外周血p53基因检测与大肠癌早期诊断关系

目的分析大肠癌发生过程中p53基因的突变作用,评估外周血p53基因突变分析作为大肠癌高危对象筛查指标的实际应用价值。方法 用聚合酶链反应-单链构象多态(PCR-SSCP)银染技术对50例大肠癌家系成员和20例健康人(对照组)的外周血p53基因第5～8外显子进行检测。结果 大肠癌家系成员和对照组的外周血p53基因突变率为24％和0,差异有显著性(P<0.05)。结论p53基因突变在大肠癌的发生过程中起重要作用,外周血p53基因突变分析可望成为大肠癌高危对象的早期诊断手段。     

大肠癌p53基因突变抗体的相关性研究及其临床意义

目的　研究大肠癌患者血清 p53 Ab与 p53基因突变及蛋白表达之间关系 ,以探讨p53基因在大肠癌发生与早期诊断中的作用及其临床意义。方法　运用ELISA法检测 34例大肠癌及 10例健康对照组血清 p53 Ab ,同时运用PCR SSCP与IHC法分析p53基因第 5～ 8外显子突变及蛋白表达情况。结果　 34例大肠癌中 ,p53 Ab阳性率为 17 6 % (6 /34) ,正常对照组均为阴性。大肠癌组织中p53基因第 5～ 8外显子突变及蛋白表达阳性率分别为52 9% (18/ 34)和 55 9% (19/ 34) ,正常粘膜未见p53蛋白表达。 12例癌组织中有 p53基因突变的患者其粪便中基因突变阳性率为 4 1 6 % (5/ 12 )。p53蛋白表达与基因突变呈正相关 (rs=0 349,P <0 0 5) ,p53 Ab存在与 p53基因突变及蛋白表达均无关 (P >0 0 5)。p53基因突变、蛋白表达及 p53 Ab存在与腺癌组织分化、淋巴结转移及其它临床病理因素均无关 (P >0 0 5)。结论　p53基因突变是参与和影响 p53蛋白表达和生物学功能的主要因素。p53基因突变或蛋白表达可诱导 p53 Ab产生 ,但不是其产生的唯一决定因素。ELISA法检测血清p53 Ab对于诊断大肠癌具有 10 0 %特异性 ,血清p53 Ab的检测可成为一种新的肿瘤标记物用于大肠癌的诊断及高危人群的筛检普查。     

大肠腺癌p53基因突变与p53基因蛋白表达的关系

目的为了解大肠癌p53基因突变与p53基因蛋白表达之间的关系。方法用RT－PCR－SSCP方法检测100例新鲜大肠腺癌组织P53基因突变，以PAb1801单克隆抗体（单抗）免疫组织化学（LSAB法）染色检测相同腺癌组织p53基因蛋白表达。结果在这100例大肠腺癌中，p53基因突变阳性率为51％，PAb1801单抗免疫组织化学染色（免疫级化）阳性率为62％。在p53基因突变检测阴性的49例中，24例PAb1801阴性，25例PAb1801阳性；51例p53基因突变检测阳性中，14例PAb1801阴性，37例PAb1801阳性，Fisher＇sexacttestP＝0．02。结论大肠腺癌p53基因突变是参与和影响p53基因蛋白表达的一个主要因素。     

应用PCR-SSCP法检测乳腺癌患者血中p53基因突变

[目的]探讨乳腺癌患者外周血p53基因突变的临床意义.[方法]应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）的方法检测35例乳腺癌患者和20例良性肿瘤患者外周血中p53基因外显子5～8的突变情况.[结果]乳腺癌患者p53基因突变的检出率为40.0%（14/35）,显著高于对照组良性肿瘤患者的5.0%（1/20）（P＜0.05）.[结论]p53基因突变在乳腺癌外周血中有较高的检出率,是乳腺癌发生的早期信号.     

大肠癌p53基因突变及p16基因缺失检测及临床意义

目的：探讨本地区散发性大肠癌p53、p16蛋白表达、临床病理因素的关系。方法：SSCP－PCR检测p53基因突变、p16基因缺失,免疫组化检测p53,p16蛋白表达,结果p16基因缺失率48％（19／40例）,未见突变,p16蛋白缺失率为55％（22／40）。p53基因突变率30％,p53蛋白阳性表达率为68％（27／40例）。组织学分组Ⅱ,Ⅲ级p16基因缺失率明显高于Ⅰ级（P＜0．01）,临床分期D期p53估变明显高于临床分期B,C期（P＜0．05）,结论p16基因缺失、53基因突变与大肠癌的发生、发展有关。     

