三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏p-ERK1/2表达的影响

目的研究三七总皂甙(PNS)对大鼠肝卵圆细胞(HOC)增殖模型肝脏p-ERK1/2表达的影响,探讨PNS调节HOC增殖的可能信号途径。方法将66只健康雄性Wistar大鼠随机分成对照组(n=6)、模型组(n=30)和PNS组(n=30)。模型组、PNS组采用2-AFF/PH方法建立HOC增殖模型,PNS组大鼠建模时(即第一次2     

苦参碱对大鼠实验性肝纤维化的影响

目的：研究苦参碱对肝纤维化的防治作用及其机理。方法：应用四氯化碳诱导大鼠实验性肝纤维化，并以苦参碱防治。观察了３，６，１２周对照组、模型组、治疗组的血清丙氨酸转移酶（ＡＬＴ）、透明质酸（ＨＡ）、肝组织羟脯氨酸（ＨｙＰ）含量以及肝脏病理变化。结果：苦参碱５０ｍｇ／ｋｇ和１００ｍｇ／ｋｇ均能显著减轻肝细胞变性、坏死及纤维组织的形成，同时能降低不同实验阶段血清ＡＬＴ（Ｐ＜０．０１）、ＨＡ（Ｐ＜０．０１）以及肝组织中Ｈｙｐ含量（Ｐ＜０．０５）。结论：苦参碱有防治四氯化碳诱发的肝纤维化的作用。     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响

研究氧化苦参碱地大鼠肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,并以氮蓝四唑试验比色法观察氧化苦参碱对肝星状细胞增殖效应。     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞产生转化生长因子β1的影响

目的 观察氧化苦参碱对传代大鼠肝星状细胞自分泌产生TGFβ1的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流消化正常大鼠肝脏，Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞并传一代，药物作用于传代HSC，以貂肺上皮细胞(My—l—Ln)生长抑制MTI’法检测培养上清中他隋活性及分泌总量，并抽取HSC的mRNA，RT—PCR半定量分析药物对HSC他F住mRNA的表达。结果氧化苦参碱可减少HSC’rG耶。的分泌总量，并抑制‘IGF任的活化及mRNA的表达。结论氧化苦参碱能抑制肝星状细胞‘rGFA产生并活化可能是与其具有抗肝纤维化的作用有关。     

三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏P—ERK1／2表达的影响

目的 研究三七总皂甙(PNS)对大鼠肝卵圆细胞(HOC)增殖模型肝脏p-ERK1/2表达的影响,探讨PNS调节HOC增殖的可能信号途径.方法 将66只健康雄性Wistar大鼠随机分成对照组(n=6)、模型组(n=30)和PNS组(n=30).模型组、PNS组采用2-AFF/PH方法建立HOC增殖模型,PNS组大鼠建模时(即第一次2-AAF灌胃前1 h)予以PNS 25 mg/(kg·d)腹腔内注射,并持续至实验结束.模型组、PNS组在术后第4小时,第4、8、12、16天随机取6只大鼠检测.对照组大鼠未予特殊处理.采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化;免疫组织化学和细胞形态学方法计数HOC;免疫组织化学及Western blot分析p-ERK1/2蛋白水平.结果 对照组、模型组和PNS组术后第4小时未见HOC增殖.模型组术后第4天汇管区有HOC增殖反应,第8天HOC增殖达峰值,第12天HOC从汇管区向肝实质内浸润,第16天HOC增殖较第12天减少.与模型组比较,PNS组第4、8、16天HOC增殖均减少(均P<0.05),第12天HOC增殖增多(P<0.05).对照组大鼠肝组织p-ERK1/2蛋白水平很低,模型组p-ERK1/2蛋白表达术后各时点分别为对照组的(2.24±0.17)、(3.87±0.35)、(5.28±0.48)、(2.96±0.33)、(2.12±0.19)倍;PNS组各时点p-ERK1/2的表达分别为对照组的(1.56±0.23)、(2.77±0.19)、(3.53±0.35)、(3.62±0.45)、(1.36±0.16)倍.与模型组比较,PNS组术后第12天p-ERK1/2表达升高(P<0.01),第4小时,第4、8、16天表达均减少(均P<0.05).结论 在HOC介导肝再生过程中,HOC的p-ERK1/2表达与其增殖趋势相同;PNS可使大鼠肝脏的HOC增殖及p-ERK1/2的表达降低、滞后、持续时间延长.     

