野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达及活性的影响

目的:研究野黄芩苷对Caco-2细胞中P-糖蛋白(P-gp)表达及活性的影响。方法:野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)与Caco-2细胞共孵育24 h,48 h及72 h后,通过western blot方法检测野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达的影响;通过罗丹明123转运试验,测定罗丹明123在Caco-2细胞内的累积量变化,以考察野黄芩苷对P-gp活性的影响。结果:野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达具有诱导作用,孵育24 h后,野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)对P-gp蛋白的上调倍数分别为2.34,2.65,2.00;孵育48 h后,野黄芩苷上调P-gp蛋白表达2.70,4.66,3.13倍;孵育72 h后,野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)对P-gp蛋白的上调倍数分别为2.82,2.62,1.84。野黄芩苷上调Caco-2细胞中P-gp蛋白表达的同时增加P-gp外排泵活性,孵育24 h后,野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)降低胞内罗丹明123累积量至70.6%,66.6%,76.6%;孵育48 h后,胞内罗丹明123累积量降低至55.6%,37.5%,65.2%;孵育72 h后,胞内罗丹明123累积量降低至45.5%,53.9%,60.3%。结论:野黄芩苷诱导Caco-2细胞中P-gp的蛋白表达,并能增加P-gp外排泵活性。     

HPLC-MS法测定关附甲素及其在Caco-2细胞上的摄取特性

目的建立关附甲素的LC-MS测定法,研究其在Ca-co-2细胞上的摄取特性。方法采用ShimadzuVP–ODS,C8柱,(250mm×2.1 mm,5μm),流动相:乙腈∶水=30∶70(V/V),用0.2%冰乙酸溶液,加入二乙胺适量调pH至4.0左右,流速:0.2 ml.min-1,电喷雾离子化(ES1)方式,采用选择性离子检测法,检测离子为正离子,关附甲素的选择性离子:[M+H],m/z 430。考察温度、药物浓度、时间和pH值对关附甲素在Caco-2细胞上摄取的影响。结果关附甲素在0.2～50.0μmol.L-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9988),最低定量限0.2μmol.L-1。关附甲素在Caeo-2细胞上的摄取具有一定的浓度、时间和pH值依赖性,其摄取表现为被动扩散。结论该法灵敏、简单,专属性强,关附甲素在Caco-2细胞上具有良好的摄取。     

大剂量甲氨蝶呤治疗小儿急性淋巴细胞白血病的血药浓度与不良反应相关性探讨

目的探讨大剂量甲氨蝶呤（MTX）治疗儿童急性淋巴细胞白血病血药浓度与不良反应相关性,为临床合理用药提供依据。方法采用荧光偏振免疫法测定72位患儿血药浓度,结合临床不良反应观察,采用χ2检验分析血药浓度与不良反应发生的关系。结果血清MTX C24 h≥40μmol.L-1的常见不良反应发生率与血清MTX C24 h〈40μmol.L-1相比有显著性差异（P〈0.05）。血清MTX C48 h≥1.0μmol.L-1的不良反应发生率与血清MTX C48 h〈1.0μmol.L-1相比有极显著性差异（P〈0.01）。结论 MTX不良反应的发生率直接取决于MTX血药浓度的高低和持续时间的长短。     

LC-MS法测定槐果碱及其在Caco-2细胞上的摄取特性*

目的建立槐果碱的LC-MS测定法,研究其在Caco-2细胞上的摄取特性.方法采用Zorbax Extend-C18柱(50 mm×2.1 mm,5μm),流动相为10 mmol·L-1醋酸铵水溶液-乙腈(85∶15),流速0.2 mL·min-1.电喷雾离子化(ESI)方式,采用选择性离子检测法,检测离子为正离子,槐果碱的选择性离子为m/z∶247.3[M+H]+,考察了温度、药物浓度、时间和pH值对槐果碱在Caco-2细胞上摄取的影响.结果槐果碱在2～1 000 μg·L-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7),最低定量限为2 μg·L-1;槐果碱在Caco-2细胞上的摄取具有一定的浓度、时间和pH值依赖性,其摄取表现为被动扩散.结论该法灵敏、简单,专属性强,槐果碱在Caco-2细胞上具有良好的摄取.     

