hOGG1基因低表达对氢醌的细胞毒性及遗传毒性的影响

目的 探讨hOGG1基因低表达对氢醌(HQ)的细胞毒性及遗传毒性的影响.方法 0、5、10、20、40、80μmol/L浓度的(HQ)染毒A549细胞和hOGG1基因低表达的A549-R细胞,噻唑蓝比色法检测2种细胞存活率,荧光法测定2种细胞内活性氧(ROS)含量,微核试验分析2种细胞染色体损伤,彗星试验观察细胞的DNA损伤和修复.结果 随着HQ染毒浓度的增加,2种细胞的存活率均下降,A549-R细胞和A549细胞IC50分别为160.49和228.42 μmol/L,且差异有统计学意义(P＜0.05).0、5、10、20、40、80 μmol/L HQ染毒组A549-R细胞ROS含量、微核率均明显高于A549细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);各浓度HQ染毒组A549-R细胞拖尾率和Olive尾距(OTM)值均明显大于A549细胞,并有剂量-反应关系,差异有统计学意义(P＜0.05).hOGG1基因低表达的A549-R细胞比A549细胞对HQ引起的DNA损伤修复更慢,修复2.0 h后才出现拖尾率和OTM值的明显降低,3.0 h后仍未完全修复.结论 氧化损伤可能是HQ毒作用的机制之一,hOGG1基因低表达可增加A549-R细胞对HQ的敏感性.     

汽车尾气提取物对hOGG1低表达细胞的氧化损伤作用

[目的]研究汽车尾气提取物对DNA碱基切除修复基因hOGG1低表达细胞的氧化损伤作用,为揭示汽车尾气提取物通过氧化损伤导致肺癌的发病机制提供更有力的证据。[方法]以肺腺癌A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而使hOGG1低表达的A549-R细胞为研究对象,用MTT试验铡定汽车尾气提取物处理后两种细胞的生存能力;彗星试验检测两种细胞DNA损伤与修复的差异;并通过测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,比较两种细胞抗氧化水平。[结果]A549-R细胞的IC50显著低于A549细胞(P<0．05);汽车尾气提取物作用下两种细胞均有不同程度DNA损伤,A549-R细胞的拖尾率和DNA迁移长度显著大于A549细胞(P<0．05);损伤后A549细胞修复发生较A549-R快,与A549细胞相比A549-R细胞更不易修复;汽车尾气提取物作用下两种细胞内SOD及GSH-Px活性均下降,A549-R细胞的抗氧化水平较A549细胞更低。[结论]hOGG1低表达使肺腺癌细胞:DNA修复能力降低,从而使其对汽车尾气提取物的敏感性增强,汽车尾气提取物可能通过氧化损伤途径导致肺癌的发生。     

氢醌对A549细胞人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氢醌(hydroquinone,HQ)对人肺腺癌A549细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)、脂质过氧化损伤产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-oxo-guanine DNA glyeoslase,hOGG1)基因mRNA表达的影响,探讨HQ毒作用的分子机制.方法 不同浓度HQ作用于A549细胞,噻唑兰(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,荧光探针检测细胞内ROS的变化,比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,逆转录聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析hOGG1基因mRNA的表达.结果 随着HQ浓度的增加,各实验结果为:(1)A549细胞的吸光度值(A值)下降,160 μmol/L和320 μmoL/L浓度组[(0.584±0.098)、(0.328±0.066)]与对照组(0.989±0.150)相比差异有统计学意义(q值分别为5.56、9.07,P值均<0.05),且两组细胞存活率均低于80%;(2)A549细胞内ROS生成增多,40 μmol/L和80 μmoL/L浓度组A值[(39.80±4.15)、(101.99μ9.45)]与对照组(5.71±0.50)相比差异有统计学意义(q值分别为10.74、30.32,P值均<0.05);(3)SOD、GSH-Px活性下降,活性值在80 μmol/L时[(22.93±0.56)U/mg prot、(25.60±2.31)U/mg prot]均低于对照组[(25.62±0.28)U/mg prot、(38.97±2.61)U/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为12.17、8.78,P值均<0.05);MDA含量升高,在40 μmol/L和80 μmol/L[(1.07±0.01)nmol/mg prot、(1.19±0.08)nmol/mg plot]时高于对照组[(0.77±0.04)nmol/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为10.90、15.49,P值均<0.05);SOD(r=-0.95,F=20.00,P=0.04)与GSH-Px(r=-0.99,F=115.48,P=0.01)活力的下降和MDA(r=0.96,F=21.31,P=0.04)含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系;(4)RT-PCR结果显示:HQ作用后,A549细胞hOGG1 mRNA的表达呈下降趋势,80 μmoL/L浓度组hOGG1 mRNA的表达(0.478±0.017)与对照组(0.715±0.038)相比降低较明显(q=11.70,P<0.05).结论 HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降,提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制.     

