转染血红素氧合酶-1基因减轻大鼠脂肪肝移植后的缺血再灌注损伤

目的 探讨转染血红素氧合酶-1(HO-1)基因对大鼠脂肪肝移植后缺血再灌注损伤的影响.方法 利用分子生物学方法构建携带有HO-1基因的重组腺病毒(Ad5-HO-1),于供肝切取前48 h经阴茎背静脉将Ad5-HO-1注入供者体内,供肝置于4℃HTK液保存2 h,然后移植.对照组接受正常肝移植;轻度对照组接受轻度脂肪肝移植;轻度实验组接受注射Ad5～HO-1的轻度脂肪肝移植;重度对照组接受重度脂肪肝移植;重度实验组接受注射Ad5-HO-1的重度脂肪肝移植.术后观察各组大鼠的存活率及肝功能;观察移植肝组织的病理变化;测定移植肝组织中HO-1的活性以及HO-1、Bcl-2、锌指蛋白A20、凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.结果 与重度对照组相比较,重度实验组的丙氨酸转氨酶水平显著下降(P＜0.05).轻度实验组和重度实验组的HO-1活性分别高于各自的对照组(P＜0.05).重度实验组移植肝组织中HO-1、Bcl-2及锌指蛋白A20的表达水平明显高于重度对照组(P＜0.05),而Caspase-3的表达是降低的(P＜0.05).重度实验组的1、7、21 d存活率分别为66.7%(4/6)、50%(3/6)和50%(3/6),而重度对照组的1、7、21 d存活率分别为33.3%(2/6)、16.7%(1/6)和16.7%(1/6),二者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染血HO-1基因可减轻大鼠脂肪肝移植后的缺血再灌注损伤.     

纤维连接蛋白连接片段-1肽段减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤

目的 探讨纤维连接蛋白连接片段-1(CS1)肽段对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的影响及其机制.方法 用Wistar大鼠作为供、受鼠,制作肝移植模型.CS1组供鼠分别于术前3d、取肝时和移植前注射CS1肽段,供肝获取后于UW液中保存18h,肝移植术后3d每天注射CS1肽段;对照组用随机肽段替代CS1,其他操作同CS1组.术后6、24、72 h检测受鼠血清转氨酶水平和肝组织病理改变.免疫组织化学染色显示肝脏中的炎症细胞和肝窦内皮细胞.多聚酶链反应检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA的表达水平.结果 术后24 h,对照组坏死肝组织面积约占总面积的(25.7±5.4)％,而CS1组为(12.6±3.6)％(P＜0.05).对照组血清转氨酶水平也低于对照组(P＜0.05).术后CS1组移植肝中枯否细胞和中性粒细胞数目均少于对照组(P＜0.05).两组冷缺血18h的供肝中,肝窦内皮细胞均失去正常形态,仅少数内皮细胞特异性标志物阳性.术后72 h,CS1组肝窦内皮细胞基本恢复正常形态,SE-1表达恢复,而对照组肝窦内皮细胞恢复欠佳.术后6和24 h时,CS1组肝组织中TNF-α mRNA的水平低于对照组(P＜0.0)5);术后24 h时,对照组VEGF mRNA的表达高于CS1组(P＜0.05);两组IL-1βmRNA水平的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 用CS1肽段处理供、受鼠可以减少炎症因子mRNA的表达,保护肝窦内皮细胞,减轻移植肝缺血再灌注损伤.     

