花生四烯酸诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤和凋亡

探讨花生四烯酸 (AA)能否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡及其机制。以不同浓度的AA与细胞分别作用 8、16、2 0和 2 4h ,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞存活率 ,Hoechst 3 3 2 5 8染色法观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解 ,流式细胞术测定细胞凋亡率。测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量和胞内还原型GSH含量来判断细胞氧化程度。结果表明 ,AA呈浓度和时间依赖性引起HUVECs存活率下降 (P <0 0 1)。AA处理 2 4h的HUVECs可见凋亡典型的形态学变化 ,琼脂糖电泳示“DNAladder”。AA( 5 0～ 15 0 μmol L)作用 2 0h后 ,流式细胞术检测显示细胞凋亡峰 ,细胞凋亡率分别为 2 0 7% ,3 8 6%和 5 2 5 % (P <0 0 5 )。随着AA浓度的增加 ,细胞MDA含量相应增加 ,而胞内还原型GSH含量则减少 (P <0 0 5 )。表明花生四烯酸 ( 5 0～ 15 0 μmol L)能诱导HUVECs凋亡 ,可能与其促进细胞脂质过氧化损伤作用有关     

槲皮素对ox-LDL所致的小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化的影响

 目的：研究槲皮素(quercetin,QUE)预处理对氧化低密度脂蛋白 (oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化的影响,并探讨可能的分子机制。方法：体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,给予20、40和80 μmol/L QUE预处理30 min,再加入ox-LDL (100 mg/L)继续培养24 h。采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积,测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以评价细胞膜完整性和脂质过氧化程度。分别采用real-time PCR和免疫印迹技术检测清道夫受体CD36 mRNA和蛋白表达变化。结果：QUE (20,40和80 μmol/L)预处理显著抑制ox-LDL所诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成,且呈浓度依赖性。ox-LDL组细胞LDH释放增加,而QUE预处理则显著抑制ox-LDL的上述细胞毒性。与ox-LDL组比较,QUE预处理组细胞内ROS含量和培养液中MDA水平明显降低。另外QUE预处理在mRNA和蛋白水平均明显抑制ox-LDL所诱导的CD36表达上调。结论: QUE可减轻ox-LDL所诱导的小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化,其机制可能部分是通过下调CD36表达实现的。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导脑皮质神经元凋亡及Ca2+超载的影响

目的：观察银杏内酯B对谷氨酸诱导培养脑皮质神经元凋亡的拮抗作用，并探讨这种作用与神经细胞内游离Ca2+浓度改变的关系。方法： 采用改良的方法原代培养胎小鼠脑皮质神经元，用噻唑兰（MTT）法检测神经元的存活情况；细胞凋亡采用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳法和Hoechst 33258核染色方法进行分析；用Fura-2/AM荧光指示剂法测定细胞内Ca2+浓度。结果： 谷氨酸（0.8 mmol/L）能诱导神经细胞凋亡和胞内Ca2+超载，银杏内酯B（10-250 μmol/L）能减轻谷氨酸所致的细胞损伤，表现为神经元存活率提高，细胞形态的恢复和DNA断裂减少。结论： 银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用，这可能与其能竞争PAF受体并降低神经细胞内［Ca2+］从而抑制谷氨酸诱导的神经元凋亡有关。     

阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元bcl-2、bax基因表达的影响

目的：探讨阿魏酸钠(SF)对一氧化氮（NO）供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响。方法:采用SD大鼠海马神经元原代培养，经终浓度分别为10、20、40、80、120、160 μmol/L SF预处理后，用50 μmol/L SNP处理24 h，采用MTT法检测细胞存活率，Hoechst 33258荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测凋亡，Western blotting及RT-PCR检测bcl-2、bax基因表达。结果:不同剂量SF (10-160 μmol/L)预处理6 h可显著提高神经元的存活率，减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象；DNA凝胶电泳图谱未见典型的“梯状”改变；增加bcl-2 mRNA及蛋白的表达, 降低bax mRNA及蛋白的表达。结论:SF 抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡，其机制可能与其增加Bcl-2蛋白表达，降低Bax蛋白表达，增高Bcl-2/Bax的比值有关。     

