肺癌病人外周血单个核细胞NK活性和LAK活性的研究

肺癌是常见的恶性肿瘤之一,目前认为,肺癌的病因除了致癌因素、遗传因素外,机体免疫监视功能的降低也起重要的作用,现认为在排除肿瘤细胞中起主要作用的是细胞免疫。其中NK和LAK细胞是重要的免疫细胞之一。本文研究肺癌病人NK活性和LAK活性,以及一些细胞因子对NK活性的影响,为了解肺癌的发展、转归及免疫治疗提供实验数据。1材料1．1实验对象：肺癌病人为我院外科待手术者（男18例,女7例）,年龄45～75岁,术后经病理确诊,其中鳞癌15例,腺癌州例;采血前未经任何化疗、放疗,未用免疫抑制及免疫增强剂。对照组;健康体检出国…     

骨转移瘤LAK细胞治疗前后NK活性水平变化及意义

目的了解骨转移瘤患病机体NK活性变化及免疫状况与致命再转移的关系.方法对20例骨转移瘤转输自体LAK前后作了NK活性动态性监测,所测参数与10例正常人作了分析比较.结果正常对照组平均NK活性率(49.5±12.2)%;LAK组治疗前平均NK活性(19.9±20.5)%,治疗后平均活性(35.48±17.44)%,与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论动态个体NK活性监测用以判断机体免疫状态与疗效较为客观,可作为监测恶瘤再转移的参考指标.     

LAK细胞免疫活性研究

本文用~(51)Cr-铬酸钠释放法分析了由PBL、SPC和THC制备的LAK细胞免疫活性变化规律。证明LAK细胞的NK活性和LAK活性与IL-2有非常明显的正向依赖关系,与培养细胞密度有明显的负向依赖关系。无IL-2诱导,不表现LAK活性,在低细胞密度条件下少量的IL-2即可激活LAK细胞,细胞密度增大,IL-2剂量需要相应增加,用2×10~6/ml细胞密度制备LAK细胞,诱导LAK细胞活性的最佳IL-2剂量为1000 IU/ml。单用IL-2激活LAK细胞,NK活性高峰时相在48h左右;LAK活性高峰时相在60h前后。LAK细胞杀伤活性可以在培养液中维持1～2天时间,要在较长时间内维持LAK细胞活性,须定期更换培养基,添加IL-2。LAK细胞杀伤活性与细胞形态学变化不完全同步。     

正常人外周血NK细胞活性的调查

应用经作者改良的乳酸脱氢酶(LUH)释放法,测定了健康男性和女性(18～25岁)各30名的外周血NK细胞活性。其正常值相应为37.15±10.98%和38.48±14.69%。健康成人的NK细胞活性正常值为37.82±12.54%。     

NK／LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

OBJECTIVE: To understand the relation between cytotoxic activity of immunologic effector cells and multidrug resistance of the tumor cells. METHODS: Continuous observation of the morphological changes and MTT colorimetry were employed to evaluate the cytotoxic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells and natural killer (NK) cells against multidrug-resistant (MDR) human oral carcinoma cell line-KBV200 (before and after reversal of MDR) and parental drug-sensitive cell line KB. The morphologic changes of LAK cells and the 3 target cell lines were observed continuously under inverted microscope 3 h after co-culture of LAK cells with one of three target cell lines respectively. The lysis rates of three tumor cell lines in response to co-culture with LAK or NK cells were determined using MTT colorimetry. RESULTS: In comparison with the parental drug-sensitive cell line KB, both KBV200 and its reserved cell line by verapamil (KBVV) showed earlier adherence and greater number of cells lysed by LAK. In MTT colorimetry assay, the cytotoxicity of both LAK and NK cells against the 3 cell lines was associated with the effector-to-target (E/T) cell ratio; the lysis rates of KBV200 and reversed KBV200 cells by verapamil in response to LAK and NK cells were higher than that of KB cells (P<0.05), but KBV200 and KBVV did not significantly differ (P>0.05). At the same E/T ratio, LAK cells possessed stronger cytotoxicity than NK cells against all the tumor cell lines (P<0.05). CONCLUSIONS: Immunologic effector cells possess strong cytotoxic activity against multidrug-resistant cell line KBV200. Modulation of MDR does not decrease the cytotoxic activity of the immunologic effector cells. The results of this study suggest that adoptive cell immunotherapy with immunologic effector cells may be of value in controlling the progress of MDR tumors.     

