绿脓假单胞菌DNA的分子生物学研究

为使医院感染流行病学调查方法由生物学提高以分子生物学水平。方法选用不同限制性核酸内切酶（ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，ＥｃｏＲＩ），对绿脓假单胞菌主要生物型进行染色体ＤＮＡ酶切，凝胶电泳后获得限制性核酸内切酶（ＲＥＡ）图谱，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从Ｅ．Ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ，２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因，以（α－Ｐ＾３２）ｄＡＴＰ经缺口平移法标记ｒＤＮＡ作为广谱探针，经Ｓｏｕｔｈ     

PCR定点诱变方法构建BCR—ABLcDNA竞争性PCR内参照物

本实验通过合成与原有下游引物（Ｂ）相似的一条新引物（Ｂ’）,经聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）扩增出比原ＢＣＲ－ＡＢＬｃＤＮＡ序列减少了４个碱基的参照物,达到定点诱变的目的。经酶切分析证明,两型ＢＣＲ－ＡＢＬｍＲＮＡ均可通过此方法得到相应的ｃＤＮＡ参照物。参照物和特测模板的共扩增产物可通过毛细管电泳达到基线分离,证明了其可行性。该参数物可用于慢性粒细胞白血     

单倍体相同供受者HLA—DNA配型及临床意义

以人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）的ＤＱβ片段ｃＤＮＡ作为探针，用４种限制性内切酶（ＭＳＰＩ、ＥｃｏＲ Ｉ、Ｔａｑ Ｉ和Ｐｓｔ Ｉ）对６对单倍体相同的活体肾移植供受者进行ＤＮＡ配型。结果发现ＨＬＡ－ＤＮＡ分型比血清学配型更高频率地表现其特异性，４种酶中ＥｃｏＲＩ的分型尤与肾移植存活率相关。混合淋巴细胞培养结果也与ＥｃｏＲＩ分型相近。     

ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点基因多态性与尤文肉瘤患者化疗耐药及肺部感染 的关系

摘要：目的 分析 ＡＴＰ 结合盒 Ｂ 亚家族成员 １ （ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｂ ｍｅｍｂｅｒ １，ＡＢＣＢ１）ｒｓ１０２７６０３６、Ｔｏｌｌ 样受体 ４ （Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ４，ＴＬＲ４）ｒｓ１１５３６８８９ 和白细胞介素１０（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０，ＩＬ １０）ｒｓ１５５４２８６ 基因多态性与尤文肉瘤患者化疗耐 药及并发肺部感染的关系。方法 选取 ２０１７ 年 １ 月至 ２０１９ 年 １ 月就诊的 ８０ 例尤文肉瘤患者为研究对象，采集各患者外周 血并提取 ＤＮＡ，定量 ＰＣＲ 检测 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点基因多态性。分别对 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ ＣＣ、ＣＴ 和 ＴＴ 基因型，ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 位点 ＣＣ、ＣＴ 和 ＴＴ 基因型以及ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点 ＧＧ、ＧＡ 和 ＡＡ 基因型进 行分析，并探究其与尤文肉瘤患者化疗耐药及并发肺部感染的关系。结果 ８０ 例尤文肉瘤患者的 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点分布符合 Ｈａｒｄｙ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ 平衡（χ２ ＝ ４．２５３，Ｐ＞０．０５），具有群体代表性。ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ 位点中 ＣＣ 基因型占比高于 ＣＴ 和 ＴＴ 基因型（χ２ ＝ ９３．８６３，Ｐ＜０．００１），ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 位点中 ＧＧ 基因型占比高于 ＧＣ 和 ＣＣ 基 因型（χ２ ＝ ６０．７８８，Ｐ＜０．００１），ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点中 ＧＧ 基因型占比高于 ＧＡ 和 ＡＡ 基因型（χ２ ＝ ４１．２１３，Ｐ＜０．００１）。依据化疗 耐药的界定，ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ 位点 ＣＣ 基因型和 ＣＴ／ ＴＴ 基因型的化疗耐药分别为７８．３３％和５５．００％，两组间差异有统计学意 义（χ２ ＝ ４．０９６，Ｐ＝ ０．０４３）。ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 位点 ＧＧ 基因型和 ＧＣ／ ＣＣ 基因型患者肺部感染发生率分别为 ５０．９４％和 ２５．９３％， 两组间差异具有统计学意义（χ２ ＝ ４．５８１，Ｐ＝ ０．０３２）。ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点 ＧＧ 基因型和 ＧＡ／ ＡＡ 基因型患者肺部感染发生率分 别为 ５８．３３％和 ２８．１３％，两组间差异具有统计学意义（χ２ ＝ ６．１２３，Ｐ ＝ ０．０１３）。连锁不平衡测试结果显示，ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、 ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６位点之间存在连锁不平衡（Ｄ′：０．８８～０．９１，Ｐ＜０．０５）。结论 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ 位点的多态性 影响尤文肉瘤患者的化疗耐药，ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９位点和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６位点的多态性则与尤文肉瘤患者并发肺部感染相关。     

