蛋氨酸胆碱对铅暴露大鼠脏器微量元素影响

目的 探讨蛋氨酸胆碱对铅暴露SD大鼠体内微量元素影响。方法 将60只SD大鼠随机分为空白对照组、染铅组、蛋氨酸胆碱组、铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组,分别给予铅(饮水)和蛋氨酸胆碱(灌胃),麻醉取脑、肾、肝和骨,采用电感耦合等离子发射光谱法测定组织中铅、铜、铁、锰、锌及钙含量。结果 染铅后,脑、肝、肾、骨组织中铅含量明显增高,分别为(0.631±0.188),(1.178±0.354),(12.669±2.682)和(165.621±12.015)μg/g,铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组肝组织铅含量分别降至(0.955±0.299)和(0.637±0.164)μg/g;铅+高剂量蛋氨酸胆碱组肾铅和骨铅含量分别降至(9.789±1.743)和(132.742±17.743)μg/g,明显低于铅对照组(P<0.01);铅对照组脑铁和铜及肝铁含量高于空白对照组,给予蛋氨酸胆碱后,脑铁和铜及肝铁含量下降至空白对照组水平。结论 蛋氨酸胆碱可降低肝、肾和骨组织中铅含量,对铜、铁、锰、锌无明显影响。     

染铅大鼠海马胆囊缩素神经元的变化

目前已经证实 ,铅影响神经系统 ,尤其是对婴幼儿的智力发育及学习记忆功能具有危害 ,但关于铅的神经毒性机制迄今未完全阐明。铅中毒大鼠海马神经元型一氧化氮合酶(ｎＮＯＳ)活力被抑制[1] 和ＮＯ导致低水平铅暴露大鼠脑片ＣＡ1区长时程增强 (ＬＴＰ)增加[2 ] 的实验提示 ,铅可能在海马区通过ＮＯ选择性干扰某种神经化学途径 ,影响突触可塑性及学习记忆。现已确认 ,神经肽是脑内参与学习记忆过程的关键神经化学物质 ,海马结构内含一种与学习记忆密切相关的肽能神经元即胆囊收缩素 (Ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ ,ＣＣＫ)神经元[3 6] ,本…     

两种含锌化合物对染铅大鼠海马神经元型NOS的影响

目的探讨硫酸锌 (ZnSO4 )和牛磺酸锌 (TZC)拮抗铅对学习记忆损害的作用 ,为补锌防治铅中毒提供实验依据。方法采用免疫组织化学方法 ,观察饮用含 0 .2g·L- 1醋酸铅 (PbAc)饮水和每公斤含锌 2 0 0mg、6 0 0mg(5、15g·kg- 1ZnSO4 ,5 .9、17.7g·kg- 1TZC)的饲料喂养 3个月后大鼠海马神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)阳性神经元数目的变化。结果与正常对照组大鼠海马CA1区nNOS阳性神经元数 (6 0 .6 7± 13.4 8)相比 ,染铅组海马CA1区nNOS阳性神经元数 (4 6 .6 7± 9.0 4 )明显减少 ,差别有显著性 (P <0 .0 5 )。而铅加 5g·kg- 1和 15g·kg- 1ZnSO4组以及铅加 5 .9g·kg- 1TZC组海马CA1区nNOS阳性神经元数 (5 3.6 0± 8.4 3、5 4.0 0± 6 .4 4和 5 6 .87± 6 .6 4)均较染铅组显著增加 (P <0 .0 5 ) ,以铅加 5 .9g·kg- 1TZC组的数目增加最多 ;而铅加 17.7g·kg- 1TZC组海马CA1区nNOS阳性神经元数 (5 1.6 7± 7.74 )与染铅组的差别无显著性 (P >0 .0 5 )。各组大鼠海马齿状回nNOS阳性细胞数的变化与CA1区变化基本一致 ,而CA3区与正常对照组无明显差别。结论锌对抗铅的毒性作用与锌的化学结合形式、锌的剂量有关     