白藜芦醇对星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨白藜芦醇( RES)对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法星形胶质细胞传代培养,随机分为阴性对照组(以正常培养液培养),模型对照组(100μmol·L-1的过氧化氢作用12 h),RES小剂量组(20μmol·L-1 RES孵育24 h后,加入过氧化氢作用12 h)和RES大剂量组(40μmol·L-1 RES孵育24 h后,加入过氧化氢作用12 h),采用MTT比色法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达。结果 MTT结果显示5,10,20,40μmol·L-1 RES孵育24 h后细胞活性分别为(100.46±3.17)％,(101.33±3.14)％,(101.33±1.30)％,(99.67±2.62)％,与阴性对照组(98.33±2.13)％比较,差异无统计学意义(P>0.05)。表明RES对星形胶质细胞活性无影响。用20及40μmol·L-1 RES处理后,星形胶质细胞在过氧化氢作用12 h后引起损伤,其活性分别提高到(54.67±4.11)％和(70.33±2.61)％,与模型对照组比较,差异有统计学意义(t=3.59,7.13,P<0.01)。 RES可以抑制过氧化氢诱导的细胞活性的下降,流式细胞计数结果显示用20,40μmol·L-1RES处理后,星形胶质细胞凋亡率分别下降到(35.51±3.56)％和(14.12±3.19)％,与模型对照组(46.31±4.16)％比较,差异有统计学意义(t=4.26,6.33 P<0.01)。 Hochest33258染色结果显示RES可以抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡。此外,RES还可以减少过氧化氢所致星形胶质细胞内caspses-3及caspase-9的表达,并且伴随RES作用时间的延长其表达量呈下降趋势。结论 RES通过抑制caspses-3及caspase-9的表达有效抑制了过氧化氢对星形胶质细胞的损伤,从而为其用于治疗中枢神经疾病提供实验依据。     

大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病血药浓度监测分析

目的:采用高效液相色谱法(HPLC)测定患儿甲氨蝶呤(MTX)的血药浓度,并对大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)血药浓度监测结果进行分析.方法:2005年4月至2007年3月收治的21例ALL患儿接受85例次大剂量MTX治疗,MTX的剂量为5 s/(m2·次).MTX应用后42 h用甲酰四氢叶酸钙解救.在大荆量MTX应用后的44 h、72 h用高效液相色谱法监测MTX的血药浓度.结果:44 h、72 h MTX的血药浓度分别为(0.82±0.95)gmol/L、(0.091±0.062)μmol/L.结论:MTX在体内处置个体差异大,可以根据血药浓度测定结果作为调整甲酰四氢叶酸钙用量的主要依据.     

