新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的建立

目的 探讨建立新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的方法 .方法 用消化法分离新生大鼠心房肌细胞并进行原代培养.纯化后随机分为对照组(C组)、实验组(E1、E2、E3组),依次加入不同浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)伊屋诺霉素(ionomycin),以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测心房肌细胞游离钙离子浓度([Ca2+]i),建立新生大鼠心房肌细胞不同程度钙超载模型.结果 (1)培养至第4天,细胞生长密度可以达到瓶底70%左右;免疫组织化学染色鉴定:90%以上培养细胞α-肌动蛋白抗体染色呈阳性;(2)对照组心房肌细胞活性率为(73.00±2.37)%,与各实验组心房肌细胞活性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)经不同浓度ionomycin处理l h后,各实验组心房肌细胞[Ca2+]i明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(431.54±20.97、705.87±28.34、1 305.05±53.69 vs 257.08±18.63,P<0.05),且各实验组间心房肌细胞[Ca2+]i水平随ionomycin浓度的增加而上升,实验组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).光镜下形态学观察表明,随ionomycin浓度的增加,荧光强度逐渐加强,呈浓度依赖性.结论 应用钙离子载体ionomycin能够建立可靠的心房肌细胞钙超载模型.     

慢性心房颤动对人心房肌钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的探讨慢性心房颤动对人心房肌细胞内游离Ca2 浓度、心房肌组织钙调蛋白(calmodulin,CaM)及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法用激光共聚焦显微镜技术,对急性分离的慢性风湿性心脏病伴慢性房颤或窦性心律患者的心房肌细胞内游离Ca2 浓度进行测定,同时用West-ern blot法检测心房肌组织CaM及CaMKⅡ表达的变化。结果慢性风湿性心脏病伴慢性房颤患者心房肌细胞内游离Ca2 浓度显著高于窦性心律患者[(276.38±38.12)nmol/Lvs(122.28±45.63)nmol/L,(P<0.05)]。慢性风湿性心脏病伴慢性房颤患者心房肌CaM及CaMKⅡ的表达明显强于窦性心律患者。结论慢性房颤患者心房肌细胞内存在钙超载,Ca2 /CaMKⅡ通路可能是慢性房颤心房肌的信号转导途径之一。     

The effects of KN-93 on β-MHC and ANF in cardiomyocytes hypertrophy.

目的 探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC) mRNA和心钠素(ANF) mRNA表达的影响.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10 μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达.结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加.KN-93可抑制上述效应.结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达.     

尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca2+浓度及Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα表达的影响

目的 探讨尼莫地平( nimodipin,NIM)对戊四氮( pentylenetetrazol,PTZ) 点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离 Ca2+浓度([Ca2+]I)、ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium / calmodulin-dependent protein kinase Ⅱa,CaMKⅡα 蛋白表达的影响.方法 将动物分为正常对照组、PTZ 组和 NIM + PTZ组,采用 PTZ 慢性点燃癫痫模型,应用 Mor-ris 水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]I变化,Western blot方法测定 CaMKⅡα蛋白的表达.结果 PTZ 组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]I明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与 PTZ 组比较,NIM + PTZ 组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]I;下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05).结论 PTZ 点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM 可以降低细胞内[Ca2+]I;,提高 CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力.     

KN-93对肥大心肌细胞β-肌球蛋白重链及心钠素表达的影响

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA和心钠素(ANF)mRNA表达的影响。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达。结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加。KN-93可抑制上述效应。结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达。     

缺氧对心肌细胞内游离钙浓度和细胞膜Ca2+-ATPase表达的影响及薯蓣皂甙的干预作用

目的探讨缺氧对心肌细胞内游离钙离子浓度和细胞质膜Ca2 -ATPase表达的影响及薯蓣皂甙的干预作用.方法原代培养大鼠心肌细胞,制备心肌细胞缺氧模型,随机分为正常对照组、缺氧损伤组、左旋氨氯地平组、薯蓣皂甙组.分别测定各组心肌细胞内游离钙离子的浓度(FURA2/AM荧光探针法)和细胞质膜上Ca2 -ATPase 表达水平(RT-PCR法).结果缺氧损伤组较对照组心肌细胞内游离钙离子浓度显著上升(P<0.01),细胞质膜上的钙泵的表达明显减弱(P<0.05),经薯蓣皂甙及左旋氨氯地平干预后细胞内游离钙浓度均降低(P均<0.01),细胞膜上钙泵的表达均明显增强(P均<0.01).结论细胞内钙超负荷是缺氧损伤心肌细胞的主要机制之一,薯蓣皂甙通过增加细胞膜上钙泵的表达有效减轻心肌细胞内的钙超载,对缺氧心肌具有保护作用.     

