SEB活化的人外周血T细胞CD25,CD69的表达

本文用超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导外周血淋巴细胞增殖。结果显示出微量超抗原能诱导外周血淋巴细胞的增殖,大量的增殖反应发生在SEB刺激后的第5天,增殖的细胞是CD4~+T细胞,它们由刺激前的27％增加到42％。外周血活化的T细胞不依赖外源性IL-2:大量内源性IL-2的存在抑制T细胞的增殖反应。伴随CD4~+T细胞的增殖,CD25和CD69分子表达明显增加。提示SEB能改变外周血T细胞表面的分子表达。     

CD4~+CD25~+T细胞在CD8~+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用

实验旨在研究CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用。将小鼠脾脏中分离的单个核细胞分为两组,即去除CD4+CD25+T细胞组和未去除CD4+CD25+T细胞组,测定树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽刺激不同T细胞增殖活性、细胞因子IFN-γ分泌,以及多肽特异性CD8+T细胞对同源性胃癌细胞株MFC的杀伤活性。结果显示预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,所诱导的特异性CD8+CTL对肿瘤细胞免疫应答增强,表现为反应性T细胞对树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽增殖反应增强,IFN-γ分泌量提高及CD8+T细胞对MFC杀伤活性增强。这些结果表明,预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,肿瘤抗原多肽修饰的树突状细胞肿瘤疫苗效能可明显增加。CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中起下调作用。     

超抗原SEB活化的NKT细胞亚群及耐受功能的研究

目的 研究多肽类抗原.超抗原金黄色葡萄球菌肠毒索B(staphylococcal entcrotoxin B,SEB)活化的NKT细胞亚群及耐受特征.方法 小鼠脾细胞分别与SEB和ConA体外培养,MTT方法 测定细胞增殖;特异性耐受特征的研究使用体外活化第3天的细胞,吸出上清后添加二次抗原ConA、LPS、IL-2,继续培养3 d,MTT方法测定细胞对二次抗原的应答反应能力.用流式细胞测定法解析SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、5、10和15天时的T和NKT淋巴细胞亚群.结果 SEB和ConA均诱导了小鼠淋巴细胞在体外增殖;SEB活化的淋巴细胞对ConA、LPS和IL-2的二次应答反应能力消失,细胞增殖的OD570nm值由一次应答反应的0.433±0.07分别下降到0.19±0.01、0.14 ±0.02和0.15±0.04(P＜0.01).EonA活化的淋巴细胞的二次应答反应依然存在并依赖IL-2.SEB活化的淋巴细胞是CD4+NK1.1+和CD8+NK1.1+NKT细胞,而不是CD4-CD8-NKT细胞.ConA活化的淋巴细胞是CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞并包括了CD4-C08-/CD3+NK1.1+NKT细胞.结论 除了α-Calcer脂多糖类抗原能够活化NKT细胞,多肽类超抗原SEB也能活化NKT细胞并具有特异性免疫耐受功能.能够介导免疫耐受的NKT细胞亚群可能是SEB活化的CIM+、CD8+NKT细胞而不是CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞.     

人CD4~+CD25~+调节性T细胞体外扩增研究

目的:建立有效的体外培养扩增人CD4+CD25+Treg细胞的体系,为临床输注供者来源的CD4+CD25+细胞抑制急性移植物抗宿主病(Auctegraft versus host disease,aGVHD)提供实验基础。方法:用免疫磁珠分选法从健康人外周血淋巴细胞中得到CD4+T细胞、CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+Treg细胞。分别进行长期培养、扩增;流式分析其表型及FOXP3表达,MTT法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。结果:经过3周培养,三组细胞均有明显的扩增。磁珠分选后的CD4+CD25+Treg细胞的扩增倍数为(20±8)倍,细胞纯度由89.28%±2.43%下降到76.36%±2.38%。CD4+CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为(110±21)倍,并且CD4+CD25+Treg细胞的比例由培养前0.55%±0.27%增加到53.73%±3.81%。CD4+T细胞组扩增倍数为(89±8)倍,并且CD4+CD25+Treg细胞的比例由10.63%±3.87%增加到70.93%±1.71%。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低。而且其各浓度梯度的抑制作用在自体和异体之间无明显的差异。结论:我们在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4+T细胞组扩增倍数大,细胞数量多,细胞纯度有很大提高,方法简便,有望应用于临床试验。     

