RGDS-GG-KLAKLAKK多肽对人骨肉瘤细胞生长的影响

.结果 多肽RGDS-GG-KLAKLAKK明显抑制MG-63细胞的增殖,并有时间和剂量依赖性,在24、48 h的IC50分别为46.8、37.6 μmol/L(P＜0.05).多肽RGDS-GG-KLAKLAKK随着剂量的增加MG-63细胞的凋亡率从5.23%上升至38.90%(P＜0.01).MG-63细胞在多肽RGDS-GG-KLAKLAKK处理后,SurvivinmRNA的表达出现明显下降.结论 多肽RGDS-GG-KLAKLAKK能够抑制入骨肉瘤MG-63细胞的增殖,并诱导其凋亡.     

塞来昔布抑制骨肉瘤细胞黏附侵袭及其机制

目的 观察环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨肉瘤MG-63和U2-OS细胞增殖、黏附和侵袭的抑制作用,探讨其分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTF)比色法、黏附实验、侵袭实验、流式细胞术和Western blot研究25、50、100 μmol/L 3种浓度塞来昔布对两种细胞株增殖、黏附、侵袭能力及CD44和基质金属酶(MMP)-9表达的影响.结果 3种浓度的塞来昔布作用48 h后MG-63细胞增殖抑制率分别为9.35%、42.68%、60.29%(P＜0.05),对U2-OS细胞的抑制率分别为2.59%、8.95%、29.36%(P＜0.05).对MG-63的黏附抑制率分别为8.6%、21. 5%、52.8%(P＜0.05);对U2-OS的黏附抑制率分别为1.6%、3.8%、19.0%(P＜0.05);对两种骨肉瘤细胞的侵袭能力、CD44和MMP-9的表达均有抑制作用,对高表达COX-2的MG-63的抑制效应更加显著.结论 塞来昔布可抑制骨肉瘤细胞的增殖、黏附和侵袭,这种作用与下调CD44和MMP-9的表达有关,此种效应具有COX-2依耐性.     

DFU对骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 观察选择性环氧合酶-2抑制剂DFU对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖和侵袭能力的影响及其对Ang-2基因表达的调控.方法 体外培养骨肉瘤细胞株MG-63,免疫荧光法检测Ang-2在MG-63细胞中的表达,应用噻唑蓝(MTT)比色法和形态学检测研究不同浓度DFU对骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用,Boyden小室体外侵袭实验检测其对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响,RT-PCR法分析DFU对骨肉瘤细胞株MG-63中Ang-2基因表达的影响.结果 免疫荧光染色结果显示Ang-2在骨肉瘤细胞株MG-63中呈阳性染色,MTT法和形态学检测提示DFU可抑制骨肉瘤细胞株MG-63的增殖,并具有剂量依赖性,在DFU浓度为200 μmol/L时,对细胞生长有明显的抑制作用.Boyden小室体外侵袭实验显示DFU可降低骨肉瘤细胞的侵袭能力,在DFU浓度为200 μmol/L时,作用最显著.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析显示经DFU作用后的骨肉瘤细胞株MG-63表达Ang-2较用药前明显下降.结论 DFU对骨肉瘤细胞株MG-63的增殖有抑制作用,其可能通过抑制Ang-2的表达,降低其侵袭能力.     

肿瘤转移相关基因1在人骨肉瘤细胞的表达与转移侵袭的关系

目的比较肿瘤转移相关基因(MTA1)在人骨肉瘤细胞高低转移株的表达水平,探讨MTA1表达水平与骨肉瘤细胞转移潜能的相关性。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)检测MG-63骨肉瘤细胞高低转移株MTA1的表达情况,用Boyden小室体外侵袭实验检测两株MG-63细胞的体外侵袭力;用脂质体介导的MTA1基因转染MG-63低转移株细胞,通过 RT-PCR检测MTA1的表达;Boyden小室体外侵袭实验检测转染前后细胞侵袭力的变化。结果 RT-PCR结果显示MTA1在MG-63低转移细胞株中表达水平低(1．32),在高转移细胞株中表达水平高(6．27,P<0．05);Boyden小室体外侵袭实验显示MG-63高转移株细胞体外侵袭力强,其穿膜细胞相对百分率为(46．3±2．4)％,低转移株细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞相对百分率(12．6± 1．1)％,两者差异有统计学意义(P<0．05);转染MTA1基因后,低转移细胞株转移潜能较未转染细胞明显增高。结论 MTA1与人骨肉瘤细胞转移潜能有密切关系。     