ISO通过CaMKⅡ和PKA激活RyR2诱发心肌细胞凋亡

目的：探讨异丙肾上腺素（ISO）持续激活Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和蛋白激酶A (PKA)后对心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：将H9C2心肌细胞分为Control组、ISO组、ISO+KN93 (CaMKⅡ抑制剂)组、ISO+H-89 (PKA抑制剂)组，经不同药物干预后，通过CCK-8法检测心肌细胞活力，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒和流式细胞术检测心肌细胞凋亡，Western blot法检测CaMKⅡ、PKA、兰尼碱受体2 (RyR2)及凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bax、Bcl-2的表达情况，荧光显微镜观察细胞形态变化和钙荧光强度。结果：与Control组比较，ISO组细胞活性降低，CaMKⅡ、PKA和RyR2的磷酸化水平增加，凋亡蛋白Cleaved-Caspase3、Bax/Bcl-2表达增加，胞内钙含量增多，细胞凋亡率增多，差异均有统计学意义（P<0.01）；与ISO组比较，ISO+KN93和ISO+H-89组细胞活性增高，CaMKⅡ、PKA和RyR2的磷酸化水平降低，凋亡蛋白Cleaved-Caspase...     

血管紧张素Ⅱ对人心房肌细胞内Ca2+的影响及替米沙坦的拮抗作用

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人心房肌细胞[Ca2+]i的影响,以及AngⅡ受体拮抗剂替米沙坦的拮抗作用. 方法:急性分离单个人心房肌细胞,实验分4组:正常对照组;AngⅡ组,加入终浓度为0.1 μmol/L的AngⅡ;替米沙坦组,加入终浓度为10 nmol/L的替米沙坦;AngⅡ+替米沙坦组,替米沙坦10 nmol/L与AngⅡ 0.1 μmol/L同时加入. 以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15 min检测[Ca2+]i变化. 结果:对照组和替米沙坦组人心房肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低. AngⅡ加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著增高(P<0.01 vs对照组). 而AngⅡ+替米沙坦组细胞内荧光光密度值显著低于AngⅡ组(P<0.01 vs AngⅡ组). 结论:AngⅡ可引起人心房肌细胞内钙超载,替米沙坦能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载.     

大豆异黄酮对大鼠缺血再灌注脑组织CaMKⅡ表达的影响

目的:研究大豆异黄酮对缺血再灌注脑组织钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ表达的影响.方法:选取603健康成年SD大鼠,随机分成假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和大豆异黄酮预处理组(SI组),各203.采用Longa改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血2 h后再灌注24 h,行神经功能缺损评分,TTC染色检测脑梗死体积,Western blotting技术检测CaMKⅡ蛋白表达.结果:I/R组神经功能缺损评分明显高于Sham组(P<0.01),与I/R组比较,SI组神经功能缺损评分明显下降(P<0.01).I/R组梗死体积高于Sham组(P<0.01),与I/R组比较,SI组梗死体积降低(P<0.01).I/R组缺血区CaMKⅡ蛋白表达量低于Sham组(P<0.01),与I/R组比较,SI组缺血区CaMKⅡ蛋白的表达量增加(P<0.01).结论:大豆异黄酮可能通过上调缺血区CaMKⅡ蛋白表达,减轻缺血再灌注脑损伤.     

