角质形成细胞与成纤维细胞对中波紫外线照射应激能力的比较研究

目的：观察两种皮肤细胞即原代角质形成细胞及成纤维细胞对中波紫外线照射的反应差异。方法：采用不同剂量中波紫外线(UVB)照射上述两种细胞，评估UVB对细胞作用的时间及剂量效应，以倒置光学显微镜观察细胞受损程度，MTT法检测细胞活性。结果：UVB照射后；细胞损伤程度均随照射剂量加大而加重。另经24、48、72小时孵育后，分别对两种细胞进行不同时间段的细胞活性(MTT)比值比较(72／24小时，72／48小时)，发现细胞活性比依次递减：原代角质形成细胞(1．16和1．63)，成纤维细胞(1．05和1．09)。MTT结果显示低剂量紫外线照射时，细胞损伤恢复可发生在照射后48小时；高剂量紫外线照射后，细胞的损伤程度均随孵育时间延长而加重。结论：原代角质形成细胞抵抗紫外线辐射损伤的能力较强，而成纤维细胞相对较易受损。     

中波紫外线对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的：探讨中波紫外线（UVB）对HaCaT细胞损伤的影响。方法：取对数生长期的HaCaT细胞,用0、30、60、90 mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0、24、48、72h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在30～60mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,细胞的增值活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论：UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

UVB照射对PIG1细胞增殖活性的影响

目的：探讨UVB照射对正常人黑素细胞PIG1细胞形态及增殖活性的影响。方法：取对数生长期的PIG1细胞,分别以50、100、200、300、400、500、600和700mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0h、24h和48h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在50～200 mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,PIG1细胞的增殖活性逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了一定剂量的UVB照射可以促进细胞增殖。结论：一定剂量的UVB照射有刺激PIG1细胞增殖及树突生长的作用。     

UVB辐射后HaCaT细胞光产物的产生和清除及EGCG的干预作用

目的:环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)是细胞受紫外线损伤后产生的特征性光产物之一。本文观察UVB辐射后HaCaT细胞光产物CPDs的产生和清除没食子儿茶素没食子酸脂(epigallocatechingallate,EGCG)的干预作用。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞并用EGCG干预处理,采用免疫组织化学法在照光后不同时间点检测CPDs的产生和清除。结果:细胞损伤程度随UVB辐射剂量加大而增大。30mJ/cm2UVB辐射后HaCaT细胞开始产生CPDs,0.5h左右达到高峰。同时细胞也开始清除CPDs,辐射后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,至24h基本清除CPDs。EGCG处理UVB辐射的细胞CPDs少于单纯照光组(P<0.05)。结论:细胞损伤程度随UVB辐射剂量增大而加重,UVB辐射后HaCaT细胞对CPDs的清除存在快速期和慢速期;EGCG可以降低UVB辐射所致的光产物水平。     

川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。     

羟氯喹及黄芩等中药对紫外线损伤角质形成细胞的保护作用

目的:研究羟氯喹及某些中药活性成分对紫外线损伤角质形成细胞保护作用的影响及作用环节。方法:采用30、60、90mJ/cm~2剂量的UVB照射培养的永生角质形成细胞HaCaT,以羟氯喹及中药茶多酚(EGCG)、黄芩、川芎进行干预处理,观察其保护性能及作用环节。以普通光学显微镜对照观察细胞受损程度,记录72 h内细胞生长曲线,以MTT法检测细胞活性,以酶联免疫吸附实验检测IL-6和TNF-α的分泌量。结果:经UVB照射后,受试HaCaT细胞的损伤程度与紫外线照射剂量呈正相关,细胞计数与活性下降39％-80％,在照射后72h损伤程度超过90％。药物处理后细胞活性可恢复10％-72％。经比较表明,羟氯喹具有一定的光保护作用(OD值为0.43±0.04至0 96±0.04,P<0.05),EGCG具有较强的光保护效应(OD值为1.19±0.07至1.28±0.06,P相似文献   

