黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究

目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与雌激素受体的关系;MTT法检测黄芪注射液对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,黄芪注射液不能提高细胞活性,但对雌激素受体具有激活作用。结论黄芪注射液可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统是研究中药作用机理的手段之一。     

不同剂量黄芪组方的防己黄芪汤对正常小鼠免疫功能的影响

用MTT比色分析法、YC花环法、EA花环法和称重法研究了不同比例量黄芪（6％、18％、54％）组方的防己黄芪汤对正常小鼠腹腔MΦ吞噬功能、T细胞功能和体重的影响。结果显示防己黄芪汤可增强腹腔MΦ吞噬活性、腹腔MΦ－C3b受体和MΦ－Fc受体活性，提高ConA诱导的T细胞转化率，减轻小鼠的体重；18％黄芪含量（原方）免疫调节作用最强。     

黄芪多糖生物活性的初步研究

黄芪多糖是从蒙古黄芪根中提取的多糖体(简称 APS),具有抗肝损害、抗感染、抗肿瘤作用。对免疫系统的研究结果显示它能使机体的脾脏增大,胸腺缩小,T 淋巴细胞比例下降;并抑制了脾脏细胞对 ConA 和 PHA 的应答反应,说明了 APS 对 T 细胞的功能有抑制作用。相反对 B 细胞的功能,如抗体形成细胞对 B 细胞致有丝分裂原 LPS 的反应却有增强作用。     

黄芪水溶性黄酮类对小鼠细胞免疫功能的影响

目的：观察黄芪水溶性黄酮类对小鼠细胞免疫功能的影响。方法：采用“细胞毒”法和“MTT”法，通过观察小鼠T淋巴细胞及其亚群和淋巴细胞的增殖作用，初步研究黄芪水溶性黄酮类（AF）对氢考（HC）致免疫功能低下小鼠和正常小鼠的细胞免疫功能的影响。结果：AF能提高免疫功能低下小鼠T细胞总数及L3T4^ 、Lyt2^ 细胞百分率和L3T4^ /Lyt2^ 细胞比值，并可恢复至正常水平；AF能ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖，且本身具有丝裂原的作用。结论：AF对细胞免疫功能具有促进作用。     

脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体研究及黄芪作用观察

目的 :观察脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数的变化以及中药黄芪注射液对其的调控作用。方法 :脾虚模型采用利血平方法 ,治疗组给予黄芪注射液 ;大鼠胃黏膜壁细胞分离与纯化采用Lewin胃袋法及Percoll密度梯度纯化 ;壁细胞胃泌素受体结合位点数 (sites cell)的检测采用放射配基结合方法。结果 :利血平脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数为 2 71 2± 91 8,明显低于正常组 (6 19 1± 30 4 5 ,P <0 0 5 )。中药黄芪注射液对其有显著上调作用 (5 45 2± 2 0 5 3,P<0 0 1)。结论 :利血平脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数下降 ,中药黄芪注射液对其有明显上调作用 ,胃泌素受体与脾虚证关系密切。     

黄芪提取物对3T3-L1细胞的影响及其部分作用机制

目的观察黄芪提取物对3T3-L1细胞增殖、分化和分泌Leptin、PAI-1的影响,探讨中药黄芪调脂作用的部分机制。方法培养3T3-L1细胞,并用不同浓度的黄芪多糖和黄芪甲苷进行干预,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度。用ELISA法检测细胞培养上清中Leptin、PAI-1的含量。结果黄芪多糖和黄芪甲苷均能促进前脂肪细胞的增殖和分化,且对Leptin分泌均有促进作用,而二者对PAI-1的分泌均有抑制作用。结论中药黄芪调脂机制复杂,其可能通过促进前脂肪细胞的增殖与分化和影响脂肪细胞分泌功能而达到调脂作用。     

