反义血管内皮生长因子对食管癌细胞体外放射增敏作用

[目的]研究TE-1细胞转染VEGF反义寡核苷酸，观察转染后肿瘤细胞VEGF表达情况及其对放射敏感性的影响。[方法]将反义VEGF寡核苷酸经Lipofectamine^TM2000介导转染TE-1细胞；并经γ线照射。采用MTT法检测细胞生长状况，RT-PCR、Western blotting检测细胞照射前后VEGF基因的表达，流式细胞术检测细胞周期分布情况和凋亡率；克隆形成实验反映转染后细胞放射敏感性的变化。[结果]将反义VEGF寡核苷酸成功地转染人食管癌TE-1细胞中，VEGF表达水平明显降低，体外增殖反应无明显差异，细胞周期分布情况相似．未见明显凋亡发生。不同剂量照射后增殖情况无统计学差异；反义组细胞凋亡率略有上升．转染反义组细胞较未转染组细胞放射敏感性增加。[结论]转染反义VEGF寡核苷酸可抑制食管癌TE-1细胞VEGF表达，联合放射治疗，对TE-1细胞增殖无明显作用，而其放射敏感性有增强作用。     

ATP7B基因反义寡核苷酸对卵巢癌SKOV3ipl细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨ATP7B基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODNs)片段对卵巢癌SKOV3ip1细胞顺铂敏感性的影响。方法人工合成包含ATP7B mRNA翻译起始位点的ASODNs片段及作为对照的正义寡核苷酸(sense ol-igodeoxynucleotide,SODNs)片段。脂质体lipofectamine2000(LF)将ASODNs及SODNs转染卵巢癌SKOV3ip1细胞后,用RT-PCR法、流式细胞测定法、Western blot及MTT法检测SKOV3ip1细胞转染后,ATP7B基因mRNA、蛋白表达及半数抑制浓度(IC50)的变化。结果SKOV3ipl细胞以及转染ASODNs后,ATP7B与β-actin mRNA的光密度比值分别为0.831±0.06和0.203±0.07(P<0.01)。流式细胞法检测细胞内ATP7B蛋白的荧光强度由转染前的79.42±4.04下降到50.87±5.47(P<0.05)。Western blot检测SKOV3ipl细胞以及转染ASODNs后,ATP7B与actin蛋白的光密度比值分别为2.60±0.44和1.01±0.06(P<0.01)。MTT检测IC50由转染前的(126.63±12.06)μmol/L下降为(80.90±20.09)μmol/L(P<0.01)。而转染SODNs及LF的SKOV3ip1细胞中,上述指标无统计学差异(P>0.05)。结论ATP7B基因反义寡核苷酸能显著抑制卵巢癌SKOV3ip1细胞ATP7B mRNA和蛋白表达,并能增加SKOV3ip1细胞对顺铂的敏感性。     

反义cDNA对放射线诱导食管癌细胞VEGF高表达的抑制作用

[目的]探讨反义VEGFcDNA对放射线诱导人食管癌细胞VEGF高表达的抑制作用,为食管癌放疗与反义VEGF联合治疗提供依据。[方法]阳离子脂质体作为载体,用反义VEGFcDNA质粒转染人食管癌细胞TE-1;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、原位杂交和流式细胞术检测转染后癌细胞;γ线照射转染、非转染食管癌细胞TE-1,采用免疫组化、ELISA与RT-PCR法分别观察反义VEGFcDNA对放射线诱导的食管癌细胞TE-1VEGF表达的作用。[结果]转染反义VEGFcDNA的食管癌细胞有外源性反义VEGFcDNA的整合及表达,癌细胞生长速率无明显减慢,凋亡现象并不明显。转染细胞较非转染的食管癌细胞TE-1相比,照射后细胞表达VEGFmRNA及蛋白的水平均明显降低。[结论]以抗VEGF表达为基础的抗血管生成治疗有可能成为食管癌放射治疗的有效辅助手段。反义VEGFcDNA对放射线诱导的人食管癌细胞VEGF高表达有明显抑制作用。     

c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响

[目的]探讨癌基因c-raf-1的反义寡核苷酸埘人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响。[方法]设立c-raf-1正义寡核苷酸组和非处理组（仅加入等量的脂质伴)作对照，用RT-PCR检测卵巢癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化，用免疫组化技术检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体-c-raf-1反义寡核苷酸作用前后受^60Coγ射线照射后细胞Ki-67的表达情况。[结果]c-raf-1反义寡核苷酸能抑制c-raf-1癌基因的表达，经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其Ki-67表达较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下调，而转染c-raf-1正义寡核苷酸组和单纯照射组相比无明显差异。[结论]c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3受照射后的增殖能力。该作刚可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了引起肿瘤细胞辐射抗拒的细胞信号传导途径有关。     

Bcl-2反义寡核苷酸联合富勒醇对K562细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度的Bcl-2反义寡核苷酸和富勒醇作用后K562细胞的凋亡情况.方法:用0.1、0.2 mg/mL的富勒醇和10μmol/L的Bcl-2反义寡核苷酸以及联合10μmol/L、0.1 mg/mL的Bcl-2反义寡核苷酸和富勒醇分别作用于K562细胞,于作用后12、18和24 h观察K562细胞的凋亡情况.结果:反义寡核苷酸+富勒醇组于作用后12 h细胞增殖受抑最显著.OD值降为0.705±0.003,与空白组OD值1.057±0.007比较,两者差异有统计学意义,P<0.01,且随着时间延长,这种抑制作用有逐渐降低的趋势.反义寡核苷酸+富勒醇组OD值0.705±0.003与反义寡核苷酸组OD值0.704±0.003比较,差异无统计学意义.结论:富勒醇联合Bcl-2反义寡核苷酸在诱导肿瘤细胞凋亡方面无协同作用,富勒醇在自然光照条件下也不能干扰Bcl-2反义寡核苷酸对细胞凋亡的诱导作用.     

