从黏膜免疫探讨脾虚痹证(类风湿性关节炎)发生机理

迄今为止,对于痹证病因已从导致痹证的内在因素(肾虚)、外在因素(风寒湿)、不内外因(软骨损伤)等方面进行了研究[1～3]。笔者现从黏膜免疫角度探讨脾虚对痹证发病的影响机制。 1 脾虚与痹证 脾为后天之本,气血生化之源,又主四肢肌肉。故脾虚则四肢不用。痹证虽有外因,但治疗应祛邪与扶正兼顾,尤其病久者需注意扶正。所谓“治风先治血”,血脉流畅,气旺而利于祛邪,如独活寄生汤、芎附散等均用人参、白术、茯苓、甘草等益气健脾之品。可见古人亦以补脾为治疗久痹、顽痹之大法。故又有人提出“脾虚是痹证的发病之本”[4、5]。 2 脾虚与免…     

芎附散对脾虚痹证(类风湿性关节炎)模型的影响

目的观察芎附散对脾虚基础上诱发痹证(类风湿性关节炎)小鼠模型的影响。方法选择DBA小鼠,胶原诱导性关节炎(CIA)作为痹证模型,以大黄泻下加饥饱失常造成脾虚模型,在此基础上加以型胶原(C)诱发脾虚痹证(类风湿性关节炎)的模型,用芎附散及雷公藤多苷进行治疗。观察小鼠体重、关节肿胀程度及病理学改变,用酶联免疫吸附法测定各组小鼠血清中抗C抗体、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ)含量的变化。结果痹证组、脾虚痹证组动物体重减轻,关节肿胀加剧,膝、踝关节病理学改变明显,INF-α及IFN-γ含量增高,血清中抗C抗体含量升高,以脾虚痹证组明显,与痹证组比较差异有显著性意义(P<0.01),芎附散能显著减轻上述改变。结论该模型是研究痹证(类风湿性关节炎)机制较理想的动物模型之一,芎附散对该模型有明显的治疗作用。     

宣发膜原法对胶原诱导性关节炎大鼠免疫功能的影响

目的：探讨宣发膜原法对Ⅱ型胶原诱导性关节炎（CIA）的治疗机理，为研究类风湿关节炎（RA）的发病和损伤机理提供实验依据。方法：以CIA作为RA的动物模型，给以宣发膜原方治疗，检测CIA大鼠免疫指标和病理变化。结果：治疗组大鼠病理损伤减轻，TNF-α降低，IFN-γ升高，抗CⅡ抗体降低。结论：宣发膜原法能够减轻CIA病理损伤，调节CIA大鼠免疫功能，可以用于RA治疗。     

宣发膜原方和雷公藤制剂对大鼠胶原诱导性关节炎影响的对比研究

探讨宣发膜原方对CIA的治疗机理 ,为研究RA的发病和损伤机理提供实验依据。以CIA作为RA的动物模型 ,对比研究宣发膜原方和雷公藤制剂对CIA大鼠免疫指标的影响。宣发膜原方和雷公藤制剂都可以减轻CIA大鼠病理损伤 ,增加血清中IFN γ ,降低TNF α和抗CII抗体 ,并且雷公藤制剂对CIA的治疗效果不如宣发膜原方作用快。宣发膜原法能够减轻CIA病理损伤 ,调节CIA大鼠免疫功能。     

关节免疫损伤动物模型——Ⅱ型胶原所致关节炎研究进展

关节免疫损伤动物模型——Ⅱ型胶原所致关节炎研究进展吕爱平徐世杰刘振丽王安民（中国中医研究院基础理论研究所北京１００７００）许多不同类型的关节炎都以慢性炎症、自身免疫为特征，但其病因和初发过程并不十分清楚。为了进一步探讨此类疾病的发病过程，我们需要一种...     

宣发膜原方对胶原诱导性关节炎大鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10影响的研究

目的:探讨宣发膜原方对CIA大鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10影响.方法:以CIA作为RA的动物模型,给予宣发膜原方治疗,用ELISA及放免法检测大鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10的含量.结果:宣发膜原方可以降低大鼠血清中IFN-γ、TNF-α和IL-6(P＜0.01),升高IL-10(P＜0.01).结论:宣发膜原方能够调节CIA大鼠血清中细胞因子含量.     

雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎及佐剂性关节炎黏膜免疫功能影响的对比研究

目的观察雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎（collagen-Ⅱ induced arthritis,CIA）及佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）黏膜免疫功能的影响。方法分别以Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂单独致炎免疫大鼠造成CIA和AA模型,以雷公藤多甙治疗,观察大鼠黏膜、全身免疫指标（外周血T细胞亚群）以及关节局部炎症因子（IL-6、TNF—α、COX-2和NF-κB等）的变化。结果CIA模型组派伊尔结（Peyer’s patch,PP）CD4^＋、血中CD4^＋、CD8^＋均升高;AA模型组PPCD4^＋降低,CD8^＋升高,血中的CD4^＋,CD8^＋均升高。雷公藤对两模型组的PP和血中T细胞亚群存在不同影响。两种模型大鼠关节可见高水平IL-6、TNF—α、COX-2和NF—κB表达,雷公藤多甙可以抑制这些炎症介质的表达。结论两种关节炎模型在黏膜免疫反应方面及雷公藤多甙对这两种模型的影响存在异同。     

从黏膜免疫探讨中医治疗类风湿性关节炎的作用机理

黏膜免疫系统(mucosal immunology system，MIS)是执行局部特异性免疫功能的重要场所，运用口服抗原的方法来诱导产生口服耐受治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)及其主要动物模型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthrifis，CIA)已经有了大量的报道。从该系统探讨中医治疗类风湿性关节炎作用机理，可为研究RA的新的思路与方法。     

黄连解毒汤调控炎性免疫抗类风湿性关节炎机制

目的 观察黄连解毒汤对胶原诱导性关节炎（CIA）模型小鼠病理改变及免疫损伤的影响,探讨黄连解毒汤抗类风湿性关节炎的可能机制。方法 24只DBA/1小鼠,随机分为正常组、模型组、甲氨喋呤组和黄连解毒汤组,每组6只,采用Ⅱ型胶原诱导建立CIA小鼠模型,给药组给予黄连解毒汤水煎液（5 g·kg^-1）和甲氨喋呤（0.5 mg·kg^-1）干预,观察小鼠关节肿胀症状,每3 d进行关节炎指数评分,评分达到峰值后取材;流式细胞仪检测外周血粒细胞、单核细胞、T淋巴细胞;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关节炎症因子表达;微计算机断层扫描技术（Micro-CT）扫描踝关节;苏木素-伊红（HE）染色检测关节组织病理改变。结果 与正常组比较,模型组小鼠关节肿胀,关节炎指数评分明显升高（P<0.05）;外周血粒细胞比例明显升高（P<0.05）,单核细胞、T淋巴细胞比例明显降低（P<0.05）,中性粒细胞淋巴细胞比例（NLR）显著升高（P<0.01）;关节组织炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6表达升高（P<0.01）;Micro-CT可见踝关节明显骨质破坏,病理可见到关节周围组织存在大量的炎性细胞浸润、滑膜增生。与模型组比较,黄连解毒汤组小鼠关节肿胀症状明显减轻,关节炎指数评分明显降低（P<0.05）;外周血T淋巴细胞比例升高,NLR显著降低（P<0.01）;关节中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达显著下降（P<0.01）;骨破坏及关节组织病理损伤情况明显改善。结论 Ⅱ型胶原导致CIA小鼠全身和关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,并且对关节局部的作用更为显著,从而抑制CIA小鼠关节病变和骨破坏。     

性腺功能异常型肾虚痹证发生机理的实验研究

以Ⅱ型胶腺免疫注射制作实验性痹证模型，复加雄鼠雌激素应用法和雌鼠久巢切除法所致肾虚，以观察肾虚痹证的发生机理。实验结果提示：卵巢切除法所致肾虚加重了Ⅱ型胶原诱发的关节炎（CIA）动物的病情，可能是CIA痹证发病的重要内因；而雌激素应用所致雄鼠肾虚状态减轻了CIA动物的关节病理改变，提示此种肾虚在CIA痹证中起着次要的作用。     

