那法瑞林对正位和异位子宫内膜雌激素受体含量的影响

本实验旨在研究那法瑞林(Naf)对兔正位和异位子宫内膜组织内雌激素受体(ER)含量的影响. 以手术方法制备兔异位内膜模型后, 将兔分为对照组,Naf 1, 3, 10 μg·kg^-1·d^-1, sc 治疗组以及手术切除双侧卵巢(OVx) 组. 6周后发现, 经Naf和OVx治疗的兔, 其子宫的重量及其内膜组织内的ER数量明显减少. 但对异位子宫内膜组织内ER的免疫组织化学分析结果表明, Naf长期应用并未引起异位内膜ER数量的明显改变. 结果提示Naf对兔子宫的抑制作用可能通过ER介导, 而其对异位子宫内膜的抑制作用则可能与ER无关.     

强效GnRH激动剂那法瑞林对兔异位子宫内膜的抑制作用

目的研究强效促性腺激素释放激素（ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ，ＧｎＲＨ）激动剂那法瑞林（ｎａｆａｒｅｌｉｎ，Ｎａｆ）对兔异位子宫内膜的抑制作用。方法以手术方法制备兔异位子宫内膜模型后，将动物分为对照组、Ｎａｆ（１，３，１０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１各１组，ｓｃ）治疗组，丹那唑（ｄａｎａｚｏｌ，Ｄａｎ，８０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｉｇ）治疗组以及手术切除双侧卵巢组（ｂｉｌａｔ－ｅｒａｌｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｙ，ＯＶＸ）。结果６ｗｋ后发现，经Ｎａｆ治疗的动物其异位内膜的体积明显减小，其中３和１０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１剂量组的疗效与ＯＶＸ组相似。Ｄａｎ尽管也能引起异位内膜萎缩，但其疗效较Ｎａｆ１０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１和ＯＶＸ有显著差别。另外，Ｎａｆ治疗组动物的血清雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）水平也明显下降。结论Ｎａｆ可明显抑制兔异位子宫内膜的生长，该作用与兔血清内Ｅ２水平下降有关。     

丙氨瑞林对子宫内膜异位症兔子宫内膜雌激素受体含量的影响

丙氨瑞林〔(Ｄ Ａｌａ6,ｐｒｏ9ＮＨＥｔ)ＬＨＲＨ ,Ａｌａ〕是治疗子宫内膜异位症的一种ＬＨＲＨ类似物。已知该药通过抑制下丘脑 垂体 性腺轴 ,降低血雌二醇 (ｅｓｔｒａｄｉｏｌ,Ｅ2 )水平而使异位子宫内膜萎缩[1] 。但体内雌二醇降低后通过何种机制抑制异位内膜生长目前还不清楚。本文采用异位内膜病理模型 ,研究了Ａｌａ对兔正位和异位子宫内膜ＥＲ含量的影响 ,旨在为该药治疗子宫内膜异位症的机制提供新的实验依据。1　材料与方法1.1　 试剂　Ａｌａ由上海丽珠东风生物技术有限公司提供 ;[3 Ｈ]Ｅ2 购于上海原子核研究所 ;己烯雌酚…     

人m3受体单克隆抗体的研制

目的：制备抗人m3受体肽链的单克隆抗体。方法：人工合成人m3受体亚型特异的细胞外氨基端肽链段,与血蓝蛋白偶联,免疫Balb/c小鼠,制备m3受体的单克隆抗体。用PEG－6000二步沉淀法与Sephadex G-50柱层析分离纯化技术。用ELISA、免疫组织化学和放射配基法鉴定抗体的特异性。结果：抗体与m3肽链、大鼠唾液腺及大脑皮质膜蛋白发生特异性的结合,不与m4肽链发生结合。抗体能抑制^3H-QNB与大鼠唾液腺膜蛋白的结合,不抑制^3H-QNB与大鼠心肌的结合,也不抑制^3H-PZ与大鼠大脑皮质膜蛋白结合。免疫组织化学结果显示唾液腺呈棕色阳性反应,而心肌呈阴性反应。结论：本研究制备的人m3受体单克隆抗体具有高的特异性,可专一性识别m3受体。     

TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者血清、在位内膜、异位内膜中的表达变化

目的 本研究旨在探讨TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者的血清、在位内膜、异位内膜的表达变化规律,以期对子宫内膜异位症部分发病机制进行研究.方法 随机选择2013年10月至2015年10月行手术治疗的子宫内膜异位症患者70例作为研究对象,其中痛经组45例,无痛组25例.另外选择同时期手术的子宫肌瘤患者30例,作为对照组.依据视觉模拟评分法将痛经组45例患者分组,包括轻度、中度和重度痛经患者各15例.在手术前空腹取静脉血,测定下列指标血清神经生长因子(NGF)、缓激肽(BK)和前列腺素F2α(PGF2α),手术中采集在位内膜及异位内膜标本,分别采用免疫组化法和免疫印记检测法检测在位内膜组织和异位内膜组织中NGF、BKB1R、TRPV1表达水平.结果 子宫内膜异位症痛经组患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量显著高于对照组和无痛组(P<0.05);血清中NGF表达与PGF2α以及BK表达与PGF2α表达均呈正相关(P<0.05).而痛经患者按照VAS分级从轻度、中度和重度上升,患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量亦呈逐渐升高趋势(P<0.05),Pearson相关分析也表明血清中NGF、BK和PGF2α表达均与VAS呈正相关(P<0.05).通过免疫组化和免疫印记方法检测对在位内膜和异位内膜进行研究发现NGF、BKB1R、TRPV1主要定位于细胞浆,在位、异位内膜的腺体内均有表达.痛经组患者在位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组和对照组(P<0.05);而痛经组患者异位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组(P<0.05).相关性亦表明NGF与TRPVl,BKB1R与TRPV1表达呈正相关(P<0.05).结论 TRPV1及其致敏因子NGF、BKB1R、PGF2α可能在子宫内膜异位症患者痛经的发生机制中发挥重要作用.     

异位内膜氧化应激及雌激素受体水平与盆腔痛关系的研究

摘要:目的 探讨异位内膜氧化应激 （OS） 及雌激素受体 （ER） 水平与盆腔痛的关系。方法 取轻、 中、 重度盆腔痛子宫内膜异位症 （EMs） 患者异位内膜作为轻度组 （29 例）、 中度组 （34 例） 及重度组 （26 例）, 取正常子宫内膜作为对照组 （30 例）。采用黄嘌呤氧化酶法检测和对比各组内膜中超氧化物歧化酶 （SOD） 水平; 采用硫代巴比妥酸比色法检测和对比各组内膜中丙二醛 （MDA） 水平; 采用免疫组化法检测和对比各组内膜中 ER 水平; 分析 3 组异位内膜中 MDA、 SOD 与 ER 水平相关性。结果 3 组异位内膜中 SOD 水平均低于对照组, MDA 及 ER 水平均高于对照组（均 P<0.05）; 3 组异位内膜中, 随疼痛程度增加, SOD 水平逐渐降低, MDA 及 ER 水平逐渐升高 （均 P<0.05）; 轻度组内膜中 MDA 水平与 ER 水平无相关性, 中度及重度组内膜中 MDA 水平与 ER 水平呈正相关 （P<0.05）, 3 组异位内膜中 SOD 水平与 ER 水平均无相关性。结论 异位内膜存在 OS 及 ER 过表达, 二者参与 EMs 盆腔痛的发生并发挥协同作用。     

SIRT1、SIRT2和IL-37在子宫内膜异位症患者异位内膜组织的表达

目的 探讨 Sirtuin1（SIRT1）、Sirtuin2（SIRT2）及白细胞介素-37（IL-37）在正常子宫内膜组织及异位子宫 内膜组织表达的差异。方法 收集正常人子宫内膜组织及异位症患者异位内膜组织各 30例,采用免疫组织化学染 色检测 SIRT1、SIRT2及 IL-37蛋白的表达情况。结果 子宫内膜异位症患者异位内膜组织中 SIRT1、SIRT2、IL-37的 阳性表达率分别为 33.0%、20.0%、36.7%,均较正常子宫内膜组织（分别为 90.0%、86.7%、86.7%）显著降低（P＜0.05）。 不同月经周期对子宫内膜 SIRT1、SIRT2及 IL-37的表达无明显影响（P＞0.05）。结论 子宫内膜异位症患者异位内 膜中 SIRT1、SIRT2及 IL-37表达水平较低,提示子宫内膜异位症患者的异位内膜组织可能存在炎症反应。     

