金水鲜胶囊联合放射治疗对肺腺癌A549细胞抑制率和VEGF表达影响的研究

[目的]研究金水鲜胶囊联合放疗对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用,同时检测采用两者联合治疗对肺癌细胞分泌的VEGF蛋白及mRNA表达的影响。[方法]体外培养肺腺癌A549细胞,将处于对数期的A549细胞随机分为4组:空白对照组(NC)、金水鲜组(JSX)、放疗组(RT)以及金水鲜与放疗联合组(JSX+RT),其中联合组又按照时序不同分为3个亚组:先金水鲜后放疗组(JSX→RT),先放疗后金水鲜组(RT→JSX),同时金水鲜联合放疗组(JSX+RT)。MTT法计算细胞生长抑制率,ELISA法测定VEGF蛋白表达的含量,RT-PCR技术检测各处理组VEGFmRNA的表达变化。[结果]①与对照组相比,各处理组肺腺癌细胞的生长速度随时间的改变都受到不同程度的抑制,其中以JSX+RT组最为明显,RT组其次,JSX组抑制肺腺癌细胞的增殖程度不如其他两个实验组。JSX+RT组抑制细胞增殖程度与空白对照组、JSX组、RT组相比,均具有显著统计学差异(P<0.05)。②各处理组细胞表达的VEGF蛋白含量有所下降,其中JSX组及JSX+RT组在48h时VEGF蛋白表达量下降的作用明显,与空白对照组及RT组相比,差异有显著统计学意义(P<0.05)。③与空白对照组相比,各处理组VEGFmRNA的表达均表现出下降趋势,在48h时JSX组及JSX+RT组与空白对照组、RT组相比,差异有显著统计学意义(P<0.05),RT组与空白对照组相比,差异有明显统计学意义(P<0.05)。[结论]金水鲜联合放疗可显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,下调VEGF蛋白以及mRNA的表达,间接降低新生血管的生成速度和数量,考虑为金水鲜胶囊在影响血管生成方面能增加放疗对肺癌的杀伤作用。     

缺氧对肺腺癌细胞HIF-α1、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达变化情况.方法对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTY法检测缺氧对A549细胞增殖的影响;Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力;分别采用RT-PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF-1α和GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强.正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达,随着缺氧时间的延长,HIF-1α和、GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P＜0.01).结论氯化钴诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平,加速肺癌细胞的生长和转移,使之进一步耐受缺氧.     

内皮抑素联合放射治疗对A549细胞生长及HIF-1表达的影响

背景与目的 已有研究表明,放射治疗会诱导肿瘤细胞高表达HIF-1.本研究通过联合使用放射治疗和endostatin联合处理肿瘤细胞,研究这两种治疗方法在体外对人肺腺癌细胞A549周期及HIF-1的影响和机制.方法 流式细胞仪分析内皮抑素对A549细胞增殖周期的影响.联合内皮抑素(ES)和放射治疗(RT)处理肺腺癌细胞A549,四唑氮蓝法(MTT)检测处理前后细胞生长抑制率的变化,酶联免疫吸附法(Elisa)检测处理前后细胞中HIF-1的表达情况.结果 内皮抑素对A549细胞具有细胞周期阻滞作用,可将其阻滞于G2/M期和S期.各种处理方法对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用随时间的增加而加强,其中联合应用放射治疗与内皮抑素治疗对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用更为明显.联合放射治疗和内皮抑素处理肺腺癌A549细胞,可以使该细胞系HIF-1的含量较单用放射治疗少.结论 内皮抑素联合放射治疗对抑制人肺腺癌A549细胞的生长具有协同作用,这种协同作用可能来源于:内皮抑素可以使A549细胞阻滞于G2/M期及S期,从而抑制A549细胞的增殖;内皮抑素可以抑制肿瘤细胞本身具有的以及放射后诱导的HIF-1的产生,HIF-1是肿瘤细胞耐受放化疗的因素之一,因此提高放射治疗的疗效.     

谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨谷氨酰胺（glutamine,Gln）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α、NF-κB表达的影响。［方法］ 体外培养肺腺癌A549细胞株,CCK-8法检测不同浓度Gln（2、4、8、16、32、64 mmol/L）对A549细胞的增殖影响,筛选适宜浓度。Transwell 实验检测细胞迁移能力,ELISA法和Western Bolt法分别检测TNF-α、NF-κB p65蛋白表达。［结果］ （1） Gln对A549细胞的作用与干预浓度有关,缺乏Gln时细胞生长受限;低浓度Gln（2、4、8mmol/L）对细胞增殖无明显抑制作用;高浓度Gln（16、32、64mmol/L）作用下抑制作用明显（P<0.01）并呈时间依赖性,且32mmol/L和64mmol/L两组作用无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,Gln组明显降低A549细胞迁移数;高浓度Gln组明显降低TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）,但32mmol/L和64mmol/L组之间无统计学差异（TNF-α分别为14.671±0.842pg/ml、14.867±1.21pg/ml,NF-κB p65分别为0.548±0.042、0.474±0.077）（P>0.05）。［结论］ Gln对肺腺癌A549细胞的作用与浓度有关,32mmol/L可能为最适抑制浓度。Gln可能通过下调TNF-α和NF-κB p65蛋白表达并抑制A549细胞的迁移发挥抗肺腺癌作用。     

Celecoxib对放射所致DNA损伤修复与凋亡的影响

目的探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib影响肺腺癌A549细胞凋亡及DNA损伤修复的放疗增敏机制。方法 A549细胞分为对照组(相同体积的DMSO)、药物组(celecoxib)、照射组(6MV X射线6 Gy)、联合组(celecoxib+6Gy X射线(药物作用24 h后))。CCK-8法检测celecoxib对肺腺癌A549细胞的IC50。RT-PCR、Western blot法检测细胞DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 Celecoxib抑制A549细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性,48 h的IC50值为58.74μmol/L。联合组DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达量明显低于对照组、药物组、照射组(P<0.01)。联合组细胞凋亡率明显高于对照组、药物组和照射组(P<0.01)。结论 Celecoxib通过抑制放射所致DNA损伤修复及促进凋亡,从而达到放疗增敏作用。     

EGFR-TKI联合COX-2抑制剂抑制肺腺癌A549细胞的增殖及其机制

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)吉非替尼联合环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法:实验设空白对照组、吉非替尼组、塞来昔布组、吉非替尼+塞来昔布组。倒置相差显微镜下观察A549细胞形态变化,MTT法检测A549细胞增殖,流式细胞术检测A549细胞周期及凋亡,Western blotting检测A549细胞中EGFR、p-EGFR、COX-2的表达。结果:吉非替尼和塞来昔布均可抑制A549细胞的增殖,可见细胞活性下降,G1期细胞阻滞及细胞凋亡增加;联合用药较单药组A549细胞活性下降更明显,G1期阻滞细胞增加,且细胞凋亡增加。吉非替尼或塞来昔布作用前后A549细胞EGFR表达无变化,但联合用药组p-EGFR及COX-2的表达较单药组显著下降。结论:吉非替尼联合塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,其机制可能与抑制EGFR的活化及下调COX-2的表达有关。     

β-榄香烯对人肺腺癌裸鼠移植瘤放疗增敏作用与HIF-1α CAⅨ的相关性研究

目的:建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型,研究β-榄香烯对移植瘤的放疗增敏效应,寻找最佳增敏剂量,并探讨放疗增敏机制是否与HIF-1α、CAⅨ具有相关性.方法:采用细胞悬液接种法建立裸鼠移植瘤模型,待移植瘤体积达0.8～1.0 cm3时,将裸鼠随机分组,观测各组移植瘤的体积倍增时间.通过计算增敏系数,获得最佳增敏剂量.RT-PCR及免疫组化方法检测HIF-1α表达,免疫组化检测CAⅨ的表达.结果:成功建立裸鼠移植瘤模型.25、45、100 mg/kg三种浓度β-榄香烯的增敏系数EF值分别为0.84、1.24、2.04,最佳增敏剂量为45 mg/kg.药物组、放疗组与空白组比较,HIF-1αmRNA表达明显增强(P＜0.01),药物组与放疗组之间HIF-1αmRNA表达没有差异(P＞0.05),联合组与其他各组比较,HIF-1αmRNA表达明显降低(P＜0.01).各组HIF-1α的免疫组化情况:药物组与空白组比较HIF-1α表达略增强(P＞0.05);放疗组与空白组比较HIF-1α表达明显增强(P＜0.05),联合组与其他各组比较HIF-1α表达明显降低(P＜0.01).各组CAⅨ的免疫组化情况:放疗组与空白组比较CAⅨ表达略增强(P＞0.05),药物组与空白组比较CAⅨ表达增强(P＜0.05),联合组与其他各组比较,CAⅨ表达明显降低(P＜0.05).结论:本研究证实β-榄香烯的最佳增敏剂量为45 mg/kg,与放疗联合明显抑制HIF-1α、CAⅨ的表达,提示β-榄香烯通过改善乏氧状况达到放射增敏的作用,值得进一步研究.     