基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌患者的表达

目的:探讨错配修复基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌发生中的作用。方法:用聚合酶链反应和单链DNA多态性分析(PCR-SSCP)对45例散发性大肠癌患者肿瘤组织及正常组织基因hMSH2、hMLH1、p53进行检测。结果:45例散发性大肠癌患者中,发生hMSH2、hMLH1、p53基因突变分别为2、6、22例,分别占4.44%、13.33%和48.89%。hMLH1、hMSH2基因在突变型p53患者中的突变率为27.27%明显高于在p53未发生突变的患者中的突变率8.69%(P<0.05)。结论:一定比例的散发性大肠癌患者中存在MMR基因缺陷,其中hMLH1所起的作用大于hMSH2,散发性大肠癌中MMR基因突变与p53突变密切相关。     

急性白血病患者p53和MGMT基因突变检测

目的：研究p53和MGMT基因突变在急性白血病发病中的意衣以及p53基因突变与MGMT基因突变的关系。方法：应用聚合酶链反应－单莲构象多态性（PCR－SSCP）技术，对36例急性非淋巴细胞白血病（ANLL），26例急性淋巴细胞白血病（ALL）和23例健康对照组骨髓细胞的p53和MGMT基因突变进行了分析。结果：p53基因突变率在ANLL中为16．7％、ALL中为19．2％，MGMT基因突变率在ANLL中为13．9％、ALL中为15．4％；62例急性白血病中有4例为p53和MGMT2个基因同时发生突变；正常对照组均未发生p53和MGMT基因突变。结论：p53和MGMT基因突变在急性白血病发生与发展中起到一定作用，急性白血病中p53基因突变和MGMT基因突变密切相关。     

大肠癌患者粪便p53基因检测及其临床意义

目的: 研究大肠癌患者p53基因突变及蛋白表达之间关系,并探讨从粪便中检测p53基因突变在大肠癌早期诊断中的临床意义。方法: 采用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)法,检测大肠癌患者癌组织和粪便标本中p53基因第5~8外显子突变情况;同时运用免疫组化法分析癌组织中p53表达情况。结果: 34例大肠癌患者癌组织标本中,p53基因第5~8外显子突变及蛋白表达阳性率分别为52.9%和55.9%,正常黏膜未见p53表达(P<0.01)。p53表达与基因突变呈正相关关系(P<0.05)。p53表达阳性率与肿瘤组织大小有关,肿瘤≤ 5cm者阳性率高于>5 cm者(P<0.05),但与其它临床病理因素无关。12例癌组织中有p53基因突变的患者其粪便中基因突变阳性率为41.7%,正常人未检测出突变。结论: p53基因突变是参与和影响p53表达和生物学功能的主要因素;大肠癌患者粪便中可检测出p53基因突变,粪便中p53基因检测可成为一种新的肿瘤标志物用于大肠癌的诊断及高危人群的筛检普查。     

高分辨率熔解曲线分析在大肠癌筛查中的应用

目的 探讨高分辨率熔解曲线分析(high-resolution melting,HRM) 在利用粪便DNA筛查大肠癌中的作用.方法 收集住院治疗的31例大肠癌患者、28例大肠腺瘤患者以及20例来医院体检的正常人新鲜粪便标本,应用HRM法检测粪便中APC、K-ras、p53基因的突变情况.结果 31例大肠癌患者粪便中APC基因突变检出率为41.9%(13/31),K-ras基因突变检出率为35.5%(11/31),p53基因突变检出率为54.8%(17/31),3个基因联合检出率为67.7%(21/31);28例大肠腺瘤患者粪便中APC基因突变检出率为25%(7/28),K-ras基因突变检出率为14.3%(4/28),p53基因突变检出率为46.4%(13/28),3个基因联合检出率为64.3%(18/28);20例正常对照粪便中APC基因突变检出率为5%(1/20),K-ras基因突变率为0(0/20),p53基因突变率为0(0/20).大肠癌组和大肠腺瘤组基因突变检出率均高于正常对照组(P<0.05),而大肠癌和大肠腺瘤组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 利用HRM法检测粪便中APC、K-ras和p53基因突变在大肠癌筛查中具有潜在的应用价值.     