TCDD暴露对子宫内膜异位症模型小鼠在位内膜组织PR亚型和DNMT-1表达的影响

目的探讨TCDD暴露小鼠子宫内膜异位症模型在位内膜DNA甲基转移酶-1(DNMT-1)、PR-A、PR-B的表达,以及PR-A、PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度。方法 60只C57BL/6雌性小鼠以2∶1与30只C3H雄性小鼠随机合笼交配,根据母鼠妊娠第8天和雌性子鼠出生后21 d所暴露TCDD的剂量(μg/kg)分为5组,0/0组、0/3组、3/0组、3/3组及3/10组。每组均为12只雌性子鼠。以上组别除0/0组外,均于出生后49 d再次暴露TCDD(3μg/kg),出生后第70天给予TCDD(3μg/kg)并实施自体子宫内膜移植术构建小鼠子宫内膜异位症模型,并且于术后3、6、9周各暴露1次TCDD(3μg/kg),术后12周取阴道脱落细胞将处于动情前期雌性子鼠脱臼处死。取其在位内膜制成蜡块,免疫组化SP法检测在位内膜DNMT-1、PR-A、PR-B的表达,以及甲基化特异PCR(MSP)检测PR-A、PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度。结果 (1)DNMT-1在3/3组中的表达显著高于0/0组(P<0.01),在3/10组中的表达显著高于3/3组(P<0.01);PR-B在0/0组中的表达显著高于3/3组(P<0.01),在3/3组中的表达显著高于3/10组(P<0.01);4组PR-A的表达经比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度3/3组中的表达高于0/0组(P<0.05),在3/10组中的表达高于3/3组(P<0.05);4组PR-A基因启动子区Cp G岛甲基化程度经比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论自胚胎期至成年期持续暴露TCDD有可能通过上调在位子宫内膜DNMT-1的表达,从而使PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度增强,致使PR-B表达减弱,促进了内异症的发生与发展。     

小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体放射配基受体结合分析方法

目的　建立简便、快速的小鼠腹腔巨噬细胞PAF放射配基受体结合分析法 ,考察巨噬细胞表面PAF受体的特性。方法　以♂C5 7BL/ 6小鼠腹腔巨噬细胞为受体材料 ,[3 H] PAF为标记配基 ,非膜过滤法进行结合放射配基分离 ,液闪计数测定。结果　小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体结合符合简单单位点受体结合模型 ,Scatchard分析求出的PAF受体结合参数Bmax=10 0 2fmol·1× 10 6cells-1,KD=3 2nmol·L-1。 [3 H] PAF与小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体的结合呈现单一、饱和特点 ,并可被特异性PAF受体拮抗剂BN5 2 0 2 1竞争性抑制。结论　利用小鼠腹腔巨噬细胞贴壁特性 ,采用非滤过法处理细胞 ,能够在保持受体生理学活性的状态下 ,用于特异性PAF受体拮抗剂的筛选     

性激素受体和基质金属蛋白酶在子宫内膜异位症的表达

目的检测雌、雄激素受体（ER、PR）和MMP-1在子宫内膜异位症（EMS）患者的异位内膜和在位内膜中表达,探讨三者在子宫内膜内异症发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学PV-9000法分别检测ER、PR和MMP-1的表达。研究组：84例EMS的异位内膜和44例在位内膜;对照组：32例子宫肌瘤者正常子宫内膜。结果异位内膜组织中ER、PR的表达明显低于正常内膜组织和在位内膜组织（P〈0.01、P〈0.05）,而异位内膜组织中MMP-1的表达强度明显高于正常内膜组织（P〈0.05）;在位内膜组织ER、PR表达却明显高于正常内膜组织（P〈0.05）。结论ER、PR和MMP-1在异位内膜和EMS在位内膜中的异常表达,可能与EMS的发生发展有关。     