受体血清“封闭”供肝预防异种肝移植超急性排斥反应

目的 探讨受体血清“封闭”供肝对异种肝移植超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)的预防作用.方法 取豚鼠和SD大鼠各20只,分别作为供体和受体,供受体随机配对;移植前采集受体大鼠近交系其他个体血清,45℃水浴灭活补体备用;实验组(n=10)术前用0.1％受体血清(recipient serum,RS)的Ringer液“封闭”供肝,对照组(n=10)仅用Ringer液灌洗供肝;采用改良“双套管法”行豚鼠、SD大鼠原位肝移植,观察供肝植入后形态学改变、受体存活时间、术后1h存活率,HE染色法检测移植肝微血栓、出血和肝细胞水肿等病理损害积分;检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)评价肝功能.结果 两组大鼠供体异种肝移植时间和无肝期比较,差异无统计学意义(P＞0.05);对照组受体大鼠供肝充盈缓慢,灌注不均,实验组供肝充盈迅速,灌注较均匀;实验组受体大鼠术后存活时间和术后1h存活率较对照组均明显增加(P＜0.01),移植肝微血栓、间质出血(积分)较对照组明显减轻(P＜0.01),肝细胞水肿无明显差异(P＞0.05);血清丙氨酸转氨酶(ALT)较对照组明显下降(P＜0.05).结论 受体血清“封闭”供肝对异种肝移植HAR具有一定的抑制作用,是预防器官移植HAR的潜在方法之一.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠小肠缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞( BMSC)移植对其小肠缺血再灌注损伤的影响.方法 获取健康Wistar大鼠骨髓,体外提取、培养BMSC,收获传代培养的第3代细胞并鉴定其表型.在健康Wistar大鼠肠黏膜下注射皮肤黑色素瘤细胞,并用底物荧光素法示踪细胞.另外制作Wistar大鼠肠道缺血再灌注模型,将模型大鼠分为2组:实验组大鼠在肠黏膜下注射BMSC悬液1 ml(含5×106个细胞);对照组大鼠在肠黏膜下注射等量生理盐水.分别于术后0、2、6、24、72和120h处死大鼠,留取血清和小肠组织样本.采用酶联免疫吸附试验检测血清二胺氧化酶( DAO)、D-乳酸和肿瘤坏死因子α(TNF-α),用光镜和透射电镜观察肠组织,蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测紧密连接蛋白-1(ZO-1).结果 体外成功分离培养出BMSC.经肠黏膜移植后的皮肤黑色素瘤细胞定植在肠道.实验组大鼠小肠病理改变较对照组轻,小肠黏膜屏障更完好.术后6h实验组DAO为(11.36±1.89) IU/ml,对照组为(14.27±2.09) IU/ml(P＜0.05);24 h时实验组DAO为(5.04±1.04)IU/ml,对照组为(7.35±1.46) IU/ml(P＜0.05).术后6 h实验组D-乳酸为(1.57±0.25) mmol/L,对照组为(1.93±0.19)mmol/L(P＜0.05);术后24 h实验组D-乳酸为(1.09±0.13)mmol/L,对照组为(1.41±0.07) mmol/L(P＜0.01).术后6h实验组TNF-α为(266.09±8.84)ng/L,对照组为(286.81±11.54) ng/L (P＜0.01);术后24 h实验组TNF-α为(190.39±4.24) ng/L,对照组为(218.49±15.51 )ng/L(P＜0.01).实验组ZO-1的表达高于对照组.结论 肠黏膜下移植BMSC可以减轻小肠缺血再灌注损伤.     

联合应用厄贝沙坦和依达拉奉对大鼠小体积移植肝的保护作用

目的 探讨联合使用厄贝沙坦和依达拉奉在大鼠小体积供肝移植早期中对移植肝的保护作用及机制.方法 取体重相差20～30g的150对SD大鼠作为肝移植供、受者,其中小体重大鼠作为供者.按随机数字表法将大鼠分为移植对照组(A组)、依达拉奉实验组(B组)、厄贝沙坦实验组(C组)、厄贝沙坦联合依达拉奉实验组(D组)及假手术对照组(E组).采用大鼠30％部分肝移植模型,按二袖套法进行大鼠原位肝移植.术后观察各组受鼠的存活情况,监测门静脉压和肝功能变化,术后6和24 h,检测移植肝组织内SOD活性及MDA含量,采用逆转录实时聚合酶链反应检测移植肝组织Egr-1 mRNA、ET-1 mRNA及Bax mRNA的表达,采用原位末端转移酶标记法检测移植肝细胞的凋亡情况.结果 术后7d,A、B、C、D及E组累积存活率分别为8.33 (1/12),33.3％(4/12),58.7％ (7/12),83.3％ (10/12)和100％(12/12),各组间差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,各实验组门静脉压的变化,术后6和24 h的ALT和AST水平,MDA含量和SOD活性,Egr-1 mRNA、ET-1 mRNA及Bax mRNA的相对表达量,以及肝细胞凋亡指数等指标的检测结果均较优,尤以D组最为显著,各组间上述指标的两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 联合使用厄贝沙坦和依达拉奉可通过降低门静脉压和抗氧化作用(减轻移植肝缺血再灌注损伤)的双重保护作用减轻大鼠小体积肝移植术后早期移植肝的损伤,且联合用药效果好于单用其中一种药物.     