刺尾鱼毒素细胞毒性损伤特征与细胞信号传导

目的　本课题旨在观察刺尾鱼毒素 (MTX)的细胞毒性特征 ,研究胞内Ca2 +、AMP、蛋白激酶C(PKC)等信号物质对MTX细胞毒性的影响 ,并探讨其毒性作用机制。方法　选用神经胶质瘤细胞(NG10 8)为实验对象 ,应用MTT法观察细胞存活率 ,以结合蛋白竞争分析法测定细胞内cAMP含量 ,用Fura 2荧光标记法测定细胞内游离 [Ca2 +]浓度。结果　NG10 8细胞对MTX的作用较敏感 ,其细胞存活率下降呈量效 时效依赖性 ,MTX作用 1h的LD50 值为 0 .5 3μg·L- 1;光镜下可见细胞膜表面出泡、自培养板脱落、细胞膜裂解 ,细胞死亡。MTX的细胞毒性与胞外 [Ca2 +]变化密切相关 ,随着胞外 [Ca2 +]升高 ,MTX的毒性增大 ,胞外无Ca2 +时 ,观察不到MTX对NG10 8细胞的毒性作用 ;L 型Ca2 +通道阻滞剂硝苯地平可以明显抑制MTX的细胞毒性。MTX作用后细胞内游离 [Ca2 +]显著升高 ,MTX作用剂量越大 ,胞内游离 [Ca2 +]变化幅度越大 ,速度越快。MTX致胞内游离 [Ca2 +]升高与胞外 [Ca2 +]呈剂量依赖性 ,无胞外Ca2 +时 ,MTX作用后观察不到胞内游离[Ca2 +]变化 ,并且硝苯地平可明显抑制MTX作用后细胞内游离 [Ca2 +]的升高。低剂量MTX致NG10 8细胞胞内cAMP明显升高 ,尤其以 0 .5 μg·L- 1作用剂量为显著 ,并且这种效应呈Ca2 +依赖性。而MTX作用剂量≥     

大剂量甲氨蝶呤治疗小儿急性淋巴细胞白血病药动学

目的:研究10例急性淋巴细胞白血病患儿应用大剂量甲氨蝶呤(MTX)的体内药动学参数,探讨最佳解救时间,并对其不良反应进行分析.方法:使用统一的治疗方案,采用荧光偏振免疫(FPIA)方法,监测一定时间的MTX血药浓度.结果:MTX体内药动学药时曲线符合一房室模型,其Cmax为(60.3±14.3)μmol·L-1;Ke为(0.11±0.02)h-1;Vd为(655.2±411.8)L;CL为(15.2±8.5)L·h-1;t1/2(k)为(7.9±2.3)h;AUC0-10为(152.4±65.4)μmol·L-1·h;AUC0-∞为(157.2±73.7)μmol·L-1·h;MRT为(3.8±2.6)h.结论:开展小儿急性淋巴细胞白血病患儿使用大剂量甲氨蝶呤的体内药动学研究具有重要的临床意义.     

氯胺酮对HepG2细胞线粒体功能的影响

目的评价氯胺酮的线粒体毒性,从而探讨氯胺酮可能的毒性机制。方法 Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定10~2000μmol·L-1培养7 d,或加入氯胺酮50~3000μmol·L-1培养24 h,CCK8细胞计数法测定细胞存活率。Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定100μmol·L-1培养7 d后,或加入氯胺酮100和1200μmol·L-1培养24 h,化学发光法检测胞内ATP合成水平,荧光探针法检测胞内钙离子浓度、活性氧及线粒体膜电位(ΔΨm)的变化,同时设齐多夫定1000μmol·L-1用于实时荧光定量PCR检测线粒体DNA(mt DNA)表达水平的变化。结果与正常对照组相比,齐多夫定10~2000μmol·L-1可以抑制细胞存活,IC50为100μmol·L-1;氯胺酮1000~3000μmol·L-1抑制细胞存活,IC50为1200μmol·L-1。与正常对照组相比,齐多夫定100μmol·L-1组线粒体ATP合成水平显著下降(P<0.05),胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05),活性氧水平显著升高(P<0.05),ΔΨm显著下降(P<0.05),而1000μmol·L-1可以明显干扰mt DNA表达水平(P<0.05)。氯胺酮100μmol·L-1组ATP合成水平明显下降(P<0.05),其他指标均无显著性差异;氯胺酮1200μmol·L-1组ATP合成水平显著下降(P<0.01),活性氧水平和胞内钙离子浓度显著升高(P<0.01),ΔΨm显著下降(P<0.05),mt DNA水平无明显改变。结论氯胺酮可以通过干扰线粒体代谢功能而诱导线粒体损伤。     