黄芪多糖诱导成熟的树突状细胞肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨经黄芪多糖（astragalus polysacharin,APS）诱导成熟的树突状细胞（dendritic cell,DC）肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用及其机制。方法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,制备DC细胞,加入营养液体外诱导为未成熟的DC细胞,培养第5天,黄芪多糖组加入终浓度为100μg/mL的黄芪多糖,细胞因子组加入终浓度为20 ng/mL重组人肿瘤坏死因子（rhTNF）-α诱导DC成熟,观察树突状细胞形态及表型变化;成熟DC以SGC-7901肿瘤抗原致敏,与同种异体T细胞共培养,采用MTT法检测T淋巴细胞增殖功能,E LISA法检测共培养上清IL-12、IFN-γ水平;经DC激活的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte,CTL）细胞与SGC-7901肿瘤细胞共培养,采用LDH释放法检测CLT对靶细胞特异性杀伤能力。结果黄芪多糖诱导的DC经形态学观察和表型鉴定,符合成熟DC的特征。黄芪多糖诱导成熟的DC能刺激同种异体T淋巴细胞增殖,T细胞增殖指数随刺激细胞与效应细胞比值的增加而增加（P〈0.05）;DC与T细胞共培养上清IL-12、IFN-γ的水平显著增加且呈时间依赖性（P〈0.05）;经致敏DC激活的CTL能显著杀伤肿瘤细胞,随着效靶比的增加,杀伤作用增强。结论黄芪多糖可在体外诱导DC成熟,并促进其抗原递呈能力,有效活化CTL,增强机体抗肿瘤功能。     

黄芪增免散对围手术期食管癌间质反应与免疫调节机制探讨

目的 :观察黄芪增免散 (黄芪 ,女贞子 ,枸杞子 ,肉苁蓉 ,红参等 )对围手术期食管癌患者免疫功能和肿瘤局部组织的影响。方法 :用黄芪增免散治疗围手术期食管癌患者 37例 ,共 4周。采用APAAP法检测治疗前后外周血T淋巴细胞数量及分类 ;对手术切除标本 ,采用甲苯胺蓝和S 10 0蛋白ABC免疫组化染色法观察治疗后癌组织内 (包括Langerhans细胞、肥大细胞、微血管、淋巴细胞等 )变化 ,并与同期手术治疗的 14例患者作对照。结果 :治疗组外周血T淋巴细胞数量及T4/T8、癌组织内Langerhans细胞、肥大细胞数量及微血管损伤明显均高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :黄芪增免散对围手术期食管癌患者整体和局部免疫功能有改善作用     

基于网络药理学研究黄芪-白术治疗新冠肺炎的作用机制

目的采用网络药理学的方法探讨黄芪-白术治疗新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)的作用机制。方法利用TCMSP数据库对黄芪-白术活性成分和作用靶点进行查找与筛选,获得黄芪-白术的有效活性成分和作用靶点,用Cytoscape 3.7.2软件绘制黄芪-白术的有效活性成分-作用靶点网络;利用GeneCards数据库获取新冠肺炎作用靶点,利用Venny 2.1.0在线工具,获得黄芪-白术与新冠肺炎共同作用靶点(即是黄芪-白术治疗新冠肺炎的作用靶点);利用String数据库构建和分析共同作用靶点互作网络;最后利用R软件对共同作用靶点进行GO和KEGG富集分析。结果通过对黄芪-白术活性成分、作用靶点查找与筛选,获得黄芪-白术有槲皮素、山奈酚、蛇床子素、毛蕊异黄酮等19个有效活性成分,作用靶点189个,并绘制出黄芪-白术的有效活性成分-作用靶点网络图;用GeneCards数据库获取新冠肺炎作用靶点259个,经过Venny 2.1.0在线工具分析,获取41个黄芪-白术与新冠肺炎共同作用靶点;GO和KEGG富集分析提示:黄芪-白术参与细胞因子受体结合、细胞因子活性、受体配体活性、磷酸酶结合等生物学过程,可能通过调控IL-17、P53、HIF-1、B细胞、T细胞等信号通路而起到治疗新冠肺炎的作用。结论黄芪-白术主要是通过抗炎、抗氧化及调节免疫而达到治疗新冠肺炎目的。     

黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响

目的 :观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G 蛋白结合活性的影响。方法 :以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性 ,用 [3 5S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的G 蛋白的结合活性 ,并计算偶联效率。结果 :QST对M1受体密度、[3 5S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用 (P <0 0 1) ,而QT无作用 (P >0 0 5)。结论 :QST对M1受体的偶联功能有上调作用     

