多药耐药细胞系A549/ADM的建立及部分特性

目的建立多药耐药细胞系A549/ADM和初步探讨人肺腺癌细胞多药耐药的发生。方法对肺腺癌细胞A549采用持续低浓度和逐渐增加阿霉素浓度间歇诱导,建立多药耐药细胞系;使用流式细胞仪器分别检测敏感细胞系和耐药系的P-gp和MRP的表达;采用MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度。结果与母细胞系相比,耐药细胞系A549/ADM对ADM的耐药程度增加了14.29倍,对VCR、DDP、VP-16均有不同程度的耐药,对5-FU无耐药性;耐药细胞系A549/ADM表面P-GP、MRP表达分别为74.8%和61.2%(P<0.01)。结论A549/ADM对多种常用肿瘤化疗药物表现有不同程度的耐药,其耐药性可能与P-GR和MRP高表达有关。     

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

目的：建立人肝癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性及机制。 方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402,采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。 结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对ADM的耐药性(半数抑制浓度,IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%;（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%,二者差异有显著性(P<0.01);BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。 结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。     

人肝癌裸鼠移植模型阿霉素诱导法建立肝癌多药耐药细胞系

目的:建立人肝癌多药耐药细胞系研究其耐药特性及机制.方法:给予移植人肝癌细胞的裸小鼠腹腔注射阿霉素(ADM)长期诱导,获得多药耐药细胞系BEL-7402/ADM.相差显微镜和HE染色观察细胞,MTT法检测耐药细胞的多药耐药性,流式细胞术检测耐药细胞表面多药耐药基因(mdr)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达.结果:BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对阿霉素的耐药性提高了20.33倍.BEL-7402/ADM细胞表面P-gp和MRP表达阳性,与对照细胞BEL-7402表达比较,差异十分显著(P<0.01).GSH/GST表达无明显变化.结论:BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生及逆转具有重要价值.     

肺癌原代细胞耐药基因的表达和化疗敏感性的研究

目的探讨ATRA与VD3逆转肺癌细胞多药耐药，提高肺癌细胞化疗敏感性的机制。方法应用原代细胞培养、MTT比色、RT—PCR等方法观察ATRA联合VD3对人肺癌原代细胞、肺腺癌A549细胞株化疗敏感性及MRP、LRP表达水平的影响。结果人肺癌原代细胞MRP、LRP高表达，其表达与肿瘤病理无明显相关，MRP表达阳性与ADM、VP-16、VCR的耐药相关，LRP表达阳性与DDP、CBP、ADM、VP-16、VCR的耐药相关。结论MRP、LRP在肺癌尤其非小细胞肺癌中高表达，可反应肿瘤细胞多药耐药性；ATRA或VD3可下调肺腺癌MRP、LRP基因的表达水平，从而提高肺腺癌的化疗敏感性。     

利福霉素逆转多药耐药细胞系A549/ADM的实验研究

目的:探讨利福霉素逆转人肺腺癌细胞多药耐药的发生及逆转机制.方法:采用流式细胞仪检测敏感细胞系、耐药细胞系的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达;MTT法检测其对多种化疗药物的耐药程度及利福霉素对其耐药的逆转效果;采用细胞内阿霉素含量的方法测定利福霉素对多药耐药的逆转作用.结果:多药耐药细胞系A549/ADM的P-gp、 MRP表达分别为74.8%和61.2%;加用利福霉素后,A549/ADM细胞内ADM的含量显著增加,A549/ADM对ADM敏感性增加了2.51倍,对VCR、DDP及VP-16敏感性分别增加7.38倍、1.29倍、2.86倍.结论:A549/ADM对多种常见肿瘤化疗药物表现不同程度耐药,其耐药性可能与P-gp、MRP高表达有关;利福霉素对A549/ADM的多药耐药有一定的逆转作用.     

