大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1的表达与白细胞浸润关系的研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达与白细胞浸润的关系，并探讨亚低温的治疗作用。方法 采用大鼠大脑中动脉阻断（MCAO）模型，经免疫组化及HE染色，测定ICAM－1表达阳性微血管数及白细胞计数。结果 （1）脑缺血再灌注后，脑缺血坏死周边区的微血管内皮细胞表达ICAM－1及白细胞浸润增多，并于24h达到高峰，二者之间呈正相关（P＜0．01）；（2）缺血早期进行亚低温治疗能明显减轻缺血再灌注后ICAM－1的表达及减少白细胞浸润（P＜0．01）。结论 脑缺血再灌注后ICAM－1可介导白细胞和内皮细胞的粘附；亚低温干预治疗可减轻缺血再灌注后脑组织的损害。     

丹红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达的影响

目的 探讨丹红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达和白细胞浸润的影响.方法 SD大鼠24只,随机分为假手术组(n=8)、缺血再灌注组(n=8)和bFGF组(n=8).应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1 h再灌注损伤24 h,术前治疗组丹红注射液预处理3 d,假手术组及缺血再灌注组用生理盐水预处理,采用免疫组织化学法染色和组织HE染色检测缺血区脑微血管内皮ICAM-1的表达及白细胞计数.结果 缺血再灌注组与假手术组相比ICAM-1表达明显升高,白细胞浸润明显(P<0.05).丹红治疗组ICAM-1表达较缺血再灌注组明显减少,白细胞浸润程度减轻(P<0.05).结论 丹红注射液预处理可降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达,减轻白细胞浸润,提示抑制粒细胞黏附作用是其脑保护作用机制之一.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1α及凋亡相关蛋白变化的影响

目的观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1α和Bcl-2蛋白变化的影响。方法用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,于缺血2h再灌注3h、6h、12h、24h、72h、7d后处死,其中亚低温组于缺血后30min实施病灶侧脑亚低温并持续4h。处死前进行神经功能缺陷评分、HE染色、免疫组化检测HIF-1α和Bcl-2的表达。结果 (1)神经功能缺陷评分:亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组(P0.05);(2)HIF-1α的表达:再灌注3h表达显著增高,至24h左右达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达与常温缺血组无显著性差异(P0.05);(3)Bcl-2的表达:再灌注3h增多,随再灌注时间的延长,其表达逐渐增多(P0.05),6h达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达明显高于常温缺血组(P0.05)。结论 HIF-1α在脑缺血早期就发挥重要的保护作用。Bcl-2在脑缺血再灌注损伤过程中主要起抑制细胞凋亡的作用。亚低温能增加Bcl-2的表达;能明显减轻缺血所致的损伤,并能明显抑制细胞调亡;对大鼠缺血后神经功能的恢复有确切的疗效。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注后炎性反应的影响

目的：观察亚低温的不同时程对大鼠脑缺血再灌注后炎性反应的影响。方法：24只SD大鼠随机分为4组：常温组，亚低温1／2h组，亚低温1h组和亚低温3h组。每组各6只大鼠。参照Zea Longa的方法建立脑缺血再灌注动物模型，于再灌注24h断头取脑，行HE染色，观察脑组织中自细胞浸润及神经细胞的变化情况。结果：常温组在缺血梗死灶周围区可见白细胞浸润明显及深染受损的神经元；随亚低温时间的延长，白细胞浸润逐渐减少，神经元亦表现为淡染的轻度损伤。结论：亚低温可抑制脑缺血再灌注后的白细胞浸润，具有神经保护作用。     

溶栓治疗时间窗与ICAM-1表达及白细胞浸润的关系

目的　探讨不同溶栓治疗时间窗与细胞间粘附分子 - 1(ICAM 1)表达及白细胞浸润的关系。方法　采用自体血栓栓塞大脑中动脉 ,缺血 0 .5小时、1小时或 4小时开始溶栓治疗 ,应用免疫组织化学方法 ,观察缺血 12小时或 2 4小时ICAM 1的表达、白细胞的浸润程度 ;TTC染色测定梗死灶的大小。结果　缺血12小时和 2 4小时 ,4小时溶栓组较 0 .5小时和 1小时溶栓组梗死灶体积明显增大 (P <0 .0 1) ;缺血周边区I CAM 1面密度、浸润白细胞数增多 (P <0 .0 1) ;1小时溶栓组较 0 .5小时溶栓组梗死灶体积增大 (P <0 .0 5 ) ;浸润的白细胞数无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但ICAM 1面密度增加 (P <0 .0 5 )。缺血 2 4小时与缺血 12小时比较 ,0 .5小时溶栓组ICAM 1面密度减少 (P <0 .0 5 ) ;而 1小时和 4小时溶栓组明显增加 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论　超早期溶栓治疗可以减少缺血周边区ICAM 1表达及白细胞的浸润 ;白细胞浸润参与了溶栓治疗后的病理生理过程。     