雷帕霉素联合缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其分子机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶向(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路抑制剂雷帕霉素联合缺氧诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的分子机制.方法:应用雷帕霉素联合缺氧处理人肺腺癌细胞株A549后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡情况,实时定量PCR和Western印迹法分别检测A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达变化,Western印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α)表达的改变.结合染色质免疫共沉淀技术,探讨雷帕霉素通过诱导细胞凋亡而发挥抗肺癌效应的分子机制.结果:雷帕霉素联合缺氧可在体外诱导A549细胞凋亡,雷帕霉素联合缺氧可诱导A549细胞中survivin mRNA(P＜0.01)和蛋白的表达水平明显下调.雷帕霉素通过抑制缺氧条件下诱导的HIF-1α表达增加,进而抑制survivin的表达.结论:雷帕霉素通过抑制缺氧条件下A549细胞中HIF-1α的表达,降低HIF-1α与survivin核心启动子的结合,下调缺氧引发的凋亡抑制基因survivin表达,进而发挥抗肿瘤的生物学效应.     

缺氧对肺腺癌细胞HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的：探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT—1、MMP-2的表达变化情况。方法：对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养，采用MTT法检测缺氧对A549细胞增殖的影响；Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力；分别采用RT—PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF—1α和GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强。正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF—1α、GLUT—1、MMP-2的表达，随着缺氧时间的延长，HIF—1α和、GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势，与正常对照组比较，各缺氧组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：氯化钴诱导缺氧可以上调HIF—1α、GLUT—1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平，加速肺癌细胞的生长和转移，使之进一步耐受缺氧。     

不同氧浓度下Notch1-4受体亚型在肺腺癌细胞A549中的表达与机制

目的探讨不同氧浓度下Notch1-4受体亚型在肺腺癌细胞A549中的表达及其机制。方法分别在正常氧浓度和低氧条件下培养肺腺癌A549细胞,采用Western blotting及RT-PCR方法分别检测Notch1-4、HIF-1α蛋白和mRNA表达。结果 Notch1-4受体各亚型在A549细胞中均有表达,Notch1蛋白在低氧浓度较正常氧浓度下表达偏高,差异有统计学意义(P <0. 05)。Notch2、3和4蛋白在不同氧浓度下表达比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。Notch1-4受体各亚型在A549细胞中均有表达,Notch1 mRNA在低氧浓度较正常氧浓度表达偏高(P <0. 05),Notch2、3和4 mRNA不同氧浓度下表达比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。HIF-1αmRNA及蛋白在1%O2及21%O2环境下在A549细胞中均有表达,且在低氧浓度较正常氧浓度下表达偏高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论低氧条件下,Notch1和HIF-1α在A549细胞中高表达,HIF-1α可能通过调节Notch1参与肺腺癌增殖。     

康莱特注射液对吉非替尼诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡影响的实验研究

目的 探讨康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响。 方法 应用MTT法计算康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的半数抑制浓度（IC50）,检测康莱特注射液（5、10、20、40、80、100、160 μl／ml）、吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、20、40 μmol／L）以及康莱特注射液（80 μl／ml）联合吉非替尼（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol／L）作用于人肺腺癌A549细胞株24、48、72 h的增殖抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI 双标法检测康莱特注射液、吉非替尼及两药联合作用于A549细胞48 h后的凋亡率;免疫细胞化学法检测各药物处理组作用于A549细胞48 h后FAS、AKT2蛋白表达;RT-PCR技术检测各组FAS mRNA、AKT2 mRNA的表达水平。均设未加药的A549细胞为空白对照组。结果 康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的IC50为80 μl／ml。康莱特注射液联合吉非替尼作用于A549细胞的增殖抑制率高于两单药组和空白对照组,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。两者的联合作用在一定浓度范围内呈现出协同的抗瘤效果。流式细胞术检测显示,两药联合组的细胞凋亡率显著高于两单药组和空白对照组（P＜0.05）。免疫细胞化学和RT-PCR检测显示,与空白对照组比较,康莱特组和两药联合组FAS蛋白和mRNA的表达水平均升高（P＜0.05）,AKT2蛋白和mRNA表达水平均下调（P＜0.05）。结论 康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株有明显的促凋亡作用,康莱特注射液可能增加人肺腺癌A549细胞对于吉非替尼的敏感性。     