经典原位肝移植术中逆灌注法对移植肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨经典原位肝移植术中逆灌注法对移植肝缺血再灌注损伤的影响.方法 35例经典原位肝移植患者随机分为试验组和对照组.试验组17例,采用经下腔静脉逆灌注法,在吻合门静脉前先开放下腔静脉,然后再吻合门静脉、肝静脉;对照组18例,采用常规经门静脉正向灌注法,先开放门静脉,再开放下腔静脉,然后吻合肝动脉.分别测定两组的以下指标:复温缺血时间(RWIT);移植术后1h及术后1、2、3、5、7天血清丙氨酸转氨酶(ALT)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT);无肝期结束后2h下腔静脉血中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的浓度;无肝期结束后3h取肝组织活检行光镜检查,高倍镜下计算肝细胞水变性及坏死细胞百分比.结果 试验组的RWIT显著短于对照组(P＜0.05);术后1小时,术后1、2天试验组TB显著低于对照组(P＜0.05),术后3、5、7天两组无差异(P＞0.05);术后1、2天试验组ALT显著低于对照组(P＜0.05),术后1h、术后3、5、7天两组无差异(P＞0.05);术后1h,术后1、3天试验组GGT显著低于对照组(P＜0.05),术后2、5、7天两组无差异(P＞0.05);两组PT术后无差异(P＞0.05);无肝期结束后2h,试验组下腔静脉血中TNF-α,IL-l的浓度显著低于对照组(P＜0.05);病理组织学检查显示试验组肝细胞缺血再灌注损伤较对照组轻;无肝期结束后3h,试验组肝细胞水变性及坏死细胞百分比显著低于对照组(P＜0.05).结论 经典原位肝移植术中逆灌注法可减轻移植肝缺血再灌注损伤,改善移植肝早期肝功能.     

供体热缺血时间对移植肝的影响

目的 探讨大鼠动脉化原位肝移植中供体热缺血时间对移植肝的影响.方法 实验分为4组:对照组(C)和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组:热缺血0 min(W0)、热缺血15 min(W15)和热缺血30 min(W30),其后建立近交系大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3、7、14和30 d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、肝功能的变化.此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率(＞100 d).结果 随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,恢复过程延长.移植组和对照组术后3、7、14和30 d血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化无显著性差异.血清碱性磷酸酶(ALP)随着供肝热缺血时间的延长逐渐增高,14 d达到高峰后逐渐下降.术后3、7、14和30 d ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性.术后热缺血0、15、30 min长期生存率组分别为100.0%(6/6)、83.3%(5/6)、66.7%(4/6),3组间比较差异无统计学意义(P=0.285).结论 肝移植过程中供肝热缺血主要损伤肝细胞,并随着供肝热缺血时间的延长移植肝细胞损伤加重,肝细胞功能恢复早于其形态学恢复.肝移植术后早期存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度,胆汁淤积的恢复明显晚于肝细胞损伤指标的恢复.在热缺血30 min内来自于心脏停搏的供肝肝移植术后是安全的.     

麦角新碱预处理对减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨使用外源性药物麦角新碱预处理对减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用.方法 在大鼠的门静脉-左肾静脉搭桥、肝后下腔静脉内置管分流法自体原位肝移植模型中,于肝门阻断前10 min经大鼠尾静脉注射麦角新碱;观察移植肝缺血前和再灌注后5 min、30 min、2 h时血清一氧化氮(NO)和血浆内皮素1(ET1)水平以及NO/ET1的比值变化;测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)酶学差异和肝组织内三磷酸腺苷(ATP)和丙二醛(MDA)含量变化;再灌注2 h取肝组织检测肝细胞、肝小叶超微结构.结果 应用麦角新碱预处理的大鼠移植肝缺血前门脉血浆中ET1升高(P＜0.01),但再灌注后5 min、30 min时,血浆中ET1水平降低(P＜0.05);而缺血前NO/ET1比值降低(P＜0.01),再灌注后5 min时,NO/ET1比值升高(P＜0.01);再灌注后ALT的升高有逐渐降低趋势;再灌注后2 h肝细胞内超微结构的损害程度减轻.结论 使用麦角新碱预处理能减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤.移植肝缺血再灌注损伤的靶细胞是肝血窦内皮细胞,NO/ET1比值平衡可能是影响移植肝微循环血流量变化的调节因素.     