黄芩苷和川芎对UVB辐射皮肤成纤维细胞的影响

目的：研究中药活性成分黄芩苷，川芎对中波紫外线（UVB）辐射损伤成纤维细胞保护作用的影响及相关作用机制。方法：采用0mJ／cm^2，30mJ／cm^2，60mJ／cm^2，90mJ／cm^2剂量UVB照射培养的原代人皮肤成纤维细胞，同时加入黄芩苷和川芎干预处理，观察细胞损伤的形态学变化，以MTT法检测细胞活性，以酶联免疫吸附实验（ELISA）检测IL-10，IL-12和TNF—α的分泌量。结果：UVB照射后，细胞损伤程度与照射剂量呈正相关，增殖活性下降；此外，UVB照射后IL-10等细胞因子分泌增加，而加入所试中药干预可明显抑制细胞损伤和相关细胞因子分泌。结论：黄芩苷、川芎有一定的光保护作用，抑制炎症细胞因子IL-10，IL-12，TNF-α的分泌可能是其减轻UVB光损伤的机制之一。     

EGCG对中波紫外线辐射后原代人角质形成细胞中光产物产生和清除的影响

目的:观察中波紫外线(UVB)辐射后人原代角质形成细胞中环丁烷嘧啶二聚体(cycl obut ane pyrimidine dimmer s,CPDs)的生成和清除情况,以及没食子儿茶素没食子酸酯(epigall ocatechingall ate,EGCG)干预对上述过程的影响。方法:以不同剂量UVB照射原代角质形成细胞后并加入EGCG干预处理,采用免疫组织化学法检测UVB照射后不同时段细胞中CPDs的产生和清除情况。结果:UVB照射后细胞中CPDs开始产生,1h左右达到高峰;CPDs在照光后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,至24hCPDs被基本清除。照光前后加入EGCG干预减少UVB引起的35.7%～42.9%CPDs产生(P<0.05)。结论:UVB可明显引起原代人角质形成细胞损伤,受损程度随辐射剂量增大而加重;EGCG可以减少UVB辐射所致的光产物的产生,加速光产物的清除。     

中波紫外线照射对人原代角质形成细胞XPA和ERCC1蛋白表达的影响以及EGCG的干预作用

目的：研究中波紫外线（UVB）照射对人原代角质形成细胞（KC）的着色性干皮病A组蛋白（XPA）和切除修复互补交叉蛋白1（ERCC1）蛋白表达的影响以及没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的干预作用。方法：以一定剂量UVB照射人原代角质形成细胞,在UVB辐射前后加入EGCG干预处理细胞,用Westernblot方法检测照射后不同时间点的XPA和ERCC1蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后以及EGCG干预的同一时点XPA和ERCC1蛋白的表达水平。结果：30mJ/cm2的UVB照射后人原代角质形成细胞的XPA和ERCC1蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至UVB照射后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,XPA和ERCC1蛋白表达随UVB剂量增大而增加。EGCG可下调UVB诱导的XPA和ERCC1蛋白表达。结论：人原代KC中XPA和ERCC1蛋白表达与UVB辐射存在一定的时间和剂量关系,EGCG可在一定程度上下调上述蛋白表达。     

茶多酚单体和黄芩苷对紫外线辐射皮肤成纤维细胞的影响

目的：研究中药活性成分茶多酚单体没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、黄芩苷对紫外线辐射损伤的成纤维细胞形态、增殖活性及产生IL-6、TNF-α的影响,探讨其光保护作用.方法：采用30mJ/cm^2、60mJ/cm^2、90mJ/cm^2剂量UVB照射体外培养的原代人皮肤成纤维细胞,以中药单体EGCG和黄芩苷进行干预处理,倒置相差显微镜观察细胞受损程度,以甲唑盐比色试验（MTT法）检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液TNF-α、IL-6分泌量.结果：UVB照射引起皮肤成纤维细胞形态受损,其损伤程度呈剂量依赖性,细胞增殖活性下降28%-44%,其下降程度与照射剂量成正相关（P＜0.05）,UVB照射后细胞因子分泌增加,加入中药单体处理后细胞活性有不同程度恢复（4%～22%）,IL-6、TNF-α分泌量显著下降,差异均有统计学意义.结论：EGCG、黄芩苷具有光保护性能,抑制炎症细胞因子IL-6、TNF-α分泌可能是其减轻紫外线辐射损伤的机制之一.     

