聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因治疗金黄地鼠颊癌的实验研究

目的：观察聚乙二醇-聚谷氨酸（PEG—PBLG）纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK治疗金黄地鼠颊癌的疗效。方法：用二甲基苯并蒽（DMBA）诱导金黄地鼠颊黏膜癌变，建立颊癌动物模型。以PEG—PBLG纳米微球为载体，介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-CDglyTK瘤内转染，腹腔注射5-氟胞嘧啶（5-FC）和丙氧鸟苷（GCV），描绘肿瘤生长曲线，RT-PCR检测CDglyTK的mRNA水平，免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达，原位末端标记法检测肿瘤细胞凋亡。采用SPSS10．0统计软件包进行两样本均数χ^2检验。结果：成功建立金黄地鼠颊癌模型．RT-PCR可检测到转染肿瘤细胞中CDglyTK的mRNA表达；腹腔注射5-FC和GCV后，肿瘤生长受到明显抑制；联合使用5-FC和GCV的金黄地鼠颊癌生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组，凋亡指数（AI）显著高于对照组（P〈0．01），同时增殖指数（PI）则显著低于对照组（P〈0．01）。结论：PEG—PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK可有效治疗金黄地鼠颊癌．为口腔鳞癌的基因治疗提供了新的思路。     

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的：观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法：脂质体介导真核表达载体PBBS212－hTR转染Tca8113细胞系，运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡，并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化，结果：转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓，群体倍增时间较未转染和转染空质粒组明显延长，流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降，有亚二倍体凋亡峰出现，转染后细胞p21基因表达水平显著增高，裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱，结论：反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长，同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡，端粒酶可能是肿瘤基因治疗的理想靶点。     

链球菌722制剂对人舌鳞癌Tca8113细胞直接作用的实验研究

本文作者报告了链球菌７２２制剂对人舌鳞状细胞癌Ｔｃａ８１１３细胞直接作用的观察，结果表明，虽然癌细胞在０．２～１．０ＫＥ／ｍｌ浓度持续作用下，丧失了集落形成的能力，镜下连续观察见细胞生长抑制；抽去７２２后细胞立即恢复原生长速度增殖。在荷人舌癌裸小鼠的瘤内、瘤周和腹腔内注射，由于裸小鼠先天缺乏Ｔ细胞免疫功能，均未见移植瘤缩小。提示：７２２对癌细胞的直接作用是暂时和可逆的，其抗癌作用主要是通过促进机体     

β-榄香烯对Tca8113细胞株诱导分化的研究

目的：研究β-榄香烯对Tca8113（口腔舌鳞癌细胞株）细胞株诱导调亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后的亚细胞结构。结果：β-榄香烯对Tca8113细胞株有明显的抑制作用。流式细胞仪分析不同的药物浓度、不同的作用时间细胞凋亡的发生均有显著意义，Gl期细胞减少，S期细胞增多。亚细胞结构细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：β-榄香烯能抑制Tca8113细胞增殖，促进细胞凋亡，阻止S期细胞过程。     

Bcl-2与HER-2反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

目的探讨Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸(ASODN)联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的干预作用及其分子机制。方法实验分成正常对照组、Bcl-2正义干预组、HER-2正义干预组、Bcl-2反义干预组、HER-2 反义干预组、Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合干预组,共6组。脂质体转染后不同时间分别进行电镜观察、 RT-PCR检测,以观察不同条件处理后各组细胞的凋亡、Bcl-2与HER-2基因表达有无差别。结果 Bcl-2与HER-2 基因反义寡核苷酸联合干预组,转染后出现凋亡小体和各期凋亡细胞;Bcl-2基因表达下降36%,HER-2基因表达下降51%。联合转染作用优于单反义基因转染作用。结论 Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合转染能够促进肿瘤细胞凋亡并下调Bcl-2与HER-2基因的表达。     

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

我们采用c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染的方法，通过一系列实验，观察对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的抑制作用。     

沙门菌介导骨桥蛋白siRNA对Tca 8113细胞体外生长的影响

目的:研究应用减毒沙门菌感染性转基因骨桥蛋白siRNA(OPNsiRNA)抑制Tca 8113细胞生长和转移的可行性和作用。方法:人工合成OPNsiRNA,同时,合成无义ControlsiRNA作为对照,进行以下平行试验;合成siRNA,分别构建表达载体pIRES2-EGFP,转染减毒沙门菌SL7207,获得的重组菌SL-OPNsiRNA和SL-ControlsiRNA分别体外感染Tca 8113细胞,观察细胞感染率及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响,同时以Western印迹检测转基因OPNsiRNA对细胞内源性OPN、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)蛋白表达的影响。采用SPSS15.0软件包进行组间t检验。结果:重组减毒沙门菌感染Tca 8113的效率可达80.0%以上,两者之间无显著差异(P>0.05);OPNsiRNA可显著抑制Tca 8113细胞的生长和诱导凋亡;感染后24h,细胞OPNsiRNA和Control-siRNA的迁移指数分别为0.56±0.10和0.82±0.05,侵袭力指数分别为0.53±0.13和0.83±0.06,2组之间均存在显著差异(n=12,P<0.01);同时,OPNsiRNA感染可显著降低细胞内OPN、MMP-2和uPA蛋白的表达量。结论:携带OPN-siRNA的减毒沙门菌可有效通过细菌感染方式,转入舌癌细胞,发挥抗肿瘤生长和转移的作用。     