匹伐他汀和阿托伐他汀诱发HepG2细胞发生胰岛素抵抗

目的研究匹伐他汀和阿托伐他汀诱发Hep G2细胞发生胰岛素抵抗的作用。方法 Hep G2细胞分别给予胰岛素0.5μmol·L-1,匹伐他汀1,10和100μmol·L-1,阿托伐他汀1,10和100μmol·L-1,以及阿托伐他汀100μmol·L-1+MK886 100μmol·L-1。48,72和96 h后检测细胞残余[125I]胰岛素结合率,[3H]D-葡萄糖摄取率,糖原和三酰甘油(TG)含量;作用48 h时细胞载脂蛋白A5(Apo A5)mRNA、Apo A5蛋白和Akt信号通路。结果与阴性对照组相比,匹伐他汀和阿托伐他汀对残余[125I]胰岛素结合率和糖原含量无明显作用。阿托伐他汀100μmol·L-1增加TG含量(mg·g蛋白:0.71±0.04 vs 1.51±0.05,P<0.05),降低[3H]D-葡萄糖摄取率〔37.2±3.2 vs(26.7±1.9)μmol·g-1·h-1,P<0.05),减少磷酸化Akt表达水平(0.92±0.09 vs 0.32±0.02,P<0.05),升高Apo A5 mRNA(0.30±0.02 vs 0.69±0.06,P<0.05)和蛋白表达水平(0.30±0.04 vs0.91±0.03,P<0.05),与胰岛素0.5μmol·L-1组类似。阿托伐他汀100μmol·L-1上述作用与作用时间呈正相关(r=0.729,P<0.05),而MK886可拮抗这些作用。结论阿托伐他汀100μmol·L-1时间依赖性地增强Apo A5表达,导致细胞糖脂代谢异常,诱发Hep G2细胞胰岛素抵抗。     

去甲基斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒的吸收机制及小鼠抑瘤作用研究

目的:研究去甲基斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒(NCTD-GC-NPs)的吸收机制和小鼠抑瘤作用。方法:以表观透过系数为指标,考察NCTD-GC-NPs(80μg·mL-1)及其分别与环孢素A(50μmol·L-1)、去氧胆酸钠(100mmol·L-1)、叠氮化钠(25mmol·L-1)、氧化苯胂(25mmol·L-1)联用后对结肠癌Caco-2细胞转运的影响;将接种肝癌细胞H22后的小鼠随机分为空白组、对照组(NCTD原料药2mg·kg-1)和NCTD-GC-NPs低、中、高剂量组(0.5、2、4mg·kg-1),每组10只,每日灌胃给药1次,连续给药8d,考察各组小鼠体重和抑瘤率。结果:环孢素A、去氧胆酸钠和叠氮化钠均能明显促进NCTD-GC-NPs在Caco-2细胞的转运(P<0.05或P<0.01),氧化苯胂对转运无明显影响;各组小鼠体重无明显变化;与对照组比较,NCTD-GC-NPs中、高剂量组的抑瘤率明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论:NCTD-GC-NPs主要通过主动转运穿过小肠上皮细胞,能明显抑制肝癌肿瘤细胞H22的生长。     