硫化氢对氧糖剥夺/复氧诱导小鼠脑皮层神经元损伤的体外观察

目的 探讨硫化氢（H₂S）对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）诱导神经元损伤的影响。方法 小鼠皮层神经元用无糖厄尔氏平衡盐溶液（EBSS）于2% O₂、5% CO₂、93% N₂ 37℃培养4h,换用neurobasal + B27培养基于37℃ 5%CO₂培养箱中继续培养12h,建立OGD/R模型。以硫氢化钠(NaHS)作为H₂S的供体,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率;用fura-2/AM和显微荧光成像系统检测神经元胞质钙离子浓度（［Ca ²⁺ ］i）;利用比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率;碘化丙啶（PI）染色检测细胞损伤。 结果 200、300与600 μmol/L NaHS预处理30min再OGD/R,神经元存活率显著提高（n=4）;300 μmol/L NaHS预处理后再OGD/R,［Ca ²⁺］i（n=5）、LDH释放率（n=4）和细胞损伤率（n=6）均低于OGD/R组,且使用10 μmol/L钙螯合剂BAPTA也降低OGD/R诱导的LDH释放率和细胞损伤率。 结论 H₂S减轻OGD/R所致皮层神经元损伤,其机制与H₂S抑制OGD/R诱导神经元钙超载有关。     

左旋多巴诱导PC12细胞凋亡及谷胱甘肽对细胞的保护作用

目的:研究左旋多巴(L-dopa)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的凋亡诱导作用并探讨其临床意义。方法:以PC12细胞为多巴胺(DA)神经元的细胞模型,利用电镜、DNA凝胶电泳结合图象分析仪、流式细胞术(FCM)等技术检测不同浓度L-dopa所致的凋亡率以及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)对它的影响。结果:流式术测得50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L处理组凋亡率分别为12.4%、24.4%、37.2%,与琼脂糖电泳的片断化DNA比例基本一致,与对照组(2.3%)有显著差异(P＜0.01),L-dopa与GSH合用组凋亡率2.5%与对照组比较无显著差异(P＞0.05)。结论:GSH可以阻断L-dopa 对PC12细胞的凋亡诱导作用,提示L-dopa 可能是通过氧化损害介导DA神经元凋亡,导致疗效减退。     

N-乙酰-L-色氨酸减轻H2O2诱导小鼠海马神经元细胞凋亡

 目的 探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对海马神经元（PHN）缺血低氧损伤的影响。方法 用600μmol/L H2O2诱导PHN制备海马神经元细胞凋亡模型,采用免疫荧光染色检测caspase-3的表达,Rhodamine 123染色检测线粒体膜势能（ΔΨm）的改变,台盼蓝染色检测细胞存活率,比色法检测caspase-3、乳酸脱氢酶（LDH）的活性,Western blot检测caspase-3及凋亡诱导因子（AIF）和细胞色素C（CytC）等线粒体促凋亡因子在胞质蛋白和线粒体蛋白中的表达。结果 L-NAT可减轻H2O2所引起的细胞形态的死亡、存活率的降低、LDH的释放、caspase-3的激活、线粒体膜势能的丧失及AIF和CytC等线粒体促凋亡因子的释放。 结论 L-NAT能通过抑制caspase依赖性和非依赖性的细胞凋亡途径,减轻H2O2诱导的小鼠海马神经元的细胞损伤。     

黄芩素调控miR-378a-5p对脂多糖诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤和凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-378a-5p表达有关。方法:将H9C2细胞分为对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素组、LPS+40μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-con组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-378a-5p组。细胞计数法、流式细胞术分析细胞活力和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。实时定量PCR分析miR-378a-5p表达量。结果:LPS处理显著降低H9C2细胞存活率、促进细胞凋亡,增加MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,降低SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。黄芩素显著提高LPS处理的H9C2细胞存活率,抑制细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,并增加SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。过表达miR-378a-5p显著减弱黄芩素对LPS处理的H9C2细胞存活率、凋亡、MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:黄芩素可减轻LPS诱导的心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与下调受损心肌细胞miR-378a-5p表达有关。     

环境内分泌干扰物双酚A对小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖和凋亡的影响

 目的：探讨环境内分泌干扰物双酚A（BPA）对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法：取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Western blotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴定。采用不同浓度的BPA干预稳定培养48 h的小鼠甲状腺原代培养的滤泡上皮细胞,作用24 h后,光学显微镜观测干预前后细胞生长状态的变化,流式细胞术分析细胞增殖和凋亡,real-time PCR法和免疫细胞化学染色法测定干预前后肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1（TRAIL-R1） mRNA和蛋白的表达变化。结果：原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞随BPA刺激浓度的增加,生长状态呈现先促进后抑制的趋势;0.01～0.1 μmol/L BPA作用24 h后,细胞增殖呈剂量依赖性增长,0.1 μmol/L BPA可显著刺激细胞增殖（P<0.05）,而1 μmol/L BPA刺激后则表现为细胞增殖水平显著下降（P<0.05）;0.1 μmol/L BPA刺激后凋亡指数减低（P<0.05）;0.1 μmol/L和1 μmol/L BPA刺激后TRAIL-R1 mRNA表达均显著下调（均P<0.05）,蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论：低、中浓度BPA可刺激原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡,而高浓度BPA对细胞主要表现为毒性损害作用。BPA对细胞凋亡的影响可能与TRAIL-R1相关途径有关。     

毒胡萝卜内酯对人晶状体上皮细胞HLE-B3生长抑制作用的研究

目的： 探讨青胡萝卜内酯(TG)对人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞系的生长抑制作用及其机制。方法：采用MTT法分析TG对HLE-B3细胞生长抑制作用，流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳观察TG对HLE-B3细胞凋亡诱导作用，Western blotting分析凋亡诱导过程中的相关蛋白的变化。此外，应用荧光分光光度计分析处理后不同时间的细胞内Ca2+浓度变化。结果：不同剂量的TG对HLE-B3细胞生长有不同的抑制作用，并呈现出时间和剂量依赖性关系，12 h、24 h和48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为：（2.27±0.61）μmol/L、（0.77±0.12）μmol/L和（0.15±0.04）μmol/L。0.01、0.1、1和10μmol/L TG明显诱导HLE-B3细胞凋亡。在凋亡诱导过程中，1 μmol/L的TG孵育细胞4 h后开始抑制SERCA2蛋白，引起细胞胞浆内Ca2+负载，并且刺激凋亡诱导蛋白Bax和凋亡执行蛋白caspase3的表达增加。结论：TG能够抑制HLE-B3细胞生长并诱导其凋亡，其机制可能是促发了内质网途径介导的凋亡过程。     

过氧化氢诱导心肌细胞凋亡性和非凋亡性死亡的研究

目的:探讨活性氧过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞损伤作用。方法:用不同浓度的H₂O₂作用于新生鼠培养心肌细胞,通过琼脂糖凝胶电泳、Giemsa染色和流式细胞仪等方法观察H₂O₂对心肌细胞的凋亡性损伤作用,同时检测培养介质中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)等生化指标的改变。结果:5 mmol/L H₂O₂作用于培养心肌细胞6 h,在琼脂糖凝胶电泳上出现梯状DNA带;Giemsa染色细胞涂片可见到染色体浓聚或边缘化,成新月型聚集在核膜周边,并有凋亡小体的存在;流式细胞仪可检测出亚二倍体峰的出现。结论: H₂O₂具有浓度和时间依赖关系诱导心肌细胞的凋亡,在低浓度H₂O₂(＜1 mmol/L)导致培养心肌细胞的早期生物化学改变,自由基含量升高,膜通透性增加,同时伴有少量心肌细胞凋亡;而在高浓度H₂O₂(＞10 mmol/L)时会造成培养心肌细胞的坏死性死亡,细胞膜崩塌,脂质过氧化物(MDA)大量产生,LDH大量泄漏,DNA琼脂糖凝胶电泳出现弥散(smear)泳带;5~10 mmol/L H₂O₂诱导大量心肌细胞凋亡性死亡,同时伴有LDH和MDA含量升高等生物化学的改变。     

麦胚凝集素诱导小鼠成纤维细胞L929发生凋亡的研究

目的:研究麦胚凝集素(WGA)是否能够诱导小鼠成纤维细胞L929发生凋亡及其可能的分子机制。方法:分别收集以WGA或琥珀酰化WGA(sWGA)处理24 h的L929细胞,经碘化丙啶染色后,以流式细胞仪分析细胞凋亡百分率,同时以荧光显微镜观察吖啶橙染色细胞的形态。结果:WGA处理过的细胞,其DNA亚二倍体峰 (Sub-G₁) 即凋亡峰的百分率明显升高,且与WGA剂量呈正相关;而sWGA处理的细胞则无此现象。同时,荧光显微镜观察发现WGA处理的细胞发生核碎裂,但sWGA无此作用。结论: WGA能诱导L929细胞发生凋亡,而sWGA不能诱导该细胞凋亡,提示WGA结合至细胞表面唾液酸残基是其诱导凋亡所必需;WGA诱导细胞凋亡的能力可部分解释其细胞毒性。     