耐受性CD8~+ NKT细胞体外增殖能力的鉴定

目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子的表达率和增殖能力。CFSE标记的鼠脾细胞与SEB共培养5d和10d后,荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69的百分数和增殖能力。SEB活化的第10天细胞经CFSE标记后在IL-2的协同作用下继续培养10d,荧光染色,FCM解析这群细胞的增殖能力、活性分子CD69的表达率和NKT细胞亚群的变化情况。结果:ConA、LPS和SEB三者均可以刺激小鼠脾细胞增殖。ConA和LPS在3d内可以使细胞增殖3代,且CD69的表达率为74.19%和41.56%;SEB在5d和10d内分别可以使细胞增殖5代和7代,细胞表面CD69的表达率为32.09%和48.66%。SEB活化的10d细胞可以在IL-2的协同下继续传代培养10d,可以增殖7代;这群细胞中CD8+ NKT细胞亚群,由原始的0.36%增加到38.58%;细胞表面CD69分子由正常值的0.11%提高到83.74%。结论:超抗原SEB活化的CD8+ NKT细胞可以在体外进行增殖培养,且这些细胞是活性化的细胞。利用CFSE标记细胞,FCM可以检测耐受性CD8+ NKT细胞在体外的增殖水平。     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

CD4~+T、CD8~+T、Foxp3~+T细胞在卵巢癌组织中的分布及临床意义

本研究探讨卵巢癌组织中CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞的分布特征及其与卵巢癌临床病理特征的相关性。采用免疫组织化学法检测41例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织中的CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞数,并对卵巢恶性肿瘤组织癌巢及间质中的CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞数与年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移、月经史、腹水、单侧/双侧、包膜是否完整、CA125水平及组织学类型之间的关系进行统计学分析。结果显示,1卵巢癌组织中的CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞的数量及CD4+T/CD8+T细胞的比值与良性对照组相比有显著性差异(P0.05)。2卵巢癌组织癌巢内CD4+、CD8+T细胞的数量及CD4+T/CD8+T细胞的比值显著低于间质内(P0.05)。3卵巢癌癌巢内,CD4+、CD8+、Foxp3+T的数量及CD4+T/CD8+T细胞的比值均与临床分期有关(P0.05);CD8+、Foxp3+T的数量还与病理分级有关(P0.05)。4卵巢癌组织间质内,CD8+T细胞的数量与FIGO分期、组织学类型有关(P0.05);Foxp3+T细胞的数量与病理分级、FIGO分期、淋巴结转移有关(P0.05);III期、双侧卵巢癌患者CD4+T/CD8+T细胞的比值低于I/II期、单侧卵巢癌患者,差异有统计学意义(P0.05)。5Foxp3+T细胞和CD8+T细胞在癌巢内及间质内均呈正相关(r=0.516,P0.05;r=0.430,P0.05)。综上所述,卵巢癌组织中CD8+、Foxp3+T细胞的数量明显增加,且与FIGO分期呈正相关,提示二者可能共同参与卵巢癌的发生发展;晚期卵巢癌组织中Foxp3+T细胞的数量增多、CD4+T/CD8+T细胞比值下降提示患者卵巢局部的免疫反应受到抑制。     

重症肌无力患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及意义

研究CD4 + CD2 5 + 调节性T细胞在重症肌无力 (MG )发病中的作用。本文采用三色流式细胞术对 2 9例MG患者和 2 3例健康对照者外周血中CD4 + CD2 5 + T细胞 (CD3+ CD4 + CD2 5 + )的百分率进行测定。结果显示病情未能很好控制的MG患者外周血CD4 + CD2 5 + T细胞比率略低于健康对照组 (分别为 3 79%± 1 4 0 %、 4 5 3%± 0 96 % ,P =0 12 ) ,病情稳定或缓解的MG患者CD4 + CD2 5 + T细胞比率 (8 4 5 %± 1 96 % )显著高于健康对照组 (P =0 0 0 0 1) ;胸腺切除的MG患者CD4 + CD2 5 + T细胞比率 (8 4 4 %± 2 39% )显著高于非胸腺切除的MG患者 (5 88%± 2 89% ,P =0 0 38)和健康对照组 (4 5 3%± 0 96 % ,P =0 0 0 3)。提示MG患者外周血中存在异常比例的CD4 + CD2 5 + 调节性T细胞 ,可能参与疾病的发生与发展。     