桂枝汤对痹证（胶原诱导免疫性关节炎）小鼠肠黏膜免疫系统中CD4+、CD8+T淋巴细胞及SIgA的影响

目的 观察桂枝汤对痹证(胶原诱导免疫性关节炎)小鼠肠黏膜免疫学指标的影响。方法 将80只雄性DBA小鼠随机分为4组[即正常组、模型组、桂枝汤高剂量组(简称桂高组)、桂枝汤低剂量组(简称桂低组)]。模型组采用Ⅱ型胶原诱导性关节炎作为痹证模型,运用免疫组织化学染色法标记小鼠小肠及PP结中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞及SIgA数量,用图像分析仪进行统计计算其含量。结果与正常组比较,模型组Ⅱ型胶原免疫后小鼠肠黏膜免疫系统中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞及SIgA数量明显减少,差异有显著性(P<0．05或P<0．01),应用桂枝汤(高、低剂量)后,CD4^+T淋巴细胞及SIgA数量明显升高,但只有桂高组与模型组比较差异有显著性(P<0．05或P<0．01)。结论桂枝汤可以增强痹证小鼠肠道黏膜免疫功能,从而可能诱导免疫耐受和免疫抑制。     

老年脾虚动物模型的建立及脾虚与衰老相关性研究

目的:通过老年脾虚动物模型的建立来探索脾虚与衰老的相关性。方法:将24只15月龄昆明种老年小鼠随机分为老年对照组和老年脾虚模型组,每组12只;另取2月龄昆明种青年小鼠12只,作为青年对照组。造模方法为:老年脾虚模型组小鼠单日游泳至耐力极限,喂饲甘蓝,双日100%精练猪脂0.5 ml/只灌胃,连续8 d。观测小鼠的一般状态,体重变化,血清中D-木糖含量、淀粉酶(AMS)活力,肝匀浆、脑匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,丙二醛(MDA)含量以及脑匀浆中单胺氧化酶-B(MAO-B)活力。结果:与老年对照组相比,老年脾虚模型组小鼠表现为逐日体重下降,懒动,大便时干时稀;后期进食量减少等“脾虚”症状;上述各项生化指标与老年对照组相比均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:脾虚与衰老存在一定的相关性,脾虚可导致或加速衰老的进程。     

类风湿性关节炎脾虚证病证结合动物模型的建立

目的：类风湿性关节炎（RA）脾虚证病证结合动物模型的建立。方法：选用6周龄SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,除正常对照组大鼠外,采用腹腔注射利血平的方法制作脾虚动物模型,然后采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂混合物的方法诱导出关节炎模型,观察脾虚证RA病证结合动物模型的发病情况,并采用酶联免疫吸附测定法等方法对其机理进行初步探讨。结果：与CIA对照组大鼠相比,采用腹腔注射利血平的方法制作的脾虚证胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠关节红肿程度和关节损伤程度明显加重,并且脾虚证CIA组大鼠出现精神萎靡,眯眼,被毛枯疏无光泽,弓背蜷缩,踝关节红肿,倦怠、懒动,喜聚堆,饮食减少,体重下降,稀便等与临床脾虚证相似的症状;与CIA对照组大鼠相比,脾虚证小肠黏膜功能受损：绒毛排列紊乱,数量减少,长短、宽窄不一,被覆上皮可见有多量杯状细胞,肠腔内可见多量剥脱、退变、坏死的绒毛碎片;与CIA对照组大鼠相比,脾虚证CIA大鼠抗Ⅱ型胶原抗体明显升高,且白细胞介素6、白细胞介素10及干扰素γ水平明显升高。结论：脾虚在RA发病过程中起着重要作用,采用利血平方法制作的脾虚证RA动物模型,既有明显的脾虚症状,又有明显的RA特征,说明这种脾虚证RA病证结合模型,能够部份反映脾虚证RA病人的发病特点,具有可行性。利血平法制作的脾虚证CIA大鼠模型可以为RA脾虚证病证结合动物模型提供一个有益的参考。     