在Hs578T乳腺癌细胞由Cx43组成的细胞缝隙连接对阿霉素细胞毒性的影响

目的探讨乳腺癌细胞Hs578T中缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的表达,以及由其形成的缝隙连接(gapjunction,GJ)对阿霉素(adriamycin,ADM)细胞毒性的影响。方法采用Western blot检测Hs578T细胞中Cx43表达水平;细胞免疫荧光法观察Hs578T细胞膜Cx43蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法测定Hs578T细胞荧光传递功能;MTT法检测缝隙连接功能对ADM细胞毒性的影响。结果Hs578T细胞中天然表达Cx43,10μmol·L-1维甲酸(ratinoicacid,RA)处理细胞24 h后,细胞中Cx43蛋白表达水平增高,25μmol·L-1 oleamide和10μmol·L-118-α-GA分别处理细胞24 h后,细胞中Cx43蛋白表达水平降低;Hs578T细胞膜表面有Cx43蛋白表达;10μmol·L-1RA预处理细胞24 h,细胞间荧光传递功能增强(P<0.01),25μmol·L-1oleamide和10μmol·L-118-α-GA预处理细胞1 h,细胞间荧光传递功能降低(P<0.01);在高密度接种细胞(生长融合,有GJ形成),10μmol·L-1RA增强细胞GJ功能,6μmol·L-1ADM对细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01),25μmol·L-1 oleamide或10μmol·L-1 18-α-GA抑制细胞GJ功能,6μmol·L-1ADM对细胞增殖抑制率降低(P<0.01),而在低密度接种细胞(生长未融合,无GJ形成)细胞增殖抑制率没有改变(P>0.05)。结论 Hs578T细胞天然表达Cx43蛋白,并且增强细胞间由Cx43形成的GJ功能,ADM的细胞毒性也增加;而抑制细胞GJ功能时,ADM的细胞毒性也相应降低。     

大剂量氨甲蝶呤治疗恶性肿瘤的血药浓度监测

目的探讨大剂量氨甲蝶呤（MTX）用药后血药浓度监测的临床意义。方法应用大剂量氨甲蝶呤加四氢叶酸钙（CF）解救治疗40例恶性肿瘤,采用高效液相色谱仪（HPLC）监测用药后24h和48hMTX的血药浓度,并根据血药浓度给予相应的CF解毒。结果40例患者零时MTX血药浓度均在1×10     

熊果酸抑制P-糖蛋白外排功能

目的研究女贞子中的熊果酸对P-糖蛋白（P-gp）功能的影响。方法用环孢素A作为P-糖蛋白功能抑制的阳性对照,用流式细胞术分析熊果酸对P-糖蛋白底物——罗丹明123在Caco-2细胞中外排的影响。结果当熊果酸浓度在0.01μmol.L-1时,实验组细胞内荧光与阴性对照组间无显著性差异（P〉0.05）;当熊果酸浓度在0.1～1μmol.L-1时,实验组细胞内荧光强度显著强于阴性对照组（P〈0.05）,并随熊果酸浓度的增高而增强;当熊果酸浓度为10μmol.L-1时,实验组细胞内荧光强度却表现为减弱,并且显著弱于阴性对照组（P〈0.05）,其原因有待后续实验探讨。结论在低浓度时（0.01μmol.L-1）,熊果酸对P-gp的功能没有影响;当熊果酸浓度在0.1～1μmol.L-1时,熊果酸对P-gp的功能有抑制作用。     