紫云英苷通过上调PHD2抑制缺氧诱导的卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的 探索紫云英苷(ATG)抑制卵巢癌细胞HIF-1α表达及细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法 分别给予缺氧条件培养的OVCAR-8和SK-OV-3细胞ATG(ATG组)或ATG联合PHD2抑制剂IOX2(ATG+IOX2组)处理24h,并以仅缺氧培养24h的细胞为空白对照。采用Western blot和实时荧光定量PCR检测各组细胞HIF-1α、PHD2、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白和mRNA表达变化;以正常条件培养的细胞为阴性对照,采用缺氧试剂盒检测ATG处理后细胞缺氧状态变化;采用Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;采用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖活力。分别以梯度浓度的ATG联合梯度浓度的卡铂或顺铂处理OVCAR-8和SK-OV-3细胞72h后采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力,并进行联合效应分析。结果 缺氧培养条件下,与空白对照组相比,ATG组OVCAR-8和SK-OV-3细胞PHD2蛋白及mRNA表达均升高,细胞增殖和侵袭能力均降低,HIF-1α蛋白表达均减少,PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA表达均降低,但HIF-1α的mRNA水平以及细胞缺氧状态无明显变化;而与ATG组相比,ATG+IOX2组OVCAR-8和SK-OV-3细胞增殖和侵袭能力均增加,PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达及HIF-1α蛋白表达均升高,但HIF-1α的mRNA水平无明显变化。此外,ATG可明显增强OVCAR-8和SK-OV-3细胞对顺铂和卡铂的敏感性,具有较好的联合效应。结论 ATG可通过上调PHD2表达,促进缺氧诱导的HIF-1α降解,进而抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

重组人血管内皮抑素联合放疗对人类肺癌A549细胞株生长抑制及凋亡的影响

目的研究重组人血管内皮抑素（ES,商品名：恩度）联合放射治疗对肺腺癌A549细胞的生长抑制以及血管内皮生长因子（VEGF）分泌水平和细胞凋亡的影响。方法将培养至对数生长期的A549细胞分为空白对照组、单纯放疗组、单用ES组、联合治疗组,其中在联合治疗组中根据使用放疗和内皮抑素处理的时序不同又分为先ES后放疗组（ES—RT）、先放疗后ES组（RT—ES）、ES与放疗同时进行组（RT＋ES）。放疗处理时给予^60Co照射,2Gy,单次照射;ES处理时在细胞培养液中给予ES10ul。ELISA法测定ES联合放疗对肺癌A549细胞株VEGF分泌的影响并绘制细胞生存曲线,Hoechst染色观察细胞凋亡。结果ES和放疗均对肺癌A549细胞有生长抑制作用,但联合治疗组的抑制作用较其他各组更加明显且差异性具有统计学意义（P〈0．05）。处理后的A549细胞VEGF表达量在ES组、联合治疗的各亚组均较空白对照组明显减少（P〈0．05）。ES组、RT组、联合治疗的各亚组的凋亡率均较空白对照组明显升高（P〈0．05）。结论ES联合放疗与单用ES和单纯放疗相比较,前者在抑制肿瘤细胞生长以及促进A549细胞的凋亡方面效果更好。使用ES下调肺癌A549细胞VEGF的表达,具有增加放射治疗敏感性的作用。ES与放疗联合时序的不同,对放疗增敏作用的影响无明显区别。     

HIF-1在TGF-β介导的ANGPTL4表达上调过程中的作用

目的 通过RNA干扰技术沉默A549细胞中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,初步探讨HIF-1在TGF-β介导的血管生成素样基因4(ANGPTL4)表达上调过程中的作用.方法 转染了HIF-1α-shRNA 的A549细胞(实验组)、转染空质粒的A549细胞(对照组)以及未转染的A549细胞(空白组)分别给予不同时间的TGF-β1干预,采用RT-PCR检测各组细胞中的HIF-1α与ANGPTL4的mRNA水平,Western blot检测各组细胞中HIF 1α与ANGPTL4蛋白的表达变化.结果 TGF-β1处理0、12、24、48 h后,相比于对照及空白组,实验组中HIF-1α与ANGPTL4的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),且对照组及空白组中HIF-1α与ANGPTL4的mRNA及蛋白水平均与TGF-β1干预具有显著的时效相关性(P＜0.05).而实验组内HIF-1α与ANGPTL4未观察到上述变化趋势.结论 HIF-1可能是ANGPTL4的上游调控基因,并且参与TGF-β-Smad信号通路介导的ANGPTL4表达上调.     