一贯煎对DMN肝纤维化大鼠肝卵圆细胞增殖分化的影响

[目的]探讨一贯煎有效逆转大鼠肝硬化的作用途径,促进中医药在组织结构重构研究中的发展.[方法]二甲基亚硝胺(DMN)制备大鼠肝硬化模型,于肝硬化造模成型后,给予一贯煎治疗,以Thyl.1为肝脏卵圆细胞(HOC)标记物,通过免疫组织化学、蛋白定量检测以及激光共聚焦检测技术,观察一贯煎对肝脏干细胞增殖及分化及相关因子的影响...     

三七总皂甙对大鼠体内肝卵圆细胞增殖的作用

目的 研究三七总皂甙(PNS)对大鼠体内肝卵圆细胞(HOC)增殖的影响.方法 选择体重150g左右的雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、模型组和PNS组.采用2-AAF/PH方法建立HOC增殖模型.常规组织学检查,OV-6、AFP及CK19免疫组化鉴定HOC,并观察PNS腹内注射后HOC增殖的变化.结果 对照组肝小叶、肝窦结构清晰,无增生反应.模型组和PNS组肝索结构紊乱,肝细胞坏死,汇管区伴有增生反应.与模型组比较PNS组肝组织破坏轻,恢复快,增生反应轻;模型组4d汇管区有明显HOC增殖反应,8d HOC增殖达峰值.PNS组各时间点HOC增殖显著少于模型组(P＜0.05),12d HOC增殖达峰值.结论 大鼠2-AAF/PH是理想的HOC增殖模型;PNS可调节体内HOC的增殖过程,使HOC增殖峰降低、持续时间延长.     

2-乙酰氨基芴对大鼠肝卵圆细胞增殖模型的影响

目的 在建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型的基础上，进一步研究2—乙酰氨基芴(AAF)对大鼠肝卵圆细胞增殖的影响。方法 按本室建立和改进的方案建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型，AAF剂量分别按10、20及25mg/kg给予，同时设单纯切肝对照组、假手术对照组及生理盐水对照组，重点观察大鼠肝组织结构变化及不同剂量下肝卵圆细胞增殖情况。结果 3个对照组大鼠肝组织内均未见到肝卵圆细胞，而3个实验组均见肝卵圆细胞增生；与10mg/kg剂量组比较，20mg/kg及25mg/kg两个剂量组大鼠肝组织内的肝卵圆细胞增殖更加明显，但25mg/kg剂量组大鼠死亡率较高，存活大鼠健康状况差。结论 AAF可诱导大鼠肝卵圆细胞增殖，剂量以20mg/kg较为理想。     

苦参碱对A 549细胞增殖和PinX1 mRNA表达的影响

目的探讨苦参碱对A549细胞增殖和PinX1mRNA表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱作用A549细胞48h,流式细胞仪检测增殖指数,RT-PCR检测PinX1 mRNA表达。结果随着苦参碱浓度的增加(0mg/ml、0.5mg/ml,1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml),A549细胞增殖指数(PI)逐渐下降(34.35±1.26、18.34±1.01、13.38±1.02、8.47±0.86、7.01±0.75),PinX1mRNA表达逐渐增强(PinX1/β-actin相对灰度值0.42、0.81、1.44、2.05、2.53),二者呈明显负相关(r=-0.89,P<0.05)。结论苦参碱呈浓度依赖性抑制A549细胞的增殖可能与增强PinX1mRNA的表达有关。     

大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定

为建立大鼠卵圆细胞增殖模型，分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究，SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-acetyailamif1uorene，2-AAF)，剂量分别为5、10、15、20mg／kg，连续给药6d，于第7天行三分之二部分肝切除，术后继续给药1周，每隔3d取肝组织行常规组织学观察，作细胞增殖试验及免疫组化染色。通过免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞(Magnetic activated cell sorting，MACS)，用免疫细胞化学及RT-PCR对纯化细胞进行鉴定。结果：10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8天较明显，至第11天达高峰，第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，其除表达卵圆细胞特异性抗原OV6外，尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CKl9。胚胎期肝细胞抗原AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达，同时还表达造血干细胞标记C-kit。以MACS纯化的C-kit阳性卵圆细胞，90％以上为OV6阳性，并有AFP、白蛋白、CK19 mRNA转录。结论：2-AAF剂量为10～20mg／kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞／前体细胞，利用C-kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞／前体细胞。     