脑缺血再灌注损伤时 c-fos、c-jun 的表达和细胞凋亡

目的　研究脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡和原癌基因c fos、c jun表达。 方法　 8周龄健康雄性Wistar大鼠 2 4只 ,随机分为缺血再灌注组、假手术组和对照组 ,每组各 8只。制作大鼠大脑中动脉栓塞 (MCAO)再灌注模型 ,缺血 4h再灌注 2h后断头处死 ,TUNEL法检测神经细胞凋亡 ,免疫组织化学法检测神经细胞c fos、c jun蛋白的表达。结果　缺血再灌注组细胞凋亡率、平均吸光度及c fos、c jun阳性细胞率、平均吸光度均高于假手术组和对照组 (P <0 .0 5 )。结论　脑缺血再灌注损伤可诱导c fos、c jun蛋白的表达和细胞凋亡 ;脑缺血再灌注大鼠神经功能评分与c fos、c jun蛋白的表达和细胞凋亡呈正相关。     

亚低温对局灶性脑缺血再灌注后不同时间点Akt、NF-κB变化规律的影响

目的 通过检测Akt及NF-κB蛋白的表达，探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响。方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCA0）局脑缺血再灌注模型，将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组，缺血组分别缺血2h、6h，再灌注4h、24h、72h、1周、2周后处死，亚低温组于缺血后13～14min实施病灶倒亚低温持续4h。免疫组织化学法检测Akt、NF—κB蛋白的表达。结果 相同缺血再灌注时闾点，亚低温组比常温组缺血侧Akt表达水平显著增高（P〈0．05），NF—κBP65核内移明显降低（P〈0．01）。结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt表达，抑制NF—κB的核内移，从而抑制神经元凋亡，促进脑缺血后神经功能恢复。     

大鼠脑缺血再灌注区ICAM-1表达与白细胞浸润的 观察及丹参的影响☆

】　目的　观察细胞间粘附分子(ICAM-1)蛋白在大鼠脑缺血再灌注的不同时程脑组织中的表达与中性白细胞浸润程度的关系及丹参对它们的影响。方法　SD大鼠分为3组假手术组、对照组及丹参组。大脑中动脉缺血2 h再灌注2 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d、14 d后，分别进行ICAM-1免疫组织化学及组织HE染色。结果　在脑缺血再灌早期，脑微血管内皮细胞ICAM-1免疫反应开始逐渐增加，再灌注48 h达到高峰，再灌注14 d接近正常水平，同时脑缺血区中性白细胞浸润也随之增加，在时程上与ICAM-1表达同步。丹参组，再灌注48 h后，ICAM-1免疫阳性血管数及中性白细胞的浸润比同时间对照组明显降低。结论　脑缺血ICAM-1的表达与中性白细胞浸润密切相关，丹参能降低ICAM-1的表达，抑制中性白细胞的浸润。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70 mRNA表达及损伤神经细胞凋亡的影响

目的探讨亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70 mRNA、HSP70(热休克蛋白70)表达及损伤神经细胞凋亡的影响.方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大脑中动脉阻塞2小时,再灌注损伤10小时,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、免疫组织化学法和原位缺口末端标记(TUNEL)法分别检测假手术组、对照组和亚低温组HSP70 mRNA、HSP70表达水平和凋亡细胞百分率.结果亚低温组HSP70mRNA、HSP70表达水平较对照组显著升高(P＜0.05),而凋亡细胞百分率明显低于对照组(P＜0.05).结论亚低温上调大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70 mRNA、HSP70表达水平可能与其抗损伤神经细胞凋亡作用有关.     

亚低温对局灶性脑缺血再灌注后不同时间点Akt、NF-кB变化规律的影响

目的通过检测Akt及NF-кB蛋白的表达,探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响。方法用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局脑缺血再灌注模型,将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2h、6h,再灌注4h、24h、72h、1周、2周后处死,亚低温组于缺血后13~14min实施病灶侧亚低温持续4h。免疫组织化学法检测Akt、NF-кB蛋白的表达。结果相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Akt表达水平显著增高(P<0.05),NF-кBP65核内移明显降低(P<0.01)。结论病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt表达,抑制NF-кB的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复。     

亚低温通过抑制两种凋亡通路对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后胱冬酶(caspase)依赖性及非依赖性两种凋亡通路的影响。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)及再通模型,分为假手术组、常温及亚低温脑缺血再灌注组,应用RT-PCR技术检测再灌注后不同时相缺血侧皮层凋亡诱导因子(A IF)及caspase-3 mRNA的表达。结果脑缺血2h再灌注2~4h,A IF及caspase-3 mRNA表达开始增加,随着再灌注时间的延长表达逐渐增强,至再灌注24h达高峰。每一再灌注时间点亚低温组与常温组A IF及caspase-3 mRNA表达均有显著差异,亚低温组mRNA表达均低于相应常温组。结论亚低温不仅降低caspase依赖性通路中的关键蛋白酶—caspase-3的mRNA的表达,而且降低caspase非依赖性通路中的关键蛋白—A IF的mRNA的表达,亚低温通过抑制两种凋亡通路对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注区ICAM-1表达与白细胞浸润的观察及丹参的影响