VEGF反义RNA 抑制裸鼠体内食管癌细胞生长的实验研究

 目的 探讨VEGF反义RNA对食管癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法 观察转染VEGF反义RNA的食管癌细胞TE-1在裸鼠体内成瘤性；应用免疫组化法、RT—PCR法检测移植瘤组织中VEGF蛋白及mRNA表达和MVD；用流式细胞仪和透射电镜检测细胞凋亡情况。结果 转染VEGF反义RNA的TE-1细胞在裸鼠体内肿瘤形成的潜伏期明显延长，所形成肿瘤的重量和体积小于对照组及空载体组。肿瘤组织中VEGF蛋白和mRNA的表达降低，MVD降低；肿瘤细胞发生明显的凋亡形态学改变；G0／G1期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖能力降低。结论 VEGF反义RNA能抑制裸鼠体内TE-1细胞的生长，减少肿瘤内血管的生成，增加细胞凋亡；为食管癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

c-erbB-2反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV_3细胞增殖的抑制作用

目的探讨c-erbB-2基因反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法实验分空白对照组、正常对照组、c-erbB-2正义对照组及c-erbB-2反义治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、蛋白质荧光强度测定,以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白质表达有无差别。结果反义治疗组与正义对照组比较:转染72hOD值分别为0.201与1.298(P<0.01);克隆形成率分别为26.5%与76.5%(P<0.05);凋亡率分别为21.3%与7.5%(P<0.05),同时明显地下调c-erbB-2蛋白质的表达水平(P<0.05)。结论在卵巢癌的基因治疗中,c-erbB-2反义寡核苷酸能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖。     

反义MRP3寡核苷酸对卵巢癌拓普替康耐药性的逆转作用

目的：探讨MRP3反义寡核苷酸对人卵巢癌拓普替康（TPT）耐药株SKOV3／TPT细胞的耐药逆转作用。方法：人工合成MRP3反义寡核苷酸（ASODN）相应的正义寡核苷酸（SODN）片段，用脂质体（LF）构建成ASODN／LF、SODN／LF，分别转染SKOV3／TPT细胞，用MTT法、流式细胞仪（FCM）及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3 mRNA表达的改变。结果：将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别转染进SKOV3／TPT细胞后，反义组细胞内TPT的荧光强度及耐药指数明显降低（P〈0．05），细胞内MRP3 mRNA的表达较未转染细胞下降了60．16％（P〈0．05）；正义组上述指标无明显变化。结论：转染MRP3ASODN／LF可部分逆转MRP3介导的人卵巢癌细胞对TPT耐药。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响

目的：从转录及翻译两个水平观察As2O3对卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响,从而明确As2O3是否可以通过抑制卵巢癌细胞表达VEGF而达到抗卵巢癌血管生成的目的。方法：RT-PCR半定量法测定不同浓度As2O3作用于SKOV3细胞24h后VEGF mRNA含量的变化。用ELISA法测定不同浓度和作用时间下As2O3对SKOV3细胞培养上清液中VEGF蛋白表达的影响。结果：1μmol/L-4μmol/L As2O3能显著抑制VEGF mRNA的表达,且具有浓度依赖性。1μmol/L-4μmol/L As2O3能明显降低培养上清中VEGF蛋白表达,具有浓度依赖性,但随时间延长抑制作用减弱。结论：As2O3能通过降低卵巢癌SKOV3细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌抑制肿瘤血管生成。     

VEGF-C反义寡核苷酸对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移能力的影响

[目的]探讨VEGF—C反义寡核苷酸（VEGF—CASODN）对人卵巢癌细胞SKOV3侵袭转移能力的影响。[方法]以VEGF—C基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸，脂质体介导转染。MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质Matrigel的黏附能力；体外侵袭实验检测卵巢癌细胞侵袭能力；Western blot检测细胞VEGF—C、MMP-2、E—cadherin蛋白表达。[结果]黏附实验结果显示VEGF—C ASODN转染后，在30min、60min、90min、120min各时间段与空白对照组、LIP组及SODN组相比，细胞黏附率都有明显下降（P〈0．01）：侵袭实验结果显示VEGF—CASODN转染48h后浸润细胞数目（62．5±8．71与空白对照组、LIF组和SODN组（分别为127.2±13．6、125．8±14．1、119．3±11．21相比明显减少（P〈0．01）；Western blot结果显示VEGF—C ASODN转染后细胞中VEGF—C、MMP-2蛋白表达与空白对照组、LIF组和SODN组相比明显下降，而E—cadherin蛋白表达明显增高（P〈0．01）。[结论]VEGF—C ASODN能明显抑制卵巢癌细胞体外实验中的侵袭转移能力，可望为卵巢癌提供一种有效的辅助治疗方法。