DNA生物传感器在乙型肝炎基因诊断中的应用

目的：建立石英晶体DNA传感器检测乙肝病毒基因的方法。方法：在石英晶体金表面固定单链DNA，构成压电晶体HBVDNA生物传感 器，与待测样品进行杂交反应。结果：DNA传感器能准确诊断血清中的HBV病毒基因。结论：石英晶体HBV DNA生物传感器操作省时、简单，具有用于临床基因诊断的前景。     

纳米金颗粒质量放大压电DNA传感器频移信号的研究

目的探讨纳米金颗粒质量放大压电DNA传感器频移信号的可行性,以进一步提高检测灵敏度。方法将巯基化的单链DNA探针固定于压电DNA传感器石英晶体金膜表面,封闭后加入合成的生物素化的互补靶DNA与之进行杂交反应,最后用5nm粒径的链亲和素标记的胶体金追加标记于杂交后的生物素化的靶DNA上,以增加石英晶振金膜表面的质量负载,从而降低石英晶振的响应频率,进一步放大频移信号。结果检测终浓度为10-8mol/L的阳性靶序列时杂交反应前后频移为(12.7±5.5)Hz,加入终浓度为9%的纳米金颗粒放大后总频移为(126±2.6)Hz,后者显著高于前者(P<0.01)。另外,对不同终浓度的阳性靶序列检测后发现,频移与其终浓度的lg值之间具有显著的线性关系,相关系数为0.974,而且最低检出限达到了10-12mol/L。结论实验结果表明该方法可以显著放大压电DNA传感器的频移信号,从而进一步提高压电DNA传感器检测的灵敏度。     

链延伸反应提高压电基因传感器的灵敏度的实验研究

目的　利用链延伸反应的原理延长引物链以提高压电基因传感器表面的质量负载 ,从而提高传感器的灵敏度。方法　基因传感器阵列表面分别固定上金黄色葡萄球菌mecA及femA两种探针片段 ,待杂交上相应的靶序列片段后 ,加入Klenow酶 ,室温下 (2 0℃左右 )进行链延伸反应 8h。结果　 50nmol L单链mecA在杂交反应及链延伸反应的过程中 ,频率的下降值分别为 (99.2± 8.5)Hz、(1 92 .9± 1 3 .3 )Hz。而femA则分别下降了 (1 42 .4± 1 1 .2 )Hz、(2 2 2 .6± 1 6.6)Hz。mecA、femA在链延伸反应前的检测灵敏度为 0 .5nmol L ,但经链延伸反应后检测灵敏度提高到了 0 .0 5nmol L。结论　链延伸反应有效地提高了压电基因传感器的灵敏度 ,可用于微量DNA的检测、核酸同源性分析等方面     

探针浓度对压电传感器基因杂交效应的影响

目的 探讨探针浓度对压电传感器基因杂交效应的影响。方法 9种浓度的探针与同一浓度的靶序列在压电传感器阵列上进行杂交,计算机采集并分析传感器频率数据,比较各探针浓度下固定前后频率差,杂交达到平衡所需时间,杂交前后频率差,同时,根据较低浓度数据得出的杂交动力学参数。计算各浓度下的频率变化理论值。结果 随探针浓度增加,固定引起的频率变化值逐渐增加,杂交时间有缩短趋势,杂交前后的频率差值在探针浓度较低（1nmol/L-0.5μmol/L)时逐渐增大,而探;针浓度较高（1.0-3.5μmol/L)时反而减小,高浓度时杂交前后频率变化理论值与实际值存在明显差异。结论 在石英晶体传感器阵列上,基因杂交效率随探针浓度增加而增大,但探针浓度过高反而抑制杂交,其原因可能主要在于探针之间的空间构象关系和静电排斥。     

核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌的实验研究

目的 构建一种用于检测金黄色葡萄球菌的核酸外切酶-压电石英DNA传感器新方法,同时对其重要影响因素进行探讨.方法 采用λ核酸外切酶处理金黄色葡萄球菌PCR产物,EB染色、电泳后于紫外灯下进行观察,对杂交温度、杂交时间和杂交响应性能等因素进行实验研究,进一步将构建的核酸外切酶-压电石英DNA传感器法用于金黄色葡萄球菌检测,并对其灵敏度和特异性进行研究.结果 λ核酸外切酶-压电石英DNA传感器法最适杂交温度为35℃,最适杂交时间为60 min,响应性能显著大于普通压电DNA传感器(P＜0.01),可以检测到1.0×104CFU/ml的金黄色葡萄球菌,特异性好.结论 利用核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌,具有杂交效率高、技术难度低、频率响应性能高等优点,有较好的应用前景.     

