高效液相色谱串联质谱法鉴定山银花水提取液的化学成分

目的建立快速、准确分析山银花水提取液的化学成分的高效液相色谱串联质谱方法。方法采用水为溶剂加热回流提取法提取山银花药材,提取液采用高效液相色谱串联质谱法对其主要的化学成分进行分离和鉴定。结果在负离子模式下,21个主要的化学成分得到了较好的分离,其中16个通过串联质谱进行了结构鉴定,10个通过对照品得到了确证。结论高效液相色谱串联质谱法可有效用于山银花药材的化学成分的分析鉴定。     

菊苣化学成分的LC-MS／MS定性分析与HPLC含量测定

目的建立菊苣化学成分的定性、定量分析方法,完善药材质量控制手段。方法以HPLCDAD-ESI-MS方法,对菊苣化学成分进行定性鉴定,并采用HPLC方法同时测定菊苣中5种化学成分含量。结果从菊苣中共鉴定了10个化学成分,其中6个成分的保留时间和质谱碎片离子信息与对照品一致,分别为秦皮甲素、绿原酸、秦皮乙素、菊苣酸、异绿原酸B、异绿原酸A;根据质谱碎片信息并结合文献数据初步确定了另外4个成分的化学结构。建立了菊苣中绿原酸、秦皮乙素、菊苣酸、异绿原酸B、异绿原酸A的回归方程,线性关系均良好(r0.999 5),加样回收率为95.94%~104.41%,采用此方法成功检测了10个菊苣样品中上述5种成分的含量。结论研究建立的方法可定性、定量分析菊苣中的主要化学成分,可用于菊苣药材的质量分析。     

金银花水提工艺中绿原酸变化的研究

金银花是常用药材之一,主要成分为绿原酸和异绿原酸。该两个成分易溶于水和乙醇[1]。为降低生产成本,本实验选用廉价易得的水为提取溶媒,以绿原酸的提取量为指标,采用正交试验法优选金银花的最佳水煎工艺,并考察金银花水煎液在浓缩、醇沉、干燥过程中绿原酸的损失率,为指导金银花生产提供依据。1仪器与试药Waters2695型高效液相色谱仪(自动进样器,四元泵,2996型二极管阵列检测器),Empower2工作软件,Sartorius cp225D型电子天平。金银花药材购自安徽亳州,经鉴定为忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾;绿原酸对照品(中国药品生物制品检…     

金银花和山银花UPLC特征图谱-化学成分模式识别方法研究

目的 建立超高效液相色谱（UPLC）特征图谱-化学模式识别金银花和山银花的差异性,为金银花和山银花的鉴定提供新的鉴别手段。方法 以70%甲醇超声提取金银花和山银花,特征图谱及含量测定利用同一液相色谱条件：乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,同时对新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、木犀草苷、芦丁、金丝桃苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等9种化学成分的色谱峰进行指认和含量测定,并采用SMICA14.1软件进行数据处理、聚类分析和主成分分析。结果 建立的金银花UPLC特征图谱中指认了金银花16个共有峰,山银花15个共有峰,聚类分析和主成分分析均可将二者区分开来。二者差异性成分为金丝桃苷、木犀草苷和新绿原酸。结论 UPLC特征图谱-化学成分模式识别方法能够全面、有效、直观地反映出金银花和山银花的差异,为金银花及其伪品的鉴别提供新的途径。     

返魂草药材提取方法考察与特征图谱建立

目的通过不同提取方法的筛选,研究返魂草药材HPLC特征图谱信息的影响,建立完善的返魂草药材特征图谱。方法返魂草提取方法选择水煎法、醇超声法、水煎-醇超声法三种提取方法进行对比,采用HPLC方法,色谱条件为Agilet Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5-Micron),流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶剂系统,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.8 mL·min-1,检测波长330 nm。建立返魂草样品HPLC特征图谱,指认了新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C 8个特征成分。结果返魂草药材经水煎-醇超声法提取后建立的特征图谱信息更完整、更具有指纹性。结论该提取方法新颖独特、简便可靠,为科学评价和有效控制返魂草质量提供一种新方法。     