Liguzinediol的正性肌力作用机制及心脏安全性

目的探索Liguzinediol(LZDO)对正常大鼠离体心脏正性肌力作用的机制,并评价其心脏安全性。方法①大鼠离体心脏实验:按照灌流液(空白对照)→LZDO 100μmol.L-1→洗脱的顺序灌流,持续5 min并于灌流5 min末记录大鼠离体心脏左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升/降速率(±dp/dtmax)及心率(HR)。②豚鼠在体和离体实验:在体实验按照生理盐水→LZDO 1.7 g.kg-1的顺序经颈外静脉缓慢推注,持续5 min,于每次处理后5 min记录5只豚鼠心电图。离体实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 300μmol.L-1的顺序灌流,持续5 min,于灌流5 min末记录豚鼠离体心脏心电图。分析P-R间期和心率校正QT间期(QTc间期)。③膜片钳全细胞法记录细胞膜离子通道电流:按照灌流液(空白对照)→尼莫地平2μmol.L-1顺序灌流左心室肌细胞,记录电流。灌流液(空白对照)→LZDO100μmol.L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录其5个细胞的L型钙电流。另两组实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 1→10→100→300μmol.L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录hNav1.5和hERG电流。④激光共聚焦方法测定左心室心肌细胞的钙释放量:按照灌流液(空白对照))→LZDO 100μmol.L-1的顺序灌流,于灌流2 min和30 min末记录心肌细胞钙释放量。结果①大鼠离体心脏实验:尼莫地平1μmol.L-1和rethenium red 5μmol.L-1均能完全阻断LZDO 100μmol.L-1的正性肌力作用。②豚鼠在体和离体心电图实验:豚鼠在体给予LZDO 1.7 g.kg-1或豚鼠离体心脏灌流LZDO 300μmol.L-1后,P-R及QTc间期并没有显著性改变。③细胞膜离子通道电流实验:LZDO 100μmol.L-1未能显著地增加大鼠左心室肌细胞的L型钙电流;LZDO 1,10,100和300μmol.L-1未能显著地改变hNav1.5和hERG电流。④激光共聚焦测定左心室心肌细胞钙释放实验:LZDO 100μmol.L-1显著增加左心室心肌细胞钙释放,于2 min末钙释放量达到最大值,并能维持到30 min(P<0.05)。结论 LZDO对L型钙通道无直接作用,LZDO是通过作用肌浆网钙释放来起到正性肌力作用的;LZDO在体1.7 g.kg-1或离体300μmol.L-1无致心律失常的作用。     

8-溴-7-甲氧基白杨素体外抗肝癌作用及首过糖苷化速率的测定

目的观察白杨素(ChR)衍生物8-溴-7-甲氧基白杨素(Br MC)对体外培养肝癌HepG2细胞生长的抑制作用;用人结肠腺癌(Caco-2)细胞模型比较白杨素及其衍生物Br MC的首过糖苷化速率,从药动学角度阐明Br MC比ChR抗肿瘤活性强的可能原因,为寻找既具有较强抗肿瘤活性又具有良好的药动学特性的活性新化学实体提供实验依据。方法①MTT比色法测定Br MC对体外培养肝癌Hep-G2细胞和人胚肝L-02细胞增殖的影响,评价其对肝癌细胞作用选择性;②体外培养Caco-2细胞,用Transwell建立单层细胞模型;③评价时间对Br MC和ChR葡萄糖醛酸化产物形成的影响,用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸结合物,高效液相色谱(HPLC)检测,计算葡萄糖苷化速率。结果①MTT比色法结果显示,Br MC(3.0、10.0、30.0μmol.L-1)及其先导化合物ChR(30.0μmol.L-1)与阳性对照药物5-氟尿嘧啶(5-FU30.0μmol.L-1)分别处理肝癌HepG2细胞48 h,其增殖相对抑制率分别为31.5%、52.3%、61.2%、51.1%和60.8%;Br MC的效价强度高于其先导化合物ChR,与5-FU相当。Br MC对正常人胚肝L-02细胞的毒性作用(IC50为446.5μmol.L-1)远小于对肝癌HepG2细胞的毒性(IC50为10.3μmol.L-1),对人肝癌HepG2细胞的药物选择指数达43.3;②Caco-2细胞培养21 d后,成功建立细胞单层模型;③Br MC和ChR的葡萄糖苷化产物均随时间延长而增加,但Br MC比ChR的糖苷化速率显著降低。结论以ChR为先导物,选择性引进溴和甲氧基的衍生物Br MC对肝癌的生长抑制作用较ChR明显增强,可能与其葡萄糖醛酸化程度显著降低,药物在肝癌细胞中的蓄积增加有关。     