抗黏附多肽对人肝癌高转移细胞系MHCC97侵袭转移的抑制作用

目的　研究抗黏附多肽GRGDS、YIGSR对人肝癌高转移细胞系MHCC97侵袭转移的抑制作用。方法　选择GRGDS、YIGSR作为抗黏附多肽 ,选具有高转移潜能的人肝癌细胞系MHCC97为靶细胞。用体外细胞 基质黏附实验检测两种多肽对MHCC97细胞对所包被的纤维连接蛋白 (FN)的黏附抑制作用 ;用体外细胞侵袭实验检测两种多肽对MHCC97细胞的侵袭抑制作用。结果　GRGDS、YIGSR对MHCC97细胞对FN黏附的抑制作用呈时间剂量依赖。当药物浓度达 2 0 0mg/L时 ,黏附抑制率达 60 %。两种多肽分别与细胞共育 48h后 ,均显示出明显的侵袭抑制能力。将细胞接种于裸鼠后给予GRGDS或YIGSR治疗 ,与对照组比较 ,有明显的肺重减轻、肺转移灶减少 (P <0 .0 5 )。结论　抗黏附多肽GRGDS、YIGSR对人肝癌高转移细胞系MHCC97具有明显抑制黏附、抑制侵袭转移的作用。     

染料木黄酮对骨肉瘤细胞增殖及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨染料木黄酮对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制.方法 用染料木黄酮处理MG-63细胞,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室体外侵袭实验法检测MG-63细胞侵袭能力;实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测MG-63细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2／MMP-9的mRNA及蛋白水平.结果CCK-8法表明染料木黄酮处理组MG-63细胞增殖被明显抑制,抑制率最高(85.3±5.1)％(P＜0.05);染料木黄酮在0、12.5、25.0、50.0 μmol/L时穿膜细胞数分别为(96.5±5.5)、(88.4±3.2)、(53.8±4.4)、(36.6±3.8)个,可明显降低MG-63细胞的侵袭能力(P＜0.05);染料木黄酮处理后MMP-2及MMP-9的mRNA表达水平明显下降(P＜0.05);MMP-2/MMP-9蛋白表达水平也明显下降,且具有时间依赖性.结论染料木黄酮抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖及侵袭转移能力,这种作用与MMP-2及MMP-9表达变化有关.     

反义表达人组织蛋白酶L对骨肉瘤细胞侵袭特性的影响

目的: 构建人组织蛋白酶L (cathepsinL, CATL) 基因的正、反义真核表达载体, 观察其转染后对人骨肉瘤细胞MG-63侵袭特性的影响。方法: 用基因重组技术构建人组织蛋白酶L正、反义真核表达载体, 转染人骨肉瘤细胞MG-63, RT-PCR和Westernblot检测CATL的mRNA和蛋白质的表达水平, 并对转染前后骨肉瘤细胞的侵袭能力进行检测。结果: 正、反义真核表达载体成功构建并转染入MG-63细胞中。反义载体转染后的细胞CATL的mRNA和蛋白质的表达水平下降, 体外侵袭实验表明细胞的侵袭力下降。结论: 反义CATL基因的转染使骨肉瘤细胞CATL的分泌水平下降, 细胞的体外侵袭力下降。     

Galectin-9基因不同亚型对结肠癌LoVo细胞株体外黏附侵袭能力的影响

目的 构建galeetin-9基因不同亚型的真核表达载体,观察galectin-9对结肠癌LoVo细胞体外黏附侵袭能力的影响.方法 构建galectin-9基因不同亚型的真核表达载体后,用脂质体法转染结肠癌LoVo细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证转染效果.LoVo细胞分别在转染galectin-9、转染galectin-9+抗体(5 mg/L)和转染galectin-9+β-L糖(30 mmol/L)条件下进行体外细胞-基质黏附实验和体外细胞侵袭实验.结果 测序结果证实载体上插入的galectin-9三种剪接体碱基序列正确,同时载体成功转染LoVo细胞.体外细胞-基质黏附实验中,转染空载体,转染galectin-9L,galectin-9M和galectin-9S组平均吸光度分别为:0.74±0.04、1.14±0.12、1.12±0.10和1.15±0.13,表明galectin-9促进LoVo细胞黏附于细胞外基质(P＜0.05).galectin-9抗体和β-乳糖可抑制该作用,但转染galectin-9L和galectin-9S LoVo细胞的黏附作用受β-乳糖抑制更明显(P＜0.05).体外侵袭实验未发现galectin-9对LoVo细胞侵袭力有影响.结论 galectin-9促进LoVo细胞与细胞外基质的黏附,这可能与结肠癌侵袭转移相关,但其三种亚型发挥作用的机制不全相同.     