鼻咽癌,食管癌患者外周血NK细胞活性检测

应用１２５ＩＵｄＲ标记的Ｋ５６２作为靶细胞，测定１０例鼻咽癌、２５例食管癌和３６名正常人外周血ＮＫ细胞活性。结果显示：食管癌患者为２１．１±６．５％，鼻咽癌患者为１７．２±４．７％，正常人为５７．０±１２．９％，鼻咽癌与食管癌比较差异无显著性（Ｐ＞０．００５），但正常人与肿瘤患者比较差异有极显著性（Ｐ＜０．０１）。研究表明肿瘤患者外周血ＮＫ细胞活性明显下降，表明其免疫状态较差     

癌患者的NK细胞和LAK细胞活性及MPS治疗对其的影响

观察了４７例癌患者和１３例健康人的ＮＫ细胞、内源性ＬＡＫ细胞对靶细胞的杀伤活性及ＮＫ细胞计数。结果表明，癌患者该３项指标均显著低于对照组（Ｐ＜０．００１），尤以晚期癌症和发生远处转移患者的降低为著。不同种类的癌和有无淋巴结转移的患者之间该３项指标无显著性差异。使用ＭＰＳ免疫治疗２周，可显著提高患者的上述３项指标（Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０５）。     

~(51)Cr释放方法测定LAK细胞活性若干实验条件的选择

本文探讨了(51)~Cr释放试验测定LAK细胞活性的若干实验条件。应用200μCi国产铬酸钠(Na_2~(51)CrO_4),在细胞浓度2×10~8/ml、容积0.5ml、2小时的标记条件下,1×10~4k_(562)细胞的同位素掺入量大于1800cpm,自然释放率为17～20％。以IN HCI与等容量k_(562)靶细胞共育为最大释放,其最大释放率为70.08％。效/靶比例为50∶1、共育6小时的基本条件下,(51)~Cr释放方法测定的LAK细胞杀伤K_(562)细胞活性为65.33±7.4％。     

膀胱癌患者外周血NK细胞活性的研究

本研究测定了３２例膀胱癌和２６例前列腺增生症患者外周血ＮＫ细胞活性，并将膀胱癌组ＮＫ细胞活性分别与正常对照组及前列腺增生症组进行比较，其结果表明膀胱癌患者的ＮＫ细胞活性（３８．９１±２．２３％）比对照组（５０．９１±１．６６％）明显低，（Ｐ＜０．０１）与前列腺增生症组（４９．２７±２．３０％）相比亦有显著差异（Ｐ＜０．０１）。     

~(51)铬释放法及其对自然杀伤细胞活性的测定

本文对国产~(51)铬释放试验的实验条件(靶细胞、~(51)铬的用量、标记时间及标记细胞的存放等)进行了探讨。与英国放化中心提供的~(51)铬酸钠相比,国产~(51)铬制剂虽然放射性比度、利用率和标记率较低,但用量在100—200μci时细胞毒性反应甚轻,自然释放率小于15%。通过NK细胞活性的测定表明:国产~(51)铬释放法是令人满意的。     

卵巢良,恶性肿瘤病人NK细胞活性的变化

采用改良乳酸脱氢酶释放试验检查了44例卵巢肿瘤病人的自然杀伤(NK)细胞活性。结果表明:恶性肿瘤病人的NK细胞活性明显低于良性肿瘤病人及正常人(P<0.01)。另外对20例经手术证实并彻底切除癌灶的恶性卵巢肿瘤患者进行了随访,其中6例复发或未控患者的NK细胞活性明显低于14例临床控制患者(P<0.01)。因此应用该项检查有助于判定卵巢肿瘤患者的免疫功能,对估计病人的预后有一定的参考价值。     

