PCR技术在儿科支原体肺炎诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和间接血凝法（ＩＨＡ）对６５３例肺炎患儿及２００例健康婴幼儿进行下呼吸道分泌物ＭＰ ＤＮＡ及血清抗ＭＰ－ＩｇＭ检测。结果表明：ＭＰ ＤＮＡ阳性１０７例，阳性率１６．４％；抗ＭＰ－ＩｇＭ阳性１２３例，阳性率１８．８％两者同时阳性２３例，占阳性病例的１０％。ＭＰ阳性病例数共２０７例，占肺炎病例数的３１．７％。本实验结果提示应用ＰＣＲ技术对小儿ＭＰ肺炎的早期诊断具有特异、快速、     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为肺炎衣原体感染的临床诊断提供了科学的依据     

血液透析患者输血传播病毒感染状况的初步研究

目的：研究血液透析（ＨＤ）患者输血传播病毒（ＴＴＶ）的感染状况和基因型。方法：设计特异性引物,建立工聚合酶链反应,对２０例ＨＤ患者血清标本进行ＴＴＶ－ＤＮＡ的检测。并对阳性ＰＣＲ产物进行荧光法直接测序。结果：经过巢式ＰＣＲ检测,ＨＤ患者ＴＴＶ－ＤＮＡ阳性率为２５％。随机选择ＴＴＶ－ＤＮＡ阳性ＰＣＲ产物进行荧光法直接测序,与国外报道的日本株Ｎ２２比较,核苷酸同源性为９５．８％。     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

鼻咽癌细胞DNA含量的分析

目的探讨鼻咽细胞复制不同时期ＤＮＡ含量与癌细胞发生发展的关系，为建立现代化诊断方法提供资料。方法本文应用流式细胞仪（ＦＣＭ）对６４例经病理诊断为鼻咽癌（ＮＰＣ）患者的鼻咽细胞进行ＤＮＡ含量测定，并与４１例慢性咽炎患者的鼻咽细胞ＤＮＡ含量进行对照分析。结果ＮＰＣ患者中非整倍体的阳性率为８４．４％；假阴性１５．６％；假阳性７．３％。ＤＮＡ合成期（ＳＰＦ）大于３０％的阳性率为８７．５％；假阴性１２．５％；假阳性９．８％。结论应用ＦＣＭ检测肿瘤细胞周期ＤＮＡ含量，具有快速、准确、自动化程度高的优点，有较好的临床应用前景。     

聚合酶链反应检测血透患者血清中HBV DNA的临床意义

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了４２例维持性血液透析患者血清标本的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，以评价ＰＣＲ技术在调查透析中心ＨＢＶ感染的流行病学方面的应用价值。结果在４２例标本中有１７例ＨＢＶＤＮＡ阳性（４０．５％），与常规血清标志物相比较，ＨＢｓＡｇ阳性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６０．９％，而全部血清标志物均阴性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１３．３％。提示：ＰＣＲ方法是监测中心透析ＨＢＶ传染的更灵敏、更可靠手段。它也是对ＨＢＶ变异类型的鉴别及疗效评价方面的一个重要方法。     

孕妇及胎儿弓形虫感染的临床研究

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对３０例有异常妊娠史的中期妊娠孕妇抽羊水检查，结果２例弓形虫（ＴＯＸ）ＤＮＡ阳性；阳性率６．６６％。对５０例足月妊娠孕妇作外周务所生新生儿的脐血作ＰＣＲ技术查弓形虫ＤＮＡ，结果对母子血样本ＴＯＸ－ＤＮＡ阳性。此４例孕妇均无临床症状，他们的胎儿１例无异常表现，２例为畸形儿，１例为死胎。     

细菌DNA的聚合酶链反应扩增及反相杂交初步分型

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）加反相杂交技术在细菌ＤＮＡ检测中的应用。方法以１６ＳｒＲＮＡ基因为靶序列，设计引物及寡核苷酸探针，采用ＰＣＲ法加反相杂交检测标准菌株及临床标本的细菌ＤＮＡ。结果对２４株不同标准菌株进行ＰＣＲ扩增，均出现３７１ｂｐ长度的ＤＮＡ片段，敏感性试验可检测出１０－１２ｇ的细菌ＤＮＡ，与人类基因组ＤＮＡ、真菌及病毒无交叉反应；２２例血培养阳性标本及４例脑脊液培养阳性标本均扩增出３７１ｂｐ长度ＤＮＡ条带，反相杂交法区分革兰阳性／阴性细菌与培养结果相符。结论１６ＳｒＲＮＡ基因ＰＣＲ加反相杂交技术检测细菌ＤＮＡ，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为细菌感染的临床诊断提供了科学的依据     