维甲酸联合维生素D3对非小细胞肺癌耐药基因表达的影响及其意义的探讨

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）联合维生素D3（VD3）逆转非小细胞肺癌细胞耐药的影响和意义。方法应用原代细胞培养、四甲基偶氮唑兰（M啊）比色、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）等方法观察ATRA联合VD3对人肺癌原代细胞、肺腺癌A549细胞株化疗敏感性及多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）表达水平的影响。结果人肺癌原代细胞MRP、LRP高表达，其表达与肿瘤病理无明显相关，MRP表达阳性与ADM、VP-16、VCR的耐药相关，LRP表达阳性与DDP、CBP、ADM、VP-16、VCR的耐药相关；ATRA与VD3可以明显降低肺腺癌原代细胞及A549细胞株MRP、LRP的表达量，对肺鳞癌MRP、LRP的表达量无明显影响；可以明显提高肺癌化疗敏感性。结论MRP、LRP在非小细胞肺癌中高表达，可反映肿瘤细胞多药耐药性；ATRA或VD，可下调肺腺癌MRP、LRP基因的表达水平，二药合用有协同作用，可以提高肺腺癌的化疗敏感性；但对肺鳞癌MRP、LRP基因的表达水平无明显影响，可能还存在其他的提高肺鳞癌化疗敏感性的机制。     

人结肠癌LS174T/5-Fu多药耐药细胞系的建立

目的建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性。方法以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系。MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达。结果历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高。结论LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础。     

人结肠癌LS174T/5-Fu多药耐药细胞系的建立

目的 建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性.方法 以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系.MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达.结果 历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高.结论 LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础.     

多药耐药相关蛋白和P—糖蛋白在原发性肾癌中的表达及其临床意义

目的 探讨多药耐药相关蛋白（MRP）和P-糖蛋白（P-GP）在原发性肾癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对46例原发性肾癌进行MRP和P-GP的检测。结果 MRP及P-GP在肾癌的表达率分别为63%（28/46）和85%（39/46）,MRP及P-GP的表达与肾癌的组织分级无关。结论 原发性肾癌中MRP及P-GP高表达,其可能为肾癌内源性耐药的重要机制。     

实时荧光定量PCR检测肝癌细胞多药耐药相关蛋白MRP2、MRP3及MRP5 mRNA的表达

目的 研究多药耐药相关蛋白2(MRP2)基因及MRP3、MRP5基因在正常肝脏细胞系L-02、肝癌细胞系BEL及肝癌耐药细胞系BEL/ADM的表达差异,并探讨其在肝癌耐药中的意义.方法 分别提取L-02、BEL及BEL/ADM细胞的总RNA,利用实时荧光定量PCR法检测MRP2、MRP3、MRP5基因的表达水平.结果 MRP2基因在BEL/ADM细胞中的表达量明显高于在L-02、BEL细胞中的表达(P=0.000),而其在L-02、BEL两种细胞中的表达没有显著性差异(P=0.468);MRP3、MRP5基因表达量在L-02、BEL、BEL/ADM三种细胞中均有显著性差异(P=0.000).结论 MRP2可能参与了肝癌的内在性耐药,而MRP3、MRP5可能与肝癌的获得性耐药有关.     

siRNA逆转survivin介导的T24/AMD细胞多药耐药的研究

目的:研究siRNA(small interfering RNA)逆转survivin介导的膀胱癌多药耐药性。方法:设计针对survivin基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,采用RT-PCR检测mRNA表达,免疫印迹法检测蛋白表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素累积量。结果:siRNA能明显逆转T24/ADM细胞的多药耐药,使survivin基因的mRNA及蛋白表达水平下调,细胞内阿霉素累积量显著增加(P<0.05)。结论:siRNA通过抑制survivin基因表达从而逆转膀胱癌的多药耐药。     

靶向mdr1b/mdr1a基因siRNA逆转T24/ADM多药耐药性研究

目的:研究mdr1b/a基因siRNA(small interfering RNA)逆转膀胱癌的多药耐药性。方法:设计mdr1b/a基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,用RT-PCR分析mRNA的表达,Rh123分析P-gp活性,流式细胞仪检测细胞内阿霉素积累量。结果:siRNA能明显地逆转T24/ADM细胞的多药耐药,使mdr1b/a基因的mRNA表达水平下调,细胞内阿霉素积累量显著增加(P<0.05)。结论:mdr1b/a基因siRNA能够逆转膀胱癌的多药耐药性。     

小剂量环孢素A逆转肾癌细胞多药耐药及其机制探讨

目的 探讨小剂量环孢素Ａ对肾癌细胞多药耐药的逆转及其机制。方法 通过体外实验用ＭＴＴ法测定逆转前后肾癌细胞存活率,检测逆转前后Ｐ糖蛋白表达情况。结果 小剂量环孢素Ａ（≤１ｍｇ／Ｌ）可以逆转ＲＣＣ ９２５肾癌细胞对阿霉素和长春新碱的耐药,还可诱导ＲＣＣ ９２５肾癌细胞表达Ｐ糖蛋白水平增高。结论 人体最大耐受剂量之内的环孢素Ａ可以逆转ＲＣＣ ９２５肾癌细胞的多药耐药,其机制与Ｐ糖蛋白表达有关。     

