柯萨奇B4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的 探讨柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法 采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法,结合病理学观察,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果 克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变;发病区88．89％的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号;95．24％的亚急型克山病出现阳性杂交信号,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论 柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致。     

原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南亚急型克山病的关系

用光敏生物素标记的柯萨奇 B_3病毒 cDNA 探针,与云南病区20例经临床和病理检查确诊为亚急型克山病的心肌组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果有18例出现阳性杂交信号,阳性率达90%。说明云南亚急型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在。提示云南亚急型克山病的发生与柯萨奇 B 组病毒的持续感染密切相关。     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

克山病尸检心肌标本柯萨奇B组病毒RNA片段的序列分析

目的通过原位核酸杂交技术和RT-PCR技术探讨柯萨奇B组病毒感染与吉林亚急型克山病的关系.方法以柯萨奇B组病毒基因组的一段共同序列做寡核苷酸探针,于5′端行生物素标记,检测亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中柯萨奇病毒的感染率;选取阳性标本做RT-PCR,并对PCR产物进行核苷酸序列分析,比较其与柯萨奇B组病毒各血清型之间的差异.结果 9例亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中有7例原位核酸杂交结果阳性,阳性率为77.78%;所选3例原位核酸杂交结果阳性标本RT-PCR均有长541 bp的DNA条带出现,测序结果表明该片段与柯萨奇病毒B3同区域序列一致,与B1、B4、B5的同源性较大.结论亚急型克山病患者体内有柯萨奇B组病毒RNA存在,柯萨奇病毒可能在克山病的发生发展中扮演重要的角色.     

柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系

目的：探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的特征及病毒感染与发病的关系。方法：以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象，用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交，以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA。结果：急型、亚急型及慢我山病的阳性杂交信号检出率分别为83．0％、87．9％及80．0％。阳性信号在急型、亚急型克山病心肌中颗粒粗大，境界较清晰，但分布比较局限；在慢型克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内，但颗粒较细小，境界不清。结论：心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果；吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关，提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇病毒与克山病的关系

为进一步探讨柯萨奇病毒与克山病的关系，采用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）制备的ｃＤＮＡ探针与黑龙江、山东、云南三省病区克山病尸检心肌组织及胎儿克山病心肌组织的石蜡切片进行了原位核酸杂交，并用脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡健康成人及冠心病、风心病尸检心肌组织和病区、非病区７～８个月引产胎儿心肌组织的石蜡包埋切片作为对照。结果急型克山病８／１３、慢型克山病３４／５０、亚急型克山病２２／２９呈现阳性杂交信号，提示有柯萨奇病毒ＲＮＡ的存在，冠心病２／１５、风心病１／１５、显著低于克山病，而健康成人对照组均为阴性，胎儿克山病一例呈阳性反应，病区引产胎儿心肌组织１０例中有２例也检出柯萨奇病毒ＲＮＡ，而非病区胎心则为阴性。结果提示在一些克山病的发生和发展过程与柯萨奇Ｂ组病毒的感染高度相关。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。     

克山病与病毒性心肌炎患者血清中T_3、T_4的测定——克山病病毒病因的剖析

本文采用放射免疫分析法(RIA)测定克山病和病毒性心肌炎患者血清中三碘甲腺原氨酸(T_3)和甲状腺(T_4)的含量,同时采用免疫酶染色法检测患者血清中柯萨奇B组病毒的特异性抗体IgM,以克山病病区及非病区健康儿童做对照。结果发现:亚急型克山病患儿血清中T_4含量明显增高,而病毒性心肌炎、病区及非病区健康儿童血清T_4含量则无明显改变。克山病与病毒性心肌炎血清中T_3无改变;且两者CoxB组病毒IgM抗体阳性率大致相同,但前者T_4含量明显增高,表明克山病患者血清中T_4增高,与病毒感染无直接关系。     