牛磺酸对染铅大鼠海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的:探讨牛磺酸拮抗铅损害学习记忆能力的作用。方法:采用ABC免疫组织化学方法,研究饮用含不同剂量醋酸铅(0.02、0.2g/L)饮水和含不同剂量牛磺酸(5、10g/kg)饲料喂养的大鼠海马神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元数量的变化。结果:牛磺酸能明显增加染铅大鼠海马nNOS阳性神经元的数量。结论:牛磺酸对铅损害学习记忆能力有较明显的拮抗作用。     

低剂量铅对原代培养的海马神经元的影响

目的 研究低剂量铅对原代培养的海马神经元生长及存活的影响。方法 建立新生大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过不同浓度PbCl2染毒后，于不同时间点观察神经细胞的生长和存活情况。结果 极低浓度的铅(10^-7mol／L)即可引起神经元出芽延迟，突起长度缩短，细胞存活率下降，随剂量增加和时间延长，毒效应越严重。结论 低剂量铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。     

蛋氨酸胆碱对铅染毒大鼠CaMKⅡ和CREBmRNA及蛋白表达的影响

目的 研究蛋氨酸胆碱对铅暴露大鼠海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的影响.方法 将断乳健康SPF级雄性SD大鼠分为空白对照组、染铅组(0.4 g/L乙酸铅饮水染毒)、蛋氨酸胆碱组(1:1,400 mg/kg)、铅+低剂量蛋氨酸胆碱组和铅+高剂量蛋氨酸胆碱组.铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组在染铅的同时,经灌胃分别给予低、高剂量(100、400 mg/kg)蛋氨酸胆碱混合溶液(1:1),8周后取大鼠海马组织,用实时聚合酶链反应(PCR)法测定CaMKⅡ和CREB mRNA的表达水平,免疫印迹(Western blot)法测定CaMKⅡ、CREB和pCREB蛋白含量.结果 染铅组大鼠海马CaMKⅡI和CREB mRNA的表达水平(0.743±0.185,0.729±0.199)均明显低于空白对照组(0.950±0.238,0.901±0.232),CREB和pCREB蛋白表达量( 0.271±0.045,0.212±0.058)低于空白对照组(0.319±0.058,0.506±0.125),差异均有统计学意义(P＜0.05);给予低、高剂量蛋氨酸胆碱后染铅大鼠海马CaMKⅡ mRNA表达水平(1.014±0.210,1.126±0.379)和CREB mRNA表达水平(1.029±0.335,0.932±0.251)均明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05),铅+高剂量蛋氨酸胆碱组CREB和pCREB蛋白表达量(0.407±0.951,0.563±0.178)明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蛋氨酸胆碱可以拮抗铅对海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的抑制作用.     

铅对海马神经元单环磷酸腺苷水平的影响

目的　通过放射免疫的方法 ,研究铅暴露对体外培养的海马神经元单环磷酸腺苷 (cyclicadenosinemonophosphatec,cAMP)水平的影响。 方法　在体外培养 3d的原代胚鼠海马神经元中 ,加入不同浓度的氯化铅 (分别为 10 -4mol/L、10 -6mol/L、10 -8mol/LPb2 + )暴露 2 1d ,收集海马细胞并超声粉碎后 ,用放射免疫的方法测海马细胞cAMP水平。结果　铅抑制体外培养的海马神经元腺苷酸环化酶活性 ,降低cAMP水平。 1× 10 -8mol/LPb2 + 暴露即能抑制海马细胞腺苷酸环化酶活性。铅暴露程度越高 ,cAMP降低越明显 ,两者成负相关。结论　铅暴露后海马神经元cAMP水平下降可能是铅影响学习记忆的机制之一。     

不同神经发育阶段铅暴露对大鼠海马神经元数目的影响

目的:探讨不同神经发育阶段铅暴露对海马神经元数目的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为孕期染铅组、断乳后染铅组和对照组,处理组经水给予PbCl2400μmol/L,对照组自来水。至观察终点采用免疫组化法检测海马CA3区神经元数目。结果:仔鼠出生第1天,孕期染铅组与对照组神经元数目均数分别是315.52±42.12、435.25±25.38,明显低于对照组(P<0.05);至2月龄,孕期染铅组仔鼠神经元均数仍显著低于对照组(P<0.05),而出生断乳后染铅组神经元均数与对照组相比,差别无统计学意义P﹥0.05,其均数分别是45.00±7.83、58.25±7.85和58.74±4.92。结论:孕期铅暴露可导致仔鼠海马神经元数目减少,而出生后铅暴露则对海马组织神经元数目没有明显影响。     