黄芪对变应性鼻炎患者外周血Th17的影

目的 观察黄芪对变应性鼻炎（allergic rhinitis, AR）患者辅助性T细胞（helper T cell, Th）-17及其相关因子表达的影响,初步探讨黄芪对AR患者Th17细胞功能的作用。方法 提取AR患者（AR组,31例）及健康受试者（健康组,22名）外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）,经高、低剂量黄芪注射液（200、500 μg/mL）体外干预24 h后,采用定时定量逆转录－聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测相关孤儿核受体C（related orphan receptor C,RORC）的表达,ELISA法检测 IL-17A、IL-22的表达,流式细胞术检测Th17细胞的表达。结果 AR组 PBMCs中Th17、RORC、IL-17A、IL-22的表达均较健康组升高 （均 P<0.01）。在AR组及健康组中PBMCs经低剂量黄芪干预后RORC、Th17细胞及其细胞因子的表达水平较其未干预时差异无统计学意义（均P>0.05）;而经高剂量黄芪干预后,RORC较其未干预时的表达水平降低差异有统计学意义（AR组： P<0.05;健康组： P<0.01）,同时Th17细胞及其细胞因子的表达水平较其未干预时降低,差异有统计学意义（均P<0.01）。结论 Th17的过度活化是导致AR的关键因素之一,黄芪可通过抑制Th17细胞的分化及其促炎细胞因子的释放,进而抑制AR炎症反应,达到控制AR炎症状态的目的。     

补中益气汤含药血清等对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合作用的影响

目的 :观察补中益气汤含药血清等 8种制剂体外给药对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合作用的影响。方法 :放射配基受体结合法。结果 :补中益气汤含药血清、参麦注射液、黄芪多糖能抑制大鼠胃壁细胞胃泌素受体与12 5I 胃泌素的特异性结合。结论 :补中益气汤含药血清等对大鼠胃壁细胞胃泌素受体的结合作用有一定影响 ,补中益气汤调节胃泌素受体复健脾虚证的机理可能在于与胃泌素受体竞争性结合。     

雌二醇对活化脾细胞增殖的抑制作用及桑寄生的干预

目的:观察17β-雌二醇(E2)对脾细胞的影响,分析子宫内膜异位症雌激素-免疫的病理环节.方法:MTT法检测不同浓度雌二醇对静息脾细胞、ConA活化脾细胞增殖的影响、雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对E2作用的影响及桑寄生对E2的干预.结果:雌二醇对静息脾细胞增殖未见明显影响,10-6M E2明显抑制2.5μg/ml ConA活化的脾细胞增殖, Tamoxifen 可以抑制E2对ConA活化的脾细胞的增殖抑制作用,桑寄生也有相同的作用.结论:高浓度的雌二醇可以抑制脾细胞的增殖,此作用可以被雌激素受体拮抗剂拮抗,提示高浓度的E2可以抑制免疫细胞的活化,桑寄生拮抗E2抑制ConA活化的脾细胞增殖的作用.     

补中益气汤含药血清等对大鼠胃臂细胞胃泌素受体结合作用的影响

目的：观察补中益气汤含药血清等8种制剂体外给药对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合作用的影响。方法：放射配基受体结合法。结果：补中益气汤含药血清、参麦注射液、黄芪多糖能抑制大鼠胃壁细胞胃泌素受体^125I-胃泌素的特异性结合。结论：补中益气汤含药血清等对大鼠胃壁细胞胃泌素受体的结合作用有一定影响，补中益气汤调节胃泌素受体复健脾虚证的机理可能在于与胃泌素受体竞争性结合。     

脾虚大鼠胃壁细胞胞浆游离钙离子浓度及黄芪对其调节作用的研究

目的：检测脾虚模型大鼠胃壁细胞胞内[Ca^2 ]i及黄芪对[Ca^2 ]i的调节作用。方法：SD大鼠用大鼠造成脾虚模型,并用黄芪注射液治疗4日,用Fura-2/AM荧光分光光度法检测壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下[Ca^2 ]i。结果：脾虚模型大鼠壁细胞静息状态下[Ca^2 ]i明显低于正常大鼠,胃泌素刺激后[Ca^2 ]i升高幅度亦明显低于正常组;脾虚黄芪治疗组大鼠静息状态下[Ca^2 ]i有一定升高,胃泌素刺激下黄芪治疗组壁细胞[C^2 ]i升高幅度明显高于模型组并与正常组比较无明显差异。结论：脾虚大鼠胃壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下[C^2 ]i明显低于正常大鼠,说明脾虚证时壁细胞功能处于一种低代谢状态,推测胞内钙库容量可能降低,而且壁细胞表面胃泌素受体数下调或／和功能下降,不能正常介导胞外信号。黄芪能够使低下的胞内代谢水平有一定程度恢复,胞内钙库容量有一定增大,并能使胃泌素受体数上调和／或功能加强,这可能是黄芪健脾益气作用的一个细胞水平的新机制。     