国产那法瑞林对大鼠、兔异位子宫内膜的抑制作用

采用大鼠和兔子宫内膜异位模型，以亮丙瑞林、达那唑作为阳性对照，观察那法再林对异位子宫内膜的抑制作用。结果表明那法瑞林皮下注射0．5、1．5、5μg/kg和鼻腔给药30、100μg/kg对异位子宫内膜均有明显抑制作用，且具有明显的剂量依赖性。皮下注射产生的抑制作用比鼻腔给药强。那法瑞林对异位子宫内膜的抑制作用较亮丙瑞林、达那唑强，相对于亮丙瑞林其对异位子宫内膜抑制效价，在大鼠为5．47：1，在兔为10．5：1。     

Evaluation of drug-muscarinic receptor affinities using cell membrane chromatography and radioligand binding assay in guinea pig jejunum membrane

AIM: To study if cell membrane chromatography (CMC) could reflect drug-receptor interaction and evaluate the affinity and competitive binding to muscarinic acetylcholine receptor (mAChR). METHODS: The cell membrane stationary phase (CMSP) was prepared by immobilizing guinea pig jejunum cell membrane on the surface of a silica carrier, and was used for the rapid on-line chromatographic evaluation of ligand binding affinities to mAChR. The affinity to mAChR was also evaluated from radioligand binding assays (RBA) using the same jejunum membrane preparation. RESULTS: The capacity factor (k') profiles in guinea pig jejunum CMSP were: (-)QNB (15.4)>(+)QNB (11.5)>atropine (5.35)>pirenzepine (5.26)>4-DAMP (4.45)>AF-DX116 (4.18)>pilocarpine (3.93)>acetylcholine (1.31). These results compared with the affinity rank orders obtained from radioligand binding assays indicated that there was a positive correlation (r2= 0.8525, P<0.0001) between both data sets. CONCLUSION: The CMC method can be used to evaluate drug-receptor affinities for drug candidates.     

桂枝茯苓对子宫内膜异位症大鼠异位内膜组织生存素和半胱氨酸蛋白-3表达的影响

目的研究桂枝茯苓对子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜组织生存素(Survivin)和半胱氨酸蛋白-3(Caspase-3)表达的影响。方法自体移植法建立EMs模型,随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组15只。模型组均予以0.9%NaCl 2 mL;对照组予以0.52 mg·mL^-1米非司酮混悬液2 mL;低、中、高剂量实验组分别予以29,58和116 mg·mL^-1桂枝茯苓混悬液2 mL。5组大鼠均予以灌胃给药,每天1次,连续用药28 d。取子宫内膜组织,用免疫组织化学法检测Survivin和Caspase-3的表达量。结果模型组、对照组和低、中、高剂量实验组的Survivin阳性表达率分别为92.86%,26.67%,60.00%,33.33%和28.57%,Caspase-3阳性表达分别为14.29%,86.67%,46.67%,73.33%和85.71%,对照组和低、中、高剂量组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论桂枝茯苓治疗EMs的作用机制可能是通过下调Survivin在EMs中的高表达,激活细胞中的Caspase-3活化途径,从而抑制异位内膜的增长。     

异位子宫内膜芳香化酶P450A的表达及其意义

目的研究异位子宫内膜及在位内膜P450芳香化酶mRNA表达,探讨其在子宫内膜异位症发病中的作用和临床意义。方法采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)技术检测45例卵巢异位子宫内膜、22例盆腹膜子宫内膜异位病灶、32例在位内膜和35例对照组子宫内膜中P450芳香化酶(P450A)mRNA的表达。结果67例异位内膜均有P450A mRNA的表达,在卵巢异位子宫内膜和盆腹膜异位子宫内膜组间其表达无显著性差异(P>0.05);异位子宫内膜P450A mRNA表达量均高于在位内膜(P<0.01);35例对照组子宫内膜几乎无表达。结论正常子宫内膜无P450A表达,但子宫内膜异位症患者的在位内膜有P450A,而异位子宫内膜则呈P450A高表达。提示异位子宫内膜局部存在异常雌激素合成;在位内膜本身的保护机制劣于正常内膜。     