PA－MSHA菌苗对小鼠淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响

经基础研究和初步临床应用表明，ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗对肿瘤的生长有抑制作用。本文通过体外实验发现，该菌苗有刺激小鼠淋巴细胞增殖的作用，并对ＮＫ细胞杀伤靶细胞的活性有增强作用，其刺激增殖和活性增强作用，在一定范围内与菌苗的使用浓度成正比关系。提示ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗可能是一种良好的诱导增强淋巴细胞和ＮＫ细胞功能活性的刺激剂。     

重组白细胞介素-2对急性白血病及MDS患者NK活性异常的逆转作用

用标准的~(51)Cr 释放法观察了12例急性白血病及白血病前期(MDS)患者的外周单个核细胞(PBMNCs)经重组白细胞介素-2(rIL-2)诱导3～4周后 NK活性及 LAK 活性的变化。结果诱导前 NK 活性(5.3±4.5%)较健康人(56.2±9.9%)明显减低(P<0.01)。rIL-2(1000u//ml)诱导3～4周后 NK 活性(46.9±8.6%)较培养前显著提高(P<0.01)。LAK 活性由0.80±0.83%升高到49.4±9.6%。同时在培养过程中也观察到淋巴细胞逐渐增多,而白血病幼稚细胞逐渐减少。这提示 rIL-2在体外能够逆转急性白血病及 MDS 患者 NK 杀伤功能缺陷,其 LAK 活性的诱导过程也是对白血病细胞的清除过程。     

胃癌病人自然杀伤细胞活性检测及变化因素分析

以Na_2~(51)CrO_4标记K562靶细胞,应用放射性同位素释放法,对正常人和胃癌病人外周血NK细胞活性进行了检测,发现胃癌病人NK活性的高低与肿瘤组织分化程度的高低相平行,即高分化胃癌病人NK细胞活性无显明改变,低分化与不良分化胃癌病人NK细胞活性明显降低;而无论是限局型还是浸润型病人,NK细胞活性均明显降低。干扰素浓度为500IU/ml时,可提高正常人(40.5%)和病人(36.6%)的NK细胞活性,其中限局型病人对干扰素的反应能力优于浸润型病人。     

PHA胸导管来源诱生的LAK细胞的作用

利用胸导管引流治疗哮喘病的机会,研究了PHA在rIL-2诱导胸导管淋巴细胞成为LAK细胞中的作用。结果表明:PHA和rIL-2共同诱导TDL2周,细胞数量扩增约34倍。同时明显促进了DL的~3H-TdR和~3H-Leucine的参入,较对照组有明显差异(P<0.01)。其中rIL-2 100～1000U/ml和PHA组作用最佳,但PHA和rIL-2的协同作用持续时间短,第6d即开始下降,而且PHA参与诱导的TDL-LAK细胞的杀伤活性有所下降。     

Ge—132对荷瘤小鼠NK细胞活性及红细胞免疫功能的影响

为了探讨Ｇｅ－１３２抗癌作用机制，本文进行了Ｇｅ－１３２对荷瘤小鼠脾脏ＮＫ细胞活性和红细胞免疫粘附功能影响的体内实验研究。实验采用Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤小鼠，腹腔注射Ｇｅ－１３２（剂量分别为１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ），每日１次，连续１４天后，取小鼠脾细胞和血液进行ＮＫ细胞活性及红细胞免疫粘附功能测定，并摘除瘤块称重，计算抑瘤率。结果表明，Ｇｅ－１３２对小鼠抑植瘤（Ｓ１８０）的生长具有显著的抑制效应，抑瘤率达５５％；荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ活性明显低于正常对照组，Ｇｅ－１３２能使其得以恢复；荷瘤小鼠ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率明显低于正常对照组（Ｐ＜００１），ＲＢＣ－ＩＣ花环率则高于正常对照组（Ｐ＜００１），注射Ｇｅ－１３２可显著提高ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率，降低ＲＢＣ－ＩＣ花环率。表明Ｇｅ－１３２能增强荷瘤小鼠ＮＫ细胞杀伤活性和红细胞免疫粘附功能。