4,4’-二异硫氰基芪-2,2’-二磺酸对大鼠缺血再灌注损伤的影响及机制

目的探讨广谱氯离子通道阻滞剂4,4’-二异硫氰基芪2,2’-二磺酸(DIDS)对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法雄性SD大鼠36只随机分为3组:缺血再灌注组(A组)、DIDS处理组(B组)和LY294002预处理组(C组)。伊文兰和TTC染色测定心肌梗死范围,TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数,Western blot测定蛋白激酶B(Akt)的表达。结果与A组比较,B组心肌梗死范围和心肌细胞凋亡指数明显降低[(38.8±7.7)% vs (54.2±10.8)%,(8.9±1.8)% vs (17.6±3.5)%.P<0.01];磷酸化Akt表达水平明显增加(P<0.01)。与A组比较,C组梗死面积、凋亡指数无明显减小,磷酸化Akt水平无明显变化(P>0.05)。结论 DIDS能够抑制大鼠缺血再灌注所致的心肌细胞损伤,可能是通过信号分子磷脂酰肌酶三羟基激酶/Akt的调节。     

4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的作用

目的探讨氯通道阻滞剂4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸(DIDS)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大的作用及其可能机制。方法应用AngⅡ1μmol/L刺激心肌H9C2细胞株,构建心肌细胞肥大模型,观察12、24、36、48和72h各项表达,另给予50、100、200μmol/L DIDS预处理H9C2细胞,细胞分组:空白组、AngⅡ组、DIDS组、AngⅡ+DIDS组;免疫荧光染色测量细胞表面积,BCA法检测蛋白含量,实时定量PCR法检测心肌肥厚基因心房钠尿肽(ANP)和肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达,二氯荧光素二乙酸检测活性氧水平。结果48h细胞表面积最大(50 166±2697)μm2和总蛋白含量最大(1.68±0.06)mg/107个,36hANP mRNA为4.08±0.38和β-MHC mRNA为2.80±0.18,表达量均最高。与空白对照组比较,AngⅡ组心肌细胞表面积、总蛋白含量、ANP、β-MHC mRNA表达量和细胞内活性氧水平明显增加(P0.05),DIDS组无显著差异(P0.05);与AngⅡ组比较,DIDS+AngⅡ组的心肌细胞表面积明显减小(P0.05)、总蛋白含量明显减少(P0.05)、ANP mRNA和β-MHC mRNA表达量明显减低(P0.05)、细胞内活性氧水平明显下降(P0.05)。结论 DIDS可以有效抑制AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞肥大,其机制可能与降低活性氧的水平有关。     

4,4’-二异硫氰基茋-2,2’-二磺酸对高糖诱导心肌细胞损伤的保护作用

目的：探讨高糖诱导心肌细胞损伤过程中氯离子浓度的变化以及氯离子通道阻断剂4,4’-二异硫氰基茋-2,2’-二磺酸（DIDS）对受损心肌细胞的作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,应用葡萄糖浓度为33mmol/L DMEM培养基,作用72h,构建心肌细胞损伤模型。实验分为对照组、高糖组、高糖＋DIDS组和DIDS组。用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,氯离子荧光探针（MQAE）检测细胞内氯离子浓度。结果高糖作用下的心肌细胞存活率呈浓度及时间依赖性降低（P＜0.05）,流式细胞仪检测显示受损心肌细胞以凋亡性损伤为主。MQAE检测结果显示,与对照组比较,高糖组细胞内氯离子浓度显著下降（P＜0.05）。心肌细胞存活率及细胞内氯离子浓度,DIDS组与对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。与高糖组比较,高糖＋DIDS组心肌细胞存活率显著升高,细胞内氯离子浓度下降明显减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论氯离子通道参与了高糖诱导的心肌细胞损伤过程,DIDS可在一定程度上减轻以凋亡为主的心肌细胞损伤。     