反义pEGFP-C1-Survivin对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的 观察Survivin反义核酸载体对人骨肉瘤细胞株MG-63生物学行为的抑制效应,并探讨其机制.方法 MTY检测转染前后MG-63细胞增殖抑制率的变化,Boyden小室体外侵袭实验测定转染前后侵袭能力变化.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后Ang-2基因mRNA表达的变化.结果 噻唑蓝(MTT)检测显示转染后骨肉瘤细胞增殖明显受抑制,转染组抑制率达到23.4%,与各对照组之间差异有统计学意义(P<0.01),脂质体组、空质粒组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR分析显示转染组MG-63中Ang-2基因mRNA的表达较转染前明显下降,与其他组之间差异有统计学意义(P<0.01),而另3组之间差异无统计学意义(P>0.05).Boyden小室体外侵袭实验测定显示转染组侵袭百分数为17.9%,与其他各组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 Survivin反义核酸可以显著抑制人骨肉瘤细胞株MG-63的增殖、侵袭能力,部分逆转其恶性表型,这可能与其下调Ang-2的表达有关.     

甲氨蝶呤对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡及28Livin和Caspase-3表达的影响

目的 观察甲氨蝶呤(MTx)对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡及Livin和Caspase-3表达的影响.方法 体外培养骨肉瘤MG-63细胞株,用0、50、100、200和400μmol/L的MTX作用于骨肉瘤MG-63细胞24、48、72 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖活性,用流式细胞仪测细胞的凋亡率,用Western blot检测不同浓度MTX作用于骨肉瘤MG-63细胞24 h后各组细胞的Livin和Caspase-3蛋白表达水平.结果 随MTX浓度增加骨肉瘤MG-63细胞的增殖活性降低,同时细胞的凋亡率增加(P＜0.05),随MTX浓度增加各组细胞中Livin蛋白的表达降低,Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05).结论 MTX诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其机制可能与下调Livin表达继而上调Caspase-3表达有关.

Abstract：

Objective To observe the effect of Methotrexate (MTX) on apoptosis and expression of Livin and Caspase-3 in human osteosarcoma cell line MG-63. Methods After treatment of MG-63 cells with MTX at different concentrations (0, 50, 100,200,400 μmol/L) for 24, 48 and 72 h, methyl thiazol tetrazolium(MTT) assay was used to observe the growth inhibition of MG-63. The apoptosis was assessed by flow cytometry. The protein expression of Livin and Caspase-3 was detected by Western blotting. Results When MTX was added, growth inhibition and increased apoptosis of MG-63 cells were detected,which was showed in a dose- and time-dependent manner. MTX also down-regulated the level of the protein expression of Livin (P＜0.05), and elevated the protein expression of Caspase-3 (P＜0.05). Conclusion MTX can induce apoptosis of MG-63 cells, by down-regulating Livin expression and subsequently up-regulating Caspase-3 expression.     

GLP-1受体激动剂艾塞那肽对MG-63细胞增殖及成骨分化的影响

目的探讨GLP-1受体激动剂艾塞那肽(Exenatide)对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖及成骨分化的作用。方法将MG-63细胞制成单细胞悬液,接种于细胞培养板,分别用不同浓度的艾塞那肽(0 mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)处理细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测MG-63细胞增殖率,并将艾塞那肽处理后的细胞裂解并取上清,使用碱性磷酸酶测定试剂盒测定AKP活力。结果 (1)艾塞那肽可促进MG-63细胞增殖(P0.05),但随着GLP-1受体激动剂浓度升高,细胞增殖程度降低(P0.05),低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖能力最强。(2)艾塞那肽不同浓度处理后各组AKP活力增加(P0.05),而且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)升高AKP活力最明显(P0.05)。结论艾塞那肽能促进人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖及成骨分化,且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖分化能力最强。     