长春地区1992～1996年病毒性心肌炎柯萨奇B组病毒感染情况的调查

近年来用原位核酸杂交和套式聚合酶反应等技术,从各型克山病心肌标本中均发现有柯萨奇B组(CBV)病毒RNA的存在,其阳性率从61.5％到90.0％不等。证明很多克山病病人确有肠道感染,重新提出重视肠道病毒,特别是柯萨奇B组病毒感染在克山病发病中的作用。 作者对克山病非病区——长春地区近年来柯萨奇病毒感染引起的心肌炎给予特别关注。对1992～1996年临床拟诊为急性病毒性心肌炎患者进行了CBV特异性IgM抗体的检验,结果报告如下。     

克山病患者心肌中肠道病毒VP1抗原的检测

目的为进一步探讨肠道病毒感染与克山病的发病关系.方法应用抗柯萨奇B5病毒的VP1壳蛋白的单克隆抗体,采用免疫组化方法,对黑龙江、山东、云南3省区急型、亚急型、慢性、潜在型克山病患者尸检心肌共83例,风心病10例,冠心病10例,心肌炎21例,扩张型心肌病29例,非病区非正常死亡的正常人10例,病区发病季节非克山病死亡病人13例的尸检心肌进行了检测.结果克山病尸检心肌83例中有74例阳性,阳性率89.2%;风心病、冠心病、非正常死亡健康人的阳性检出率分别为10%,心肌炎,扩张型心肌病的阳性检出率分别为66.7%和70%;病区发病季节非克山病死亡病人心肌阳性检出率为38.5%.结论 3省区各型克山病心肌中均能检出肠道病毒VP1结构蛋白,支持克山病的发生与肠道病毒感染高度相关.     

Coxsackievirus B3 infection and its mutation in Keshan disease

AIM: To investigate coxsackievirus B(3) infection and its gene mutation in Keshan disease. METHODS: The expression of Coxsackievirus B(3) RNA was detected in autopsy specimens of acute (12 cases), sub-acute (27 cases) and chronic (15 cases) Keshan disease by in situ hybridization. In sub-acute Keshan disease specimens, 3 cases with positive result by in situ hybridization were selected RT-PCR analysis. The DNA segments were then sequenced. RESULTS: Coxsackievirus B(3) RNA was detected in the cytoplasm of myocardiocyte. The positive rate was 83% in acute, 67% in sub-acute and 80% in chronic Keshan disease. In the conservative region of Coxsackievirus B(3) genome, there was a mutation in 234 (C-T) compared to the non-cardiovirulent strain, CVB(3/0). CONCLUSION: Coxsackievirus B(3) RNA can survive and replicate in heart muscle of Keshan disease, which may play an important role in the occurrence of Keshan disease. The possible mechanism of occurrence of Keshan disease is associated with point a mutation in Coxsackievirus B(3) genome.     

克山病病区12例急性心肌炎临床病理分析

目的 探讨云南省克山病病区急性致死性心肌炎暴发流行及其猝死的原因。方法 对１２例在季节性群体发病中收集到的死亡病例,作临床病理资料总结分析。结果 此类心肌炎暴发浒具有一定的发病特点,心肌病变主要表现为间质性炎症反应,在９例心肌组织中,有８例肠道病毒ＲＮＡ阳性。结论 肠道病毒感染可能是云南克山病病区急性心肌炎暴发流行的主要病因。     

克山病患者心肌肠道病毒VP1结构蛋白检测

目的 探讨肠道病毒感染与克山病发病的关系。方法 应用抗柯萨奇B5病毒(Coxsackie B5 virus，CVB5)VP1蛋白单克隆抗体，采用免疫组化方法，检测黑龙江、山东、云南省克山病病区急型、亚急型、慢型、潜在型克山病死亡病例心肌标本83例，风心病10例，冠心病10例，心肌炎21例，扩张型心肌病29例，非病区非正常死亡的正常人10例，病区发病季节非克山病死亡病例13例。结果 克山病83例心肌标本中有74例VP1结构蛋白阳性，阳性率89．2％；风心病、冠心病、非正常死亡健康人VP1阳性检出率均为10％；心肌炎、扩张型心肌病VP1阳性检出率分别为66．7％和70％；病区发病季节非克山病死亡病人VP1阳性检出率为38．5％。结论 来自3省份的各型克山病死亡病例心肌标本中均能检出肠道病毒VP1结构蛋白，克山病的发生与肠道病毒感染高度相关。     

