBC高于正常时口服 ,1g/ d)治疗后 ,WBC基本维持正常 ,脾脏缩小。同年 10月无诱因出现颜面、四肢水肿及大量泡沫尿入院。查血 WBC3.9× 10 9/L ;TG 3.31mm ol/ L ;白蛋白 30 g/ L ;循环免疫复合物阳性 ;血清蛋白电泳 α2、β增高 ,γ正常 ;2 4 h尿蛋白 3.5 7g;血生化、抗“O”、类风湿因子、狼疮因子、尿本周蛋白、血清 Ig M…     

雌激素和雄激素对肿瘤坏死因子α诱导的内皮细胞粘附分子表达的调控(英文)

目的　研究雌激素与雄激素对肿瘤坏死因子 (TNF α)诱导的脐带静脉内皮细胞 (HUVEC)粘附分子表达的调控作用方法　体外培养的脐带静脉内皮细胞用TNF α、雌激素、雄激素单独作用或性激素与TNF 协同作用 3,6 ,12或 2 4h后 ,用荧光标记的粘附分子抗体孵育细胞 ,通过流式细胞仪检测细胞间粘附分子 1(ICAM 1) ,血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)以及E 选择素 (E selectin)的表达情况。结果　雌激素和雄激素 (5 /10 0 μg/L)单独作用对ICAM 1,VCAM 1及E selectin表达无明显影响。TNF α可诱导HUVEC表达VCAM 1及E selectin ,并能引起ICAM 1表达增高。雌激素或雄激素与TNF α协同作用对ICAM 1表达均无明显影响。雄激素 (5 /10 0 μg/L)可明显增强TNF α诱导的E selectin表达 (P <0 0 1) ,雄激素 (5 μg/L而非 10 0 μg/L)还可增强TNF α诱导的VCAM 1表达。雌激素 (5 μg/L而非 10 0 μg/L)可增强TNF α诱导的E selectin表达 (P <0 .0 5 )而对VCAM 1表达无明显影响。结论　由于粘附分子在机体免疫反应中起重要作用 ,雌激素和雄激素可能通过影响TNF α诱导的内皮细胞粘附分子表达而发挥其免疫调控功能。     

急性白血病患者血清sFas，TNFα水平及其与疗效的关系

目的 :探讨急性白血病患者血清可溶性跨膜蛋白 (s Fas)和肿瘤坏死因子 α(TNFα)的变化及意义。方法 :采用 EL ISA法测定 30例急性白血病患者血清 s Fas,放免法测定 32例急性白血病患者血清 TNFα含量 ,并与正常对照组比较。结果 :急淋白血病患者未完全缓解组 s Fas为 (7.14± 2 .18) μg/L,急非淋白血病未完全缓解组为 (9.6 9± 3.5 1) μg/L,均明显高于正常对照组的 (3.49± 2 .36 ) μg/L,亦明显高于其相应的完全缓解组。s Fas比正常对照组高出 2倍的患者化疗获得完全缓解的机会明显下降。急性白血病患者初发未治时血清 TNFα为 (6 .0 7± 1.32 ) nmol/L,化疗后未完全缓解者为 (5 .79± 1.2 7) nm ol/L,复发者为 (7.5 0± 1.6 7) nm ol/L,均明显高于正常对照组的 (2 .32± 0 .90 ) nm ol/L 和化疗后完全缓解者的 (4 .14±1.5 ) nm ol/L。结论 :血清 s Fas,TNFα在急性白血病患者均明显升高 ,是预后不良的因素。监测二者变化有助于疗效判断