松香酸通过诱导自噬减轻AGEs诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激反应

目的:本文旨在探索松香酸(abietic acid,AA)对晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激的影响及其相关机制。方法:H9c2细胞分为5组:对照组加入生理盐水处理24 h;AGEs处理组加入AGEs(100 mg/L)处理24 h;AGEs+AA(10、25和50μmol/L)组同时加入AGEs(100 mg/L)和AA(10、25和50μmol/L)处理24 h。MTT法检测H9c2细胞活力。Western blot分析肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、cleaved caspase-12、GADD34、Bi P、LC3、P62和beclin 1的蛋白水平。ELISA检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性。流式细胞术分析细胞凋亡。结果:低浓度(低于50μmol/L)的松香酸对H9c2细胞活力无明显影响,高浓度(高于50μmol/L)的松香酸会降低H9c2细胞活力。AGEs组Mb、CK-MB和c Tn I蛋白表达及LDH的水平明显高于对照组(P0.05);与AGEs组相比,AGEs+AA(10、25和50μmol/L)组Mb、CK-MB和c Tn I的蛋白表达及LDH的表达水平明显降低(P0.05)。松香酸(10、25和50μmol/L)可抑制AGEs诱导的心肌细胞凋亡、CHOP和cleaved caspase-12蛋白水平的升高及GADD34和Bi P表达的降低(P0.05)。而且,松香酸(10、25和50μmol/L)可抑制AGEs诱导的心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和beclin 1表达的降低及P62表达的升高(P0.05)。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤可逆转松香酸对心肌细胞LC3、Mb、cleaved caspase-12和Bi P蛋白水平的影响(P0.05)。结论:松香酸通过诱导自噬减轻AGEs诱导的心肌H9c2细胞凋亡和内质网应激反应。     

粒细胞集落刺激因子影响阿糖胞苷诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究

目的：观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对阿糖胞苷（Ara-C）诱导HL-60白血病细胞凋亡的调控作用。方法：应用细胞培养技术、细胞凋亡形态、二苯胺法DNA片段化定量和MTT法来观察HL-60白血病细胞的增殖、凋亡和细胞药敏的变化。结果：G-CSF有刺激HL-60白血病细胞的增殖的作用,其细胞集落为76.5±18.0,而对照组仅为46.5±13.5（P<0.01,n=5）。Ara-C（10 mg/L）作用于HL-60白血病细胞4 h,DNA片段率为32.3%±6.5%,同时加入G-CSF和Ara-C作用于HL-60白血病细胞4 h;DNA片段率为23.6%±7.2%,两组比较有非常显著性差异（P<0.01）。HL-60白血病细胞加入G-CSF后对Ara-C的IC₅₀（18.85±3.21）可看出比单用Ara-C（15.29±2.47）的敏感性低（P<0.05）。结论：G-CSF能刺激HL-60白血病细胞增殖;抑制Ara-C诱导HL-60白血病细胞的凋亡;能降低HL-60白血病细胞对Ara-C的敏感性。     

反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的:观察反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法: 合成bcl-2AS-PS-ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446, 半定量RT-PCR检测bcl-2mRNA表达;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Bcl-2蛋白表达;通过克隆形成率、细胞计数、流式细胞仪DNA倍体分析、TUNEL等指标观察bcl-2 AS-PS-ODN对细胞增殖、活力和凋亡的影响。结果:①bcl-2 AS-PS-ODN能特异性地降低NCI-H446细胞bcl-2mRNA和Bcl-2蛋白的表达。1μmol/LAS-PS-ODN作用24h后bcl-2mRNA表达量下降69.5%, 48h后Bcl-2蛋白下降62.7%。②bcl-2 AS-PS-ODN能够抑制细胞增殖和活力, 诱导细胞凋亡, 1μmol/LAS-PS-ODN作用24h后, 细胞凋亡率约为22.3%-32.7%。结论:bcl-2 AS-PS-ODN能够特异性降低bcl-2mRNA、蛋白表达, 抑制NCI-H446细胞的增殖和活力, 并诱导细胞凋亡。     