佐剂关节炎大鼠肺功能变化与Notch1、Notch2/Jagged1、Jagged2通路的相关性

目的观察佐剂关节炎(AA)大鼠肺功能降低与肺组织Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的关系。方法将40只大鼠随机均分为正常组和模型组,模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(CFA)0.1 ml致炎,复制成AA模型。致炎30 d后,观察两组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数、肺功能、肺组织形态学变化,RT-PCR法检测肺组织Notch1、Notch2及Jagged1、Jagged2的表达。结果模型组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,肺功能参数用力肺活量(FVC)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、用力最大呼气流量(PEF)降低,肺组织Notch1、Jag-ged1、Jagged2的表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。相关分析显示,模型组大鼠肺功能参数FVC与Jagged1呈正相关,1s内平均呼气流量(FEV1/FVC)与Notch1呈正相关,FEF50与Jagged2呈正相关,FEF75与Notch1、Notch2呈正相关,与Jag-ged1呈负相关(P<0.05,P<0.01)。结论 AA大鼠在发生关节炎症的同时出现肺功能降低,而肺功能降低与Notch受体/配体呈高度相关,提示致炎后形成的免疫复合物沉积于肺组织,激活肺组织Notch信号通路,通过级联放大效应进一步导致肺功能降低。     

过表达Notch1对肿瘤细胞增殖的影响

目的通过在肿瘤细胞内过表达Notch1胞内段活性部分,模拟细胞Notch途径的上调,检测细胞增殖状态的变化。方法利用包含Notch1胞内段的逆转录病毒感染实验细胞。通过CBF-1报告载体检测细胞内Notch信号的激活程度,MTS法检测细胞增殖情况,并对细胞的周期分布进行检测。结果Notch1胞内段的表达引起Notch信号在不同细胞中的上调,并引起Hela和HepG2细胞的增殖抑制和BGC-823细胞的增殖加速,而对Chang细胞的增殖没有明显影响。结论Notch信号的上调能引起不同肿瘤细胞增殖状态的变化,对Notch在肿瘤基因治疗中的应用具有重要意义。     

Notch1，Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的:检测Notch1,Jagged1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达及其临床病理学意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达并分析它们与临床病理参数间的关系.结果:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌中表达的阳性强度分别为81.5%(53/65),83.1%(54/65)和93.8%(61/65),均明显高于正常支气管上皮组织的阳性强度(P＜0.05);NSCLC中Notch1和VEGF蛋白表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关(P＜0.05);Jagged1蛋白表达与患者病理类型和淋巴结转移有关.Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达三者两两间均呈显著正相关.结论:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白可能在肺癌发生发展中起重要作用;其高表达有可能作为预测NSCLC侵袭、转移的重要指标.     

大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏Notch1／Jagged1的表达及其意义

目的:观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后不同时期Notch1/Jagged1、纤维连接蛋白(FN)表达的变化,探讨在肾脏间质纤维化发病机制中的意义。方法:建立大鼠UUO模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和westernblotting动态观察(第1、3、7、14天)梗阻侧肾脏及假手术对照组Notch1/Jagged1mRNA、蛋白和FN的表达。结果:UUO模型梗阻侧肾脏Notch1/Jagged1mRNA蛋白及FN蛋白在输尿管结扎后第1、3、7、14天不同时间点均显著高于对照组和非梗阻侧肾脏(P<0.05或P<0.01),Notch1/Jagged1mRNA在第7天达高峰,但Jagged1于第1天达高峰,Notch1、FN在第14天达高峰。结论:在整体条件下,随着肾间质纤维化程度的加重,FN聚积也随之增加,同时Notch1/Jagged1表达增强,提示Notch1/Jagged1信号通路在肾间质纤维化发病机制中起重要作用。     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。     