HL-60/ADM细胞系耐药性检测

目的　检测 HL- 6 0 / ADM细胞化疗药物敏感性及 MRP表达。方法　以 HL- 6 0 / ADM细胞为实验对象 ,对化疗敏感的 HL - 6 0细胞为对照 ,MTT法检测药物敏感性 ,免疫细胞化学法检测 MRP蛋白的表达 ,PT- PCR法检测MRP m RNA表达。结果　两种细胞生长周期基本一致 ;HL - 6 0 / ADM细胞对 ADM、MTZ、VCR、H四种化疗药物 IC50 显著高于 HL- 6 0细胞 (P<0 .0 1) ,RF均在 2 0倍以上 ;HL- 6 0 / ADM表达 MRP m RNA,细胞膜表面 MRP阳性。结论　 HL-6 0 / ADM细胞系适合体外 MDR研究。     

氧化苦参碱和粉防己碱对鼻咽癌耐药细胞株的耐药逆转作用

目的：研究天然有效成分氧化苦参碱（Oxy）和粉防己碱（TET）对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1（200）的耐药逆转作用．方法：以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1（200）为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的Oxy和TET作用后HNE-1（200）耐药细胞对常用抗肿瘤药物顺铂（DDP）,5-氟尿嘧啶（5-Fu）,长春新碱（vincristine,VCR）,阿霉素（Adriamycin,ADM）的增殖抑制率和IC50,并进一步计算其逆转指数．结果：无毒剂量的TET和Oxy分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,抗肿瘤药物对耐药细胞的增殖抑制率增加．TET逆转HNE-1（200）细胞对DDP,5-Fu,VCR,ADM的耐药指数分别为2．25,2．1,3．19,2．27;Oxy逆转HNE-1（200）细胞对DDP,5-Fu,VCR,ADM的耐药指数分别为1．59,1．26,2．28,1．26．结论：低毒浓度的天然药物Oxy和TET对鼻咽耐药细胞株HNE-1（200）具有一定的耐药逆转作用．     

环孢霉素A联合干扰素-α对膀胱癌T24/ADM耐药逆转的研究

目的：探讨逆转人膀胱癌T24/ADM多药耐药（MDR）的可行性。方法：采用MTT比色法研究单独逆转组[环孢霉素A（CsA）或干扰素-α（INF-α）]和联合逆转组（CsA＋INF-α）对阿霉素（ADM）细胞毒性在人膀胱癌T24细胞的影响。结果：CsA与INF-α能部分逆转膀胱癌T24细胞对ADM的敏感性。联合两药比单独使用一种有更高的细胞抑制作用,当CsA浓度为1.0μg/ml、INF-α为2.0×106 U/L时,细胞抑制率达44.7%（P〈0.01）。结论：CsA、INF-α能逆转膀胱癌T24/ADM的耐药性,联合使用比单独使用一种有更好的效果。     

两种siRNA转染方法对T24/ADM多药耐药性的影响

目的:评价2种转染小干扰RNA(siRNA,small interfering RNA)方法对膀胱癌多药耐药性(MDR)的影响。方法:设计MDR基因的siRNA,用脂质体和电转的方法转染膀胱癌T24/ADM细胞,用RT-PCR分析mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞内糖蛋白(P-gp)的表达和阿霉素积累量。结果:siRNA能明显地逆转T24/ADM细胞的多药耐药。电转染的方法抑制基因的效果优于脂质体转染的方法,P-gp表达下调,细胞内阿霉素积累量显著增加(P<0.05)。结论:2种转染方法均能够逆转膀胱癌的多药耐药性,电转染的方法优于化学转染方法。     

五味子乙素逆转膀胱肿瘤多药耐药的实验研究

目的研究五味子乙素对膀胱肿瘤T24/ADM细胞多药耐药的逆转作用。方法 MTT法测定半数抑制浓度IC50和逆转倍数RI,流式细胞仪测定细胞内罗丹明的浓度。结果五味子乙素可以明显增加阿霉素对膀胱肿瘤T24/ADM细胞的细胞毒作用（P〈0.05）,逆转指数为4.11,五味子乙素明显抑制了细胞内罗丹明的外排（P〈0.05）。结论五味子乙素明显抑制了膀胱肿瘤细胞的多药耐药,其机制可能与其抑制P-gp蛋白的外排有关。