耐受调节性CD8+NKT细胞体外稳定性的研究

目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性.方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究.以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共同培养72 h,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力.在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加各效应细胞,72 h后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力.体外扩增和冻存的效应细胞与异源鼠脾细胞做混合淋巴细胞培养,MTT法测定细胞的增殖情况.效应细胞用荧光抗体染色,用流式细胞术(FCM)解析NKT细胞亚群.结果:与正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力相比,体外扩增10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞对ConA或LPS的应答反应能力明显降低,细胞增殖的A值分别由正常值0.67和0.61分别下降至0.30和0.31,0.28和0.20,0.26和0.24,以及0.22和0.23(P＜0.05,n=3).效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述刺激剂ConA或LPS的应答反应,分别由正常值0.67和0.61下降至0.33和0.39,0.30和0.43,0.36和0.43,以及0.26和0.29(P＜0.05,n=3).效应细胞与异源鼠脾细胞反应与对照组相比明显的降低,分别由正常值0.70下降至20d的0.42,30 d的0.42以及冻存效应细胞的0.54(P＜0.05,n=3).在这群效应细胞中,主要是CD8+NKT细胞,由原始的0.36%增加到41.59%(P＜0.05,n=3).结论:耐受调节性CD8+NKT细胞可以在体外进行传代培养,并且这些传代培养细胞的耐受调节功能依然存在.     

传染性非典型肺炎患者CD4阳性T细胞在发病早期显著下降

为了解传染性非典型肺炎患者早期的免疫状态 ,采用流式细胞仪以三色荧光标记的单克隆抗体 (CD4 FTTC/CD8 PE/CD3 PC5 )检测入院时 30例非典型肺炎或疑似患者的外周血T细胞亚群比例 ,并作绝对计数和计算CD4 +/CD8+比值。结果表明 ,11例非典型肺炎患者的CD3+、CD4 +T淋巴细胞比例、CD4 +/CD8+比值和CD3+、CD4 +和CD8+T淋巴细胞计数均明显低于 34例健康人 (P <0 0 0 1)。如CD4 +T细胞比例从健康人的 4 0 6 %降至 14 5 % ,细胞计数从健康人的 712 1/mm3 降至 15 1 1/mm3。患者CD8+T淋巴细胞比例也有一定程度的下降 (从健康人的 2 8 7%降至 2 2 6 % ,P <0 0 5 )。 19例疑似患者的上述大部分指标亦较健康人群有明显降低 (P <0 0 0 1)。非典型肺炎患者组与疑似患者组比较 ,前者CD3+T细胞和CD4 +T细胞比例进一步下降 (P <0 0 1) ,CD4 +/CD8+比例也倒置至 0 70。患者病程早期CD4 +T细胞比例下降可引起T细胞免疫功能低下 ,表明非典型肺炎和免疫功能失调有关。     

