瑞舒伐他汀对糖尿病合并冠心病大鼠动脉粥样硬化Rho激酶表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对糖尿病合并冠心病大鼠动脉粥样硬化的防治作用及其相关机制。方法 Wistar大鼠50只,随机取10只大鼠以普通饮食喂养作为对照组,另40只以链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠内膜损伤存活后,高脂饮食8周,取大鼠20只随机分为模型组、治疗组,每组10只,继续高脂饮食4周,之后治疗组用瑞舒伐他汀20mg/(kg·d)灌胃干预2个月。3组大鼠常规查血脂及RT-PCR检测主动脉血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)及Rho激酶mRNA表达。结果干预前,与对照组比较,模型组和治疗组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低(P0.05)。干预后,与对照组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;VCAM-1、ICAM-1和Rho激酶mRNA表达增加,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,治疗组上述各指标均改善,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论瑞舒伐他汀通过干预 Rho/Rho激酶信号通路表达而抑制血管内皮炎症,起到延缓、抑制动脉管腔狭窄的作用,这可能为其抗动脉粥样硬化的新机制。     

Rho相关蛋白激酶与动脉粥样硬化关系的研究进展

<正>动脉粥样硬化(AS)是一种累及全身大血管壁的慢性炎性反应和脂质沉积过程,一些危险因素(如高血糖、血脂异常以及高血压等)可以激活多种信号通路参与AS的发展,Rho A/Rho相关蛋白激酶(ROCK)通路就是其中之一。越来越多的证据表明,RhoA/ROCK通路参与AS过程的许多步骤,ROCK可能成为AS的潜在治疗靶点,了解Rho/ROCK通路在AS进展过程中的作用对AS的防治有重要意义^[1]。     

丝裂原激活蛋白激酶信号通路与糖尿病并发症

丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)超家族是真核细胞转导细胞外信号到细胞内的四大信号系统之一。糖尿病时单独高糖或高糖与其他因素共同作用,产生各种细胞外刺激激活MAPK信号转导通路,促使糖尿病肾病、糖尿病视网膜病、糖尿病神经病变和心血管病变等并发症的发生和(或)发展,调控MAPK信号转导途径的活性有可能成为防治糖尿病并发症的新的有效作用靶点。     

Rho/Rho激酶与动脉粥样硬化的研究进展

<正> 随着对促动脉粥样硬化因子的深入研究,Rho/Rho激酶途径逐渐受到人们的关注。现已发现,Rho/Rho激酶参与细胞黏附、迁移、平滑肌细胞收缩及胞质分裂等的调节,而这些细胞功能均参与了动脉粥样硬化的发生与发展。动物实验及临床研究均证明,Rho/Rho激酶与动脉粥样硬化、高血压、心肌缺血等心血管疾病的发病过程相关。因此,对     

勿动蛋白及其信号通路分子Rho A与Rho相关蛋白激酶在高血压心肌肥厚与纤维化中的作用

目的探讨勿动蛋白(Nogo)/Rho相关蛋白激酶(ROCK)-去甲肾上腺素转运蛋白(NET)信号通路对自发性高血压大鼠心肌肥厚与纤维化的调节作用。方法选择7周龄SPF级同源同系雄性自发性高血压大鼠20只,随机分为4组:对照组、Nogo受体拮抗剂(NEP1-40)组、ROCK抑制剂(法舒地尔)组和NET抑制剂(氟西汀)组,每组5只,饲养7周。分离称量左心室质量,计算左心室质量指数。实时定量PCR检测心肌肥厚标志物心钠肽、脑钠肽、β肌球蛋白重链(β-MHC)基因表达,以及心肌纤维化标志物结缔组织生长因子(CTGF)、心肌胶原组织Ⅰ型(CollagenⅠ)、心肌胶原组织Ⅲ型(CollagenⅢ)和NET基因表达水平。结果与对照组比较,NEP1-40组左心室质量指数、心钠肽、脑钠肽、β-MHC表达明显增高,法舒地尔组左心室质量指数、心钠肽、脑钠肽、β-MHC表达明显降低(P0.05)。与对照组比较,NEP1-40组CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ表达明显增高,法舒地尔组NET表达明显升高,CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ和NET表达明显降低(P0.05)。与对照组比较,氟西汀组心钠肽、脑钠肽、β-MHC、CTGF和CollagenⅠ表达明显增高[(1.37±0.05)%vs (1.26±0.03)%,(1.27±0.04)%vs (1.18±0.07)%,(1.26±0.04)%vs (1.22±0.03)%,2.05±0.01 vs 1.44±0.11,1.86±0.06 vs 1.29±0.05,P0.05]。结论Nogo/ROCK-NET信号通路参与自发性高血压大鼠心肌肥厚与纤维化的调节。     