多聚酶链式反应速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）以３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＤＮＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融融解法快提切片ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸色性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ〈０．０１）。说明ＰＣＲ用于活检组织诊断理一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此     

套式聚合酶链反应单管法检测单纯疱疹病毒

应用聚合酶链反应方法，套式ＰＣＲ双管法及套式ＰＣＲ单法分别检测１３０份散发性脑炎患者脑脊液中单纯疱疹病毒的ＤＮＡ，阳性率依次为１８．５％（２４／１３０）、２９．２％（３８／１３０）、２９．２％（３８／１３０）；６０份非中枢神经系统感当者ＣＳＦ标本的检测阳性率分别为０、３．３％（２／６０）、０。结果显示：套式ＰＣＲ虽然提高了检测的敏感性，但假阳性也大大增加。改良的套式ＰＣＲ单管法则大大减少了污染机会     

喉鳞癌中HPV的免疫组化,原位杂交,PCR和间接原位PCR检测

目的 探讨ＨＰＶ与喉癌发生的关系。方法 采用免疫组化,原位杂交,ＰＣＲ和间接原位ＰＣＲ技术检测５０例喉鳞状细胞癌中的ＨＰＶ感染情况。结果 免疫组化衣壳抗原阳性６２例（１２％）,原位杂交阳性１３例（２６％）,ＰＣＲ阳性１０例（２０％）,原位ＰＣＲ阳性１７例（３４％）,综合上述方法阳性率为４２％（阳性２１例）。结论 ＨＰＶ感染与喉癌有着明显的关系,间接原位ＰＣＲ在检测ＨＰＶ感染时具有较高的敏感性,特异     

套式聚合酶链反应检测巨细胞病毒的初步研究

目的建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。方法在ＨＣＭＶ直接早期蛋白ＥｃｏＲＩＪＤＮＡ片段内，自行设计两对引物，建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶＤＮＡ，同时结合病毒分离检测临床标本。结果２３例新生儿肝炎综合征患儿中，１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性；１例病毒分离阴性，但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测，套式ＰＣＲ阳性率为９％，病毒分离阳性率则为７％。结论套式ＰＣＲ加限制性酶切分析是一种临床检测ＨＣＭＶ的快速有效手段，值得临床推广。     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

HpaⅡ—PCR检测小儿急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨｐａⅡ－ＰＣＲ）检测５８例急性白血病（ＡＬ）患儿降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率７１．４％（２５／３５），急性非淋巴细胞白血病７８．２％（１８／２３）。敏感性达１０－３。证明ＣＴ基因５′高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本课题受卫生部、四川省人民医院出国人员基金资助     

套式聚合酶链反应单管法检测单纯疱疹病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法、套式ＰＣＲ双管法及套式ＰＣＲ单管法分别检测１３０份散发性脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）的ＤＮＡ，阳性率依次为１８．５％（２４／１３０）、２９．２％（３８／１３０）、２９．２％（３８／１３０）；６０份非中枢神经系统感染者ＣＳＦ标本的检测阳性率分别为０、３．３％（２／６０）、０。结果显示：套式ＰＣＲ虽然提高了检测的敏感性，但假阳性也大大增加。改良的套式ＰＣＲ单管法则大大减少了污染机会，使操作更方便、省时，适于临床推广应用。     

某新建医院2017-2020年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯 菌分子流行病学特征分析