SARS患者CD4~+T细胞水平与胸部X线表现的动态变化研究

为探讨SARS患者的CD4 + T淋巴细胞改变与胸部X线表现及临床表现的动态变化关系 ,为SARS的诊断治疗提供相应依据。 (1)通过每天测体温 ,了解热度、热程以及发热规律 ;(2 )入院后行CD4 + T淋巴细胞计数检测 ,此后每隔 2～ 3d进行一次 ;(3)每隔 2 4～ 72h摄胸部正侧位片。结果 2 3例均有发热 ,37 8～ 4 0 1℃。重症患者热程 (12 82± 4 4 9)d ;普通患者为 (7 6 0± 3 14 )d ,(P <0 0 5 )。入院初CD4 + T细胞平均为 17 9%± 5 6 % ;治疗 15～ 30d后为 2 9 4 %± 5 4 %。高峰期CD4 + T细胞最低 12 5 %± 6 2 % ,与其他各期比较 ,差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;恢复期 5例肺纤维化患者CD4 + T细胞为2 2 4 %± 4 8% ,较 18例无肺纤维化患者 31 4 %± 4 4 %明显降低 (P <0 0 1) ;5例并发肺纤维化患者恢复时间 (35 8± 12 5 )d ,较 18例无肺纤维化患者 (2 5± 8 6 )d明显延长 (P <0 0 1)。通过CD4 + T细胞和胸部X线的动态观察 ,两者基本呈平行变化 ,但CD4 + T细胞降低较胸部X线改变发生早 ,恢复时间较晚 ,且与肺纤维化的形成有关     

多发性骨髓瘤细胞XG-7诱导CD8和TCRαβ阳性的T细胞增殖分化成为细胞毒效应细胞

采用经密度梯度离心获得的正常健康人外周血淋巴细胞 (PBL )与多发性骨髓瘤细胞XG 7进行混合肿瘤淋巴细胞培养。3 H TdR掺入实验证实XG 7细胞可刺激PBL增殖 ;间接免疫荧光检测显示增殖的PBL中 ,CD4+ /CD8+ 细胞比例偏移 ,CD8+ T细胞增加。激活的CD8+ T细胞在含IL 2的培养体系中得到迅速扩增 ,占细胞总数的 96 %以上。流式细胞仪检测显示 ,扩增的T细胞表达CD3,CD8和TCRαβ ,而不表达CD4,CD16和CD5 6。细胞毒实验结果表明 ,扩增的CD8+ T细胞不仅杀伤原刺激细胞XG 7,也可杀伤其它肿瘤细胞如RPMI82 2 6 ,U2 6 6和Daudi。上述结果说明了经XG 7细胞所刺激PBL中的CD8+ T细胞可增殖分化成为抗肿瘤细胞的细胞毒效应细胞 ,这使得它们有可能在临床上用于肿瘤病人的治疗。     

小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3~+ CD4~+及CD3~+ CD8~+T淋巴细胞亚群的差异

目的:探索小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3+CD4+及CD3+CD8+T淋巴细胞亚群是否存在差异,并为治疗提供参考。方法:选取肺癌晚期患者共65例,其中包括小细胞肺癌14例,非小细胞肺癌51例以及20例健康对照。用流式细胞仪检测研究对象外周血淋巴细胞表面CD3+CD4+及CD3+CD8+的表达情况。结果:CD3+CD4+T细胞所占比例无论是小细胞还是非小细胞肺癌晚期的患者都较健康对照显著降低;CD3+CD8+T细胞所占比例在肺癌晚期的患者较健康对照并无显著变化;CD4+/CD8+比值在小细胞肺癌晚期患者较健康对照显著下降。结论:无论是小细胞还是非小细胞肺癌晚期的患者CD3+CD4+T细胞的水平较健康人都显著降低,说明肺癌晚期患者细胞免疫功能严重受损。     

香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞(DC),流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4~+T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4~+T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4~+T淋巴细胞共培养可以促进CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4~+T细胞共培养后分化的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg。     

超抗原SEB激活诱导CD4~+T细胞凋亡模型的建立

目的为了探讨超抗原活化诱导 CD4+ T淋巴细胞凋亡分子机理及其信号传导途径 ,有必要建立超抗原活化诱导 CD4+ T细胞凋亡模型。方法采用电镜观察细胞凋亡的形态学特征 ,借助流式细胞仪 PI染色观察细胞凋亡的光散射特征及亚二倍体核型峰特征 ,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的 DNA片段化图谱 ,最后采用改进的二苯胺 (DPA)法定量分析细胞凋亡 DNA片段化百分率。结果 4μg/ m L SEB刺激静息的 SEB应答 CD4+ T细胞 12 h后 ,电镜下观察呈现典型的凋亡形态学特征 ;流式细胞仪 PI染色分析表明 ,在二倍体峰的左侧出现亚二倍体核型峰典型凋亡特征 ,在光散射图谱上呈现低于正常细胞的前向散射和高于正常细胞的侧向散射 ;琼脂糖凝胶电泳分析呈现典型的凋亡 DNA梯状图谱 ;DNA片段化百分率分析表明 ,超抗原 SEB活化诱导 CD4+ T细胞凋亡率的升高具有时间依赖性 ,添加 Fas- Ig融合蛋白能够特异性抑制凋亡 DNA片段化百分率的升高。结论超抗原 SEB活化诱导 CD4+ T细胞凋亡模型的建立 ,为进一步深入探讨超抗原活化诱导 T细胞死亡的分子机理和信号通路奠定了坚实基础     