阿托伐他汀通过抑制ERK/MAPK信号通路改善H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的探究阿托伐他汀通过调节ERK/MAPK信号通路改善H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为空白对照组、模型组(H₂O₂处理)、阿托伐他汀组(阿托伐他汀+H₂O₂)、U0126组(ERK/MAPK信号通路抑制剂U0126+H₂O₂)、阿托伐他汀+LM22B-10组(阿托伐他汀和ERK/MAPK信号通路激活剂LM22B-10+H₂O₂)。采用MTT法、AO/EB染色法分别检测各组细胞活性、凋亡率;用酶联免疫吸附法检测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;荧光法检测活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测各组细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量降低,细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平增加,p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值上调(P均<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量升高,细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平降低,且p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值下调(P均<0.05)。与阿托伐他汀组比较,阿托伐他汀+LM22B-10组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量降低,凋亡率、LDH、MDA和ROS水平升高,同时p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值上调(P均<0.05)。结论阿托伐他汀能够改善H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路进而降低ROS介导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激损伤有关。     

蛋白激酶C-胞外信号调节激酶1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1中的作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路在尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)中的作用.方法 体外培养HUVECs,采用不同实验条件尼古丁进行干预,ELISA法测定细胞上清液中PAI-1的浓度,观察尼古丁作用的最佳浓度和时间.进一步分别用PKC的抑制剂星型胞菌素staurosporine (STS)和ERK的抑制剂PD98059干预HUVECs,观察PKC或ERK被阻断后对尼古丁诱导的HUVECs 表达PAI-1的影响,ELISA测定各组细胞上清液中PAI-1蛋白的表达水平,RT-PCR检测各组细胞PAI-1 mRNA的表达.结果 100 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白水平[(22.6 ± 1.1)μg/L]明显高于对照组[(14.2± 2.8)μg/L,q=5.64,P＜0.05];以100 μmol/L 尼古丁分别与HUVECs孵育0、4、6、8、12及24 h,各组PAI-1蛋白表达呈时间依赖性升高,并在12 h达到高峰(F=32.063,P＜0.05);尼古丁组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.32±0.20),(21.08±0.83)μg/L]明显高于对照组[(0.73±0.10),(13.39± 0.93)μg/L,q=8.43、11.97,均P＜0.05];尼古丁+STS组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.07±0.10),(16.19±2.15)μg/L]较尼古丁组降低(q=5.61、7.61,均P＜0.05),但仍高于对照组(q=7.84、4.36,均P＜0.05);尼古丁+ PD98059组PAI-1 mRNA及蛋白表达[(1.12±0.11),(17.52±1.72)μg/L]低于尼古丁组(q=4.68、5.54,均P＜0.05),仍高于对照组(q=8.77、6.43,均P＜0.05).结论 PKC-ERK1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞PAI-1表达上调中发挥一定作用.