减体积肝移植术后甘氨酸对肝脏再生的作用

目的 观察甘氨酸在大鼠减体积肝移植中对移植后大鼠生存率、脏器损伤及肝脏再生的影响.方法 雌性Sprague-Dawley大鼠(200～230 g)分为甘氨酸组和对照组.甘氨酸组:术前经静脉给予供体甘氨酸1.5 ml(300 mmol/L),对照组给予1.5 ml的林格氏液.50%大鼠肝脏在HTK液经过2 h的冷保存后行原位肝移植术.肝移植术后观察大鼠生存率、血清转氨酶、肝脏组织学及肝脏再生情况.结果大鼠减体积肝移植(50%)术后,甘氨酸显著延长大鼠生存率.减体积肝移植术后8 h对照组血清中的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)分别升至(4045.4 ±614.5)、(1972.3±338.2)、(13 079.8±2608.4)U/L,而甘氨酸可降低血清转氨酶40%～50%(P<0.05).肝脏组织学也证明了甘氨酸的保护作用(P<0.05).移植术后8 h和24 h,肝脏的再生率和肝组织中的Ki-67表达在两组中差异有统计学意义.结论 甘氨酸在大鼠减体积肝移植术后可以延长生存率,减轻肝脏损伤,并且不阻碍肝脏的再生.Kuffer细胞的失活是其主要机制.     

大鼠同种骨髓间充质细胞门静脉输注对肝大部分切除肝衰模型术后肝功能、生存率的影响

目的 观察大鼠同种骨髓间充质细胞(BMSCs)经门静脉肝内移植对80％肝切除肝衰竭模型术后肝功能、生存率的影响.方法 通过80％肝切除建立大鼠边缘肝衰竭模型,经门静脉输注绿荧光蛋白(GFP)标记的第5代(P5)大鼠同种MSC,观察BMSCs肝内移植对肝大部分切除边缘肝衰竭模型术后生存率、肝功能的影响.结果 术后7d内的存活率:MSC组72.2％( 13/18)、对照组44.4％ (8/18).MSC组的存活率明显高于对照组(72.2％比44.4％,P＜0.05;MSC组大鼠术后肝功能恢复情况明显优于对照组(P＜0.05);MSC组肝组织中可观察到移植的细胞.结论 经门静脉的BMSCs移植可促进80％肝切除边缘肝衰竭大鼠的肝功能恢复和提高生存率.     