目的　观察细胞间粘附分子（ Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１） 蛋白在大鼠脑缺血再灌注的不同时程脑组织中的表达与中性白细胞浸润程度的关系及丹参对它们的影响。方法　 Ｓ Ｄ大鼠分为３ 组：假手术组、对照组及丹参组。大脑中动脉缺血２ ｈ 再灌注２ ｈ 、１２ ｈ、２４ ｈ 、４８ ｈ 、７２ ｈ 、７ ｄ、１４ ｄ 后,分别进行 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫组织化学及组织 Ｈ Ｅ染色。结果　在脑缺血再灌早期,脑微血管内皮细胞 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫反应开始逐渐增加,再灌注４８ ｈ 达到高峰,再灌注１４ ｄ 接近正常水平,同时脑缺血区中性白细胞浸润也随之增加,在时程上与 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 表达同步。丹参组,再灌注４８ ｈ 后, Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫阳性血管数及中性白细胞的浸润比同时间对照组明显降低。结论　脑缺血 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 的表达与中性白细胞浸润密切相关,丹参能降低 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 的表达,抑制中性白细胞的浸润。     

病变侧亚低温对大鼠局脑缺血再灌注后Akt、Survivin表达的影响

目的 通过检测Akt及Survivin蛋白的表达,探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局脑缺血再灌注模型,将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2,6 h再灌注4,24,72 h,1周,2周后处死,亚低温组于缺血后13～14 min实施病灶侧亚低温持续4 h.免疫组织化学法检测Akt、Survivin 蛋白的表达.结果 相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Akt、Survivin、表达水平显著增高（P＜0.05）.结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt、Survivin表达的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复.     

环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ICAM-1、白细胞影响的研究

目的观察环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ICAM-1表达、白细胞浸润的影响。方法36只雄性SD大鼠分为假手术组和脑缺血再灌注组。脑缺血再灌注组中包括环磷酰胺治疗组和生理盐水对照组,每组按脑缺血2h后再灌注2h、4h、6h、24h又分为4个亚组。脑缺血再灌注组于脑缺血2h再灌注后2h、4h、6h、24h处死动物,用免疫组织化学法观察再灌注后不同时间点脑组织中ICAM-1的表达,HE染色法观察白细胞的浸润程度。结果(1)脑缺血再灌注后,脑缺血坏死区周边ICAM-1的表达及白细胞的浸润增多,并于24h达高峰;环磷酰胺组在相同再灌注时间点的ICAM-1表达及白细胞的浸润均明显低于对照组。(2)ICAM-1的表达与白细胞的浸润呈现正相关性。结论脑缺血再灌注后,ICAM-1的表达上调,介导了白细胞和内皮细胞的粘附,参与了脑缺血再灌注损伤的过程。环磷酰胺治疗组ICAM-1的表达、白细胞的浸润均少于对照组,说明环磷酰胺有抑制粘附分子表达上调、抑制白细胞浸润的作用,因而具有神经保护的作用,为该治疗应用于临床提供了理论基础。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达的影响

目的研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)不同时空表达的影响,进一步探讨亚低温脑保护作用的分子机制。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,分假手术组、假手术 亚低温组、模型组及模型 亚低温组。应用Western blotting和免疫组化技术分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层PARP-1蛋白的表达与裂解。结果模型组PARP-1蛋白表达量随再灌注时间的延长逐渐增加,至再灌注24h达高峰,然后逐渐减少,再灌注72h时仍高于假手术组的水平;模型组PARP-1蛋白出现裂解,随再灌注时间的延长,裂解逐渐增强。每一相同再灌注时间点,模型 亚低温组PARP-1蛋白表达量和裂解片段含量均低于模型组。结论PARP-1的过度表达和裂解是局灶性脑缺血再灌注神经元死亡的重要分子机制。亚低温可通过抑制PARP-1的过度表达及减少PARP-1的裂解而发挥脑保护作用。     