CaMK Ⅱ途径在慢性心衰模型触发性心律失常产生中的作用

目的研究异丙肾上腺素和高频率刺激对心衰心肌细胞晚发后除极(DADs)产生的影响以及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)途径在DADs产生中的作用。方法制备家兔慢性心衰模型,酶解法分离心室肌细胞,将细胞分为正常对照组(Ctl组)、正常对照+异丙肾上腺素干预组(Ctl+ISO组)、慢性心衰组(CHF组)、慢性心衰+异丙肾上腺素干预组(CHF+ISO组)、慢性心衰+异丙肾上腺素干预+KN93干预组(KN93组)。应用全细胞膜片钳技术记录动作电位(AP),采用含1μmol/L异丙肾上腺素的正钙蒂罗德液灌流心室肌细胞,在1～2Hz电刺激下,诱发心肌细胞产生DADs。在此基础上用KN93(1μmol/L)灌流心衰心肌细胞,观察CaMKⅡ的特异抑制剂KN93对DADs发生率、DADs的幅值、联律间期和发生个数的影响。结果灌流正钙蒂罗德液,并在1Hz电刺激下,Ctl组、Ctl+ISO组、CHF组、CHF+ISO组的DADs发生率分别为15.0%(3/20)、45.0%(9/20)、26.7%(12/45)、92.3%(36/39)。以含1μmol/L异丙肾上腺素和1μmol/L KN93的蒂罗德液灌流心衰心肌细胞,在1Hz电刺激下,KN93组的DADs诱发率为50%(7/14);再给予2Hz的刺激,记录到DADs的幅值为(1.82±0.78)mV、联律间期为(524.62±390.91)ms、个数为(2.42±0.90)。结论异丙肾上腺素和高频率刺激均可诱发心衰心肌细胞DADs的产生;模型应激状态下,KN93可以抑制慢性心衰心肌细胞DADs,CaMKⅡ信号转导途径可能是慢性心衰触发性心律失常产生的重要途径。     

Effect of chronic electrical stimulation on transformation of myosin heavy chain isoforms in differentiated C2C12cells

目的 研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimulation with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响.方法 以体外2％马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型.实验分3组:对照组、CsA组和KN93组.对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10 +40 Hz,1.5 h/d,共2d)处理.通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性.结果 在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHC Ⅰ的mRNA及蛋白的表达.与分化对照组MHC Ⅰ mRNA相对表达量(0.79 ±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC Ⅰ型纤维的表达(与对照组比P＜0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC Ⅰ蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02).对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93 (0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P＜0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P＞0.05).CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P＜0.05),但仍显著低于正常水平(P＜0.05).结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHC Ⅰ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据.     

创伤后应激障碍样行为异常大鼠海马Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶表达的研究

目的探讨创伤后应激障碍(PTSD)样行为异常的神经生物学机制.方法以海马惊厥阈下电刺激方法制备PTSD大鼠模型,采用流式细胞仪、荧光标记术及Western 印迹等方法,检测PTSD样行为异常大鼠海马细胞内游离Ca2+含量与钙调素(CaM)相对活性平均通道荧光,以及海马组织总CaM、Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)与Ⅳ(CaMKⅣ)的表达.结果电刺激停止后24 h大鼠海马细胞内游离钙浓度(nmol/L)增至顶峰(487.34±117.93,P＜0.01),72 h时仍明显增高(289.46±69.45,P＜0.05);游离CaM平均通道荧光则同步降低(24 h时为1.5±0.4,P＜0.01;72 h时为2.5±0.6,P＜0.05);而海马组织总CaM表达于电刺激停止后48 h内明显增多(P＜0.01),CaMKⅡα表达则显著降低(P＜0.01),CaMKⅣ表达于电刺激停止后24 h内明显增高(P＜0.05).结论海马细胞Ca2+-CaM-CaMKIIα/CaMKIV信号途径较长时程调控紊乱,可能是实验动物持续性PTSD样行为异常的重要病理生理基础之一.     