Abstract：

Objective To explore the role of protein kinase C (PKC)- extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 signal pathway in the process of plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1) protein and mRNA expression in cultured human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) induced by nicotine. Methods HUVECs were cultured to examine the effect of nicotine on the expression of secreting PAI-1 in HUVECs on different experimental conditions. The expression of PAI-1 protein was measured by ELISA. PKC inhibitor staurosporine (STS)and ERK1/2 inhibitor PD98059 were used to detect PKC or ERK1/2 function on the expression of PAI-1 in HUVECs induced by nicotine. The PAI-1 mRNA expression was determined by RT-PCR. Results The expression level of PAI-1 protein in 100 μmol/L nicotine treated group [(22.6±1.1) μg/L] increased significantly compared to the control group [(14.2±2.8) μg/L; q=5.64,P<0.05]. After stimulation with 100 μmol/L nicotine for 0,4,6,8,12 and 24 h, the levels of PAI-1 protein increased over time and reached the peak at 12 h (F=32.063,P<0.05).The PAI-1 mRNA and protein expression in nicotine treated group [(1.32±0.20), (21.08 ± 0.83) μg/L] increased significantly compared to the control group [(0.73±0.10), (13.39±0.93) μg/L; q=8.43,11.97,all P<0.05].Compared with nicotine treated group , the PAI-1 mRNA and protein expression in nicotine and STS treated group [(1.07±0.10),(16.19±2.15) μg/L] decreased significantly(q=5.61,7.61, all P<0.05), but still higher than the control group (q=7.84,4.36, all P<0.05). In nicotine and PD98059 treated group, the PAI-1 mRNA and protein expression [(1.12±0.11),(17.52±1.72) μg/L] decreased significantly compared to the nicotine treated group(q= 4.68,5.54, all P<0.05), still higher than the control group (q=8.77,6.43, all P<0.05). Conclusion PKC-ERK1/2 signal pathway may play a partial role in the up-regulation of PAI-1 induced by nicotine in HUVECs.     

Rho激酶抑制剂对急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ的影响及疗效分析

目的观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ的影响,评估盐酸法舒地尔治疗急性脑梗死的临床疗效。方法选取2014年10月~2016年4月在上海交通大学附属第一人民医院松江分院神经内科收治的急性脑梗死患者120例,随机分为法舒地尔组60例,对照组60例。另选择我院同期健康体检人员60例作为健康体检组。采用竞争性酶联免疫吸附法测定血浆尾加压素Ⅱ水平,比较法舒地尔组与对照组治疗前和治疗14d美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分。结果法舒地尔组治疗后NIHSS评分较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。法舒地尔组和对照组治疗前血浆尾加压素Ⅱ水平明显高于健康体检组(P<0.01);对照组治疗后血浆尾加压素Ⅱ水平较健康体检组明显升高[(0.20±0.06)μg/L vs(0.14±0.04)μg/L,P<0.01]。法舒地尔组和对照组治疗后血浆尾加压素Ⅱ水平较治疗前明显降低[(0.15±0.03)μg/L vs(0.25±0.04)μg/L,(0.20±0.06)μg/L vs(0.25±0.05)μg/L,P<0.01]。结论 Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔可能通过抑制Rho激酶的活性影响急性脑梗死患者血浆尾加压素Ⅱ表达,并可改善急性脑梗死患者神经功能缺损。     

阿托伐他汀通过ERK1/2通路抑制内皮微粒诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达

目的探讨阿托伐他汀对内皮细胞微粒(EMPs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响及其与ERKl/2信号通路的关系。方法将HUVECs分为不同浓度EMPs作用组与阿托伐他汀干预组。应用Western印迹检测磷酸化ERK1/2和ICAM-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ICAM-1 mRNA的表达。结果 EMPs可诱导HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白表达增加,且具有浓度和时间依赖关系(均P<0.01);阿托伐他汀及ERK1/2特异性抑制剂PD98059显著抑制EMPs诱导的HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达(均P<0.01)。结论阿托伐他汀通过ERK1/2信号通路抑制EMPs诱导HUVECs ICAM-1表达。     