替米沙坦对腹主动脉缩窄大鼠内质网应激相关的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦对腹主动脉缩窄术后大鼠内质网应激相关的心肌细胞凋亡的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=10),腹主动脉缩窄组(n=10),腹主动脉缩窄+替米沙坦组(n=10).术后10周各组大鼠用导管法测量血液动力学指标并留取心肌标本测左心室质量指数,心肌细胞凋亡用TUNEL法检测,心肌内质网应激信号通路分子GRP78、CHOP用免疫印迹法和免疫组化法检测.结果 (1)腹主动脉缩窄组左心室质量指数(3.29±0.19)mg/g明显高于假手术组(2.17±0.22)ms/g(P<0.01),左心室舒张末压(9.71±0.52)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)亦明显高于假手术组(2.79±0.13)mm Hg,左心室收缩末压(105.61 ±6.66)mm Hg明显低于假手术组(135.02 ±5.95)mm Hg(P<0.01),而腹主动脉缩窄+替米沙坦组上述指标分别为(2.34 ±0.08)mg/g、(4.70±0.36)mm Hg、(127.62 ±4.99)mm Hg,明显优于腹主动脉缩窄组(P<0.01).(2)腹主动脉缩窄+替米沙坦组心肌细胞凋亡指数(13.42 ±0.74)%显著低于腹主动脉缩窄组(35.51 ±0.65)%(P<0.01).(3)腹主动脉缩窄组内质网应激信号分子GRP78、CHOP蛋白表达RGRP78/β-actin 0.436 ±0.007、RCHOP/β-actin 0.747±0.034显著高于假手术组RGRP78/β-actin 0.144±0.009、RCHOP/β0.316 ±0.007(P<0.01),而腹主动脉缩窄+替米沙坦组GRP78、CHOP(RGP78/β-actin 0.213±0.007、RCHOP/β0.451 ±0.019),明显低于腹主动脉缩窄组(P<0.01).结论 内质网应激参与了腹主动脉缩窄术后大鼠心肌细胞凋亡,替米沙坦对内质网应激相关的心肌细胞凋亡有保护作用.     

衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡

目的:观察衣霉素(tunicamycin,TM)诱导胃癌BGC-823细胞发生内质网应激介导的细胞凋亡.方法:以浓度为10 mg/L的TM分别处理胃癌BGC-823细胞0、24、36和48 h.Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡,应用RT-PCR、Western blot检测CHOP的表达水平.结果:PI染色法检测凋亡细胞且随时间增加凋亡细胞增多,细胞凋亡率分别为0.0%、11.8%、16.3%、20.4%,具有时间依赖性(P<0.01).RT-PCR及Western blot结果显示,CHOP的表达明显高于对照组,随着处理时间的增加表达量呈上调趋势,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM可诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡.     

苦参碱对高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响

目的探讨苦参碱对高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分为正常糖组、正常糖苦参碱组、高糖组和高糖苦参碱组。实时荧光定量PCR检测超氧化物歧化酶2(SOD2)、Gp91phox、BAX、BCL-2、TNF-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6 mRNA表达;Western blot检测SOD2、P67phox、BAX、BCL-2、剪切形式半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(C-Caspase-3)、NF-κB P65亚基磷酸化(P-P65)和NF-κB P65总蛋白(T-P65);试剂盒检测细胞内丙二醛质量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活性;TUNEL检测细胞凋亡。结果正常糖组与正常糖苦参碱组丙二醛和GSH-Px及CAT活性等指标比较,无统计学差异(P>0.05);与正常糖组比较,高糖组丙二醛、P67phox、P-P65、BAX、C-Caspase-3蛋白、Gp91phox、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和细胞凋亡率明显升高,GSH-Px、CAT活性明显降低[(0.98±0.02)U/mg vs(3.82±0.05)U/mg,(12.18±0.52)U/mg vs(34.82±0.63)U/mg,P<0.05],SOD2、BCL-2蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05);与高糖组比较,高糖苦参碱组丙二醛、P67phox、P-P65、BAX、C-Caspase-3蛋白、Gp91phox、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和细胞凋亡率明显降低,GSH-Px、CAT活性、SOD2、BCL-2蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论苦参碱可以明显改善高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤,这可能与其抗氧化、抗炎和抗凋亡活性有关。