超临界CO_2流体萃取华凤仙挥发油成分分析研究

目的分析华凤仙药材挥发油化学成分,为进一步研究其化学成分提供理论参考。方法采用二氧化碳超临界萃取法（SFE-CO2）提取华凤仙挥发油,用气相色谱-质谱联用法分析鉴定其化学成分,用面积归一化法确定其相对含量。结果在华凤仙药材挥发油中,共检出52个化合物,鉴定了其中27个化合物。含量较高的为正二十六烷、正十六烷酸乙酯等。结论本研究为首次采用气相色谱-质谱联用法对凤仙药材挥发油进行成分分析,该方法快捷、简便,为进一步研究该药材的化学成分提供参考。     

大叶冬青叶中8种活性成分提取工艺研究

目的:选用四因素三水平正交实验设计,探究不同因素、水平对大叶冬青叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C 8种主要活性成分含量和浸出物含量的影响,优选大叶冬青叶的最佳提取工艺。方法:采用高效液相色谱(HPLC)同时检测大叶冬青叶中8种主要活性成分,得出总峰面积,将总峰面积和大叶冬青叶浸出物含量作为考察指标。通过因素分析和方差分析,对提取工艺中溶剂浓度、溶剂倍数、提取温度、提取次数4个因素进行考察。结果:所建立的HPLC检测方法快速、准确,大叶冬青叶中8种活性成分均有良好的分离度;最佳提取工艺为超声提取法,提取溶剂70%甲醇,溶剂倍数50倍,提取温度60℃,提取次数1次,提取时间50 min,其中溶剂浓度和提取温度对提取效率具有显著性影响。结论:优化后的提取工艺稳定可靠,评价指标易于控制,可用于规范大叶冬青的提取工艺,为大叶冬青药材的质量控制提供理论参考。     

高效液相色谱法同时测定牡蒿叶中4个绿原酸类成分含量

[目的]通过响应面法优化提取工艺,并结合高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定牡蒿叶中4个绿原酸类成分的含量,探究其开发利用价值。[方法]采用Thermo Scientific Syncronis Amino色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)色谱条件为流动相乙腈:0.1%甲酸水(40:60,V/V),流速1mL·min~(-1),柱温25℃检测波长325nm;以绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C的总含量为响应值乙醇浓度、液料比、超声功率为主要因素采用Box-Behnken响应面法对牡蒿叶中4个绿原酸类成分进行优化提取,并测定其含量。[结果]以乙腈:0.1%甲酸水(40:60,V/V)等度洗脱,流速1mL·min~(-1),柱温25℃检测波长325nm,牡蒿叶中绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C分离度良好,在6.25～200.00μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好加样回收、精密度、稳定性和重复性均符合要求。优化得到的最佳提取工艺为:乙醇浓度60%,液料比40:1(单位mL·g~(-1))超声功率250W频率53kHz室温超声20min。通过HPLC法测得绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C含量分别为14.317 0mg·g~(-1)、27.945 2mg·g~(-1)、1.2304mg·g~(-1)和5.066 5mg·g~(-1),合计总量达48.559 0mg·g~(-1)。[结论]HPLC法测得牡蒿叶中绿原酸类成分含量较为丰富。采用响应面法优化提取工艺,能够显著提高牡蒿叶中4个绿原酸类成分提取率具有较好潜在开发应用价值。     

不同提取方法测定野马追药材中绿原酸含量比较研究

目的:研究野马追药材中绿原酸含量测定的前提取方法及绿原酸含量的质控标准。方法:采用高效液相色谱法,比较了不同的提取方法、提取溶媒、提取时间和溶媒用量测定野马追药材中绿原酸含量。结果:采用超声提取方法提取野马追药材中绿原酸,且绿原酸高效液相法测定进样量在0.0908～1.362μg(r=0.9999)间呈良好的线性关系,平均回收率为100.12%,RSD为1.31%。结论:绿原酸超声提取方法和高效液相测定含量方法简便,可用于该药材的质量控制。     

不同提取方法测定野马追药材中绿原酸含量比较研究

目的：研究野马追药材中绿原酸含量测定的前提取方法及绿原酸含量的质控标准。方法：采用高效液相色谱法,比较了不同的提取方法、提取溶媒、提取时间和溶媒用量测定野马追药材中绿原酸含量。结果：采用超声提取方法提取野马追药材中绿原酸,且绿原酸高效液相法测定进样量在0.0908～1.362μg（r=0.9999）间呈良好的线性关系,平均回收率为100.12%,RSD为1.31%。结论：绿原酸超声提取方法和高效液相测定含量方法简便,可用于该药材的质量控制。     