大肠癌中mdm2和p53基因表达及生物学意义

目的 研究mdm2和p53基因在大肠癌中的表达，探讨其在大肠癌局部进展中的作用。方法 采用流式细胞术（FCM）对经病理证实的63例大肠癌和11例正常对照组结肠标本分别进行mdm2、p53基因蛋白检测，并进行对比分析。结果 大肠癌的发生与mdm2高表达、p53低表达有关，mdm2与大肠癌局部发展、浸润、转移有明显相关性，p53起负调控作用。结论 mdm2、p53基因异常表达与大肠癌的发生、淋巴转移有明显相关性。mdm2、p53联合检测对评估大肠癌预后有重要的临床价值。     

大肠癌患者外周血CK20表达及p53基因突变的研究

目的建立高效,快速的外周血Cytokeratin20(CK20)表达的检测方法,探讨大肠癌患者外周血中CK20的表达与微转移的关系,研究大肠癌与P53基因突变的关系.方法,运用荧光监测技术结合RT-PCR,检测36例大肠癌患者术前后不同时间外周血中的CK20的表达,用SSCP技术对大肠癌患者进行P53基因突变检测.结果36例患者术前的外周血中检出CK20表达的有27例,阳性率为75%手术后24h患者外周血中检出CK20表达的有30例,阳性率为83.3%,术后早期化疗结束后仅13例为阳性,阳性率为36%.36表达可以监测癌症微转移的发生,简便快速,检出率高.     

检测胃癌患者外周血中K-ras和p53基因突变的临床价值

目的 探讨检测胃癌患者外周血中K-ras和p53基因突变的临床意义.方法 应用聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR-SSCP)法,对我院收治的73例胃癌患者外周血中的K-ras和p53基因突变进行检测,并与20例非肿瘤疾病患者作对熙.结果 73例胃癌患者中有7例外周血中检测出p53基因突变,阳性率为9.6%;5例检测出K-ras基因突变,阳性率为6.8%.对照组外周血中均未检出K一瑚和p53基因突变.有无肝转移的胃癌患者外周血p53和K-ras基因突变阳性率间差异均有统计学意义(P＜0.05).不同分化程度及临床分期的胃癌患者外周血p53和K-ras基因突变阳性率间差异无统计学意义(JP＞0.05).结论 PCR-SSCP法检测外周血中K-ras和p53基因DNA有助于胃癌肝转移的诊断.     

粪、血APC及K-ras基因突变联合检测在大肠癌筛查中的作用

目的 通过联合检测粪、血浆中APC和K-ras两种基因的突变,探讨其在大肠癌筛查中的作用.方法 收集本院2003年10月～2004年3月行肠镜检查患者的肝素抗凝血5 ml,大便3～5 g.提取粪便及血浆DNA,采用PCR-SSCP法检测APC和K-ras突变.结果 和结论(1)大肠癌和腺瘤患者血浆APC基因突变分别为41.9%和57.7%(P＞0.05),高于正常对照组(P＜0.05).粪便APC基因突变分别为51.6%和42.3%(P＞0.05),高于正常对照组(P＜0.05).两种检测方法具有高度的吻合度(kappa值为0.811,P＜0.001).(2)血浆K-ras基因突变在大肠癌、腺瘤和正常对照分别为48.4%、3.8%和0%,粪便K-ras基因突变在3组中分别为54.8%、7.7%和11.1%,大肠癌组高于腺瘤组和正常组(P＜0.05),腺瘤组和正常组间无差异(P＞0.05).两种方法检测的吻合度一般(kappa值为0.662,P=0.000).(3)联合检测APC及K-ras基因突变可以提高诊断大肠癌的灵敏度.血、粪联合检测检测APC和K-ras基因突变较粪便检测无明显优势.(4)APC基因突变与是否发生肿瘤区域淋巴结转移有关,K-ras基因突变与病变分化程度有关.     

胃癌患者静脉血及肿瘤组织p53基因突变检测的临床意义

目的探讨胃癌患者外周血、门静脉血及癌组织标本p53基因突变或异常表达的临床意义。方法应用PCR-SSCP法检测73例手术治疗的胃癌患者外周血和门静脉血中p53基因的突变,并用免疫组织化学法检测胃癌组织中p53蛋白的异常表达。结果73例胃癌患者中有7例检测到外周静脉血p53基因突变,有29例检测到门静脉血p53基因突变,有51例检测到胃癌组织中p53蛋白的异常表达;胃癌组织中的p53蛋白阳性表达率（69.86%）和门静脉血中p53基因突变检出率（39.73%）均显著高于外周血的检出率（9.59%）。经中位24个月随访,其中有16例出现术后异时性肝转移,这些患者外周静脉血、门静脉血以及胃癌组织中的p53基因突变检出率或p53蛋白阳性表达率均显著高于无肝转移者,而且7例外周静脉血、门静脉血及胃癌组织中同时检测出p53基因突变或p53蛋白阳性表达的患者均发生肝转移。结论胃癌患者外周血中p53基因突变者术后发生异时性肝转移的可能性显著增加,外周静脉血联合门静脉血以及胃癌组织中p53基因突变检测有助于判定胃癌患者的预后。     