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢（P〈0.05）。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为（0.59±0.28）g,明显轻于空白对照组[（1.90±0.18）g]和无意义序列转染组[（1.66±0.24）g,P〈0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.45±0.04）%和（24.56±5.83）%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.32±0.02）%和（29.08±3.99）%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组（P均〈0.05）。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。     

敲低WTAP基因对肺腺癌A549 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨成肾细胞瘤1-结合蛋白（Wilms?s? tumor 1- associating protein,WTAP）对人肺腺癌A549 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选用人肺腺癌A549 细胞和HEK293T,设计两组shWTAP干扰序列,构建慢病毒载体质粒,在HEK293T细胞中包装慢病毒后感染人肺腺癌A549 细胞,对照组感染277 空载体质粒。用qPCR和WB实验检测A549 细胞中WTAP mRNA和蛋白的表达水平,用BrdU 实验、细胞划痕愈合实验、Transwell 实验分别检测A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：成功构建shWTAP-1 和shWTAP-2 两种慢病毒质粒,感染A549 细胞后,与对照组比较,A549 细胞中WTAP mRNA和蛋白表达水平显著下调（均P<0.05）,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低（均P<0.05）。结论：敲低WTAP 基因的表达对人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力有显著抑制作用,WTAP基因的表达与肺腺癌的发生发展相关,WTAP可能是肺腺癌诊疗的一个潜在靶标。     

MicroRNA-10b对人肺腺癌细胞株A549增殖及侵袭能力的影响

目的探讨miRNA-10b对人肺腺癌细胞A549的增殖及侵袭能力的影响。方法用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒转染入A549,实验设置空白对照组、阴性对照组和miRNA-10b质粒转染组,转染后荧光显微镜下观察转染效率,实时定量PCR检测各组细胞miRNA-10b的表达,细胞增殖实验检测各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,miRNA-10b质粒转染组细胞转染后增殖速度加快,细胞侵袭能力增强(P<0.05)。结论 miRNA-10b可以促进A549细胞的增殖及侵袭能力。     

沉默表皮生长因子受体的表达对肺腺癌A549细胞自噬的影响

目的：研究降低表皮生长因子受体（EGFR）的表达对肺腺癌A549细胞自噬活性的影响。方法：A549细胞中加入EGF处理,分为4组,即未处理组和10、25、50 ng/mL EGF处理组,用Western blot方法检测EGFR的蛋白表达;采用转染siRNA降低肺腺癌细胞A549细胞EGFR的表达,将A549细胞分为4组,即未处理组、EGFR siRNA-1组、EGFR siRNA-2组和EGFR siRNA-3组,分别采用Real-time RT-PCR和Western blot方法检测EGFR mRNA和蛋白表达水平来评价3个siRNA的沉默效果;将A549细胞分为转染EGFR siRNA组、转染空载体组、转染试剂组（只加入等量转染试剂）及未处理组,且4组均加入等量的50 ng/mL EGF,用Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,观察沉默EGFR表达对自噬活性变化;A549细胞分为转染EGFR siRNA组和转染空载体组,用透射电子显微镜观察自噬小体。结果：转染siRNA后A549细胞EGF蛋白的表达降低,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化水平升高（P < 0.05）,细胞内出现较多自噬小体,自噬活性明显增加。结论：降低EGFR的表达可以提高肺腺癌A549细胞自噬活性。     

NDV-HN致人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨NDV-HN诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的相关机制。［方法］ （1）构建包含绿色荧光素蛋白（GFP）及NDV-HN的慢病毒sfGFP-HN载体,用293V细胞包装慢病毒Lv-sfGFP-HN,用293V细胞进行空载质粒转染组（空载组）慢病毒包装,命名为Lv-sfGFP;（2）以空载组A549-sfGFP细胞和空白组A549为对照,用慢病毒转染方法建立稳定表达NDV-HN蛋白的A549细胞株,即A549-sfGFP-HN细胞株,RT-PCR、Western blot检测A549细胞NDV-HN蛋白的表达;（3）分别在A549-sfGFP-HN和A549两组细胞中加入顺铂,流式细胞术检测细胞凋亡;（4）在基因水平和蛋白水平上分别用RT-PCR和Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。［结果］ （1）Lv-sfGFP-HN和Lv-sfGFP慢病毒分别转染A549细胞后,只在转染组A549-sfGFP-HN细胞检测到NDV-HN蛋白。（2）转染组A549-sfGFP-HN细胞凋亡率明显高于空白组A549细胞 (P＜0.01),转染组A549-sfGFP-HN细胞加入顺铂后,其细胞凋亡率明显增加。（3）转染组A549-sfGFP-HN细胞与空载质粒转染组A549细胞和空白组A549细胞相比,凋亡相关蛋白Bcl-2表达量明显下调(P＜0.01)。［结论］ 慢病毒转染NDV-HN到A549细胞后导致A549-sfGFP-HN细胞出现凋亡,且与Bcl-2下调有关。转染NDV-HN的肺癌细胞联合使用抗癌药物顺铂,增加了肺癌细胞凋亡率。