氯化锂对染铅大鼠海马nNOS蛋白与基因表达的影响

目的:探讨锂对醋酸铅神经毒性的拮抗效应及其可能机制。方法:通过ABC免疫组化法和半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,研究饮用0.2g/L醋酸铅(PbAc)饮水和含不同剂量(3、30、300和3000mg/kg)氯化锂(LiCl)饲料喂养的大鼠海马nNOS蛋白与基因表达的变化。结果:与对照组比,3、30mg/kgLiCl组大鼠海马CA1区nNOS阳性神经元数目和nNOSmRNA相对含量显著增多;而染铅组大鼠则显著减少。Pb+LiCl(3、30和300mg/kg)组均较染铅组有显著性增加,但Pb+3000mg/kgLiCl组与染铅组无显著性差异。各组大鼠海马齿状回nNOS阳性神经元数目的变化与CA1区变化基本一致,CA3区变化不显著。结论:锂对铅的神经毒性有明显的拮抗作用。     

锂对染铅大鼠海马胆囊收缩素和神经元型一氧化氮合酶神经元的保护作用

目的 探讨锂对染铅大鼠海马胆囊收缩素（CCK）和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）神经元的保护作用及其与动物学习记忆功能变化的关系.方法 通过测量体重,利用反映学习记忆功能的Y迷宫法和ABC免疫组化法,研究饮用含0.2 g/L醋酸铅（PbAc）水和含不同剂量（3、30、300、3 000mg/kg）氯化锂（LiCl）饲料喂养的大鼠体格发育情况、学习记忆能力以及海马不同亚区CCK和nNOS阳性神经元数目的变化.结果铅染毒组大鼠体重增加少于对照组大鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）,Y-迷宫学会次数多于对照组大鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）;其海马各区CCK和nNOS阳性神经元数明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.铅＋LiCl（3、30、300mg/kg）组体重增加多于对照组大鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）;Y-迷宫学会次数少于对照组大鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）,海马各区CCK阳性神经元数明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.铅＋3 000mg/kg LiCl组大鼠Y-迷宫学会次数多于对照组大鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）;海马各区CCK阳性神经元数明显少于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）;与铅染毒组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 铅可损伤大鼠学习记忆能力,影响大脑海马CCK和nNOS阳性神经元的数目.较低剂量的锂对铅引起的学习记忆损伤和海马CCK阳性神经元的变化有一定保护作用.     

铅对原代培养海马神经细胞DNA损伤作用

目的 通过检测细胞生长抑制和凋亡相关的DNA损伤蛋白在大鼠原代培养海马细胞中的表达与原代培养海马细胞DNA损伤的相关性,探讨铅的神经毒理作用机制。方法 原代培养的海马神经细胞,于培养7 d全量更换培养液后加入不同浓度醋酸铅0.2、1.0、10μmol/L,置于37℃、5%CO₂培养箱继续培养24 h;蛋白免疫印迹(west-ern blot)方法检测生长抑制DNA损伤诱导因子(GADD 153)表达;彗星实验检测大鼠海马原代培养神经细胞DNA损伤程度。结果 与对照组比较,随着染铅浓度增高,原代培养的海马神经细胞中的DNA的尾距(OTM)和彗尾值增大,0.2、1.0μmol/L染铅组GADD 153蛋白表达较弱,染铅浓度为10μmol/L时,表达明显增加。结论 细胞DNA损伤与GADD 153蛋白表达呈一定相关性。     

双苯氟嗪对铅致海马神经元损伤的保护作用

目的 观察双苯氟嗪（Dipfluzine，Dip）对铅致原代培养海马神经元损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法 以原代培养的海马神经元作为研究对象，用醋酸铅造海马神经元损伤模型，通过测定细胞存活率，乳酸脱氢酶（LDH）泄漏率和胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i），观察Dip对铅致原代培养海马神经元损伤的保护作用。结果 Dip1．0和10μmol／L可显著提高铅损伤海马神经元存活率，降低LDH泄漏率，对铅诱导的海马神经元[Ca^2＋]i升高有明显的抑制作用（P〈0．01）；Dip0．1μmol／L亦可抑制铅诱导的海马神经元[Ca^2＋]i升高（P〈0．05）。结论 Dip对铅致原代培养海马神经元损伤具有保护作用，其机制可能与其抑制铅诱导的胞内钙超载有关。     