断藤益母汤对胶原诱导性关节炎模型小鼠的防治作用

目的观察断藤益母汤(DTYMD)对胶原诱导性关节炎(CIA)模型小鼠关节炎症及骨质破坏的防治作用。方法将48只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组8只,分别为正常组、模型组、MTX组(2 mg·kg^-1)、DTYMD低剂量组(7.5 g·kg^-1)、DTYMD中剂量组(15 g·kg^-1)、DTYMD高剂量组(30 g·kg^-1)。除正常组外,其他5组均采用二次免疫法复制CIA模型。加强免疫当天(Day21)开始灌胃给药,每日1次(MTX组每周灌胃给药2次),连续给药4周。Day21开始,每4d进行1次关节指数评分;给药结束后,取小鼠踝关节行micro-CT扫描并进行三维重建;小鼠踝关节行HE染色并进行关节病理评分。结果与正常组比较,模型组小鼠关节肿胀明显,严重者出现强直;踝关节骨质侵蚀明显,关节完整性受破坏严重;踝关节结构破坏严重,炎症细胞浸润明显,滑膜增生,血管翳形成,向软骨内侵袭导致软骨及骨破坏;关节周围炎症评分、骨破坏评分及病理总评分均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,DTYMD各剂量组小鼠的关节红肿减轻,关节活动尚可;各剂量组均可显著降低CIA模型关节指数(P<0.01),其中高剂量组明显优于其他各组(P<0.01);各剂量组均可不同程度减轻踝关节骨质侵蚀破坏,高剂量组的骨质情况接近正常组,明显优于其他各组;各剂量组的踝关节相对完整,滑膜增厚不明显,少量炎症细胞浸润,关节周围炎症评分、骨破坏评分、病理总评分均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 DTYMD能有效防治CIA模型小鼠的关节炎症和骨质破坏,并存在一定量效关系。     

肠安颗粒对脾虚模型小鼠及其免疫功能的影响

目的:观察肠安颗粒对脾虚模型动物和免疫功能的影响。方法:用大黄致小鼠"脾虚"模型,观察肠安颗粒对脾虚模型小鼠的耐寒存活率和脾指数的影响;测定小鼠碳粒廓清指数K、半数溶血值HC50,观察对机体免疫功能的影响。结果:肠安颗粒可升高脾虚小鼠的脾指数,减少3 h内的死亡数,对脾虚模型有一定的治疗复健作用;可明显提高小鼠的碳粒廓清率和半数溶血值,与对照组比较,差异显著(P<0.05)。结论肠安颗粒对脾虚有一定的治疗作用,可促进单核巨噬细胞吞噬功能,增强体液免疫。     

益气补肾活血方对佐剂关节炎大鼠OPG和RANKL的影响

目的:采用佐剂关节炎(AA)大鼠模型,探讨益气补肾活血方治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:以雷公藤多苷作对照,通过对大鼠的体重和关节肿胀指数进行观察及检测益气补肾活血方对骨保护素(OPG)和核因子кB受体活化因子配体(RANKL)水平的影响。结果:益气补肾活血方能显著减轻大鼠关节肿胀指数,能明显提高AA大鼠细胞因子OPG的水平,同时抑制RANKL的水平。结论:提示益气补肾活血方可通过抑制与骨破坏密切相关的细胞因子RANKL的水平,提高OPG的水平,具有双向免疫调节作用,具有明显的骨保护作用,可能是该方治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

全蝎、蜈蚣对胶原诱导型关节炎大鼠肠黏膜免疫状态的调节作用

目的:观察全蝎、蜈蚣对胶原蛋白诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠肠黏膜免疫状态的调节作用。方法:Wistar大白鼠60只,随机分成6组,即正常组,模型组,全蝎蜈蚣高,中,低剂量组,Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CII)组。采用Ⅱ型胶原蛋白诱导法复制大鼠关节炎模型,并ig给予全蝎蜈蚣混悬液(0.4,0.2,0.1 g.kg-1)进行干预,CII组予CII蛋白冻干粉60μg.kg-1 ig进行对照,共计40 d。采用流式细胞术分别检测大鼠肠道派伊尔(peyer’s patches,PP)结淋巴细胞亚群水平,采用酶联免疫吸附试验法检测小肠组织匀浆转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、分泌型免疫球蛋白(secreted immunoglobulin,sIgA)的表达水平。结果:与模型组比较,各治疗组均可明显下调CD4+,CD8+ T细胞水平,升高CD4/CD8水平,并具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。同时,除中剂量组外,其他各治疗组小肠组织匀浆sIgA水平均明显上升(P<0.01),至于TGF-β1,则仅中剂量组和CII组小肠组织匀浆中TGF-β表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:全蝎、蜈蚣调节胶原免疫性关节炎黏膜免疫的作用可能通过调节小肠黏膜局部PP结T淋巴细胞亚群平衡,降低肠黏膜TGF-β1和升高sIgA表达水平来实现的。     