肺癌抑癌基因-1对人骨肉瘤细胞株MG63的侵袭和转移抑制效应研究

目的观察肺癌抑癌基因-1（TSLC1）稳定转染至骨肉瘤细胞株后对其侵袭、转移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法采用稳定表达TSLC1基因的人骨肉瘤细胞株M8T为研究对象,转染空载体的细胞系M8P设为对照组,MG63细胞株为空白组;Transwell法检测三组细胞株的体外侵袭和迁移能力;将细胞制成1×107细胞悬液,于裸鼠尾静脉注射,第4周开始处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织石蜡包埋切片HE染色检测。将0.5 mL磷酸盐缓冲液（PBS）重悬2×107细胞皮下注射5周龄裸鼠,皮下肿瘤生长情况1周检测1次。结果 M8T细胞株体外侵袭细胞数目为（25.86±2.12）,迁移的细胞数目为（37.55±3.46）;其裸鼠皮下成瘤形成时间：于注射后第4周开始生长,较对照组和空白组细胞株成瘤时间晚,体积显著减小,体内肺转移形成时间为注射后第9周,肺部转移灶发生率为40%。结论 TSLC1基因可明显抑制人骨肉瘤细胞的侵袭和转移及皮下成瘤能力。     

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。 方法 用5 μg/L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0~5 μmol/L）MG-132预处理NRK-49F细胞后,MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况;Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。 结果 TGF-β1（5 μg/L）可促进NRK-49F细胞增殖,而MG-132（0.25~5 μmol/L）呈剂量依赖性地抑制这种效应,使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5 μg/L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3.880%±0.365%比4.723%±1.582%）,而MG-132（0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50 μmol/L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8.8％、18.7％、22.8％、31.3％、37.7％、38.9％）。MG-132（2.5 μmol/L）+TGF-β1组及 MG-132（2.5 μmol/L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示,MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达,促进caspase-3的活性片段产生,Bcl-2表达下调,并能使Bax和p21表达上调,但对p27没有明显的影响。 结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖,并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关,提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。     

Are MG-63 and HOS TE85 human osteosarcoma cell lines representative models of the osteoblastic phenotype?

The aim of this study was to perform a systematic comparison of two widely used osteosarcoma cell lines and ascertain their relevance as experimental models for investigating osteoblast function. We have therefore compared growth, differentiated cell function, integral expression and adhesive profiles of MG-63, HOS TE85, and human bone derived cells. Both osteosarcoma cell lines proliferated more rapidly than osteoblast-like cells with HOS cells exhibiting the shortest doubling time. HOS cells expressed higher levels of alkaline phosphatase than MG-63 cells under basal conditions but only MG-63 cells showed the increased enzyme activity following 1,25-dihydroxyvitamin D₃ (1,25(OH)₂D₃) administration, which is characteristic of bone derived cells. Osteocalcin was not detected in supernatants from any cells under basal conditions but levels produced by MG-63 cells on addition of 1,25(OH)₂D₃ were comparable with those of osteoblast-like cells. ∝1, ∝2, ∝3, ∝5, ∝V, and β1 integrin subunits were detected on all cells and there was no staining for ∝L, ∝M, β2, and β3. ∝3 and β1 were the major subunits detected on MG-63, HOS, and bone derived cells but relative concentrations of other ∝ subunits were dependent on cell type; ∝4 and ∝6 subunits could only be detected on osteosarcoma cell lines. Short term, serum-free cell adhesion assays showed that the three cell types adhered in a saturable manner to collagen I, fibronectin, and laminin. Maximal adhesion of osteosarcoma cell lines and human bone derived cells was observed after 2 hours and similar extracellular matrix protein coating concentrations were required by the three cell types to achieve optimum binding: maximal adhesion to collagen I and fibronectin occurred at 0.1–0.5 μg/cm², and maximal adhesion to laminin occurred at 5–10 μg/cm². These studies indicate that both osteosarcoma cell lines provide appropriate models for studying integrin subunit expression and cell adhesion. In addition, MG-63 cells are also suitable for investigating regulation and production of osteocalcin by human osteoblast-like cells. Proliferation and alkaline phosphatase activity exhibited by both MG-63 and HOS TE85 cells were not very representative of bone cell cultures and therefore neither cell line is ideally suited to studying these aspects of osteoblast function.