山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记的ＣＯＸＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针，与亚包型克山病病例尸检心肌组织９例及１５例脑外务，ＣＯ中毒等意外死亡的正常民人心肌组织和１０例非病区７～８个月胎儿心组织切片进行原位杂交，结果９例山东亚急型克山病的５例检测到ＣＯＸＢ组病毒的ＲＮＡ，阳性率为５５．５％（５／９），而对照组均为阴性，结果提示ＣＯＸＢ组病毒感染是山东省亚急性型克     

恢复期亚急型和慢型克山病患者动态心电图特点及预后意义

目的 观察恢复期亚急型和慢型克山病患者动态心电图（DCG）特点，探讨其预后意义。方法 选择恢复期亚急型和慢型克山病患者88例，进行心电图（ECG）和DCG检查，并长期随访，以观察终点结果死亡或存活分组对比分析。结果 恢复期亚急型克山病患者在ECG90．3％正常情况下，84．9％的DCG出现异常。慢型ECG及DCG异常检出率都很高，分别为94．7％和100．0％。亚急型DCG异常检出率室早最高，为77．4％，其中成对室早51．6％，室速32．3％；房早次之41．9％。慢型DCG异常检出率室早最高，为96．5％，其中频发室早75．4％，成对室早51．6％，室速32．3％；房早次之82．2％。死亡组与存活组对比，死亡组ECG房早、室早、ST-T改变较存活组检出率高（P〈0．05）。死亡组与存活组DCG室早总检出率无差异（P〉0．05），但成对室早和室速检出率较存活组高（P〈0．05）。结论 房性与室性心律失常是恢复期亚急型和慢型克山病的DCG特征，亚急型ECG正常，DCG高异常检出率；慢型ECG及DCG均高异常检出率。成对室早和室速对预后有重要意义。     

克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表达的研究

目的探讨细胞凋亡及结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常表达与亚急型、慢型克山病的关系。方法应用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Ｄｅｓｍｉｎ双重荧光染色,并应用共聚焦显微镜观察结果。结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ的异常荧光染色及细胞凋亡,有Ｄｅｓｍｉｎ荧光染色变浅甚至消失,慢型克山病多表现为染色增强,或呈团状聚集于心肌细胞中间,或呈块状附于细胞膜下。凋亡细胞多见于有Ｄｅｓｍｉｎ异常改变的心肌细胞、浸润的炎细胞、血管内皮细胞及一些间质细胞。结论细胞凋亡与结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常参与克山病的发生与发展。     

2006年全国克山病病情监测汇总分析

目的 掌握2006年全国克山病患病及发病情况.方法 根据2006年克山病监测方案及<克山病诊断标准>(GB 17021-1997),对27个监测点居民进行查体、描记心电图、疑似病例摄X线胸片等临床检查,同时对克山病发病相关因素进行检测.结果 27个监测点潜在型、慢型克山病检出率分别为2.25%(295/13 090)、0.60%(78/13 090).估计全国有3 370 000～4 110 000例克山病病人,其中慢型克山病患者600 000～940 000例.四川省报告发生6例亚急型克山病,另外新检出克山病潜在型5例,慢型1例.发硒平均水平为0.3282mg/kg,粮硒平均水平为0.0148 mg/kg.结论 历史重病区有新的亚急型克山病发生,克山病仍然是一个严重的地方性公共卫生问题;在进行克山病监测的同时,建议加强患者管理、治疗和重病区克山病的预防工作.