大剂量甲氨蝶呤治疗儿童ALL的血药浓度监测及其临床意义

目的分析儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）采用大剂量甲氨蝶呤（MTX）化疗时的血药浓度监测结果,探讨其对于甲酰四氢叶酸钙（CF）个体化解救的临床意义。方法140例ALL患儿按照ALL危险度分组,标危组接受3．0g·m^-2 MTX治疗,高危组接受5．0g·m^-2 MTX治疗。采用高效液相色谱法测定MTX给药后固定时间点（24、44、68h）的血药浓度,根据血药浓度结果调整CF解救方案,同时观察不良反应。结果标危组24、44、68hMTX血药浓度分别为29．80±15．07、0．47±0．41、0．09±0．07μmol·L^-1,高危组24、44、68hMTX血药浓度分别为57．17±16．65、1．22±1．86、0．53±0．54μmol·L^-1,MTX血药浓度有显著的个体差异;不同剂量组CF解救剂量有显著差异;高危组中MTX排泄延迟的发生率较高（28／99）;所有病例无不可逆的严重不良反应发生。结论大剂量MTX化疗时的血药浓度监测是非常必要的,对于CF解救的个体化具有十分重要的临床意义。     

大黄酸对体外大鼠皮质神经元突起长度及微管相关蛋白2mRNA表达的影响

目的研究大黄酸(RH)对大鼠皮质神经元的营养作用,并初步探讨其相关机制。方法体外DMEM/F12+0.4%B27培养新生大鼠皮质神经元,应用神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP2)免疫细胞化学染色法鉴定神经元。神经元细胞加入RH 2,4和8μmol·L-1作用72 h,计算神经元平均突起长度;或分别同时加入Trk受体拮抗剂K252a 50 nmol·L-1和PI3K抑制剂LY294002 10μmol·L-1测量神经元平均突起长度。MTT法检测细胞存活,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测MAP2 mRNA表达。结果 NSE及MAP2免疫荧光染色结果显示,绝大多数细胞呈阳性反应,所培养的细胞90%以上为神经元。MTT和LDH检测结果表明,与溶媒对照组相比,RH2,4和8μmol·L-1能明显提高神经元存活率(P<0.01);平均突起长度明显增加(P<0.01)。与RH8μmol·L-1组相比,同时加入K252a 50 nmol·L-1或LY294002 10μmol·L-1,平均突起长度明显缩短(P<0.01)。与溶媒对照组相比,RH 2,4和8μmol·L-1组MAP2 mRNA表达量明显增加(P<0.01)。结论 RH对新生大鼠皮质神经元具有神经营养作用,能促进神经元突起的生长和提高神经元的存活率。RH神经营养作用可能部分通过激活Trk受体,继而激活Ras/PI3K/PKB通路而发挥的。     

丹皮酚影响依托泊苷对人胶质母细胞瘤细胞U251的细胞毒性

目的:研究丹皮酚(Paeonol,Pae)对人胶质母细胞瘤细胞增殖的影响及其对化疗药物敏感性的影响。方法:应用水溶性四唑盐法,检测不同浓度和时间点Pae对体外培养人胶质母细胞瘤U251细胞增殖的影响,联合Pae及不同浓度依托泊苷(VP-16),检测Pae对VP-16细胞毒性的影响并以SPSS17.0系统软件计算IC50值。结果:(1)Pae可呈剂量依赖性抑制人胶质母细胞瘤U251细胞的增殖,Pae在浓度为15.63 mg.L-1即可将U251细胞存活率显著降低至82.88%±1.24%(P<0.01),IC50为203.81 mg.L-1。(2)Pae对U251细胞增殖的抑制作用随时间延长而增强。(3)Pae与VP-16联合使用,可显著增强VP-16对U251的细胞毒性,当联用Pae剂量为15.63 mg.L-1时,VP-16的IC50值降低至376.81μmol.L-1,与单独使用时的IC50值(767.34μmol.L-1)相比降低幅度达50.89%。(4)Pae增强VP-16对U251细胞毒性的作用具有时间依赖性,随给药时间延长而逐渐增强。结论:Pae可抑制人胶质母细胞瘤U251细胞增殖。Pae与化疗药物VP-16联用时可以显著增强此化疗药物对胶质母细胞瘤的细胞毒性,提高胶质母细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。