基于UHPLC-Q-TOF/MS的地榆化学成分分析及大鼠体内代谢研究

目的  采用超高效液相色谱和-四级杆串联飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)法分析地榆水提物在大鼠血清、尿液及粪便中的原型成分及代谢产物, 探讨地榆中活性成分在大鼠体内的代谢途径。方法  采用Thermo AcclaimTM RSLC 120 C₁₈色谱柱(3.0 mm×100 mm, 2.2 μm), 以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱, 流速0.4 mL·min-1, 进样量3 μL, 柱温40 ℃。运用电喷雾离子源(ESI), 扫描范围m/z 50~1 500, 正、负离子模式采集数据。通过比较灌胃地榆水提物后大鼠血清、尿液和粪便样品和空白组样品的差异, 对原型成分及其代谢产物进行鉴定。结果  灌胃给予地榆水提物后, 从大鼠血清、尿液及粪便中鉴定出69个外源性成分, 包括24个原型成分和45个代谢产物。其中24个原型成分包括16个酚类成分、7个三萜类成分及1个单萜烯醇苷。地榆水提物在大鼠体内的代谢途径主要包括还原、甲基化、脱水、氧化、硫酸化及葡萄糖醛酸结合等。结论  所鉴定出的原型成分和代谢产物可为进一步解析地榆体内代谢过程, 阐明其药效物质基础提供实验依据。      

热毒宁注射液解热作用与化学质控成分相关性研究

目的 探讨热毒宁注射液化学质控成分与解热作用的关系.方法 建立脂多糖(LPS)致大鼠发热动物模型,研究热毒宁注射液解热作用和对中枢发热介质前列腺素E2(PGE2)影响.复制LPS诱导巨噬细胞RAW264.7释放PGE2模型,并采用环氧化合酶(COX)-2活性实验,考察热毒宁注射液及其化学质控成分对PGE2释放和COX-...     

UHPLC-Q-TOF/MS对藜芦药材化学成分的快速分离与鉴别

目的采用超高效液相色谱仪与四极杆飞行时间串联质谱仪联用技术(UHPLC-Q-TOF/MS)对藜芦中化学成分进行分析鉴别。方法应用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子模式下采集数据。结果共鉴别出黎芦药材中32个化学成分,通过比较碎片离子对其中的3对同分异构体进行了结构解析。结论采用UHPLC-Q-TOF/MS方法能快速地在一张图谱上表征出藜芦中的主要化学成分,为藜芦的药效物质基础及化学成分体内代谢与作用机制的深入研究奠定了基础。     

鸭跖草水提取物抗流感病毒的实验研究

目的研究鸭跖草水提取物在体内外抗流感病毒的活性。方法体外抗病毒试验采用CPE法。按Reed—Mueneh方法计算TC50、IC50和T1,观察鸭跖草水提取物体外对流感病毒引起的细胞病变的影响;体内抗病毒试验采用小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型,以肺部炎症、死亡率和生命延长率为指标,观察鸭跖草水提取物体内抗流感病毒的活性。结果鸭跖草水提取物在体外对流感病毒引起的细胞痛变有明显抑制作用,其IC50为生药4．25mg／ml,TI为7．17;在给药剂量为生药8～32g／kg时,对流感病毒所致的小鼠肺部炎症有明显抑制作用,并能明显降低流感病毒感染小鼠的死亡率和延长其存活时间。结论鸭跖草水提取物在体内外均具有明显抗流感病毒的作用。     

四妙勇安汤水提物大鼠吸收入血成分研究

目的通过对四妙勇安汤水提物入血成分的研究,初步阐明该复方的药效物质基础。方法采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(LCMS-IT-TOF)联用技术,在电喷雾离子源的正、负离子模式下,对四妙勇安汤水提物、大鼠灌胃给药后的血清和空白血清进行检测。以甲醇对血清样本进行前处理,采用Inertsil ODS-3色谱柱,以乙腈(A)-水(含0.1%甲酸)(B)为流动相进行梯度洗脱,根据化合物的多级质谱碎片,结合参考文献和对照品初步确定四妙勇安汤水提物入血成分。结果四妙勇安汤灌胃给药后在大鼠血清中发现14个入血成分,其中10个来自该复方的原型成分,其余4个可能为代谢产物。9个色谱峰被确认为哈巴苷、绿原酸、马钱苷、当药苷、甘草苷、金丝桃苷、安格洛苷C、异绿原酸C和哈巴俄苷。结论四妙勇安汤入血成分是各组方药味配伍后共同作用的结果,本研究可为四妙勇安汤的药效物质基础和进一步的体内代谢研究提供参考。     