hOGG1基因在Cr(Ⅵ)诱导线粒体DNA氧化损伤中的作用

目的探讨hOGG1基因在Cr(Ⅵ)诱导线粒体DNA氧化损伤中的修复作用。方法取不同浓度的Cr(Ⅵ)(0、2、8和32μmol/L)处理L-02肝细胞24h,分别测定细胞内活性氧簇(ROS)与hOGG1 mRNA表达水平和线粒体内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)与hOGG1基因表达的人类8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶蛋白(hOGG1蛋白)水平。结果 8μmol/L和32μmol/L剂量组与对照组比较,细胞内ROS平均水平及线粒体内8-OhdG平均水平均明显增加(P<0.05),而hOGG1基因mRNA水平和线粒体内hOGG1蛋白水平,与对照组比较,2μmol/L剂量组两者水平均上升(P<0.05),32μmol/L剂量组两者水平均降低(P<0.05)。结论 Cr(Ⅵ)可诱导细胞内ROS水平增加,引起线粒体DNA氧化损伤,而hOGG1基因表达水平的改变,影响了线粒体DNA的修复能力。hOGG1基因在Cr(Ⅵ)诱导线粒体DNA氧化损伤中起到了重要的作用。     

香烟烟雾对2种肺细胞的DNA损伤与修复

目的探讨经香烟烟雾溶液染毒的人正常肺间质细胞和人肺腺癌细胞的DNA损伤及其修复效应.方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF)和人肺腺癌A549细胞,以二甲基亚砜(DMSO)和磷酸缓冲液(PBS)作为吸收液,采集香烟主流烟雾.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定香烟烟雾-DMSO吸收液和香烟烟雾-PBS吸收液(分别简称DMSO烟液和PBS烟液)的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的毒性(分别以DMSO和PBS为阴性对照),以无明显细胞毒性的浓度进行彗星实验(分别以DMSO和PBS为阴性对照,以重铬酸钾为阳性对照),测定细胞的DNA损伤及修复情况.结果DMSO烟液原液及其1/2稀释液染毒的细胞存活率低于80%,而PBS烟液染毒的细胞存活率均高于80%.DMSO烟液的1/4、1/8、1/16倍稀释液以及PBS烟液的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤与阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.01),且存在明显的剂量-效应关系.DNA损伤在两种细胞间差异无统计学意义(P＞0.05),但DMSO烟液所致的DNA损伤高于PBS烟液(P＜0.01).细胞在去除受试物后培养30 min时开始修复,随着修复时间的延长,拖尾细胞数减少,DNA迁移长度缩短(P＜0.05),且A549细胞修复得更快(P＜0.05).结论DMSO烟液的细胞毒性和遗传毒性均高于PBS烟液.香烟烟雾对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤差异不明显,A549细胞的DNA损伤修复能力较HLF细胞强.     

铬盐与香烟烟雾溶液对A549细胞毒性和DNA断裂的影响

目的研究重铬酸钾和香烟烟雾溶液(CSS)对A549细胞的细胞毒性和DNA损伤的联合作用。方法应用四甲基偶氮唑盐法和单细胞凝胶电泳法检测了重铬酸钾和CSS联合处理对A549细胞的细胞毒性以及DNA链的断裂损伤。结果低浓度重铬酸钾(0．2-0．6μmol／L)与高浓度CSS(10支／L)联合作用促进了细胞的增殖，高浓度重铬酸钾(5．4—16．2μmol／L)与高浓度CSS联合作用表现为明显的细胞毒性。重铬酸钾(0．2、0．6和1．8μmol／L)或CSS(0．1、0．2、0．5支／L)单独处理均可诱导DNA断裂，存在一定的剂量-反应关系。在重铬酸钾的0．6μmol／L时．随CSS(0．1、0．2、0．5支／L)浓度的升高，A549细胞DNA链断裂程度逐渐增加。结论重铬酸钾和CSS对A549细胞均有细胞毒性和DNA损伤作用。重铬酸钾和CSS联合处理诱导A549细胞DNA链断裂，并显著高于两者单独处理引起的DNA链断裂作用。     

不同粒径SiO2致A549细胞毒性及氧化损伤作用实验研究

目的探讨纳米SiO2及纳米/微米复合SiO2颗粒对A549细胞的毒性效应及氧化损伤作用。方法将纳米、微米、纳米/微米复合SiO2按照不同作用浓度(0、3.13、6.25、12.5、25.0、50.0、100、200μg/ml),对A549细胞进行染毒作用24h后,采用CCK-8法测定A549细胞的抑制率,DCFH-DA荧光染色法标记检测细胞活性氧(ROS)水平,微量酶标法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果与阴性对照组比较,纳米、微米、纳米/微米复合组细胞抑制率均升高(P<0.05);且纳米/微米复合组始终高于纳米组及微米组。低浓度时微米SiO2对细胞抑制率高于纳米SiO2。随着浓度的增加,纳米组高于微米组(P<0.05)。各暴露组ROS水平则呈剂量-效应关系。同浓度纳米SiO2组高于微米SiO2组,且纳米/微米复合SiO2组高于同浓度纳米组及微米组。与阴性对照组比较,染毒组LDH水平升高,存在剂量-效应关系。同浓度纳米组高于微米组,纳米/微米复合组高于纳米组及微米组(P<0.05)。结论不同粒径SiO2均可引起A549细胞抑制率升高、ROS水平升高和细胞膜损伤。且纳米/微米复合SiO2组强于纳米组及微米组,同浓度纳米SiO2组高于微米组,说明粒径越小,对细胞损伤越大,而氧化损伤可能是纳米SiO2致细胞凋亡的一个途径。     

PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞氧化应激和8-羟基脱氧鸟苷含量的影响

目的探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞氧化应激及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的影响。方法设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/LPBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/LPCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h。用荧光染料DCFH-DA标记法和高效液相色谱-电化学技术(HPLC-ECD)分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和8-OHdG的含量。结果随着染毒剂量的增加,PBDE-47单独染毒组ROS水平有逐渐增高的趋势,但与对照组及其相应的PCB153联合组相比,ROS水平无明显差异(P>0.05)。中、高联合染毒组ROS水平与对照组相比显著增加(P<0.05),并显著高于相应的单独剂量染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后细胞内ROS水平明显下降(P<0.05),细胞内ROS水平与PBDE-47染毒剂量呈现剂量-效应关系;高剂量PBDE-47单独染毒组和中、高剂量联合染毒组8-OHdG的含量与对照组相比均有明显的增加(P<0.05),高剂量联合染毒组8-OHdG含量明显高于相应的单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞内8-OHdG含量明显下降(P<0.05)。细胞内ROS水平与8-OHdG含量呈正相关关系(r=0.895)。结论一定剂量的PBDE-47可致DNA氧化损伤,PCB153可增加PBDE-47对SH-SY5Y细胞DNA的氧化损伤作用,提示活性氧在PBDE-47致DNA损伤方面发挥了重要作用。     

硒和砷对HepG2细胞氧化应激和DNA氧化损伤及修复的作用

目的研究硒和砷单独及联合作用对HepG2细胞氧化应激和DNA氧化损伤及修复的影响。方法采用不同浓度的硒(2.5、5.0和10.0μmol/L亚硒酸钠)和砷(1.56、3.13、6.25、12.5和25.0μmol/L亚砷酸)为受试物单独或联合处理HepG2细胞。荧光法测定丙二醛(MDA)作为氧化应激的指标,高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-EC)测定8-羟基鸟苷(8-OHdG)作为DNA氧化损伤的指标,Western Blot检测hOGG1表达作为DNA氧化损伤修复的指标。结果在硒和砷单独作用的条件下,可观察到:(1)5.0、10.0μmol/L的亚硒酸钠和6.25、12.5、25.0μmol/L的亚砷酸均引起HepG2细胞MDA含量增加、8-OHdG生成增多、hOGG1表达明显下降(P<0.05,P<0.01);(2)较低浓度的亚硒酸钠(2.5μmol/L)具有有限的抑制8-OHdG生成的作用(P>0.05)。在硒和砷联合作用的条件下,可观察到:(1)2.5μmol/L的亚硒酸钠和6.25μmol/L的亚砷酸同时染毒使MDA含量和8-OHdG的生成均较相应砷剂量组下降(P<0.05);(2)2.5μmol/L的亚硒酸钠与6.25、12.5和25.0μmol/L的亚砷酸同时染毒,hOGG1表达与相应砷剂量组比较没有明显差异(P>0.05)。结论5.0、10.0μmol/L的亚硒酸钠和6.25、12.5、25.0μmol/L的亚砷酸均可引起HepG2细胞氧化应激增强、8-OHdG生成增多、hOGG1表达明显下降;一定剂量的硒(2.5μmol/L的亚硒酸钠)对砷诱导的HepG2细胞氧化应激和DNA氧化损伤具有抑制作用,但对砷所致的DNA氧化损伤修复不产生明显影响。     