Notch1和表皮生长因子受体信号通路在调节人舌鳞癌细胞增殖中的交互作用

目的 研究Notch1和表皮生长因子受体(EGFR)信号通路在调节人舌鳞癌细胞增殖中的交互作用.方法 通过分别瞬时转染编码Notch1胞内域的表达载体和靶向人EGFR基因的短发卡RNA(shRNA)的表达载体,以及受体酪氨酸激酶抑制剂 AGl478 处理,分别观察Notch1组成性活化、EGFR基因沉默以及阻断EGFR信号通路对人舌鳞癌细胞系Tea8113 细胞增殖及Notch1和EGFR表达的影响.用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹检测Notch1和EGFR的mRNA和蛋白的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性.结果 Notch1组成性活化抑制Tca8113细胞增殖,上调Notch1表达(mRNA分别为1.102±0.135和0.243±0.032,P<0.05)而下调EGFR表达(mRNA分别为0.083±0.009和0.605±0.075,P<0.05);EGFR基因沉默抑制TcaS113细胞增殖,下调EGFR表达(mRNA分别为0.148±0.019和1.175±0.132,P<0.05)而上调Notch1表达(mRNA分别为0.978±0.115和0.083±0.009,P<0.05);阻断EGFR信号通路对Tca8113细胞的EGFR表达无明显影响(P>0.05),但抑制细胞增殖并上调Notch1表达(P<0.05).结论 Notch1和EGFR信号通路在调节人舌鳞癌细胞增殖中可能存在双向调控的交互作用.     

脑缺血后处理对大鼠大脑海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4蛋白表达的影响

目的：探讨基于Notch1信号通路观察缺血后处理（CIP）对全脑缺血再灌注（I/R）大鼠海马区神经元中Cyclin D1和CDK4蛋白表达的影响,阐明其机制。方法：128只健康的雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组（改良的Pulsinelli四血管阻断法制作）、CIP组（在彻底再灌注之前进行反复3次的再通/阻断血管）和DAPT组（实施CIP之前3 h按10mg·kg^-1·d^-1腹腔注射DAPT）,每组32只。分别在缺血后6、24、48和72 h采用HE染色观察各组大鼠海马区神经元表现并计算存活率,免疫组织化学染色观察CyclinD1、CDK4和Notch1表达的细胞,Western blotting法观察各时间点大鼠海马区中Cyclin D1、CDK4和Notch1蛋白的表达水平。结果：HE染色,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区神经元结构损伤,各时间点海马区神经元存活率明显降低（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组相应时间点大鼠海马区神经元存活率明显升高（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组相应时间点大鼠海马区神经元存活率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学染色,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）,Notch1阳性细胞数明显增加（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）,Notch1阳性细胞数明显减少（P<0.05）。Western blotting法,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平升高（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Notch1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组的Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Notch1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：CIP对神经元的保护作用可能是通过提高Notch1蛋白活性和抑制Cyclin D1和CDK4蛋白实现的。     

Notch1受体和配体分子Jagged1蛋白在肝癌组织中的表达及意义

目的 探讨Notch1及Jagged1蛋白在肝脏肿瘤中的表达特点及其与肝癌的临床病理学特点的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测65例肝癌组织及其相应癌旁正常组织中Notch1和Jagged1蛋白的表达.结果 在肝癌和癌旁正常组织中,Notch1的阳性表达率分别为16.9％和90.8％;Jagged1的阳性表达率分别为10.9％和86.2％,两组间差异均有显著性(P=0.000).Notch1受体和Jagged1配体分子的表达与患者年龄、性别,肿瘤大小无关;Notch1受体表达与肝癌组织学分型、Edmondson分级及有无淋巴结转移无关(P＞0.05);而Jagged1配体表达则与肝癌组织学分型、Edmondson分级及有无淋巴结转移有关(P＜0.05);在肝癌组织中Notch1与Jagged1的表达呈正相关(r1=0.301,P =0.005).结论 Notch1蛋白和Jagged1蛋白可以作为诊断肝癌的特异性指标,也有望成为肝癌基因治疗的新靶点.     

抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞"归巢"并改善哮喘

目的 观察间充质干细胞（BMSCs）归巢调节哮喘Th1/Th“2 漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法 20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组：正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、BMSCs移植组（BMSCs）、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型,尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学,酶联免疫吸附法检测肺组织白介素（IL）-5、IL-13、IFN-γ,RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达,免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达,免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果 与NC组比较,MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低,IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高,Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）。与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高,BMSCs组Notch1、Jagged1 蛋白表达降低,BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低（P<0.05或P<0.01）。与BMSCs组比较,BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高,IL-13、Notch1mRNA表达降低（P<0.05）。结论 BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2“漂移”产生调节作用,Notch1/Jagged1通路可能参与其过程。