顶头孢霉菌原生质体融合技术

“原生质体”(Protoplast)最初由Hanstein用来表示植物细胞壁内的原生质,1952年Salton用它表示动植物和微生物细胞内去除细胞壁后的一种细胞结构。原生质体在渗透压稳定剂存在下用酶裂解细胞壁而分离得到,经再生后能恢复细胞原有的结构和功能。原生质体可在融合剂聚乙二醇(PEG)作用下被诱发融合,产生重组体细胞。微生物原生质体融合技术是七十年代发展起来的遗传重组新技术,它不仅在种内,     

酵母菌乳糖酶中试制备工艺研究

研究了酵母菌乳糖酶中试制备工艺包括发酵、菌体破壁、酶液精制等。以2％乳糖、2％葡萄糖、2％玉米浆、0．5％酵母膏、1．5％尿素配方作为发酵培养基，通过对发酵各参数的优化控制，在500L规模发酵罐中进行发酵，单位体积酶活达13．8U／ml。此外，还建立了较大规模酵母菌细胞壁快速破壁方法，以及简便的乳糖酶提取制备工艺。整套工艺操作简便，成本低廉且无须添加任何大型设备，酶的总提取收率在67％以上。该酶制品在6℃低温条件下可在较短时间内有效水解乳制品中的乳糖,降解率达70％以上。     

我院生化药物和酶诊断试剂的研制

概述近２０年我院在药用酶（胶原酶，链激酶，尿激酶，弹性酶，溶菌酶）、工业用酶（青霉素酰化酶，头孢菌素酰化酶，乙内酰脲酶）、诊断用酶（胆固醇，甘油三酯，肌酸激酶，乳酸脱氢酶，葡萄糖和尿素氮的测定）及透明质酸方面的研究开发     

抗癌药物靶向研究的一些新动向

人体内低密度脂蛋白(LDL)是血浆中胆固醇的主要载体,人体细胞表面存在LDL 的受体,LDL 与受体结合后,在溶酶体内降解,释放胆固醇,供细胞应用。Peterson 等发现,白血病细胞,特别是急性髓性白血病患者的LDL 受体活力比正常人周围血和骨髓有核细胞活力高。在诊断时发现,许多白血病患者的血浆中胆固醇含量偏低,但在服用细胞毒类药物后,胆固醇明显     

用羧甲基甲壳素亲和层析提制溶菌酶

<正> 溶菌酶又称胞壁质酶,是细菌细胞壁的溶解酶,其作用的最适小分子底物为N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)与N-乙酰氨基葡萄糖乳酸(NAM)交替的六糖。这结构与天然甲壳素(Chitin聚-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡糖)相似,甲壳素的结构为:是溶菌酶的类似底物,能与溶菌酶形成酶-底物复合物。因此,可将甲壳素羧甲基     

110例酒依赖患者的常见血清酶、血脂水平分析

目的:了解酒依赖患者的常见血清酶、血脂水平。方法:应用0LYMPUS AU-400全自动生化分析仪,对符合CCMD-3诊断标准酒依赖患者110例,分别测定其常见血清酶和血脂,并与90例健康者组成的对照组进行比较。结果:酒依赖组的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)等血清酶类指标显著高于正常对照组(P<0.01)。酒依赖组的血清三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、载脂蛋白B(ApoB)显著高于正常对照组(P<0.01);其高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、载脂蛋白A1(ApoA1)显著低于正常对照组(P<0.01);而总胆固醇(TC)两组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:酒依赖患者的常见血清酶类指标及血脂有不同程度的改变。应大力宣传饮酒成瘾的危害和酒精依赖的防治知识,对酒依赖的患者应早诊断早治疗。     

药物依赖者肝、心、肾功能损伤的调查报告

本文报告100例海洛因及盐酸二氢埃托啡成瘾者肝、心、肾功能的损伤情况。抽取空腹晨血．分别测定谷丙转氮酶(GPT）、谷草转氮酶(GOT)、乳酸脱氲酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰转胸酶(r-GT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、尿素氰(BUN)、肌酐(Cr)．观察其肝、心、     

胆固醇吸收抑制剂在治疗高胆固醇血症中的作用

高胆固醇血症是冠心病的首要病因，而现有最强力的降脂药他汀类并不能使所有患者达到治疗目标。为此目前急需研制抑制肠吸收胆固醇的药物。本文对在动物模型和人体具有这种作用的植物甾醇类、酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂类、微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)抑制剂类和2-氮杂环丁酮类药的研究进展做了较全面的综述。其中2-氮杂环丁酮类的enetimibe单药使用时有较显著的降脂作用，而与他汀类药或非诺贝特伍用时均能额外地降脂，且无药物间相互作用、耐受性好、不良反应也不严重，故伍用疗法有临床应用前途。     