摘要：目的 为新建医院的医院感染控制提供参考依据。 方法 回顾性分析 ２０１７—２０２０ 年苏州科技城医院微生物室分离的 ７６３ 株肺炎克雷伯菌临床分布及药敏试验结果；应用脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）技术分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（ＣＲＫＰ）的 同源性，ＰＣＲ 技术检测其碳青霉烯酶基因；对产碳青霉烯酶的菌株进行质粒接合转移实验；对代表性菌株进行全基因组测序 分析。 结果 该院肺炎克雷伯菌主要分离自痰液（５０．９８％）、尿液（３０．８０％）、血液（１２．０６％）、分泌物（７．７３％）等；菌株主要来 源于神经外科、呼吸内科、重症监护病区、肿瘤内科等科室；菌株对四环素、哌拉西林耐药率达 ３０％，对喹诺酮类、阿莫西林／ 克 拉维酸、哌拉西林／ 他唑巴坦、庆大霉素耐药率均在 ２０％以下，对阿米卡星、碳青霉烯类耐药率在 １０％以下；ＰＦＧＥ 结果显示 ＣＲＫＰ 有 ３２ 个克隆型，Ａ２２、Ａ２６ 型为相对优势克隆型；ＰＣＲ 法检测出 ２２ 株 ｂｌａＫＰＣ阳性，６ 株 ｂｌａＮＤＭ阳性，２ 株 ｂｌａＩＭＰ 阳性，２ 株 ｂｌａＫＰＣ 、ｂｌａＮＤＭ双阳性；７ 株 ｂｌａＫＰＣ 、２ 株 ｂｌａＮＤＭ阳性菌株接合转移成功；代表菌株全基因组测序结果显示该株菌为 ＫＰＣ?２、ＳＴ１１ 型，未携带肺炎克雷伯菌常见的 ｒｍｐＡ、ｒｍｐＡ２ 等毒力基因，携带少见的 ｉｕｔＡ、ｉｒｏＮ 毒力基因及 ｐｉｌＷ 基因。 结论 该新建医院 ＣＲＫＰ 的检出率呈上升趋势，耐药基因型逐渐多样性，应予以高度关注。     

多重聚合酶链反应检测生殖支原体感染

目的建立一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）用于检测生殖支原体（Ｍｇ）。方法性病门诊患者５１１例，正常对照５６人。分泌物（女性为宫颈、男性为尿道拭子）标本用ＮＰ－４０裂解液一步法制备模板ＤＮＡ。设计Ｍｇ种属特异性引物及功能性结蛋白基因引物，先进行标准株的特异性与敏感性试验，然后进行临床标本的ＰＣＲ扩增反应。结果两对引物有良好的特异性，对Ｍｇ标准株模板敏感性可达１０－６μｇ。临床标本检测，广东地区２６１例性病门诊患者的Ｍｇ－ＤＮＡ阳性率（５４／２６１，２０．７％）高于上海（９／８４，１０．７％）、常州（８／７０，１１．４％）及南京地区（１１／９６，１１．５％；χ２＝１６．１，Ｐ＜０．０１），后三者的感染率互相间比较，差异无显著性（χ２＝０．０５６，Ｐ＞０．０５）。性病门诊患者５１１例的Ｍｇ－ＤＮＡ总阳性率（８２／５１１，１６．１％）与５６例正常对照者（１／５６，１．８％）比较，差异有非常显著性（χ２＝７．８８２，Ｐ＜０．０１）。结论建立的ＰＣＲ技术检测Ｍｇ具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

PCR技术在儿科结核病诊断中存在的问题

观察多聚酶链反应技术在结核病临床诊断上的应用以及存在的问题，方法：２２例结核病符合临床诊断标准，５０例对照组，应用ＰＣＲ技术，经凝胶电泳法检测结果。结果血样本ＴＢ－ＤＮＡ－ＰＣＲ的阳性率为结核组１８．１８％，对照组３６．００％，敏感度１８．１８％，特异性６４．００％，假阳性３６．００％，假阴性８１．８２％。     

多聚酶链式反应快速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＮＤＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融裂解法快提切片中ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸染色阴性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ用于肺活检组织诊断结核是一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此外，对影响ＰＣＲ结果的因素进行了分析。     

脑瘫患儿CT改变与巨细胞病毒感染关系的初步研究

用多聚酶链反应法（ＰＣＲ）检测７４例脑瘫患儿尿中巨细胞病毒ＤＮＡ（ＣＷＶ－ＤＮＡ），ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率为５４．１％，同时行ＣＴ检查，其中４７例（６３．５％）异常，在ＣＴ异常组中ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率为６３．８％，而ＣＴ正常组阳性率为３６．５％，两者比较差异有显著性。（Ｐ＜０．０５）。示ＣＭＶ感染可能与婴儿脑损伤有关，且在一部分患儿可引起解剖性损伤。