黄芪及其有效成分的研究概况

黄芪为膜荚黄芪的根 ,含香豆素、黄酮类化合物、皂甙及微量叶酸和数种维生素 ,具有补气固表、托毒生肌、利水的功效 ,“可治一切气衰血虚之证”[1] 。黄芪及其提取成份除对免疫系统、心血管系统有影响外 ,在抗衰老、抗癌等方面也起着不容忽视的作用。1　对免疫系统的影响1 1　对体液免疫的影响　黄芪对正常机体的抗体生成功能有明显促进作用[2 ] 。黄芪多糖 (APS)对创伤小鼠具有很好的免疫保护作用[3] 。黄芪皂甙也能明显促进B细胞增殖分化和浆细胞抗体合成。1 2　对T淋巴细胞功能的影响　黄芪可使ConA诱导的T细胞增殖反应和B细胞免疫功…     

红芪替换玉屏风口服液中的黄芪后对免疫抑制小鼠细胞免疫作用的比较研究

目的:比较研究红芪替换玉屏风口服液中的黄芪后对免疫抑制小鼠细胞免疫调节作用。方法:通过给小鼠腹腔注射免疫抑制剂环磷酰胺致成免疫功能低下模型,以相同剂量的红芪替代玉屏风口服液中的黄芪灌胃进行体内拮抗实验,测定胸腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞的增殖能力、杀伤活性、T细胞亚群、血清IL-1β的含量。结果:玉屏风口服液和红芪替换黄芪的玉屏风水提物均可显著提高被环磷酰胺抑制的小鼠胸腺指数和脾脏指数;使巨噬细胞吞噬功能明显增加;并能拮抗环磷酰胺对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖、杀伤活性、T细胞亚群数量和IL-1β产生的免疫抑制作用。且红芪替换黄芪的玉屏风水提物提高被环磷酰胺抑制的小鼠脾脏指数和T淋巴细胞增殖能力优于玉屏风口服液。结论:红芪与防风、白术配伍后与玉屏风口服液相比在细胞免疫调节方面具有相似的作用,且在恢复脾脏质量和T淋巴细胞增殖方面优于玉屏风口服液。     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

同一复方用黄芪与用红芪对小鼠免疫功能影响的比较研究

目的:比较同一复方用黄芪与用红芪对免疫低下小鼠免疫功能的影响。方法:取正常昆明种小鼠60只,雌雄各半,随机分为6组:空白对照组、模型组、含黄芪益气养血汤组(6 g.kg-1)、含红芪益气养血汤组(6 g.kg-1)、含黄芪补中益气汤组(4 g.kg-1)、含红芪补中益气汤组(4 g.kg-1),连续ig 14 d,用药第2天腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,分别比较补中益气汤和益气养血汤用红芪和用黄芪对免疫低下小鼠T淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤活性、血清溶血素和血清IL-1,IL-4水平的影响。结果:这两个复方无论用红芪还是用黄芪均能使免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤活性、血清溶血素和血清IL-1,IL-4水平提高至正常水平,其中,在T淋巴细胞增殖上,两复方用红芪均比用黄芪作用更为显著(P<0.05),而在其余指标上两复方无论用红芪还是黄芪均无明显差异。结论:益气养血汤和补中益气汤在提高细胞免疫功能方面用红芪均比用黄芪作用显著。     

黄芪注射液配合化疗对急性白血病患者T淋巴细胞亚群的影响

目的 :观察黄芪注射液配合化疗对急性白血病患者 T细胞亚群 ( CD4 ,CD8,CD4 / CD8)的影响。方法 :将 6 1例初治白血病患者随机分为黄芪注射液加化疗组 (简称黄芪组 31例 )及单纯化疗组 (简称对照组 30例 )。观察两组治疗前后 T细胞亚群水平。结果 :治疗后两组 CD4 ,CD4 / CD8均明显提高 ,但黄芪组更为明显。组间比较有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :黄芪注射液改善调节接受化疗的急性白血病患者的免疫功能 ,增进疗效。