丙泊酚对新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察使用丙泊酚前及丙泊酚 (5 0 ,2 5 0 μmol/L)预处理后 ,氯化钾和咖啡因诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果　丙泊酚 5 0 μmol/L使氯化钾诱发的新生或成年大鼠心肌细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,较对照组有明显差异 (P <0 .0 1 ) ,对新生大鼠心肌细胞的抑制作用较成年大鼠明显。丙泊酚 2 5 0 μmol/L使细胞内钙荧光强度峰值进一步降低。但两种浓度的丙泊酚对咖啡因诱发的两种心肌细胞钙荧光强度的升高均无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　丙泊酚浓度依赖地降低心肌细胞内钙离子浓度 ,与其抑制细胞外钙内流有关 ,它对新生大鼠心肌细胞的抑制作用更强。提示临床上使用丙泊酚作为麻醉剂 ,尤其对小儿麻醉时应有足够重视。     

CaMKⅡ调控脂多糖诱导的心肌细胞内钙、ROS的作用机制研究

目的 探究钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞胞浆Ca2+、活性氧(ROS)的分子作用机制.方法 大鼠心肌细胞(H9C2)经10.0μg/ml的LPS处理48 h,构建心肌炎体外细胞模型.实验分为对照组、LPS组(10.0μg/ml的LPS作用48 h)、KN93+LPS组[5.0μ...     

美金刚改善血管性痴呆大鼠认知功能及相关作用机制的研究

目的 研究美金刚对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能及海马N-甲基D-天(门)冬氨酸-2B亚基受体(NMDAR-2B)水平、突触后致密物质95(PSD-95)表达和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的影响.方法 采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型,将144只Wistar大鼠随机分为假手术组、VD模型组(VD组)和美金刚治疗组(美金刚组).于术后4、8、12、16周用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆水平,用RT-PCR法检测大鼠海马NMDAR-2B水平,用免疫组织化学法检测PSD-95的表达,用32P掺入法检测大鼠海马CaMK Ⅱ的活性.结果 与假手术组比较,VD模型组大鼠术后各时间点的学习记忆能力均显著下降(均P<0.01);海马NMDAR-2B的水平和PSD-95的表达在术后4周时明显增高(P<0.05或0.01),术后8～16周显著降低(均P<0.01);海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后8周下降(P>0.05),术后12、16周明显降低(均P<0.01).美金刚组术后4周时上述各项检测结果与假手术组差异无统计学意义,术后8、12周时学习记忆水平、NMDAR-2B水平和PSD-95的表达明显高于VD模型组(P<0.01或0.05);而总CaMKⅡ活性与VD模型组差异无统计学意义.结论 VD发生发展过程中,NMDAR-2B水平、PSD-95的表达和总CaMK Ⅱ活性先过度激活后明显降低,美金刚能拮抗或上调海马NMDAR-2B表达并改善VD大鼠的认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限.     

Connexin 43-膜纳米管-Ca2+信号途径参与房颤发生的机制研究

目的 探讨膜纳米管(membrane nanotubes, MNTs)参与心房颤动(atrial fibrillation, AF)发生的作用机制。方法 8周龄雄性SD大鼠随机分为电刺激组和假手术组，每组10只。电刺激组经食道高频心房起搏进行电刺激诱导建立大鼠AF模型，假手术组不予心房起搏电刺激。分离两组大鼠心房肌细胞建立细胞水平电刺激组与假手术组，在此基础上，给予电刺激组心房肌细胞MNTs结构抑制剂Cyto D建立细胞水平电刺激+Cyto D组。利用免疫荧光染色评估心房肌细胞之间的MNTs变化；应用细胞内钙离子(calcium ion, Ca²⁺)荧光钙探针标记心肌细胞中Ca²⁺,随后利用流式细胞术检测荧光探针标记的Ca²⁺变化；采用蛋白免疫印迹法检测缝隙连接蛋白43(Connexin 43)的蛋白水平表达。结果 应用经食道高频心房起搏电刺激成功建立大鼠AF模型。与假手术组相比，电刺激组心房肌细胞之间MNTs连接增多增粗，钙信号显著增强(P<0.01)。与电刺激组相比，电刺激+Cyto D组MNTs减少变细，钙信...     

慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响

目的研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimula-tion with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响。方法以体外2%马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型。实验分3组:对照组、CsA组和KN93组。对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3 d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10+40 Hz,1.5 h/d,共2 d)处理。通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性。结果在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHCⅠ的mRNA及蛋白的表达。与分化对照组MHCⅠmRNA相对表达量(0.79±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC I型纤维的表达(与对照组比P<0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC I蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02)。对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93(0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P<0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P>0.05)。CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P<0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.05)。结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHCⅠ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据。     

血管紧张素Ⅱ及替米沙坦对大鼠心房肌细胞钾和钙电流的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和替米沙坦对SD大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和L型钙电流(ICa-L)的作用。方法急性酶解法分离SD大鼠心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察AngⅡ、替米沙坦以及AngⅡ联合替米沙坦对大鼠心房肌细胞Ito和ICa-L的影响。结果 AngⅡ(0.1μmol/L)和替米沙坦(0.01μmol/L)以及两药联合均能抑制大鼠心房肌细胞Ito,AngⅡ组、替米沙坦组、联合组干预前后Ito的电流密度值比较差异有统计学意义[(22.48±2.75)vs(15.71±2.06)pA/pF,(24.16±2.36)vs(16.15±1.82)pA/pF,(24.41±2.27)vs(21.35±1.46)pA/pF,P<0.05]。AngⅡ(0.1μmol/L)能显著增强大鼠心房肌细胞ICa-L的峰值电流密度[(-4.51±0.38)vs(-5.16±0.29)pA/pF,P<0.01];替米沙坦(0.01μmol/L)对心房肌细胞ICa-L无明显作用[(-4.35±0.27)vs(-4.29±0.34)pA/pF,P>0.05],但联合组中替米沙坦可拮抗AngⅡ对ICa-L的增强效...     

脑发育不同阶段甲醛暴露对大鼠学习记忆能力及海马CA3区CaMKⅡ表达的影响

目的:研究低浓度甲醛吸入对脑发育不同阶段大鼠空间学习记忆能力、生长发育及海马CA3区CaMKⅡ表达的影响.方法:选择生后3 d、14 d、60 d(相当于新生儿期、幼年期、成年期)Wistar大鼠,每年龄段随机分为对照组和染毒组各8只,采用吸入方式染毒(甲醛浓度为0.5 mg/m3),2 h/d,连续28 d;监测大鼠体重,用Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力,免疫组织化学方法检测海马CA3区CaMKⅡ表达.结果:所有染毒组大鼠较同龄对照组均出现体重增长落后(P<0.05);新生鼠染毒组和幼年鼠染毒组在Morris水迷宫中定位航行实验逃避潜伏期比同龄对照组明显延长(P<0.05);空间探索试验穿越平台次数也明显少于同龄对照组(P<0.05);免疫组织化学检测海马CA3区CaMKⅡ表达较同龄对照组下降(P<0.05);而成年组除染毒组体重增长落后外,水迷宫逃避潜伏期、穿越平台次数及海马CA3区CaMKⅡ表达两组均无显著性差异(P>0.05).结论:甲醛吸入染毒可能影响Wistar大鼠学习记忆能力,脑发育早期(新生儿期和婴幼儿期) 对甲醛的神经毒性更为敏感;海马CA3区CaMKⅡ表达下降可能是甲醛影响大鼠学习记忆的机制之一.     

CaMK Ⅱ在小鼠重症急性胰腺炎胰腺损伤中的作用

目的 观察钙调素依赖蛋白激酶（CaMK Ⅱ）在重症急性胰腺炎（SAP）小鼠胰腺组织中的表达情况,并探讨其抑制剂KN93对SAP胰腺损伤的保护作用和机制。方法 36只健康雄性C57小鼠随机分为假手术组、SAP组、KN93组、SAP组+KN93组,9只/组。于造模后24 h收集血清和胰腺组织;采用HE染色观察胰腺组织病理改变;Elisa检测血清脂肪酶、淀粉酶活性以及炎性因子变化情况;免疫印迹法检测CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ、p-NF-κB、MAPK、p-MAPK在小鼠胰腺组织中的表达变化。 结果 与假手术组比较,SAP组p-CaMK Ⅱ、p-NF-κB、p-MAPK表达水平升高（P<0.05）。KN93干预后,SAP小鼠胰腺组织病理损伤减轻,血清脂肪酶、淀粉酶以及炎性因子（TNF-α、IL-6）水平降低（P<0.05）,同时NF-κB、ERK和MAPK蛋白磷酸化也降低（P<0.05）。结论 CaMK Ⅱ蛋白在SAP疾病胰腺组织活性升高,CaMK Ⅱ抑制剂KN93能有效减轻SAP小鼠胰腺损伤和炎症程度,其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关。