铅暴露对生长期大鼠回肠氮能神经元影响

目的 研究铅暴露对生长期大鼠回肠氮能神经元的影响,探讨铅致回肠氮能神经元形态改变或损伤的剂量-效应关系、时间-效应关系,为揭示铅中毒引起腹绞痛的毒理机制提供实验证据.方法 6周龄雄性SD大鼠75只,随机分为5组,每组15只,第1,2,3,4组为实验组,第5组为对照组.4个实验组动物分别用15,30,45,90mg/(kg·bw)的醋酸铅,采用灌胃方式染毒,每天1次;对照组以等量的双蒸水灌胃,每天1次.每组大鼠随机分为3小组,每小组以数字加以标注.在第10,30,90 d时对相对应小组大鼠进行血铅测定和回肠壁平铺冰冻块上切片后进行还原型辅酶A(β-NADPH)组织化学染色.结果 铅暴露生长期大鼠血铅浓度随染毒时间延长、染毒剂量的加大而升高;回肠一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数量、活性随染毒时间延长、染毒剂量的加大而降低;大鼠血铅浓度与回肠NOS阳性神经元数量存在负性相关,与NOS阳性神经元平均灰度值存在正性相关.结论 铅对回肠氮能神经元的影响不仅表现在铅暴露降低NOS活性,而且铅暴露致回肠氮能神经元的数量减少,且存在时间-效应、剂量-效应关系.     

胆碱对酒精中毒孕鼠神经元保护作用的实验研究

目的:观察不同剂量胆碱对孕期酒精中毒大鼠生仔后神经元的影响,探讨其机制。方法:将孕鼠分为酒精组、大剂量胆碱组、小剂量胆碱组及对照组。用灌胃法建立酒精中毒动物模型。在分娩当天进行行为测试,分别观察母鼠的舔仔行为和哺乳行为,计算各行为时间,比较各组母鼠的行为的差异。用免疫组化方法检测下丘脑室旁核催产素神经元数量变化。结果:酒精组母鼠的行为持续时间与对照组比较差异有显著性(P<0.01或P<0.05);胆碱组的行为持续时间与酒精组比较差异有显著性(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,酒精组和小剂量胆碱保护组PVN区催产素神经元阳性细胞数目减少(P<0.05)。结论:怀孕期大量饮酒能够明显损伤相关的催产素神经元,而胆碱对神经元有一定的保护作用,并具有一定的剂量依从性,其机制可能是足量的胆碱为脑细胞提供了一定的营养,有效的保持了细胞结构。     

铅硒联合作用对原代培养海马神经元影响

目的观察铅、硒对原代培养的海马神经元生长及存活的影响，研究硒对铅的神经细胞生长抑制的拮抗作用。方法建立新生Wistar大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过PbCl2，Na2SeO3单独及联合作用，观察神经细胞的生长和存活情况。结果10^-5mol／L铅明显抑制了原代培养的海马神经元突起生长，引起神经元存活率下降；单独硒（2×10^-6mol／L）有明显促进海马神经元突起生长的作用．尤其在神经元突起生长早期；但对海马神经元存活率的影响不明显。铅和硒共同孵育时，培养早期硒能拮抗铅对神经元突起延伸的抑制．但随着培养时间延长，这种拮抗作用消失；从神经元存活率来看，在实验剂量下，未见硒能拮抗铅对神经元存活的抑制作用。结论铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。本实验剂量下的硒在细胞培养早期有促进神经元突起生长和拈抗铅对神经元生长和存活的抑制作用。     