小鼠局灶性脑缺血模型中细胞间粘附分子-1表达升高

目的　白细胞可以导致缺血细胞损伤,内皮细胞上表达的细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）有利于白细胞迁移至组织。本研究目的是对小鼠大脑中动脉栓塞（ＭＣＡＯ）后脑内ＩＣＡＭ－１ 蛋白在组织中表达和含量进行检测。方法　通过对成年雄性ＣＤ－１ 小鼠使用血管腔内尼龙线栓塞术,造成０、３、６、１２、２４、４８ 和７２ ｈ 的持续性大脑中动脉栓塞。缺血程度由激光多普勒流量仪确定,缺血脑组织ＩＣＡＭ－１ 的阳性表达由免疫组化技术检测,并用免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹来定量。结果　在大脑中动脉栓塞后,小鼠缺血脑半球的表面脑血流量减少到基准值的９％ ～１５％ 。各组间大脑中动脉栓塞过程中的脑血流量无显著差异。免疫组化技术显示,缺血中心区和末影区都见ＩＣＡＭ－１ 阳性的微血管内皮细胞,从缺血中心到缺血边缘区微血管内皮细胞表达ＩＣＡＭ－１ 出现增高的趋势。免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹分析结果表明,缺血区ＩＣＡＭ－１的表达在大脑中动脉栓塞后３ ｈ 增高,６～１２ ｈ 达到高峰,并持续到７２ ｈ。结论　研究表明,在持续性大脑中动脉栓塞的小鼠中检测到ＩＣＡＭ－１ 表达明显升高,因为在持续局灶性大脑中动脉缺血后ＩＣＡＭ－１ 可介导白细胞和内皮细胞粘附,加速     

地塞米松对新生大鼠缺氧缺血性脑病脑组织细胞间黏附分子-1表达与白细胞浸润的影响

目的　研究地塞米松预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织细胞间黏附分子 1(ICAM 1)的表达与白细胞浸润的影响。方法　将 4 8只新生大鼠制作成缺氧缺血性脑病 (HIE)模型 ,于制作模型前 2 4小时即分别予地塞米松预处理组和对照组大鼠腹腔内注射地塞米松 0 1mg/kg、生理盐水 10ml/kg。模型后2 4小时处死大鼠 ,分别进行脑组织ICAM 1免疫组织化学检测、白细胞计数及组织HE染色。结果　ICAM 1平均吸光度 :预处理组 (3 6 2± 1 2 1) ,对照组 (9 4 2± 2 6 5 ) (P <0 0 5 ) ;神经细胞损伤评分 :预处理组 (0 38±0 13) ,对照组 (1 6 3± 0 74 ) (P <0 0 0 1) ;白细胞浸润 :预处理组 (8 4± 1 7) ,对照组 (16 3± 4 6 ) (P <0 0 0 1)。结论　地塞米松预处理能减少HIE时脑组织的ICAM 1蛋白表达及白细胞浸润 ,能减轻脑组织损害程度     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法将雄性Wistar大鼠30只分为假手术组、常温组和亚低温组。制作右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,观察缺血2h再灌注48h后各组大鼠脑组织学改变和HSP70及GFAP的表达。结果常温组大鼠脑皮质下神经元严重坏死,亚低温组皮质下神经元坏死严重程度明显较常温组轻,假手术组未见神经元坏死。常温组大鼠脑组织GFAP和HSP70阳性细胞较多,假手术组、亚低温组GFAP和HSP70阳性细胞少于常温组,假手术组偶见HSP70阳性细胞;图像分析显示,常温组大鼠脑组织GFAP、HSP70表达的平均光密度较假手术组和亚低温组明显增高(均P<0.01)。结论亚低温能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,降低脑组织HSP70及GFAP蛋白的表达。     

亚低温治疗大鼠缺血性脑水肿研究

目的研究亚低温对延迟时间窗再灌注的局灶脑缺血大鼠缺血性脑水肿的治疗作用。方法 SD雄性大鼠96只,线栓法制作大脑中动脉闭塞模型后随机分为缺血3 h组、缺血6 h组、缺血9 h组(每组各30只),分别在造模3 h、6 h和9 h后拔出线栓,使大脑中动脉再灌注。各缺血组按照再灌注后是否给予亚低温治疗及亚低温持续时间分为常温、亚低温3 h和亚低温5 h三个亚组,每个亚组有10只大鼠。另设假手术组6只。缺血组大鼠在再灌注24 h后处死取脑,假手术组在术后24 h处死取脑,干-湿重法测定各组缺血侧脑组织含水量并进行比较。结果与假手术组比较,缺血组缺血侧脑组织含水量明显增高。缺血3 h组中3 h亚低温和5 h亚低温亚组的缺血侧脑组织含水量与缺血3 h常温组比较,差异有统计学意义(79.39%±2.44%vs82.16%±1.50%,P0.05;79.20%±1.55%vs 82.16%±1.50%,P0.05)。其余各缺血组中经过亚低温治疗的大鼠与常温亚组的脑组织含水量无统计学差异。结论亚低温可减轻缺血早期(3 h)再灌注的脑组织水肿,保护缺血脑组织,而对晚期(6 h和9 h)再灌注的缺血性脑水肿无论亚低温时间长短均无明显保护作用。