阿托伐他汀抑制大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄及对线粒体融合素2表达的影响

目的研究阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄及线粒体融合素2(Mfn2)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为假手术组,对照组,阿托伐他汀1组(他汀1组)和阿托伐他汀2组(他汀2组),每组12只。他汀1组术前3d每日阿托伐他汀10mg/kg灌胃,他汀2组每日阿托伐他汀40mg/kg,随后制备颈动脉球囊损伤模型。HE染色行组织形态学观察,测量内膜面积(I)/中膜面积(M)比值;免疫组织化学及免疫印迹法检测Mfn2及增殖细胞核抗原(PCNA)表达;依文思蓝染色观察血管内皮修复。结果与假手术组比较,对照组及他汀1组和2组血管内膜增生,I/M比值显著增加(P<0.01),PCNA阳性细胞比值显著增加(P<0.01),Mfn2表达显著降低(P<0.01);与对照组比较,他汀1组和他汀2组I/M比值降低(P<0.01),PCNA阳性细胞比值降低(P<0.01),Mfn2表达升高(P<0.05);且他汀2组较他汀1组变化更显著(P<0.05)。与对照组比较,他汀1组和他汀2组依文思蓝染色区域面积与吸光度相对值的乘积显著降低(P<0.05)。结论阿托伐他汀抑制大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄,同时可促进内皮细胞修复,其作用可能与上调Mfn2表达有关。     

RNA干扰人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达对内皮细胞骨架损伤的影响

目的构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL处理)、阴性转染组(ox-LDL处理+阴性慢病毒转染)和慢病毒转染组(ox-LDL处理+最佳干扰序列慢病毒转染)。荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、Rho激酶(ROCK)、LOX-1蛋白的表达;免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的变化。结果与对照组比较,ox-LDL组和阴性转染组p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达增高;细胞F-actin发生损伤并伴含量减少(P<0.05)。与阴性转染组比较,慢病毒转染组抑制p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达,减轻F-actin损伤及伴含量增加(P<0.05)。结论干扰LOX-1表达对ox-LDL诱导引起的内皮细胞ROCK、p-MLC表达增加及细胞骨架损伤均有抑制作用。     

Rho激酶抑制剂法舒地尔通过抑制MLK3-JNK信号通路保护脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元

目的 探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对脑缺血再灌注大鼠混合性谱系激酶(mixedlineage kinase 3,MLK3)、c-Jun-N末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)磷酸化、胱冬酶-3表达以及海马CA1区神经元损伤的影响.方法 72只Sprague-Daw1ey大鼠随机分为假手...     

Rho激酶抑制剂法舒地尔通过抑制MLK3－JNK信号通路保护脑缺血再灌注大鼠海马CAl区神经元

目的探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对脑缺血再灌注大鼠混合性谱系激酶（mixed—lineagekinase3,MLK3）、c—Jun—N末端激酶（c-JunNH2-terminalkinase,JNK）磷酸化、胱冬酶-3表达以及海马CAl区神经元损伤的影响。方法72只Sprague—Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、生理盐水对照组和法舒地尔组。四血管结扎法制作大鼠全脑缺血模型。免疫印迹分析检测MLK3和JNK磷酸化水平以及胱冬酶-3表达,采用焦油紫染色图像分析检测海马CAl区存活神经元数量。结果缺血再灌注6h时,法舒地尔组MLK3磷酸化水平（1．13±0．03）显著低于生理盐水对照组（2．08±0．01,P=0．0003）,但MLK3水平无显著差异（P=0．69）;缺血再灌注3d时,法舒地尔组JNK磷酸化水平（1．27±0．02）显著低于生理盐水对照组（2．09±0．01,P=0．0002）,但JNK水平无显著差异（P=0．83）;缺血再灌注6h时,法舒地尔组胱冬酶-3表达水平（1．28±0．02）显著低于生理盐水对照组（2．10±0．01,P=0．0006）;缺血再灌注5d时,法舒地尔组海马CAl区存活锥体细胞数量为（82．8±3．2）个,显著多于生理盐水对照组的（11．8±1．6）个（P〈0．05）。结论法舒地尔能显著抑制缺血再灌注诱导的MLK3、JNK磷酸化水平以及胱冬酶-3蛋白表达,进而减轻海马CAl区神经元损伤。     