肝移植自发免疫耐受大鼠CD8+CD28-T抑制细胞的生物学特性

目的　研究近交系大鼠原位肝移植自发免疫耐受模型中CD8 CD2 8- T抑制细胞的生物学特点。方法　建立大鼠原位肝移植模型 ,流式细胞技术检测自发免疫耐受模型中CD8 CD2 8- T抑制细胞含量变化 ;通过体外混合淋巴细胞反应和体内输注验证CD8 CD2 8- T细胞的抑制功能 ,并检测其增殖、细胞因子mRNA的表达和诱导靶细胞发生凋亡的情况 ,并与急性排异组相比较。结果　自发免疫耐受模型大鼠脾脏CD8 CD2 8- T细胞含量 (31.5 %± 2 .6 % )显著高于正常大鼠 (5 .4 %±1.5 % )和急性排异组大鼠 (6 .0 %± 1.3% )。自发免疫耐受组CD8 CD2 8- T细胞明显抑制体外混合淋巴细胞反应的增殖 ,体内输注显著延长皮肤移植物的存活时间 (MST :10± 0 .8dvs 15± 1.8d ,P <0 .0 5 ) ,但急性排异组大鼠脾脏CD8 CD2 8- T细胞无抑制功能。外源性IL 2 4 0U ml可逆转CD8 CD2 8- T细胞的抑制功能。CD8 CD2 8- T细胞不会增加靶细胞凋亡的发生 ,其IFN γmRNA为高表达 ,而急性排异组无表达。PHA 5 0 μg ml和IL 2 4 0U ml、PMA ion 5 0 2 5 0ng ml和IL 2 4 0U ml联合应用可有效刺激CD8 CD2 8- T细胞增殖。结论　自发耐受组大鼠脾脏CD8 CD2 8- T细胞是一种T抑制细胞 ,在自发免疫耐受的形成过程中具有重要作用 ,其抑制作用可能与IFN     

SEB诱导的CD4+ T细胞无能、凋亡及MHC-I类分子表达下调

目的：探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素（SEB）体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制。方法：采用SEB体外刺激C57BL/6J（B6）小鼠的脾细胞后，以MTT比色法检测脾细胞的增殖，并用PI染色后以流式细胞术（FCM）分析不同时间段处于S期，G0-G1期的细胞及无能T细胞的凋亡，测定T细胞亚群及MHC-I（H-2K^b)表达的变化。用琼脂糖凝胶电泳，观察不同时间段凋亡T细胞的DNA特征。结果：部分去除CD8^ T细胞后。SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4^ T细胞大量增殖，在SEB刺激后第3天，CD4^ T细胞中处于S期的比率最大，此后开始下降；而处于G0-G1期的CD4^ T细胞变化则相反，在初次刺激后第3天，增殖的CD4^ T细胞出现无能，FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNAladder证实，在第7天，无能CD4^ T细胞出现凋亡，且凋亡细胞的比率逐渐增多，不因加入抗CD3抗体或CoN A而逆转，在SEB刺激后，CD4^ T细胞表面MHC-I类分子（H-2K^b)的表达，随细胞无能的出现而明显下调。结论：SEB诱导的T细胞免疫耐受，可能与CD4^ T细胞的无能，凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下调有关。     