丹参酮IIA通过抑制p38 MAPK通路减轻PM2.5对血管内皮细胞的损伤

 目的: 探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及丹参酮ⅡA在这一过程中的作用及机制。方法: 采集广州城区大气PM2.5并以不同质量浓度(0、20、200、400 mg/L)染毒EA.hy926细胞24 h,MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡,Western blot法测p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2的蛋白水平,ELISA法测白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,并测定细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性;分别加入丹参酮ⅡA(5、10、20μ mol/L)和p38 MAPK通路特异性阻滞剂SB20358020μ mol/L检测丹参酮ⅡA的干预作用及机制。结果: 与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低EA.hy926细胞的存活率,上调p-p38 MAPK蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以促进细胞凋亡,诱导分泌IL-6及TNF-α,降低SOD活性,增加MDA含量及LDH活性,差异均有统计学显著性(P<0.05);丹参酮ⅡA呈剂量依赖性增加EA.hy926细胞的存活率,下调p-p38 MAPK蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以抑制细胞凋亡,降低IL-6及TNF-α含量,增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活性,差异均有统计学显著性(P<0.05)。结论: 丹参酮ⅡA可通过抑制p38 MAPK通路,减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤。     

紫草素通过PI3K/Akt通路抑制氧糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡

目的:探讨紫草素对氧糖剥夺(OGD)损伤模型中大鼠原代皮层神经元的作用及机制。方法:用不同浓度(0. 02、0. 2、2和20μmol/L)紫草素对大鼠原代皮层神经元经进行预处理,再经OGD损伤处理,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法和荧光素二乙酸酯/碘化丙啶(FDA/PI)双染法分别检测神经元活性和凋亡情况,选择最适紫草素浓度。然后,在加入紫草素之前提前加入LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂,1μmol/L),用Wesern blot法检测神经元p-Akt(Ser473)水平变化,用LDH法和FDA/PI双染法检测神经元活性和凋亡率变化。结果:0. 2、2及20μmol/L的紫草素可显著提高神经元存活率(P 0. 05),同时还可使神经元内p-Akt(Ser473)水平显著升高(P 0. 05); LY294002可显著阻断紫草素对神经元p-Akt(Ser473)水平和凋亡率的影响(P 0. 05)。结论:紫草素可通过激活PI3K/Akt通路来减少OGD诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡。     

载脂蛋白A-I模拟肽L-4F减轻过氧化氢诱导的小鼠骨髓内皮祖细胞损伤

 目的: 研究载脂蛋白A-I模拟肽L-4F是否减轻过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)氧化应激损伤及其机制。方法: 通过密度梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞,条件培养基EGM-2MV诱导分化培养EPCs。对培养EPCs先以PI3K/AKT抑制剂LY294002(30 μmol/L)干预2 h后加入L-4F(75 mg/L)4 h,再加入100 μmol/L H₂O₂ 24 h。MTT 法检测细胞活力,试剂盒检测各实验组培养基超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,以评价细胞氧化与抗氧化平衡及脂质过氧化程度;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫印迹法检测p-AKT蛋白水平。结果: L-4F预处理显著抑制了H₂O₂诱导的细胞活力降低、SOD活性下降、MDA含量增加及细胞凋亡。H₂O₂下调p-AKT的蛋白水平,L-4F呈浓度依赖性地上调p-AKT的蛋白水平。LY294002抑制了L-4F减轻EPCs损伤的作用。结论: 载脂蛋白A-I 模拟肽L-4F部分通过PI3K/AKT通路减轻H₂O₂诱导的EPCs氧化应激损伤。     

肽基脯氨酰顺反异构酶抑制剂胡桃醌对宫颈鳞癌SiHa细胞凋亡的作用

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶抑制剂胡桃醌对宫颈鳞癌Si Ha细胞增殖和凋亡的影响及其促凋亡的机制。方法:选取处于对数生长期的Si Ha细胞,将其分为空白对照组和不同剂量(10、20、50、80及100μmol/L)胡桃醌给药组,共6组。采用MTT法观察胡桃醌对Si Ha细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50=20.4μmol/L),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;选取与IC50接近的浓度(20μmol/L)通过Hoechst 33258及流式细胞术测定胡桃醌对Si Ha细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、8、9以及抑癌基因PTEN的蛋白水平。结果:MTT实验结果显示,与对照组比较,各给药组对细胞活力的抑制作用明显,差异有统计学意义(P0.05);Hoechst 33258检测表明,20μmol/L胡桃醌处理细胞12 h后可出现明显的细胞核典型凋亡细胞形态,流式细胞术检测结果说明胡桃醌可诱导Si Ha细胞出现早期凋亡;Western blot检测显示与正常对照组相比,20μmol/L胡桃醌处理细胞12 h后,cleaved caspase-3、8、9及PTEN的蛋白水平明显增加。结论:胡桃醌可以抑制Si Ha细胞的活力,并诱导细胞凋亡,其机制主要是通过抑制caspase途径并增加抑癌基因的表达。