5-FU聚乳酸纳米微球对人舌癌Tca83细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨5-FU聚乳酸纳米微球抑制人舌癌Tca83细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法:5-FU聚乳酸纳米微球、5-FU及空白对照组分别作用于Tca83细胞,四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率;吖啶橙(AO)荧光染色法检测细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI);流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化。结果:5-FU与5-FU聚乳酸纳米微球组自第3天起与对照组之间存在显著性差异(P<0.05),且差异随作用时间的延长、作用浓度的增加而增大,其中5-FU组持续到第7天其后差异的变化不再具有统计学意义;而5-FU聚乳酸纳米微球组则一直持续到第11天且差异的增加始终具有统计学意义,同时自第7天起与同条件下5-FU各浓度组比较差异亦有显著性(P<0.01)。结论:5-FU聚乳酸纳米微球可抑制Tca83细胞增殖并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,且作用时间较5-FU延长、作用效果较5-FU提高。     

阿霉素诱导鸟嘌呤-四链体形成对Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响

目的探讨阿霉素诱导端粒重复序列核苷酸形成G4及其抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的功能作用。方法通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移实验来分析不同质量浓度的阿霉素对d（TTAGGG）3、d（TTAGGG）4和d（TTAGGG）5迁移速度的影响以及对d（TTAGGG）4、d（TTAGAG）4、d（TTAGGG）5和d（TTAGGGT）电泳的影响;用二甲基硫酸盐（DMS）甲基化保护实验分析d（TTAGGG）4和d（TTAGAG）4中G的甲基化作用;利用经典端粒重复序列扩增法（TRAP）和改良TRAP- G4检测法分析阿霉素抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的特点。结果质量浓度为5.00 μg/mL阿霉素可使部分线性d（TTAGGG）4和d（TTAGGG）5转变成有二级结构的复合物,呈现为新的高速迁移条带。质量浓度为1.25 μg/mL阿霉素可保护端粒重复序列中G免遭甲基化作用。质量浓度为2.50、1.25 μg/mL阿霉素在TRAP检测中可部分抑制端粒延伸反应,而在TRAP- G4检测中可完全抑制端粒延伸反应。结论阿霉素可通过诱导端粒重复序列形成分子内G4结构抑制端粒酶介导的端粒延伸反应。     

重离子辐照对舌癌Tca8113细胞中转移相关基因RhoC的作用

目的：：探讨重离子辐照对舌癌侵袭转移相关基因RhoC的作用。方法：应用不同剂量重离子束(12 C6+)对体外培养的舌癌Tca8113细胞进行辐照,采用荧光实时定量PCR法及Western Blot法观察细胞中RhoC mRNA及蛋白的表达变化。结果：与空白对照组比较,12C6+辐照后4h,各实验组细胞中RhoC mRNA的表达降低(P<0.05);辐照后12 h,2 Gy及4 Gy组细胞中RhoC mRNA表达增加,随后各组细胞中RhoC mRNA表达再次下降(P<0.05);辐照后12 h,细胞中RhoC蛋白表达量随辐照剂量的增加而增高,在4 Gy时达到高峰;24 h后随剂量的增加逐渐降低;在相同辐照剂量下,细胞中RhoC蛋白的表达随时间推移呈下降趋势,RhoC蛋白表达和RhoC mRNA表达的趋势相同。结论：12 C6+重离子束可以下调舌癌Tca 8113细胞中RhoC基因的表达。     

银杏酚酸提高Tca8113对化学治疗药物敏感性的研究

目的 探讨银杏酚酸(GA)提高舌鳞状细胞癌Tca8113对化疗药物的敏感性及其机制.方法 以甲噻唑四唑氮(MTT)检测单独用药与联合用药时Tca8113的生存率,蛋白质印迹技术检测不同作用时间GA对Tca8113中蛋白质激酶D(PkD)-2的表达和对其磷酸化的影响,利用shRNA干扰技术沉默Tca8113中nKD-2基...     

TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义

目的 观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type 8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义.方法 应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达.结果 免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达.TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P＜0.05).免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达.Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织.结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节.     

阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞影响的研究

目的：观察阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞端粒酶活性、增殖及凋亡的影响，探讨G-四联体结构生物学功能。方法：通过TRAP法和改良TRAP—G4法，分析阿霉素对Ra8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响。研究分2个实验组进行，用药组培养液含2．5μmol几阿霉素，非用药组培养液加相应体积生理盐水，细胞培养1、3、5和7d后．利用TRAP法检测其端粒酶活性；流式细胞仪分析其细胞周期和凋亡率，并对2实验组间凋亡率进行t检验；Giemsa染色和SA—β—gal染色观察凋亡和衰老细胞。结果：TRAP和改良TRAP—G4检测表明，阿霉素通过诱导G4形成抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应。在2．5μmol／L阿霉素作用下，Tca8113细胞端粒酶活性在3d后出现降低：用药组细胞增殖受抑制，停滞于G0—G1期和S期；所有观察期内2实验组间细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0．05）：用药组出现衰老和凋亡细胞。结论：阿霉素诱导G-四联体形成，可抑制Tca8113细胞端粒酶活性，降低其增殖活性．促进衰老和凋亡发生。     

4、5、7-三羟基异黄酮对人舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力的影响

目的观察4、5、7-三羟基异黄酮(Genistein)对舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力及金属基质蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法以细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测Genistein对Tca8113细胞侵袭的影响;采用明胶酶谱法及凝胶图像分析系统检测Genistein对胞外分泌MMP-2蛋白的影响;采用WesternBlot及细胞免疫组织化学检测Genistein对胞内MMP-2蛋白表达的影响。结果Genistein可明显抑制Tca8113细胞的迁移侵袭,Genistein组与对照组之间有明显的差异(P<0.01);Genistein可使细胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表达下调,活性MMP-2下调18.75%,MMP-2下调28.31%;WesternBlot及细胞免疫组织化学均检测到Genistein组与对照组相比能降低胞内MMP-2蛋白的表达。结论Genistein可以明显抑制Tca8113舌癌细胞株的体外迁移侵袭能力,并减少Tca8113胞内和胞外分泌的MMP-2蛋白的表达。     

维生素E琥珀酸酯诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的研究

目的探讨维生素E琥珀酸酯（VES）对人舌鳞癌Tca8113细胞的凋亡诱导作用及其可能的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测VES对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用;应用流式细胞仪分析不同质量浓度VES处理后舌鳞癌细胞的凋亡率;Fas中和抗体进行阻断实验;以细胞免疫化学法和流式细胞仪检测VES处理后肿瘤细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达的变化。结果不同质量浓度的VES处理后,舌鳞癌细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞的凋亡率显著上升,呈现时间依赖性和剂量依赖性;Fas中和抗体进行阻断后,细胞凋亡率显著下降;VES处理后细胞Fas蛋白表达增强;流式细胞仪检测细胞表面Fas平均荧光强度也显著升高。结论VES对舌鳞癌细胞具有凋亡诱导作用,其作用机制与肿瘤细胞表面Fas蛋白表达的上调有关。     

TRPM1在舌癌组织及Tca8113细胞中表达的研究

目的 观察瞬间受体势M亚基1(Transient Receptor Potential Melastatin-1,TRPM1)在舌癌组织及舌癌Tca8113细胞系中的表达情况。方法 选取25例舌癌组织作为实验组,15例正常舌组织作为对照组,应用免疫组化及Western-blot的方法检测TRPM1蛋白在舌癌组织及Tca8113细胞与正常舌组织中的表达;应用RT-PCR方法检测TRPM1 mRNA在舌癌细胞与正常舌组织中的表达。结果 免疫组化实验结果显示,23/25例舌癌组织中TRPM1呈强阳性表达,2/25例呈阴性表达;12/15例正常舌体组织中TRPM1呈阴性表达,3/15例呈弱阳性表达。TRPM1在舌癌与正常舌组织中的表达有显著性差异(P<0.05);Western-blot实验显示舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113细胞中TRPM1蛋白的表达水平高于其在正常舌组织的表达;RT-PCR实验结果也证实TRPM1 mRNA在Tca8113细胞中的表达高于正常舌组织。结论 TRPM1与舌癌的发生可能存在相关性。     

体外诱导Tca8113细胞产生耐药性的分析

目的探讨Tca8113细胞长期接触卡铂以后耐药性表达情况。方法以Tca8113细胞系为研究对象,采用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续培养诱导其产生耐药性。用MTT法检测细胞耐药指数,LsAB免疫组化法检测耐药蛋白P糖蛋白- 170（Pgp- 170）、谷胱苷肽S转移酶- π（GST- π）、多药抗药性相关蛋白（MRP）和拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）的表达,RT- PCR检测多药耐药基因（MDR）、MRP和GST- π的表达。结果诱导后Tca8113/卡铂（CBP）对氨甲喋呤（MTX）、CBP、平阳霉素（PYM）、长春新碱（VCR）的抗药性明显升高,但对5- 氟尿嘧啶（5- FU）抗药性增加不明显。在免疫组化和RT- PCR中Pgp- 170、MRP和GST- π表达升高,TopoⅡ表达降低。结论Tca8113细胞系在卡铂长期刺激的环境中多种耐药相关蛋白表达上升,表明肿瘤细胞的耐药现象受到多种基因的调节。Tca8113/CBP可以作为一个肿瘤耐药研究的平台。