重症肌无力患者外周血CD5~+B细胞和CD4~-CD8~-T细胞的变化

研究重症肌无力 (MG )患者外周血CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞的变化 ,以探讨这两种细胞与MG的关系。采用流式细胞仪分析MG患者和对照组外周血中CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞的频率 ,同时以ELISA方法检测这些患者的血清AchR、PsmR抗体水平。结果 :2 8例MG患者的CD5 + B细胞为 19 75 %± 10 8% ,高于对照组的 15 4 %± 9 6 7% (P <0 0 1) ;胸腺未切除MG患者的CD5 + B细胞为 2 2 31%± 7 4 7% ,显著高于对照组 (P <0 0 0 1) ;两种抗体阳性MG患者的CD5 + B细胞为 2 4 96 %± 13 1% ,显著高于对照组 (P <0 0 0 1) ;以上各组MG患者的CD4 CD8 T细胞与对照组均无显著区别 ;两种抗体阴性组的CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞亦与对照组均无显著区别 ;两种抗体阴性组的CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞亦与对照组无明显差异。本研究提示MG患者外周血的CD5 + B细胞频率增高 ,与胸腺切除与否以及突触前后膜抗体的阳性程度密切相关 ,而CD4 CD8 T细胞是否与MG有关还需进一步研究证实。     

外周血CD3~+CD56~+T细胞在恶性肿瘤患者中的表现及临床意义

目的了解 CD3+ CD5 6 + T细胞与 CD3- CD5 6 + 、CD3+ CD5 6 - 的关系及其在参与恶性肿瘤患者抗肿瘤免疫中的作用。方法采用流式细胞术对 10 0例恶性肿瘤患者 (5 5例实体瘤患者和 45例非实体瘤患者 )及 46例健康对照组外周血中的 CD3+ CD5 6 +、CD3- CD5 6 +、CD3+ CD5 6 - 3类淋巴细胞进行标记分析。结果在实体瘤和非实体瘤患者组中 :CD3+ CD5 6 + T细胞均有高表达 ,2组患者与健康对照组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。 CD3+ CD5 6 - T细胞在实体瘤组的表达都显著低于非实体瘤组和健康对照组 ,2组间比较均有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ;而 CD3- CD5 6 + NK细胞在 2患者组中的表达与健康对照组比较均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 CD3+ CD5 6 + T细胞在恶性肿瘤患者外周血中的高表达较 CD3- CD5 6 + NK细胞更明显 ,并且不受恶性肿瘤细胞类型的影响 ,提示高表达的 CD3+ CD5 6 + T细胞是参与抗肿瘤免疫的重要表现     

间充质干细胞体外对ITP患者CD4+CD25+T细胞影响

目的:体外观察间充质干细胞(MSCs)对免疫性血小板减少症(ITP)患者CD4+ CD25+T细胞比例的影响.方法:采用Ficoll分离骨髓单个核细胞,通过体外培养,扩增出MSCs,通过Ficoll分离法和尼龙棉柱法获取正常人及ITP患者外周血T淋巴细胞,并应用流式细胞术检测T细胞中CD4+ CD25+T细胞比例;MSCs经丝裂霉素MMC处理后按不同数量(2×103、1×104、5×104个细胞/孔)接种培养板作为基底层细胞,然后分别接种体外分离纯化的异体ITP及正常人T淋巴细胞,于2、4、6天后各自收集T淋巴细胞及培养上清,用流式细胞术检测接种于骨髓MSCs的ITP患者CD4+ CD25+T细胞比例.结果:ITP患者外周血CD4+ CD25+T细胞数量及CD4+ CD25+/CD4+比值均明显低于正常对照组(P＜0.05);在PHA作用下,数量＞1×104的骨髓MSCs与T淋巴细胞共培养4天后,与正常对照组相比,MSCs可显著上调ITP患者及正常人T淋巴细胞中CD4+ CD25+T淋巴细胞比例及CD4+ CD25 +/CD4+比值(P＜0.05),且随MSCs量的增加,作用增强(P＜0.05).体外骨髓MSCs对ITP患者CD4+ CD25+T淋巴细胞具有上调作用,以上这种机制可使ITP患者的细胞因子及CD4+ CD25+T淋巴细胞逐渐接近于正常人但仍达不到正常人水平(P＜0.05).结论:MSCs在体外可能通过上调CD4+ CD25+调节性T细胞,进而诱导ITP患者免疫耐受形成.