单倍体相同供受者HLA－DNA配型及临床意义

以人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）的ＤＱβ片段ｃＤＮＡ作为探针，用４种限制性内切酶（ＭＳＰＩ、ＥｃｏＲＩ、ＴａｑＩ和ＰｓｔＩ）对６对单倍体相同的活体肾移植供受者进行ＤＮＡ配型。结果发现ＨＬＡ一ＤＮＡ分型比血清学配型更高频率地表现其特异性，４种酶中ＥｃｏＲＩ的分型尤与肾移植存活率相关。混合淋巴细胞培养结果也与ＥｃｏＲＩ分型相近。     

扁桃体炎,口腔癌中EB病毒的检测

为探讨Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒在扁桃体炎、口腔癌中的感染状况，本研究利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫反应（ＥＬＩＳＡ）检测５４例正常人、２８例慢性扁桃体疾患者及３０例口腔癌患者的口腔含漱液、术后组织标本的ＥＢＶ－ＤＮＡ和血清标本的ＩｇＧ－ＥＢＶＣＡ，表明：扁桃体炎、口腔癌者的ＥＢＶ－ＤＮＡ检出率与正常人相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５），而ＩｇＧ－ＥＢＶＣＡ的检出率与正常人相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５），慢性扁桃体疾患者、口腔癌患者的含漱液与术后组织标本的ＥＢＶ－ＤＮＡ检出率相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明仅仅检测ＩｇＧ－ＥＢＶＣＡ较难反映患者的真实情况，检测口腔含漱液中的ＥＢＶ－ＤＮＡ能比较真实地反映ＥＢ病毒在扁桃体炎、口腔癌中的感染状况，在临床上有较高的应用价值     

血清酮体比值判断感染性多脏器功能失常综合征病情严重程度及预后的意义

目的：探讨血清酮体比值（ＡＫＢＲ）对判断感染性多脏器功能失常综合征病情轻重程度和预后的意义。方法：测定正常对照组、肝硬化组、急性感染组（又分Ａ、Ｂ、Ｃ３组）患者乙酰乙酸（ＡｃＡｃ）、β羟丁酸（３ＨＢ）及ＡＫＢＲ等指标水平。结果：肝硬化组ＡｃＡｃ〔（０．４２±０．１５）ｍｍｏｌ／Ｌ〕和３ＨＢ〔（０．８２±０．１８）ｍｍｏｌ／Ｌ〕明显低于正常对照组〔（０．９９±０．２０）ｍｍｏｌ／Ｌ和（１．４０±０．２５）ｍｍｏｌ／Ｌ〕，Ｐ均＜０．０１；急性感染Ａ、Ｂ、Ｃ３组的ＰａＯ２、乳酸、阴离子间隙具有显著性差异（Ｐ均＜０．０１）；ＡＫＢＲ与ＡＰＡＣＨＥⅢ评分呈明显负相关（ｒ＝－０．８１２，Ｐ＜０．００１）；血清酮体水平与ＡＰＡＣＨＥⅢ评分间无明显直线相关关系（ｒ＝０．１６３，Ｐ＞０．０５）；ＡＫＢＲ和ＰａＯ２与ＡＰＡＣＨＥⅢ评分间有明显相关性（ｒ＝０．７２２，Ｐ＜０．０１）。结论：ＡＫＢＲ能更早期、直接、准确地反映肝细胞线粒体的受损程度和能量代谢状态，可以作为评估感染性ＭＯＤＳ病情严重程度及预后的重要指标。     

乙型肝炎患者HBV－DNA和HBeAg检测的比较

乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ检测的比较上海第二医科大学（２０００２５）刘丹，支立民，徐伯忠本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫吸附法对６６例确诊为乙型肝炎患者的血清，分别检测ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ、ＨＢｓＡｇ，现将结果报道如下。一、...     

再生障碍性贫血患者的载脂蛋白B,E基因多态性分析

我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，研究２３例再生障碍性贫血（再障）患者载脂蛋白Ｂ，Ｅ（ＡｐｏＢ，Ｅ）基因限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）。比较再障患者与正常人的ＡｐｏＢ基因ＸｂａⅠ和ＥｃｏＲⅠ酶切位点ＲＦＬＰｓ的差异及ＡｐｏＥ基因ＨｈａⅠ酶切位点...     

鉴别乙型肝炎病毒野毒株及E阴性突变株的新方法

目的同时检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）野毒株及２种ＨＢｅＡｇ阴性突变株（Ｅ阴性突变株）。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，以人为改变核苷酸序列的２对引物，自乙型肝炎患者血清ＤＮＡ中，同时扩增出１４８ｂｐ及１０２ｂｐ两种产物，根据限制性内切酶Ｂｓｕ３６Ⅰ和ＡｆｌⅢ对ＰＣＲ产物消化后片段长度多态性的分析，鉴别ＨＢＶ野毒株Ｍ０与２种Ｅ阴性突变株Ｍ１、Ｍ２。结果突变株Ｍ１的１０２ｂｐ扩增产物经Ｂｓｕ３６Ⅰ酶切，可产生一８２ｂｐ片段；突变株Ｍ２除１０２ｂｐ产物含Ｂｓｕ３６Ⅰ酶切点外，其１４８ｂｐ产物经ＡｆｌⅢ酶切后，可产生一１１７ｂｐ片段；野毒株Ｍ０的２种产物不含上述酶切点。用该法对３４例ＨＢｅＡｇ阴性患者进行检测，结果与寡核苷酸探针杂交完全一致。结论该方法简便、准确，为ＨＢＶ变异株的检测探索了一条非放射性的新途径。