Apoptin基因诱导A375细胞凋亡信号转导机制

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A 375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析检测A 375的细胞的凋亡;以比色法检测半胱天冬蛋白酶8(caspase-8)和caspase-3的相对活性。结果Apoptin基因瞬间传染的A 375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);Cas-pase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化。结论Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡。     

肿瘤特异性凋亡基因对人淋巴瘤细胞诱导作用

目的观察肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)对人淋巴瘤细胞U937的凋亡诱导作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937；采用台盼蓝染色法、RT—PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人淋巴瘤细胞U937诱导凋亡的作用。结果Apopin基因瞬间转染的人淋巴瘤细胞U937可出现明显的细胞凋亡：而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关。结论Apoptin基因具有诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡的作用。     

全反式维甲酸诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的可能性,并进一步研究其作用机制.方法 体外培养人膀胱癌EJ细胞,以不同浓度ATRA处理后,用MTT法测定细胞生长抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;分光光度法检测caspase-3活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2 mRNA表达.结果 ATRA能显著抑制EJ细胞的生长,并在一定浓度和时间范围内呈现出时间、剂量依赖关系;细胞的凋亡率随着ATRA浓度的增大而增高;ATRA作用后bcl-2 mRNA表达随着ATRA浓度的增大而降低;caspase-3基因的活性随着ATRA浓度的增大而升高.结论 ATRA对人膀胱癌EJ细胞生长的抑制在一定浓度范围内呈时间和剂量依赖性.ATRA通过抑制bcl-2 mRNA表达,激活caspase-3基因而诱导凋亡,这为其诱导凋亡的作用机制之一.     

Ghrelin抑制棕榈酸诱导的人血管内皮细胞凋亡

目的 探讨ghrelin能否抑制棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡.方法 人脐静脉内皮细胞分别在含0.3 mM棕榈酸的培养基中孵育24 h,培养基中如或不加ghrelin,流式细胞仪Annexin V/PI法检测凋亡,分光光度计检测caspase-3活性,应用DCFH-DA通过流式细胞仪检测细胞内活性氧.结果 内皮细胞暴露于含棕榈酸的培养基24 h与不加棕榈酸相比细胞凋亡显著增加、caspase-3活性增加,加入ghrelin (100 nM) 24 h显著降低棕榈酸诱导的细胞凋亡、降低caspase-3活性.棕榈酸增加细胞活性氧,而ghrelin能够抑制棕榈酸对细胞活性氧的影响.结论 Ghrelin可以抑制棕榈酸诱导的血管内皮细胞凋亡,降低caspase-3的活性及活性氧生成,ghrelin具有一定的防治动脉粥样硬化作用.     

乙苯对大鼠脑组织氧化损伤和超微结构及凋亡相关基因表达的影响

目的 观察亚慢性接触乙苯对大鼠脑组织氧化损伤、超微结构及凋亡相关基因表达的影响.方法 SD大鼠40只,随机分为4组,每组20只.暴露于0.0、433.5、4335.0和6500.0mg/m3的乙苯,6h/次,5次/周,共13周,建立大鼠乙苯亚慢性染毒模型,检测脑组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,电子显微镜观察脑组织超微结构,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测脑组织B细胞淋巴瘤-2相关联X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、细胞色素C(Cyt C)、细胞凋亡蛋白酶(Caspase-3)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)等基因的表达.结果 4335.0和6500.0 mg/m3剂量组大鼠脑组织内MDA含量[(2.03±0.56)、(4.17±1.31)nmol/mg pro]明显高于对照组[(1.08±0.26)nmol/mg pro],差异有统计学意义(P<0.05),各剂量组大鼠脑组织AChE活力[(0.321±0.066)、(0.276±0.031)、(0.202±0.041)U/mg]和GSH含量[(35.19±15.08)、(33.42±15.32)、(27.99±7.53)mg/g pro]均明显低于对照组[AchE活力(0.583±0.125)U/mg,GSH含量(76.38±18.41)mg/g pro],差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05).6500.0mg/m3乙苯处理组大鼠脑组织电镜下观察可见核仁呈半月形,胞质线粒体减少,受损的神经纤维内含高电子密度的髓磷体结构,为膜性结构脂质过氧化损伤所形成.4335.0和6500.0 mg/m3剂量组Bax基因表达水平明显高于对照组和433.5 mg/m3剂量组;与对照组相比,各剂量组Cyt C、caspase-9、caspase-3基因表达水平皆明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);各剂量组Bcl-2的基因表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 乙苯可诱导大鼠脑组织氧化损伤,发生凋亡,其机制可能乙苯可导致Bax、Cyt C、caspase-9、caspase-3基因的上调和抑制Bcl-2的表达有关.     