XBP1信号转导通路对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的 探讨内毒素(LPS)激活X盒结合蛋白1(XBP1)信号转导通路对移植肝缺血再灌注损伤的影响及其机制.方法 以雄性SD大鼠为供、受者,分为冷缺血转染组、活体转染组和对照组,以两袖套法建立肝移植模型.冷缺血转染组大鼠于冷缺血期经门静脉灌注转染携带XBP1短发夹干扰RNA的质粒(pSIXBP1);活体转染组大鼠在门静脉袖套吻合完成后经门静脉分支注入pSIXBP1;对照组不予任何处理.分别于移植肝门静脉恢复再灌注后60和180 min处死大鼠,光镜观察肝组织病理损害程度,逆转录聚合酶链反应及蛋白免疫印记法测定肝组织XBP1 mRNA和XBP的表达水平;酶连免疫吸附试验检测肝组织核因子κB(NF-κB)的活性及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 再灌注后180 min,冷缺血转染组病理损害程度、XBP1 mRNA含量和XBP1含量低于活体转染组和对照组(P＜0.05),该组TNF-α的表达水平为(584.94±15.97)pg/ml,低于活体转染组和对照组(P＜0.05).而再灌注后180 min时,3组NF-κB活性的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 XBP1通路与NF-κB通路在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中对TNF-α基因的调控作用是两个相对独立的环节,XBP1短发夹RNA干扰技术能有效减轻肝移植时的缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To explore the regulation mechanism of X box binding protein 1 (XBP1)signal transduction pathway for TNF-α and effective approach in ischemia/reperfusion (I/R) injury of liver transplantation for short hairpin RNA (shRNA) interference used to gene therapy in liver graft.Methods Male Sprague-Dawley rats were divided into three groups: the cold ischemia transfection group (CIT), the in vivo transfection group (IVT) and the control group. Experiments of orthotopic liver transplantation were performed by two cuff method. The rats in CIT were perfused with XBP1-shRNA plasmid (pSIXBP1) during cold ischemia phase, those in IVT received the equivalent volume (2 ml) of pSIIRAK 4 after portal vein inoculation, and those in the control group were not subjected to any treatment. Rats were killed at 60 or 180 min after restoring reperfusion of hepatic portal vein.Histopathological damage degree of graft liver was observed by light microscope. The expression levels of XBP1 gene and protein were detected by RT-PCR and Western blotting. The activities of NF-κB and the serum TNF-α level were detected by ELISA. Results All the indexes including the degree of histopathological damage, the expression levels of XBP1 mRNA and protein and the TNF-α level were significantly decreased in CIT as compared with IVT and control group (P＜0. 05). However,there was no significant difference in NF-κB activity among the three groups (P＞0. 05). Conclusion The role of XBP1 pathway in TNF-α gene regulation and that of NF-κB pathway in rat liver I/R injury are two relatively independent aspects, and the depression of XBP1 expression with XBP1 shRNA through portal vein perfusion during cold ischemia phase could effectively alleviate graft hepatic I/R     

缺血后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨在体条件下缺血后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法采用SD大鼠原位肝移植模型,供肝冷保存时间100min,无肝期控制于18min以内,60只雄性健康SD大鼠随机分为3组,对照组12只,缺血再灌注损伤组和后处理组各24只。对照组开腹后仅游离肝周韧带;缺血再灌注损伤组受体大鼠供肝切除前仅以肝素化生理盐水经门静脉灌注;后处理组供肝植入后完全再灌注前,给予多次短暂复灌复停作为缺血后处理。缺血再灌注损伤组、后处理组受体一半（6只）于再灌注后2h留取血液及肝组织,另一半（6只）于再灌注后6h留取肝组织。对照组于关腹后相应时间留取血液及肝组织。各组分别检测肝功能,采用酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子Or．和中性粒细胞弹性蛋白酶。根据酶促反应原理,利用分光光度仪测定肝脏谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶。肝组织HE染色后光镜下观察组织学变化。结果缺血再灌注损伤组和后处理组血清肝功能指标、炎性细胞因子水平及肝组织过氧化物含量均高于对照组（P〈0．05）,而后处理组较缺血再灌注损伤组则明显低（P〈0．05）;缺血再灌注损伤组和后处理组肝组织抗氧化酶活力显著低于对照组（P〈0．05）,而后处理组较缺血再灌注损伤组则明显高（P〈0．05）。结论缺血后处理对大鼠移植肝的缺血再灌注损伤有明显的保护作用。提高组织的抗氧化能力和降低炎性细胞因子水平可能是缺血后处理保护作用的机制之一。     

大鼠肝移植术后早期肝脏损害与Ref-1蛋白的表达

目的 观察大鼠肝移植术后早期肝组织内氧化还原因子1(redox factor-1,Ref-1)蛋白表达与肝脏损伤的关系.方法 将150只Wistar大鼠动物分为三个组,肝移植组、假手术组和空白对照组.分别于肝移植术后3、6、9、12、24 h取材,采用免疫组织化学方法检测移植后各时间肝组织Ref-1蛋白表达,同时通过血清生化指标、组织病理学分析研究Ref-1蛋白表达的意义.结果 血清学检查显示,肝移植术后3 h AST、ALT显著升高,术后6 h降低.病理学分析显示:术后24 h内,部分肝组织结构不清,肝细胞变性,肝窦扩张充血,炎细胞明显浸润.肝损伤较重.免疫组化检测显示,肝移植后早期肝实质细胞内Refl蛋白增高.9h达高峰,以后逐渐下降.结论 肝移植术后发生肝损伤以术后6 h为最重,之后损伤程度逐渐减轻,这是由于移植术后缺血再灌注损伤,激活Ref-1的表达明显增加,修复了由于缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡.     