健脾合剂对脾虚型溃疡性结肠炎患者的免疫干预机制研究

目的:研究健脾合剂如何对脾虚型溃疡型结肠炎(UC)进行免疫干预。方法:选取健脾合剂治疗组100例及健康对照组100例。健脾合剂(党参、白术、山楂、陈皮、麦芽等)由本院中药制剂室协助配制,一剂煎3袋,各150 mL。每天分3次温服,日1剂。均为20天1个疗程,服药2个疗程复查免疫指标。结果:UC患者治疗前的CD+4细胞与对照组相比无显著性差异,而CD+3和CD+8较对照组显著减少:经治疗临床症状缓解后,其CD+4细胞数回落(与治疗前比较,P>0.05),CD+3和CD+8细胞数回升(与治疗前比较,P<0.05和P<0.05)。UC患者治疗前的CD+4/CD+8比值较对照组显著升高(P<0.05),经治疗后回落(与治疗前比较,P<0.05)。两个疗程间总有效率未见显著性差异。结论:健脾合剂对溃疡性结肠炎有显著的免疫调节作用,且主要提高了Ts细胞,从而缓解自身免疫及变态反应所致的系列临床症状。     

新痹痛灵对胶原诱导性关节炎大鼠及其滑膜组织中HMGB1 mRNA表达的影响

目的:观察新痹痛灵对胶原诱导性关节炎大鼠及其滑膜组织中HMGB1 mRNA的影响。方法:新痹痛灵方中饮片经相关工艺提取后制为浸膏;将SD大鼠72只随机分出12只为正常组,其余进行胶原诱导性关节炎(CIA)造模,再将造模大鼠随机分为模型组,新痹痛灵高、中、低剂量组(3.2,1.6,0.8 g·kg-1·d-1)以及雷公藤多苷片组(0.008 g·kg-1·d-1),各组大鼠于二次免疫后当天开始ig给药,连续给药21 d。容积法测量大鼠关节体积,病理切片观察,RT-q PCR检测滑膜组织HMGB1mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀明显(P0.01),滑膜组织HMGB1 mRNA的表达明显增加(P0.01);与模型组比较,新痹痛灵高剂量组的关节肿胀于14,21 d明显减轻(P0.05,P0.01),且滑膜组织HMGB1 mRNA的表达明显降低(P0.01)。关节病理切片显示新痹痛灵各剂量组及雷公藤多苷片组病变较模型组均有不同程度减轻。结论:新痹痛灵可减轻CIA大鼠关节肿胀、降低滑膜组织中HMGB1 mRNA的表达,通过抑制HMGB1而减少相关炎症通路的激活可能是新痹痛灵治疗类风湿关节炎的机制之一。     

胡蜂毒提取物对胶原诱导性类风湿性关节炎大鼠的作用研究

目的建立胶原诱导性类风湿关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型来探讨胡蜂毒提取物对大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(注射用蜂毒冻干粉,1.25 mg·kg^-1)和胡蜂毒提取物低、中、高剂量(0.125、0.25、0.5 mg·kg^-1)组,除正常组外,其余各组采用多点注射鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂的方法来诱导大鼠RA模型,每7 d一次,共14 d。造模结束后,各给药组于足趾皮下注射对应剂量的药物,连续给药14 d。分别于造模前、造模第14天和给药第14天测量大鼠踝关节直径和周长,并进行AI评分;观察大鼠脏器指数和踝关节组织HE染色的变化;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中相关炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、前列腺素(PG)E-2、环氧化酶(COX)-2和类风湿因子免疫球蛋白(Ig)G、Ig A、Ig M的含量变化;利用流式细胞术检测大鼠脾脏T细胞亚群的变化。结果与模型组比较,胡蜂毒提取物对CIΑ大鼠的关节肿胀(直径及周长)抑制效果显著(P<0.01),能明显降低其AI评分(P<0.01或P<0.05),能不同程度恢复大鼠的脏器指数(P<0.01或P<0.05),改善踝关节组织病理学结构病变,降低大鼠血清中各炎症因子和类风湿因子的表达(P<0.01或P<0.05),调节和改善T细胞亚群比例的紊乱(P<0.01或P<0.05)。结论胡蜂毒提取物对CIA大鼠具有较好的治疗作用,这与其对炎症细胞因子网络的调控和对免疫的调节有关系。