产溶葡球菌酶工程菌的发酵工艺

对溶葡球菌酶生产菌Bacillus Subtilis-0044的发酵条件和工艺作了进一步研究和改进，该菌的摇瓶产酶呆达550u/ml，在5L自动发酵罐上达680u/ml，且发酵周期大大缩短，仅5-6小时，发酵产率比原工艺提高一倍以上，该工艺全部使用国产常用原料，为产业化生产提供便利，在研究中发现溶解氧对培养过程非常重要；pH对产酶没有明显影响。发酵中期流加葡萄糖可抑制蛋白酶对产物酶的降解作用。     

穴状昆布中的phlorotannins对HIV-1逆转录酶和蛋白酶的抑制作用（英]／Ahn M J…∥Biol Pharm Bull

鱼藤素是鱼藤酮类化合物，存在于非洲植物栓皮豆Mundulea sericea中，对小鼠皮肤癌和大鼠乳腺癌模型有明显的化学防护作用。作者用HPLC联合ES—MS(电子喷雾质谱分析)检测了在几种载体中的鱼藤素降解产物和稳定性。     

妊娠期糖尿病患者血脂 游离脂肪酸与新生儿动脉血气 血乳酸 心肌酶的变化研究

目的探讨妊娠期糖尿病患者血脂、游离脂肪酸(FFA)水平与新生儿动脉血气、血乳酸(LAC)、心肌酶水平的变化。方法选取2019年7月至2020年7月在西安高新区医院定期体检与分娩且确诊的妊娠期糖尿病患者102例作为研究组,选取同期在本院进行定期体检的健康孕妇102名作为对照组,回顾性分析2组人群的资料。对2组人群的血脂、FFA、新生儿出生1h内的动脉血气指标、血乳酸、心肌酶相关指标进行检测。比较2组人群体质量指数、糖代谢指标、血常规、生化指标、新生儿动脉血气指标、LAC水平、心肌酶相关指标、生化指标情况。主要包括:谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、血红蛋白(Hb)、白蛋白、肌酐、尿酸、尿素氮、纤维蛋白原(FIB)。分娩前对2组人群的糖代谢指标进行检测,主要有FFA、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbA₁c);血钙(Ca)、血乳酸、二氧化碳分压(PaCO₂)、动脉血pH值、血糖、剩余碱、氧分压,对新生儿对生化指标...     

注射用交联透明质酸钠凝胶的制备及其体外抗酶降解性的研究

目的筛选交联反应条件,制备强抗酶降解的注射用交联透明质酸钠(HA)凝胶(HA-凝胶),并建立其体外抗酶降解性的测定方法。方法用1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)交联HA制备HA-凝胶,对其体外抗酶降解性的测定方法进行确证;采用正交试验考察6个因素对交联反应的影响,选择最佳反应条件。结果透明质酸酶(HAas)对HA-凝胶体外抗酶降解性测定方法无干扰,HAas在100~500 U/mL与产物显色后的吸光度呈线性关系(r=0.998 8)。正交试验极差分析和方差分析显示HA的起始反应浓度、BDDE与HA的比例对交联反应具有显著性影响,在氢氧化钠浓度1%、HA平均相对分子质量1.2×106、反应温度50℃、BDDE与HA的比例为1∶10(g/g)、反应时间4 h和HA浓度为15%的反应条件下,可得到抗酶降解性最好的HA-凝胶。结论选择适宜反应条件可以制备得到体外抗酶降解性强的HA-凝胶,为进一步开发注射美容和整形产品奠定了基础。     

siRNA及其在肿瘤研究中的应用

RNAi(RNA inferference)是一种序列特异性，RNA为依赖性转录后基因沉默技术(PTGS)。在大多数真核生物中，RNAi在控制外来基因表达中起到进化上保守的细胞防御作用。RNAi由外源的dsRNA启动，将与其同源的单链靶mRNA特异性降解。在低等真核生物中，dsRNA进入胞浆后被核酸内切酶Ⅲ(RNaseⅢ)样蛋白Dicer，降解为21-23nt RNAs[小干涉及RNAs或siRNAs(Small mtertence RNA)]，后者在降解靶mRNA中充当向导。在哺乳动物中，这种由dsRNA引发的特定基因表达受抑制的现象称为RNAi，植物中称为PTGS。     

涠洲岛海水中可培养细菌的溶藻活性初探

目的 选取3种海洋赤潮甲藻为研究对象,从广西涠洲岛海域来源细菌中筛选出高效溶藻的菌株,研究菌株的溶藻效果和初步作用机制,为开展赤潮的防治工作奠定基础。方法 采用细菌发酵液与甲藻共培养来测定菌株的溶藻活性,检测藻细胞中丙二醛和抗氧化相关酶系统的响应规律,分析甲藻胞外溶解性有机物组成,并通过KEGG和CAZy数据库预测目标菌株合成溶藻物质的能力。结果 从24株细菌中筛选到15株对至少一种甲藻表现出溶藻活性的菌株,总阳性率为62.5%,菌株M026对3种甲藻均表现出显著的溶藻效果。添加10%的M026发酵无菌滤液,共培养3 d后,3种甲藻细胞死亡率均高达95.0%。生理生化响应表明,在M026发酵无菌滤液胁迫下,甲藻细胞膜脂过氧化损伤严重,3种抗氧化相关酶(SOD、CAT和APX)活性先增加后下降,且三维荧光光谱检测到藻细胞内溶产物为类富里酸和类蛋白类物质。通过全基因组分析,菌株M026含有溶藻活性的次级代谢产物生物合成基因,及多种降解植物细胞壁的酶。结论 菌株M026可作为微生物溶藻菌剂的候选菌株。     

固态发酵黑曲霉产壳聚糖酶的纯化及其性质研究

目的 研究黑曲霉产壳聚糖酶的纯化及其性质.方法 紫外诱变筛选黑曲霉产壳聚糖酶高产菌株,并分离纯化其固态发酵物的粗提液,研究纯化的壳聚糖酶的酶学性质.结果 固态发酵120 h,干培养基的酶活力可达58.12 U·g~(-1).固态培养基提取液通过丙酮分级沉淀,经交联壳聚糖树脂亲和层析、DEAE-Sepharose FF层析得到了一种胞外壳聚糖酶,分子量为63kD,最适反应温度为55℃,最适反应pH6～7,降解壳聚糖反应的米氏常数K_m为2.933 g·L~(-1),V_(max)为0.028 g·L~(-1)·min~(-1).该酶不能降解片状甲壳素和纤维素,能微弱降解CMC和胶体甲壳素,最适底物为脱乙酰度90%的胶体壳聚糖.结论 紫外诱变的成本低、方法简单,利用黑曲霉高产壳聚糖酶菌株发酵能生产一种新型壳聚糖酶.     

基层医院临床生化检验技术（续16）

第五节 血清乳酸脱氢酶(LDH) 总活性比色法测定1 原理 LDH在有辅酶Ⅰ携氢的条件下,催化乳酸、丙酮酸之间的可逆反应,以乳酸为基质,在pH>9.5的介质中经LDH催化作用后,测定生成的丙酮酸的量,借以求得酶活力单位。2 试剂2.1 0.1mol/L甘氨酸缓冲液 精称甘氨酸(C_2H_5NO_2 MW=75.07)1.50lg,氯化钠1.17g,用蒸馏水溶解后稀释至200ml。     

不同取代羧甲基壳聚糖体外酶降解的研究

目的:研究不同取代羧甲基壳聚糖(CMC)的生物降解性.方法:通过体外酶解试验,用粘度测定法研究了在溶菌酶作用下CMC的分子量.结果:溶菌酶作为催化CMC降解的非专一性酶,能有效地催化CMC降解;酶解反应程度与酶浓度成线性关系;随着羧甲基壳聚糖取代度的增加,CMC的降解速度加快.结论:通过控制取代度,可以得到不同生物降解要求的羧甲基壳聚糖.     

测定游离胆固醇的“二酶试剂”质量问题的探讨

通过实验证实,由球孢子链霉菌(streptomyces globisporus)菌体中提取的胆固醇氧化酶制品中,含有少量的胆固醇酯酶。它的存在,不影响总胆固醇的测定。但对游离胆固醇的测定,会发生干扰。通过改进工艺,使除去胆固醇脂酶的胆固醇氧化酶,能成功地用于游离胆固醇,脂蛋白-x(Lp-x)及卵磷脂:胆固醇酰基转移酶(LCAT)的测定。     

开发一种以真菌自分解为基础生产发酵用营养添加剂的方法

真菌自分解可作为生产类似酵母提取物的营养富集溶液的替代方法，本研究验证了此潜在用途。自分解实验在发酵固形物上进行，固形物提取自不同小麦磨粉流上的泡盛曲霉分批或连续深层培养物。自分解的程度不受所用pH范围(3～6．5)的影响，而严格受温度(30～55℃)、初始固形物浓度(10～45g/L)和培养时间的影响。真菌细胞壁的酶裂解通过图像分析、总干重的减少和如游离氨基氮和磷等各种成分的逐步释放，加以鉴定。     

庆大霉素在菌体内的存在方式及对发酵效价的影响

研究了发酵过程中庆大霉素在菌丝体内的存在方式。结果表明，胞内庆大霉素主要被菌丝体细胞壁吸附。湿菌丝体１ｇ能吸附４７７６Ｕ的庆大霉素。湿细胞壁１ｇ吸附庆大霉素的量达２００００Ｕ。一定强度的超声波处理，能明显削弱这种吸附。产物吸附于胞壁，使胞内产物浓度远大于胞外。这可能是庆大霉素发酵后期生物合成严重受阻的一个原因。