纳米银颗粒对人HepG2和A549细胞的氧化损伤效应研究

目的探讨纳米银颗粒对人HepG2和A549细胞的氧化损伤效应。方法采用稳定转染了HSPA1A启动子荧光素酶报告基因质粒的HepG2和A549细胞株(HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞)作为细胞株,用不同浓度(6.25、12.5、25、50μg/ml)的纳米银混悬液染毒细胞48h,分别测定细胞存活率、荧光素酶活力、丙二醛(MDA)浓度和细胞内银浓度。结果HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A染毒组的细胞存活率均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);染毒浓度为50μg/ml时,细胞存活率分别为对照组的25.26%和12.30%。纳米银颗粒可明显诱导HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞内荧光素酶的表达,各染毒组酶活力均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);HepG2/HSPA1A细胞内荧光素酶活力高于A549/HSPA1A细胞,前者在最高染毒浓度(50μg/ml)时的酶活力为对照组的138.2倍。仅在最高染毒浓度(50μg/ml)时,HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞MDA浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。细胞内银浓度随纳米银浓度的增加而升高,有明显的剂量-效应关系,且HepG2/HSPA1A细胞内银浓度略高于A549/HSPA1A细胞。结论纳米银颗粒可直接进入细胞并诱导细胞氧化损伤;HepG2/HSPA1A和A549/HSPA1A细胞荧光素酶活力所反映的HSPA1A启动子转录活力可用于快速评估纳米银颗粒所致细胞氧化损伤水平。     

纳米与常规二氧化钛对A549细胞毒性及DNA损伤的比较

[目的]比较纳米二氧化钛（nano-TiO2）和常规TiO2对细胞的毒性及DNA损伤有无差异。[方法]体外培养人肺腺癌细胞（A549细胞）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）和单细胞凝胶电泳技术（彗星实验）比较25、50、100、200μg／mL质量浓度（以下简称“浓度”）的nano-TiO2（5-10nm）和常规TiO2的细胞毒性与DNA损伤作用。[结果]nano-TiO2对A549细胞的毒性与常规TiO2的变化趋势相近,nano-TiO2毒性大于常规TiO2,200gg／mL浓度时作用12h以上两者细胞存活率的差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组相比,nano-TiO2各剂量组尾DNA含量、Olive尾距、彗星尾长均明显增加（P〈0．05）;常规TiO2在受试剂量下尾DNA含量、Olive尾距、彗星尾长与对照组比较均无明显增加。[结论]nano-TiO2对A549细胞的毒性高于常规TiO2,且nano-TiO2可诱导DNA损伤,而常规TiO2未观察到DNA损伤作用。表明nano-TiO2与常规TiO2在毒性大小和毒作用性质均有差异。     

顺铂对A549细胞DNA修复酶MGMT和DNA-PKcs表达的影响

[目的]探讨在DNA损伤剂顺铂作用下，A549细胞内DNA修复基因六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)和DNA依赖的蛋白激酶复合物催化亚单位(DNA-PKcs)的表达变化。[方法]MTT法分析顺铂对A549细胞生存力的影响；彗星实验研究顺铂对DNA损伤的程度；RT-PCR分析不同顺铂作用时问修复酶mRNA水平的变化。[结果]顺铂对A549细胞的生长有明显的抑制作用，且为剂量依赖性。低浓度(IC20剂量)顺铂作用下，DNA损伤程度的变化与作用时间成正比，且伴随MGMT和DNA-PKcs的表达上升。停止作用后，DNA损伤程度减轻，修复基因的表达也逐渐恢复至正常水平。[结论]短期顺铂染毒所导致的急性DNA损伤对MGMT和DNA-PKcs的表达有明显的正性诱导作用。     