结直肠癌患者门静脉血p27基因甲基化检测及其临床意义

目的 研究结直肠癌患者门静脉血、外周血中p27基因甲基化状态的变化,探讨其与临床病理特征的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应分析技术,检测106例结直肠癌患者的门静脉血中p27基因启动子甲基化的阳性率,并结合临床病理进行分析.结果 结直肠癌患者外周血中的p27基因甲基化阳性率为24.5%(26/106),对照组为3.4%(1/29).结直肠癌患者门静脉血中p27基因甲基化阳性率为30.2%(32/106),其中Dukes分期:A+B期和C+D期阳性率分别为20.0%(11/55)和41.2%(21/51);低分化和高中分化阳性率分别为48.0%(12/25)和24.7%(20/81);有无淋巴结转移阳性率分别为41.5%(17/41)和23.1%(15/65);浸润深度:未达浆膜层和达浆膜层阳性率分别为24.1%(7/29)和32.5%(25/77).门静脉血中p27基因甲基化与结直肠癌患者的临床分期、组织分化程度及有无淋巴结转移均有关(P＜0.05),但与患者的性别、年龄、肿瘤部位和大小均无统计学意义(P＞0.05).结论 结直肠癌的发生发展与p27基因甲基化有关.检测结直肠癌患者门静脉血中p27基因甲基化程度,可为临床分期及预后的判断提供依据.     

P53及Bcl-2蛋白在大肠腺瘤及腺癌中的表达

目的：检测大肠腺瘤及腺癌中Ｐ５３蛋白及Ｂｃｌ－２蛋白的表达，探讨ｐ５３基因、ｂｃｌ－２基因在大肠癌发生发展过程中的作用。方法：应用免疫组织化学ＡＢＣ法检测１０例正常大肠粘膜、３０例大肠腺瘤、１００例大肠腺癌及癌旁粘膜中Ｐ５３蛋白及Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果：大肠腺瘤Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白阳性率分别为２６．７％及７６．７％，大肠腺癌Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白阳性率分别为４３％及６７％，均显著高于正常粘膜与癌旁粘膜（Ｐ＜０．０１）；随着腺瘤不典型增生程度的加重，Ｐ５３蛋白阳性率显著增高（Ｐ＜０．０１），而Ｂｃｌ－２蛋白表达与腺瘤分级无关；大肠腺癌Ｐ５３蛋白阳性率显著高于腺瘤Ⅰ级不典型增生（Ｐ＜０．０１），与Ⅱ、Ⅲ级不典型增生间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），分化差的大肠腺癌Ｐ５３蛋白阳性率显著高于分化好的大肠腺癌（Ｐ＜０．０１），而分化差的大肠腺癌Ｂｃｌ－２蛋白阳性率显著低于分化好的大肠腺癌（Ｐ＜０．０５），大肠腺癌Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白表达呈负相关（Ｐ＜０．０５）；Ｐ５３蛋白表达患者复发率高、５年生存率低（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ－２蛋白过度表达的大肠癌患者复发率低、５年生存率高（Ｐ＜０．０５）。结论：ｂｃｌ－２     

大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性研究

目的研究大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性.方法用MTT比色法检测20位大肠癌患者的癌细胞对化疗药物的敏感性,并用PCR-SSCP技术分析其癌细胞的p53基因突变.结果大肠癌细胞对5-Fu[IR=(54.7±14.1)%]比对MMC[IR=(43.9±10.8)%]及ADM[IR=(43.9±9.4)%]更敏感(P＜0.05),但对DDP有耐药性[IR=(25.9±12.8)%,P＜0.01].p53基因的突变率为45%(9/20).癌细胞对MMC和ADM的敏感性与p53基因突变呈正相关(rmmc=0.589,rabm=0.624,P＜0.005).结论化疗药物MMC和ADM对大肠癌的作用依赖于p53基因的状态,而大肠癌对5-Fu和DDP的敏感性却与p53基因突变无关.     

周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液p53基因突变及其临床意义

目的:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53突变及其作为分子诊断标记的可行性.方法:DHPLC分析46例支气管肺泡灌洗液标本(33例肺癌,13例对照)p53基因Exon5～9突变.结果:肺癌组p53突变检出率36.36%(15/33),对照组未检出一例,两组p53突变率比较具有明显差异(P＜0.05);p53突变作为肺癌诊断分子标记,灵敏度36.36%(12/33),特异度100%(13/13).结论:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53基因热点突变可以作为周围型肺癌诊断的分子标记,但在支气管肺泡灌洗液标本检测单一基因突变不能满足临床诊断的需要.