砷对原代培养海马细胞形态学影响及酶活力研究

研究不同剂量亚砷酸钠对海马细胞活力、形态学改变以及生化指标的影响。采用 0、0 0 8、0 40、2 0 0和 1 0 0 0mg L亚砷酸钠处理海马细胞 6h和 2 4h后 ,观察到海马神经元活力降低 ;细胞浆、核界限不清 ,细胞浆空泡变性 ,细胞突起变细、减少以至消失 ,神经细胞之间网络疏松 ;核染色质凝集、浓缩 ,核边移 ;胞浆内尼氏体减少 ;且呈剂量和时间依赖关系 ;培养上清中乳酸脱氢酶活性增高 ,胆碱酯酶活性降低。实验结果表明不同剂量亚砷酸钠对大鼠海马细胞产生不同程度的毒性作用 ,包括变性、凋亡和坏死。     

HIF-1参与KATP通道对神经元缺氧损伤保护作用

目的 探讨三磷酸腺苷(ATP)敏感性钾通道(K_ATP通道)在缺氧中对海马神经元的保护作用机制。方法 比较对照组、单纯缺氧组、K_ATP通道激动剂+缺氧组、K_ATP通道阻断剂+缺氧组中神经元缺氧诱导因子1α亚基(HIF-1α)的蛋白表达、DNA断裂、以及神经元存活情况。结果 试验持续8,12,24 h后,正常氧分压组细胞存活率为(100±0.98)%,缺氧8,12,24 h后,细胞的存活率分别降至(85.76±3.31)%,(80.13±1.76)%,(72.24±3.87)%,差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧12,24 h后,缺氧+二氮嗪组细胞凋亡率分别为(8.1±3.1)%,(18.4±2.3)%,缺氧+甲糖宁组分别为(32.5±1.6)%,(45.7±3.4)%,与单纯缺氧组的(20.3±2.2)%,(31.6±1.7)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 K_ATP通道可以通过上调HIF-1α的蛋白表达水平,对缺氧中的海马神经元起到保护作用。     

N-花生四烯甘氨酸（NAGly）缓解七氟烷诱导的发育期大鼠原代海马神经元神经毒性

目的探讨N-花生四烯酰乙醇胺（N—arachidonoylethanolamine,AEA）类似物N-花生四烯甘氨酸（N—arachidonoylglycine,NAGly）对发育期大鼠原代海马神经元七氟烷暴露诱导的神经毒性的保护作用。方法体外培养7d的原代海马神经元经七氟烷暴露,同时给予NAGly处理,采用TUNEL染色和流式检测细胞凋亡。Westernblot检测凋亡蛋白表达。结果NAGly促进细胞活性,抑制了七氟烷诱导的凋亡。NAGly改善了七氟烷暴露诱导的ERKI／2活性抑制。MEK抑制剂能够破坏NAGly的神经保护作用。结论AEA类似物NAGly能够保护发育期海马神经元改善七氟烷诱导的神经毒性,其可能机制是通过上调MEK／ERKl／2MAPK信号通路实现的。     

磷酸化突触素在神经元囊泡循环与递质释放中作用

目的探讨磷酸化突触素I在微波辐射所致囊泡循环和氨基酸递质释放改变中的作用。方法采用30 mW/cm² 微波辐射原代海马神经元, 免疫荧光染色观察辐射后1、6、12 h, 1、2、3 d神经元Ser-62/67及Ser-553位点突触素I磷酸化表达改变;高效液相色谱检测辐射后6 h海马神经元氨基酸递质释放量变化; time-lapse观察辐射后6 h神经元突触囊泡循环改变;给予U0126和roscovitine进行干预, 观察上述指标改变。结果30 mW/cm² 微波辐射后海马磷酸化突触素I Ser-62/67、Ser-553及磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)、细胞周期素依赖性激酶(Cdk5)表达明显减少, γ-氨基丁酸(GABA)释放明显减少, 海马神经元囊泡循环速度减慢;辐射并给予U0126后, 神经元p-ERK和Ser-62/67位点突触素I磷酸化表达明显减弱, 囊泡循环速度减慢;辐射并给予roscovitine后, 神经元Cdk5表达减少, Ser-553位点突触素I磷酸化表达上调, GABA释放明显增加, 囊泡循环速度明显减慢。结论30 mW/cm²微波辐射通过下调海马神经元ERK活性抑制突触素I Ser-62/67位点磷酸化而使囊泡循环受抑制, 囊泡锚定障碍;通过下调Cdk5促进突触素I Ser-553位点磷酸化而利于含GABA的囊泡锚定于突触前膜, 但抑制囊泡循环。