Portal vein pressure is the key for successful liver transplantation of an extremely small graft in the pig model

In partial-liver transplantation, the use of small grafts sometimes results in graft failure, usually caused by portal hypertension after transplantation (Tx). Portal hypertension after Tx can be decreased with a porto-caval shunt (PCS). The purpose of this study is to clarify the effect of the PCS on extremely reduced-size liver Tx. In a pig model, the posterior segment of 25% of a whole liver was transplanted orthotopically. The pigs were divided two groups: group A, graft with PCS ( n=7), and group B, graft without PCS ( n=7). The PCS was made by means of side-to-side anastomosis of the portal vein and the inferior vena cava. We examined the portal vein pressure, survival rate, regeneration rate of the graft, Ki-67 as an index of cell proliferation, and histological findings, and carried out liver-function tests. In group A, five pigs survived for more than 4 days and the remaining two died of a perforated gastric ulcer on post-operative day (POD) 2. In group B, all pigs except one died of graft failure within 24 h. Portal vein pressure after reperfusion in group A and group B was of statistically significant difference ( P<0.05), 14.2+/-3.2 and 18.9+/-4.7 cmH(2)O, respectively. In group A, the regeneration rate of the graft was 94%, 4 days after Tx, and Ki-67 stained remarkably in the parenchymal hepatocytes. In TEM finding, structure of the sinusoid was also well maintained after Tx. From these results we can conclude that the key to success in liver Tx with extremely small grafts lies in the control of the portal vein pressure.     

缺血预处理对大鼠减体积肝移植术后Akt生存信号通路的影响及其意义

目的 探讨缺血预处理(IPC)对大鼠减体积肝移植术后Akt生存信号通路的影响及意义.方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为2组:50%减体积肝移植组(Control组)和IPC组,Western blot检测肝组织总Akt和p-Akt及其下游的p-Bad和p-GSK3β蛋白水平,同时结合血清学和组织病理学分析Akt生存信号通路变化的意义.结果 与Control组比较,IPC组术后6、24 h丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著下降(6 h:1064.49±126.53比802.90±82.39;24 h:1401.13±172.73比943.80±116.25,P<0.01);Control组术后24 h,肝细胞明显空泡样变性伴局部坏死,小叶结构破坏,门脉周围水肿、充血,炎症细胞浸润明显,而IPC组损伤减轻;Western blot结果显示:与Control组比较,IPC组术后2、6、24 h肝组织中p-Akt、p-Bad、p-GSK3β蛋白水平上调.结论 IPC明显减轻减体积肝移植术后再灌注损伤,其机制可能与激活Akt生存信号通道密切相关.     

环氧合酶2在大鼠肝移植缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)在大鼠肝移植缺血再灌注损伤中的表达及其作用机制.方法 54只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为3组:正常对照组(6只);肝移植组(24只);干预组(24只).RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达;免疫组织化学染色显示COX-2阳性细胞的分布情况;ELISA法检测血清TNF-α和IL-10的含量.采用单因素方差检验分析各检测指标结果.结果 各组血清学检测指标和TNF-α表达变化与移植肝的组织学损伤相一致.COX-2 mRNA的表达为肝移植缺血再灌注损伤机制所必需,抑制其表达可加重移植物缺血再灌注损伤.结论 COX-2参与了肝移植缺血再灌注损伤,并且是重要效应分子,可能起到了降低移植物缺血再灌注损伤的保护性作用.     