Caspase-3在硫化砷诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化砷(As4S4)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的分子机制。方法以不同剂量(7.5、15、30、60mg/L)的As4S4,12、24、36、48、60 h处理Hela细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;Western blot法检测不同剂量As4S4处理Hela细胞后凋亡相关蛋白bcl-2、caspase-3表达的变化;并以流式细胞术检测半胱氨酸酶3(caspase-3)酶活性的变化。结果不同剂量As4S4处理的Hela细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系。24 h时IC50为30 mg/L,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术显示不同浓度As4S4作用Hela细胞24 h后,出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(8.13±1.13)%、(29.58±2.51)%、(46.24±3.92)%、(62.36±4.42)%,对照组没有出现凋亡峰,差异有统计学意义(P<0.01);经As4S4处理后凋亡相关蛋白bcl-2表达下降,caspase-3表达增加;随着As4S4剂量的增加,表达活性caspase-3的细胞百分率逐渐增加,分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.80)%、(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论As4S4体外对Hela细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用,其作用机制可能通过下调bcl-2蛋白表达,活化caspase-3的活性来起作用。     

刺五加注射液诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡机理的研究

目的 探索刺五加注射液诱导宫颈癌细胞HeLa发生凋亡的效应和分子机理.方法 以不同浓度的刺五加注射液作用于体外培养的宫颈癌HeLa细胞24h,应用AO/EB双染的荧光显微镜观察法和Annexin V-FITC染色的流式细胞技术,检测不同浓度刺五加注射液诱导HeLa细胞凋亡的形态改变和凋亡率；应用免疫细胞化学方法,检测HeLa细胞凋亡蛋白酶caspase-3和caspase-8的表达水平.结果 刺五加可诱导HeLa细胞发生凋亡,并随着药物浓度升高细胞凋亡率增加；荧光显微镜观察发现,在刺五加的作用下,HeLa细胞数量明显减少,呈现特征性的凋亡形态；免疫细胞化学检测显示,HeLa细胞的caspase-3和caspase-8的表达水平随刺五加浓度的增加而升高,呈现剂量依赖性.结论 刺五加注射液诱导HeLa细胞凋亡的机理可能涉及了caspase依赖性的细胞凋亡信号途径.     

siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用原理及caspase途径在此过程中的作用。方法:应用流式细胞法及RT-PCR检测沉默NFBD1对人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡基因组表达水平的影响。MTT法检测NFBD1 siRNA对HepG2细胞的抑制作用。结果:转染48 h后,转染组与阴性对照组和空白组相比,NFBD1mRNA表达明显减弱,转染组NFBD1 mRNA较空白组相对下降74.75%;HepG2细胞组中促凋亡基因Bc1-xl表达减少,Bid及caspase-3表达量增加(P<0.05)。MTT结果显示NFBD1 siRNA能明显抑制HepG2细胞增殖,抑制率达到92.131±0.893%。流式法检测结果显示转染组细胞凋亡明显高于阴性对照组和空白组。结论:NFBD1可通过改变Bc1-xl/Bid的表达比,激活caspase-3来诱导HepG2细胞凋亡。     

药桑椹多糖组成分析及诱导肿瘤细胞凋亡研究

目的分离鉴定药桑椹多糖(polysaccharide of black mulberry fruits,PBMF)及其单糖组成,并考察其抗氧化活性以及对He La细胞增殖和凋亡的影响,为药桑椹多糖的抗肿瘤研究及开发利用提供一定的理论依据。方法利用超高效液相色谱法(UPLC)分析药桑椹多糖的单糖组分;体外抗氧化实验观察PBMF的还原力、清除羟自由基能力;MTT法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;Annexin V-FITC/PI双染荧光显微镜观察He La细胞凋亡和坏死情况;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测非活化态半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(procaspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达量。结果 PBMF单糖组成主要为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖,相对摩尔比分别为3.3:1.1:0.29:37.2:0.76:39.7:0.2。PBMF具有较强还原力和羟自由基清除能力。PBMF对He La细胞的增殖具有显著地抑制作用,且呈剂量依赖性。PBMF诱导He La细胞周期停滞于G0/G1期(P0.05)。上调caspase-3的相对表达量,诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡。结论 PBMF能抑制人宫颈癌He La细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与caspase-3的活化有关。     

2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制。方法以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（△ψm）,比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs70．5％）,凋亡率明显增加（5．3％VS40．5％）;卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs61．8％）,凋亡率明显增加（5．4％VS36．9％）;此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的AtOm,提高caspase-3和caspase-8活性。而预先以Z—VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应。结论2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡。