连接酶链反应与培养法检测沙眼衣原体的比较

目的 比较连接酶链反应（ＬＣＲ）与培养法检测沙眼衣原体（ＣＴ）在泌尿生殖道感染中的临床意义。方法 应用ＬＣＲ对４０２份门诊患者的尿标本进行ＣＴ检测,其中２２６份取尿道拭子（男）或宫颈拭子（女）同时用培养法和ＬＣＲ检测ＣＴ,对两种方法的检测结果进行了比较分析。结果 ＬＣＲ法检测４０２份尿标本,ＣＴ阳性率为２８．３％（１１４／４０２）,２２６份拭子标本用ＬＣＲ法检测,阳性率为２７．０％（６１／２２６）     

聚合酶链反应结合反向杂交技术快速检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,C t)是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的C t检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16S rRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16S rRNA基因可变区内设计C t特异性探针,用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术检测尿道炎患者C t感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。一、材料和方法1.临床资料病例来源于青岛市中心医院,共146例,其中男96例,女50例,年龄19~50岁。患者具有不同程度的尿道瘙痒、蚁行感、尿频、尿痛等较典型的…     

聚合酶链反应结合反向杂交技术快速检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis,Ct）是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的Ct检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16SrRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16SrRNA基因可变区内设计Ct特异性探针,用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术检测尿道炎患者Ct感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。     

荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体感染的初步应用

泌尿生殖道沙[衣原体(Chlam ydia trachom atis,Ct)感染是我国目前最常见的性传播疾病之一,并可引起宫颈炎、尿道炎、盆腔炎、异位妊娠、输卵管不孕症及早产等[1]。细胞培养分离Ct是传统的实验室诊断“金标准”,但鉴于该方法操作烦琐,约需1周才能报告结果,故未能在临床普遍应用     

VIDAS CHL检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

目的 探讨VIDAS CHL法用于性病患者尿道拭子标本以及男性首段尿（FCU）标本沙眼衣原体（CT)检测的可行性。方法 使用组织培养法（TC）、VIDAS CHL检测法和聚合酶链反应（PCR）平行检测男性和女性拭子标本中CT，以组织培养为金标准，对VIDAS CHL和PCR进行评价。结果 232例男性标本TC阳性49例；VIDAS CHL和PCR法用于男性尿道拭子标本的敏感性分别为95.9%、93.9%，特异性分别为95.6%、94．5％，差异无显著性；VIDAS CHL法用于男性FCU的敏感性和特异性分别为85．7％和96．7％，与拭子标本作自身配对比较，检测结果无差异。151例女性拭子标本，TC法阳性23例，VIDAS CHL和PCR法的敏感性分别为100％和95．7％，特异性分别为96.1%、93.8%，差异无显著性。结论 VIDAS CHL法用于性病患者男性和女性拭子标本的CT检测，具有很高的敏感性和特异性，用于男性患者FCU的CT检测也是可行的；对于CT阳性率较高的性病人群，VIDAS CHL可以不做阻抑证实试验。     

三种沙眼衣原体的检测方法评价

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）、免疫层析法（C－C快速法）和糖原试验检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断价值。方法：用三种方法分别对102例送检标本进行平行检测。结果：以PCR法作参比，免疫层析法敏感性为86．7％，特异性为97％；糖原试验敏感性为80．0％，特异性为96．6％。结论：PCR法有较高灵敏度，免疫层析法有一定灵敏度和专一性，基层医院可以采用。     

用尿液标本连接酶链反应诊断泌尿生殖道沙眼衣原体感染研究进展

连接酶链反应（LCR）是一种新的基因扩增技术,应用两对引物对靶基因进行扩增,可用于淋球菌、沙眼衣原体、人类乳头瘤病毒等多种病原体检测,也适用于尿道拭子和尿液等多种标本。本文综述了LCR的原理,及其以尿液作为检测标本时的标本收集和处理,在沙眼衣原体诊断中的应用和影响因素。     

泌尿生殖道沙眼衣原体的检测

沙眼衣原体 (Ｃｔ)可以引起沙眼 ,还与人类各种泌尿生殖道疾病相关 ,如非淋菌性尿道炎、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎等 ;Ｃｔ还可通过母婴传染引起新生儿眼结膜炎、肺炎 ,并可导致胎膜早破、早产、新生儿死亡等。研究表明 ,Ｃｔ感染与妇女不孕、胎儿流产及输卵管妊娠有关。据报道 ,全世界每年有 5千万例泌尿生殖道Ｃｔ感染 ;在我国泌尿生殖道感染则呈迅速蔓延上升趋势 ,有些地区非淋菌性尿道炎发病率已超过淋病 ,以至很多人建议将非淋菌性尿道炎感染作为一个独立的检测项目。女性患者 ,在Ｃｔ感染初期无症状或症状较轻 ,常易被忽视而导致严…     

套式聚合酶链反应结合直接荧光法检测女性生殖道沙眼衣原体

目的建立一种敏感、特异、快速诊断女性生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的方法。方法应用套式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术和直接荧光（ＤＦＡ）法检测女性生殖道沙眼衣原体。对两者结果不符的标本用细胞培养法验证。结果３００份受检标本，ＤＦＡ法阳性７１份，阴性２２９份，ＮＰＣＲ法阳性９０份，阴性２１０份；其中ＮＰＣＲ和ＤＦＡ均为阳性者６８份，另有２２份ＮＰＣＲ阳性，而ＤＦＡ为阴性，再经细胞培养证实系阳性。但另有３份ＤＦＡ阳性，ＮＰＣＲ却为阴性，再经细胞培养证实亦属阳性。综合ＮＰＣＲ与ＤＦＡ并对照细胞培养，结果显示ＮＰＣＲ的敏感性为９６７％（９０／９３），特异性为１００％（２０７／２０７），ＤＦＡ的敏感性为７６３％（７１／９３），特异性为１００％（２０７／２０７）。结论ＮＰＣＲ技术与ＤＦＡ法检测ＣＴ感染，均具有高度特异性、操作简便等优势；ＮＰＣＲ的敏感性优于ＤＦＡ法；ＤＦＡ法具有费用低、重复好的特点。两法结合起来检测ＣＴ，将获得理想的检测效果。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体和解脲脲原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６例非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和１２８例淋病性尿道炎（ＧＵ）患者进行沙眼衣原体（Ｃｔ）和解脲脲原体（Ｕｎ）检测，其中ＮＧＵ中Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为２６．３％、１７．９％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率为７．７％；ＧＵ患者Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为４３．８％、３３．６％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率的为１６．４％。     

沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究

目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择最普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物.     

热启动双重聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体

建立了蜡隔热启动双重聚合酶链反应同时检测临床泌尿生殖道样品的淋病奈瑟菌和沙眼衣原体的方法，对１７５例临床样品进行了检测，其中淋病奈瑟菌阳性２０例，占１１．４％，沙眼衣原体阳性为３９例，占２２．３％，淋病奈瑟菌和沙眼衣原体双重感染为１２例，占６．９％，做了单一ＰＣＲ与双重ＰＣＲ对照，结果完全相符，并对阳性ＰＣＲ产物进行了限制性酶切鉴定，本实验表明，双重ＰＣＲ对于临床检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体是一快捷     

聚合酶链反应与反向线点杂交检测沙眼衣原体及分型

目的建立和评价一个新的多重和巢式PCR-反向线点杂交试验（RLB）检测泌尿生殖道沙眼衣原体及其分型方法。方法该试验设计了3对引物分别针对CT外膜蛋白（omp1）基因VD2区和质粒进行扩增，用CT15种血清型（A、B／Ba、C、D／Da、E、F、G／Ga、H、L／Ia、J、Ja、K、L1、L2和L3）探针与扩增后的产物杂交。经COBAS Amplicor检测的355份标本，其中277份尿液，2份男性直肠拭子和78份女性宫颈试子，进行PCR-RLB检测CT并分型。结果192份COBAS Amplicor阳性标本中175份PCR-RLB阳性，其中93．1％（163／175）的CT感染可被正确分型，其单一型感染分型结果与DNA测序结果一致。163份COBAS Amplicor阴性标本中6份巢式PCR-RLB阳性。85．3％（139／163）为单一型CT感染，最常见的CT是E（38．6％）F（28．5％）和D（18．2％）。14．7％（24／163）为CT混合感染，混合感染以H和K为主。结论PCR-RLB检测CT是一种简便、快速、特异和敏感的方法，并准确的进行CT分型，为CT感染的临床诊断和分子流行病学研究提供了一种可靠的方法。     

性病病原体多重聚合酶链反应检测方法的建立和验证

目的建立同时检测淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体和单纯疱疹病毒-2致病微生物的多重聚合酶链反应（PCR）方法,用于四种性病的诊断和治疗监测。方法根据淋球菌外膜孔蛋白基因、沙眼衣原体基因、解脲支原体尿素酶基因和单纯疱疹病毒-2的DNA聚合酶基因序列,各设计一对特异性引物,优化反应体系和条件进行多重PCR反应。结果4对引物分别扩增出327、167、426、391bp的目的条带,并且特异性强,与其他非目的病原体基因不发生反应。结论本研究建立的多重PCR方法为相关病原体的快速检测提供方法。     

8305例女性衣原体感染的调查分析

目的 为了解本地区沙眼衣原体在临产前孕妇、子宫肌瘤、阴道炎、盆腔炎和宫颈炎患者中的感染状况。方法 采用多聚酶链式反应(PCR)技术,采集宫颈分泌物,对3 860例临产孕妇、895例子宫肌瘤、2 611例阴道炎、634例盆腔炎和305例宫颈炎患者进行了检测。结果 在临产前孕妇、子宫肌瘤、阴道炎、盆腔炎及宫颈炎患者中的沙眼衣原体阳性检测率分别为3.60％(139/3 860)、4.92％(44/892)、11.37％(297/2 611)、13.25％(84/634)和14.43％(44/305)。结论 沙眼衣原体在临产前孕妇、子宫肌瘤、阴道炎、盆腔炎和宫颈炎患者中,均有一定的感染率。     

裂解酶片段长度多态性在沙眼衣原体主要外膜蛋白基因分型中的应用研究

目的 建立沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白基因（ompl）上游引物5′末端地高辛标记裂解酶片段长度多态性（CFLP）分型方法，并对Ct临床分离株进行分型。方法 取临产孕妇宫颈刮片及其新生儿鼻咽拭子组成母婴配对标本300对605份，用套式聚合酶链反应扩增Ct ompl第四可变区；用建立的CFLP方法对其进行基因分型。结果 孕妇宫颈Ct检出率11％（33／300），母婴传播率24．2％（8／33）；8对Ct阳性母婴配对标本CFLP图谱呈四类，经测序证实分别为E、F、H、D型（各3、2、2、1对），各占37.5％、25％、25％和12．5％，且每对母子CFLP图谱完全一致；同一标本不同批次和相同基因型不同标本的CFLP图谱一致。结论 上游引物5′末端地高辛标记Ct ompl CFLP分型方法灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、费用相对低廉，无放射污染，是一种极具潜力的Ct基因分型方法。     

沙眼衣原体和解脲支原体感染与不孕

目的探讨沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲支原体（ＵＵ）的生殖道感染与不孕关系。方法采用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测沙眼衣原体和解脲支原体的ＤＮＡ。结果不孕组８８例中，ＣＴ阳性率２５０％，ＵＵ阳性率６２５％，对照组１４１例中，ＣＴ阳性率１１３４％，ＵＵ阳性率２８４％，ＣＴ和ＵＵ的χ２值分别为７０３和２６０１，Ｐ＜００１，有显著性差异。结论沙眼衣原体和解脲体支原体的生殖道感染是不孕的重要因素之一。