压电石英晶体传感器液相检测的影响因素

目的　探讨压电石英晶体传感器液相检测的影响因素。方法　采用AT切向镀金膜的石英晶体制成 2× 5型石英晶体微阵列 ,观察晶体振荡频率在不同粘度和密度的甘油PBS( 0 .15mol LpH 7.0 )溶液、不同浓度的NaCl溶液、不同pH的PB溶液( 0 .0 6 7mol L)及不同体积的PBS溶液 ( 0 .15mol LpH 7.0 )中的变化规律以及机械冲击和重新加样对晶体振荡频率的影响。结果　石英晶体振荡频率随溶液粘度和密度、离子浓度、pH的增大而降低。溶液体积、机械冲击和重新加样对晶体频率基本无影响。结论　石英晶体传感器所处溶液体系的性状如粘度、密度、离子浓度、pH等因素对其振荡频率有较大的影响 ,石英晶体传感器用于生物反应检测时应减少和避免上述因素的干扰     

压电石英晶体微阵列免疫传感器检测IgG的实验研究

目的 构建一种新型压电石英晶体人免疫球蛋白(IgG)的免疫微阵列传感器。方法 抗IgG单克隆抗体采用蛋白A(SPA)法固定在AT切向、基频10MHz的石英晶体微阵列金膜电极表面制成抗体敏感膜，构成压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器。结果 构建的IgG压电石英晶体免疫微阵列传感器对IgG的响应特性良好，其检测下线为0．5mIU／ml。结论 研制的压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、操作简单、快速，能在线实时检测等优点，可用于临床实验诊断。     

几种肽丁安类似物对单纯疱疹病毒DNA合成的抑制效应

放射性标记的HSV-1与HSV-2 DNAs作为探针,与单纯疱疹病毒感染的原代兔肾细胞DNA点杂交,籍助放射自显影术和液体闪烁计数测定杂交程度,用以检测酞丁安类似物对HSV DNA合成的影响。对5种酞丁安类似物:V8501、V8519、V8502、V8512和V8540进行了比较,V8540抑制作用最强,其对HSV-1和HSV-2的IC_(50)值分别为1.4μmol/L与2.3μmol/L。V8501、V8519、V8502与V8512对HSV-1的IC_(50)值分别为251μmol/L、225μmol/L、13.6μmol/L与6.3μmol/L、而对HSV-2的IC_(50)值分别为257μmol/L、163μmol/L、12.3μmol/L与5.1μmol/L。HSV DNA合成的抑制与空斑抑制程度近似,因此可以认为,单纯疱疹病毒DNA合成可能是酞丁安类似物抗病毒活性的作用位点之一。     

不同温度对压电传感器基因杂交效应的影响

目的：探讨温度对压电传感器基因杂交效应的影响。方法：在压电传感器阵列上固定20碱基的疏基DNA探针,而后分别在15℃、20℃、25℃、30℃下与同长度的互补靶序列进行杂交,计算机采集并分析传感器频率数据,比较各温度下杂交达到平衡所需时间,杂交前后频率差,并计算杂交动力学参数。结果：随温度增加,杂交时间有缩短趋势,杂交前后的频率差值逐渐减小。结合常数变化不明显,解离常数增大,使平衡常数显著增大。结论：在石英晶体传感器阵列上,基因杂交量随温度增高而减小。     

肽核酸生物传感器检测系统构建时靶序列农度的影响及线性范围的确定

目的探索肽核酸生物传感器检测系统构建时靶序列浓度值对杂交效应的影响,以及靶序列浓度线性范围的确定.方法石英谐振式生物传感器阵列表面先固定上1.5μM的bis-PNA探针,观察终浓度为1pg/L至100μg/L的HBV DNA与探针进行杂交所引起的频率变化及反应所需时间.并对频率下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果靶序列浓度为1 pg/L时,传感器未能检测出任何频率的改变.随着浓度从10 pg/L增加到100μg/L,杂交反应引起的频率下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以10μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势.在10pg/L到10μg/L的浓度范围内,浓度与频率下降值的线性回归方程为lgC=-2.745 5 0.069 1×△F,相关系数r=0.992 3.结论随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的频率下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为:10 pg/L ～ 10μg/L.