MTT法和水溶性四氮唑(WST-1)法检测中波紫外线照射HaCaT细胞后活力的比较

目的:观察中波紫外线照射后HaCaT细胞活力的变化并探讨水溶性四氮唑(WST-1)法检测的适用性.方法:将HaCaT细胞分为对照组(假照射组)、300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射后24h组(每组6个样本).600J/m2紫外线照射后4h组、8h组、1 2h组、24h组、48h组、72h组(每组6个样本).血球计数板计算HaCaT细胞数量.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和水溶性四氮唑(WST-1)法活性测定HaCaT细胞活性.结果:MTT法显示300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射HaCaT细胞24h后光密度(OD)值明显较0J/m2组低;WST-1法各组OD值明显比0J/m2组低.MTT法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低.WST-1法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞4h后OD值较0J/m2组低;600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低.WST-1法的OD值与细胞计数、MT法OD值呈正相关.结论:随着紫外线剂量的加大和照射后时间延长,HaCaT细胞数量减少,细胞的活力下降,WST-1代谢活性亦降低,呈时间和剂量依赖性.HaCaT细胞可对WST-1进行代谢,适用于该细胞增殖研究.     

中波紫外线对人角质形成细胞MMP-9 mRNA的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）诱导的永生化人角质形成细胞中MMP-9 mRNA的表达,探讨其与UVB照射所致的细胞损伤的关系。方法：绘制细胞生长曲线,采用MTT方法测定UVB照射后细胞的增殖活性,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定UVB照射后HaCaT细胞中MMP-9 mRNA的表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活性受到抑制,MMP-9 mRNA表达增强;随UVB剂量增加,照射组的MMP-9 mRNA表达逐渐增多,与未照光组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：UVB照射可引起HaCaT细胞中MMP-9 mRNA表达显著增加,且与UVB照射剂量呈正相关,与光老化的发生有一定的关系。     

环氧化酶-2选择性抑制剂NS398对紫外线照射损伤人角质形成细胞的保护作用

目的 探讨环氧化酶-2选择性抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS398)对长波紫外线(UVA)、中波紫外线(UVB)联合照射损伤HaCaT细胞的光保护效应.方法 HaCaT细胞传代培养,与含不同浓度NS398的培养基孵育2 h后接受紫外线(UV)照射,四甲基偶氮唑(MTT)法测定HaCaT细胞的增殖变化,二氯荧光素醋酸酯(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS).结果 细胞存活率测定表明,UV照射的HacaT细胞,细胞活性明显下降(P＜0.01),NS398能明显提高细胞生存能力并呈浓度依赖性(P＜0.05).NS398能明显降低UV照射引起的细胞内ROS含量,有效抵抗UV诱导的HaCaT细胞死亡或凋亡,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 NS398通过减少UV辐射诱导的细胞内ROS的生成,提高细胞的生存能力,发挥防护UV辐射损伤的作用.     

1064nm Q-switched Nd：YAG激光照射对表皮黑素细胞生物效应的影响

目的：探讨Q-switched Nd：YAG激光对培养状态下的人表皮黑素细胞生物效应的影响。方法：体外培养人表皮黑素细胞,用1064nmQ-switched Nd：YAG激光,光斑直径6mm,频率2HZ,分别用低能量密度与高能量密度进行照射。光学显微镜观察黑素细胞形态学变化,MTT法检测照射后0、24h、48h、72h细胞增殖活性,流式细胞仪检测照射24h后细胞周期与凋亡。结果：各能量密度组激光照射后即刻黑素细胞形态无明显改变,但24h后高能量密度照射组黑素细胞体积变小,树突数量减少,长度缩短。与对照组比较,低能量密度照射组黑素细胞增殖无显著差异,而高能量密度照射组显著降低,并在48h内逐渐下降至最低点,随后又呈明显上升趋势。与对照组相比较,低能量密度照射组S期细胞比率轻度增加,而细胞凋亡率无明显变化。高能量密度照射组S期细胞比率减少,凋亡率显著增加。结论：高能量密度Q-switchedNd：YAG激光照射对表皮黑素细胞的影响大于低能量密度,当其达到一定阈值时能抑制黑素细胞的增殖,并促进其凋亡。而这种损伤在一定范围内是可逆性的,黑素细胞会随着时间的延长进行自我修复。低能量密度激光照射对黑素细胞生物学活性的影响...     