甲醇和汽油汽车尾气对A549细胞株细胞毒性及增殖和凋亡功能的影响

目的:比较甲醇燃料汽车尾气和汽油燃料汽车尾气对A549细胞株的细胞毒性及增殖和凋亡功能的影响。方法:1)MTT比色法检测受试物细胞毒性。2)受试物体外培养实验:汽油组剂量分组为:0·125L/ml,0·0625L/ml,0·03125L/ml,0·0156L/ml,0·0078L/ml和一个空白对照;甲醇组剂量分组与汽油相同。A·细胞培养介质乳酸脱氢酶活性的测定;B·细胞形态学观察;C·流式细胞术a·检测细胞周期并计算细胞增殖指数;b·观察细胞亚二倍体峰的变化,计算凋亡百分比;结果:1)MTT比色法汽油组在0·125L/ml剂量组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05);甲醇组在1·0L/ml剂量组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05);2)受试物体外培养实验:A·细胞培养介质乳酸脱氢酶活性的测定:汽油组在0·0625~0·125L/ml各剂量组LDH值与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05),同等剂量下甲醇组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0·05);B·细胞形态学观察:汽油组在0·125L/ml,可见大量死亡细胞和凋亡细胞数增加,相同剂量甲醇组未见明显改变;C·流式细胞术:仅汽油组0·0156,0·03125L/ml、0·0625L/ml剂量组细胞增殖指数显著低于对照组(P<0·05),汽油组和甲醇组在0·0156~0·0625L/ml剂量组凋亡百分比均高于对照组,但后者作用更强。结论:在同等剂量下,汽油燃料尾气对A549细胞株的毒性及对细胞增殖的抑制明显高于甲醇,但甲醇诱导A549细胞凋亡的作用略强。     

姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 探究姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法 使用不同浓度的H2O2对A549细胞进行不同时长的刺激,使用CCK-8法筛选A549细胞存活率约为50%时的H2O2浓度及刺激时间作为建模条件;通过Hoechst 33258染色及Western blot对模型进行验证;实验分为模型组（Model）、VC组（VC）和姜黄素组（CCM）;采用流式细胞术对细胞凋亡情况进行检测,采用Western blot法对凋亡及氧化应激信号通路相关蛋白进行检测。结果 CCK-8实验结果显示,采用600μmol/L的H2O2对A549细胞进行24h刺激,其存活率为56.45±5.33%,Hoechst 33258染色及Western blot结果证实了模型的可靠性。流式细胞术结果显示,VC组和CCM组细胞的凋亡率与Model组相比均降低（P＜0.05,P＜0.01）,且CCM组降低更加明显（P＜0.01）。Western blot结果显示,与Model组相比,VC组和CCM组Bax、Caspase-3和Keap1表达降低,Bcl-2和Nrf2表达升高,且CCM组较VC组改变更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 姜黄素对H2O2诱导的A549细胞急性损伤具有保护作用,可能与其激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,抑制细胞凋亡有关。     

玉米紫色植株色素体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的初步研究

[目的]研究玉米紫色植株色素(PMPP)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。[方法]MTT法比较不同浓度的PMPP对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,同时应用倒置显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。[结果]不同浓度PMPP溶液对A549细胞的增殖均有抑制作用,浓度为50mg/ml时的抑制率最大,约为85.35%。形态学表现为单位视野内细胞数量明显减少,细胞间隙增大,细胞体积明显缩小,细胞失去原有的形态,胞体皱缩变圆,出现膜发泡现象。流式细胞术结果表明,当PMPP浓度为40mg/ml时,处于S期的肿瘤细胞增多,凋亡率为41.52%。[结论]玉米紫色植株色素可通过诱导部分细胞凋亡抑制人肺腺癌A549细胞增殖。     

香烟烟雾对雄性小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究

分别以二甲基亚砜 (DMSO)和磷酸缓冲液 (PBS)作为吸收液 ,用大气收集器 (U形多孔玻板吸收管 )采集香烟主流烟雾 ,制得 DMSO烟雾溶液和 PBS烟雾溶液。用彗星试验检测了这 2种烟雾溶液对小鼠睾丸细胞的 DNA损伤作用。结果显示 :2种烟雾溶液均含有 DNA损伤剂 ,可引起小鼠睾丸细胞的 DNA损伤 ,且 DMSO烟雾溶液的细胞毒性和遗传毒性均明显高于 PBS烟雾溶液。该研究为香烟的雄性生殖毒性评价提供了理论依据 ,同时也为香烟的研究提供了更为方便的手段。