Auxiliary liver transplantation: how to improve regeneration of the native liver by surgery

The technical factors which could influence regeneration of the native liver (NL) in auxiliary liver transplantation (ALT) for fulminant hepatic failure (FHF) are not well known. We studied NL regeneration according to the location of graft anastomosis in the recipient's portal system (superior mesenteric vein versus portal vein), and graft weight (50 % reduced-size versus full-size graft) in a rat model of ALT with 80 % reduction of the NL, and graft arterialization. NL regeneration was significantly more obvious when the graft was anastomosed on the recipient's superior mesenteric vein, thus establishing venous flow to the NL from the pancreas, the spleen, and the stomach, and when a full-size graft was used. The influence of portal venous flow on NL regeneration, assessed by [³H]-thymidine incorporation, was measurable as early as day 2. Both technical variables in combination resulted in significantly greater regeneration (ratio weight of NL/body weight at day 30: 2.32 ± 0.68 % versus 1.21 ± 0.63 % respectively, P = 0.02). Early preservation of portal flow to the NL is advisable to maximize NL regeneration in ALT. In any case, this regeneration is not impeded by the use of large auxiliary grafts. Received: 11 February 1999 Received after revision: 29 July 1999 Accepted: 1 September 1999     

大鼠脂肪变性供肝减体肝移植术后的肝再生

目的　探讨大鼠脂肪变性供肝减体肝移植术后的肝再生方式及相关机制。方法　采用 79%标准饲料、2 0 %猪油、1%胆固醇混合喂饲 ,同时以 5 0 %乙醇灌胃每日 1ml/10 0 g ,时间为 4周 ,诱导供肝脂肪变性形成 ,大鼠 60 %减体肝移植模型。观察和比较术后 1、3、7、14d时PCNA、Br dU免疫组织化学及新鲜分离的肝细胞的流式细胞术结果及肝再生率。结果　脂肪变性供肝减体肝移植术后 1、3、7d的肝再生率较正常明显减低 (P <0 .0 1) ;各时点的PCNA标记指数 (P <0 .0 1)和BrdU标记指数差异均有非常显著性 (P <0 .0 1) ;脂变供肝术后的肝细胞增殖指数 (PI)在 7d时最高 (2 6.3 1% ) ,而正常供肝在 3d时最高 (4 2 .0 1% )。结论　大鼠脂肪变性供肝减体肝移植术后肝再生的高峰时间滞后、周期延长。     

大鼠边缘性体积供肝肝移植模型的实验研究

目的通过建立不同体积供肝的大鼠肝移植模型,探索边缘性体积供肝大小的适宜范围,为研究小肝综合征的发病机理及防治措施提供一种易于复制的小动物模型。方法将192只大鼠随机分为全肝移植组、半肝移植组、小体积供肝移植组及超小体积供肝移植组,每组48只,分别建立全肝、半肝、小体积供肝和超小体积供肝的大鼠肝移植模型。移植术后,4组各抽取24只大鼠用于观察存活率;抽取12只大鼠于移植术前,移植术后5、15、30、45及60min测定门静脉压力;另12只大鼠于术后24h测定谷丙转氨酶（ALT）水平。结果全肝移植组的7d累积生存率为100％（24／24）,半肝移植组为87．5％（21／24）,小体积供肝移植组为37．5％（9／24）,超小体积供肝移植组均于术后48h内死亡。全肝移植组术中开放门静脉后,60min内其门静脉压力稳定;半肝移植组大鼠在开放门静脉后,其门脉压力虽有小幅升高,但仍保持相对稳定;而小体积供肝移植组和超小体积供肝移植组开放门静脉后,其门静脉压力均显著升高,15min时均达到高峰,之后该2组的门静脉压力开始回落,至45～60min时逐渐稳定。供肝的体积大小与开放门静脉后5（r=-0．942）、15（r=-0．947）、30（r=-0．900）、45（r=-0．825）和60min（r=-0．705）时的门静脉压力均呈负相关关系（P〈0．001）。肝移植术后24h,全肝移植组和半肝移植组ALT水平均低于小体积供肝移植组及超小体积供肝移植组（P〈0．05）,且小体积供肝移植组ALT水平低于超小体积供肝移植组（P〈0．05）。供肝体积的大小与大鼠移植术后的ALT水平呈负相关关系（r=-0．685,P〈0．001）。结论大鼠部分肝移植模型中,供肝与受体标准肝脏体积比（Gv／sLV）的安全界限为50％,GV／SLV为30％～35％的供肝可视为边缘性体积供肝,小于30％的供肝可视为超小体积供肝。