基于在位和异位内膜Bcl-w蛋白表达的子宫内膜异位症机制探讨

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-w在子宫内膜异位症的发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学染色法(SP法)检测凋亡抑制基因Bcl-w分别在正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症患者的异位内膜组织和在位内膜组织中的表达水平.结果 Bcl-w在子宫内膜的腺上皮细胞和间质细胞中均有表达,以腺上皮细胞浆中表达明显,偶有细胞膜和细胞核表达.异位子宫内膜组和在位子宫内膜组Bcl-w的表达高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(均P＜ 0.01);Bcl-w在异位子宫内膜组的表达高于在位子宫内膜组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 凋亡抑制基因Bcl-w在子宫内膜异位症的发生发展中起着很重要的作用.     

姜黄素抑制子宫内膜异位症血管形成的实验研究

目的:观察姜黄素对大鼠子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)局部血管形成的影响和抗血管形成作用。方法:制作Wistar大鼠EMs动物模型,4周后将大鼠分为正常组、假手术组、模型组、姜黄素低剂量组及姜黄素高剂量组5组,持续用药28d,SP免疫组化法测定在位内膜和异位组织灶中微血管密度(microvessel density,MVD)的表达,western blotting测定局部血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白量的表达。结果:姜黄素治疗模型大鼠EMs,4周后异位组织中MVD和VEGF蛋白量的表达明显低于模型组,差异有显著性(P<0.05),而在位内膜中MVD的表达与模型组相比,差异无显著性(P>0.05);姜黄素可剂量依赖性的抑制EMs异位组织的增生。结论:姜黄素对子宫内膜异位症大鼠异位组织中MVD的表达和VEGF蛋白的表达均有抑制作用,作用呈剂量依赖性。姜黄素有望成为子宫内膜异位症抗血管形成治疗的新药。     

孕三烯酮与兔子宫雌激素和孕激素受体的亲和力测定

Radioligand receptor binding assay (RRBA) was used to determine the characteristics of gestrinone binding to estrogen and progestin receptors of the uterine cytosol in rabbits. The results showed that the binding of ［³H］ progesterone and ［³H］ estradiol to uterine cytosols was in a concentration-dependent saturation manner, the dissociation constants (K_d) were 0.82 and 0.18 nmol·L^-1 by the Scatchard analysis. If the affinities of progesterone and estradiol binding to progestin and estrogen receptors were taken to be 100%, the relative binding affinities of gestrinone were 54.87%, 0.74%, respectively. The results indicated that gestrinone showed a considerably high affinity with progestin receptor, but had only a very poor affinity with estrogen receptor.     

孕三烯酮与兔子宫雌激素与孕激素受体的亲和力测定

孕三烯酮与兔子宫雌激素与孕激素受体的亲和力测定桂耀庭吴昌杰１吴熙瑞１（深圳市红十字会医院中西医结合研究所，深圳５１８０２９；１同济医科大学生殖医学中心，武汉４３００３０）孕三烯酮（ｇｅｓｔｒｉｎｏｎｅ，Ｒ２３２３）是一种１９—去甲基睾丸酮衍生物．８０...     

小柴胡汤对子宫内膜异位症大鼠异位内膜形态结构的影响

目的:探讨小柴胡汤治疗大鼠子宫内膜异位症对其异位内膜形态结构的影响。方法:采用实验性大鼠子宫内膜异位症动物模型,分 5组,小柴胡汤组分别给小柴胡汤 5, 10, 15g·kg-1·d-1,达那唑组给达那唑0. 1g·kg-1,对照组给蒸馏水 20mL·kg-1,均ig,qd。从大体、光镜、电镜等形态学水平,观察小柴胡汤对子宫内膜异位症大鼠异位内膜形态结构的影响。结果:给予小柴胡汤 5, 10, 15g·kg-1·d-1 4wk后,子宫内膜异位症大鼠均可见异位内膜体积缩小、萎缩;在光镜和电镜下观察到子宫内膜异位症大鼠异位内膜生长明显受抑制。结论:小柴胡汤对实验性大鼠子宫内膜异位症具有治疗作用。