Effect of naringin on bone cells.

Statin, a HMG-CoA reductase inhibitor, was shown to increase BMP-2 gene expression for bone formation, by blocking the mevalonate pathway in cholesterol production. We investigated the effect of naringin, a flavonoid available commonly in citrus fruits, which was also a HMG-CoA reductase inhibitor, in UMR 106 osteoblastic cell line in vitro. The control group consisted of cells cultured without any intervention for different time intervals (24 h, 48 h, and 72 h), whereas the experimental (naringin) group consisted of cells cultured with naringin of different concentrations (0.001 micromol/L, 0.01 micromol/L, and 0.1 micromol/L) for the same time intervals of the control. Colorimetric Tetrazolium (MTT) assay, total protein content assay, and alkaline phosphatase activity were used to measure the cellular activities. Results for the naringin group showed an increase in MTT assay compared with the control and the effect was dose dependent. At high concentration (0.1 micromol), the increases ranged from 60% to 80%. In the total protein content assay, naringin also showed an increase compared with control and the effect was also dose dependent. At high concentration (0.1 micromol), the increases ranged from 9% to 20%. In the alkaline phosphatase activity assay, naringin at high concentration (0.1 micromol) significantly increased the activity up to 20%. In conclusion, naringin significantly increased bone cell activities in vitro. This is the first study specifically attempted to investigate the effect of naringin on bone cell activities. Besides statin, this provided another example of mevalonate pathway blockage in the cholesterol production pathway by HMG-CoA reductase inhibition will increase the bone cell activities.     

阿魏酸对UVB导致人角质形成细胞氧化损伤的保护作用研究

目的：探讨阿魏酸是否能对中波紫外线（UVB）诱导的人角质形成细胞（HaCaT细胞）氧化损伤和凋亡起保护作用以及其可能的作用机制。方法：将HaCaT细胞分成空白组、阿魏酸纽、UVB照射组、UVB照射＋阿魏酸纽。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度;检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量变化。结果：UVB照射组的SOD、CAT、GSH-Px明显下降,MDA相应上升。阿魏酸处理的细胞UVB照射后其活性以及上清液中的SOD、GSH-Px、CAT活性相对于未加药UVB照射纽明显增加,MI）A相应下降。结论：阿魏酸可以减少UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制可能与增强抗氧化成分活性和减少氧自由基有关。     

Effectiveness of helium-neon laser irradiation on viability and cytotoxicity of diabetic-wounded fibroblast cells

OBJECTIVE: This study investigated the effectiveness of helium-neon (He-Ne) laser irradiation at increasing intervals on diabetic-induced wounded human skin fibroblast cells (WS1) at a morphological, cellular, and molecular level. BACKGROUND DATA: The controversies over light therapy can be explained by the differing exposure regimens and models used. No therapeutic window for dosimetry and mechanism of action has been determined at the level of individual cell types, particularly in diabetic cells in vitro. METHODS: WS1 cells were used to simulate an in vitro wounded diabetic model. The effect of the frequency of He-Ne irradiation (632.8 nm) at a fluence of 5 J/cm(2) was determined by analysis of cell morphology, viability, cytotoxicity, and DNA damage. Cells were irradiated using three different protocols: they were irradiated at 30 min only; irradiated twice, at 30 min and at 24 h; or irradiated twice, at 30 min and at 72 h post-wound induction. RESULTS: A single exposure to 5 J/cm(2) 30 min post-wound induction increased cellular damage. Irradiation of cells at 30 min and at 24 h post-wound induction decreased cellular viability, cytotoxicity, and DNA damage. However, complete wound closure as well as an increase in viability and a decrease in cytotoxicity and DNA damage occurs when cells were irradiated at 30 min and at 72 h post-wound induction. CONCLUSIONS: Wounded diabetic WS1 cells irradiated to 5 J/cm(2) showed increased cellular repair when irradiated with adequate time between irradiations, allowing time for cellular response mechanisms to take effect. Therefore, the irradiation interval was shown to play an important role in wound healing in vitro and should be taken into account.