异绿原酸对烟曲霉生物被膜的体外作用

目的：探讨金银花活性成分异绿原酸对早期、成熟期烟曲霉生物被膜的体外作用。方法采用微量液基稀释法测定异绿原酸对受试烟曲霉菌株最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MFC）;构建体外早期、成熟期静止生物被膜模型并用不同浓度（64、128、256、512、1024μg/mL）的异绿原酸组分别作用48h,激光共聚焦显微镜（CLSM）检测生物被膜内存活菌;扫描电镜（SEM）观察生物被膜形态学改变;结晶紫染色法定量生物被膜。比较各组MIC和MFC。结果异绿原酸对受试烟曲霉菌株的MIC和MFC均大于1024μg/mL;不论早期或成熟期,空白对照组和异绿原酸各浓度组生物被膜内菌体在CLSM下均以绿色的活菌为主;电镜观察证实异绿原酸可破坏早期、成熟期的生物被膜结构,使胞外基质减少,菌体轮廓清晰;当异绿原酸浓度达到256μg/mL时,可以使载体上不同时期生物被膜的量明显降低,256、512、1024μg/mL异绿原酸组生物被膜定量与空白对照组及组间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论异绿原酸在体外不能杀死烟曲霉生物被膜内菌体,但可对烟曲霉早期和成熟期生物被膜产生破坏作用,其作用呈浓度依赖性。     

基于化学动力学的异绿原酸A在水溶液中的降解规律研究

[目的]研究异绿原酸A在水溶液中,于不同pH值、温度、光照、初始药物浓度等条件下的降解动力学特征。[方法]采用超高液相色谱(UPLC)法考察不同环境下异绿原酸A含量随时间的变化情况,以化学反应动力学方法计算不同条件下的降解半衰期(t1/2)等反应动力学参数,利用Arrhenius方程计算降解反应的活化能。[结果]异绿原酸A在多种条件下的降解均符合一级动力学模型,降解速率呈现pH和温度依赖性;金属离子Fe~(3+)、Fe~(2+)的引入以及紫外光均会使异绿原酸A的降解反应速率加快,而初始药物浓度及氧化的变化对其降解速率影响不明显。在25℃,中性条件下异绿原酸A的降解活化能为96.71 kJ/mol,t_1/2为1 381.9 h。[结论]异绿原酸A在酸性,低温环境中较为稳定,高温、强碱、活波金属离子及紫外光均可加速其降解。异绿原酸A在中药材及中成药中广泛存在,此类药物在生产、储存和使用过程中应避免含铁容器,应选择在低温、避光环境下保存。     

绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸与人白蛋白的分子对接研究

目的：比较可疑致敏原绿原酸、异绿原酸与人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）的分子结合模式和结合能力。方法：采用Molegro Virtual Docker（MVD）软件,以华法令、地西泮和HSA共结晶复合物作为受体模板,比较绿原酸和异绿原酸（3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸）在HSA载药位点Ⅰ和Ⅱ的分子对接情况,以对接评分、关键氨基酸基团和氢键作用确定分子的结合模式。结果：绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸在HSA位点Ⅰ的分子对接分值为-112.3、-155.3和-153.1,在HSA位点Ⅱ的对接分值为-101.7、-138.5和-133.4。在位点Ⅰ,两个异绿原酸分子与关键脂溶性基团Ala291和Leu238的疏水力明显大于绿原酸;异绿原酸、绿原酸与该位点入口和内部不同的极性氨基酸基团形成氢键;与绿原酸分子相比,异绿原酸的第2个咖啡酰基占居该位点右侧亲脂区。在位点Ⅱ,异绿原酸的第2个咖啡酰基增加了其与极性氨基酸的作用。结论：异绿原酸与绿原酸相比,有更高的HSA分子对接评分,其多出的一个咖啡酰基增加了与HSA载药位点的结合能力。