法舒地尔通过Rho/ROCK信号通路抑制肝星状细胞黏附、迁移和增殖

目的观察Rho／Rho激酶（ROCK）信号转导通路抑制剂——法舒地尔，对肝星状细胞（1ISC）黏附、迁移和增殖的影响。方法将培养的HSC分为以下5组：对照组；法舒地尔12.5μmol／L组；法舒地尔25μmol／L组；法舒地尔50μmol／L组；法舒地尔100μmol／L组。采用甲苯胺蓝染色法测定细胞黏附率，Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量，用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖，Western blot检测HSC RhoA、p-MLC（Thr18／Ser19）和α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果法舒地尔对HSC的黏附、迁移和增殖均具有抑制作用，随着浓度增加，抑制作用加强；法舒地尔抑制HSC的α-平滑肌肌动蛋白表达，并且对Rho／ROCK信号转导通路关键信号分子P-MLC（Thr18／Ser19）的蛋白表达有抑制作用。结论法舒地尔通过抑制Rho／ROCK信号通路细胞骨架的调节作用抑制1ISC黏附、迁移和增殖。     

Rho and ROCK signaling in VEGF-induced microvascular endothelial hyperpermeability

OBJECTIVES: Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays an important role in the regulation of microvascular permeability under various physiological and pathological conditions. The authors tested the hypothesis that the small GTPase Rho and its downstream effector ROCK (Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase) mediate VEGF-induced increases in venular permeability. They also investigated myosin light chain (MLC) phosphorylation and actin polymerization, two well-characterized targets of the Rho-ROCK pathway that are implicated in the regulation of endothelial barrier function. METHODS: The apparent permeability coefficient of albumin (P(a)) was measured in intact isolated porcine coronary venules and in cultured coronary venular endothelial cell (CVEC) monolayers. RhoA activation was determined using a Rhotekin-agarose pull down assay. MLC phosphorylation was evaluated by immunoblotting with phospho-specific antibodies, and endothelial cellular F-actin was viewed using fluorescence microscopy. RESULTS: VEGF increased P(a) in both isolated coronary venules and CVEC monolayers. The hyperpermeability response occurred in a similar time course to that of Rho activation, MLC phosphorylation, and actin stress fiber formation. Selective blockage of ROCK with Y27632 dose-dependently inhibited VEGF-induced venular hyperpermeability. Moreover, inhibition of either Rho with exoenzyme C3 or ROCK with Y-27632 attenuated VEGF-induced increases in permeability, MLC phosphorylation, and actin-stress fiber formation in CVEC monolayers. CONCLUSIONS: Collectively, these findings suggest that the Rho-ROCK signal pathway contributes to VEGF-induced hyperpermeability. Myosin light-chain phosphorylation and actin stress fiber formation occur concomitantly with the increase in permeability upon VEGF stimulation.     

Ras/ERK信号转导通路在肝纤维化发生发展中的作用

在肝纤维化的发病机制中,肝星状细胞（HSC）发挥关键的作用。各种细胞因子的分泌,引起胞外信息变化。细胞因子与HSC上的相应受体结合,激活多条信号转导通路,将胞外信息转导入核,调控基因的转录和表达,从而引起胶原分泌增多、细胞基质降解和沉积失衡。在参与肝纤维化发生发展的信号转导通路中,Ras/ERK信号转导通路介导的信号转导促使了肝纤维化的发生发展。     

神经生长因子对人脐静脉内皮细胞在体外形成管腔样结构的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在体外形成管腔样结构(LLSs)的影响及其信号机制。方法将接种在基质胶上的HUVECs分为空白对照组、NGF组、NGF中和抗体组、对照IgG组、NGF中和抗体+NGF组、对照IgG+NGF组,以相差显微镜直接观察LLSs形态,并通过二脒基苯基吲哚/鬼笔环肽免疫荧光染色观察LLSs的细胞组成。为证实NGF促LLSs形成的信号通路,向培养液中分别预先加入丝裂原活化蛋白激酶3个主要信号通路的特异性抑制剂(PD98059、SB203580及SP600125),观察上述3个信号通路对NGF促LLSs形成的影响,并应用Western blot检测NGF及c-Jun N末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125对HUVECs JNK表达及活性的影响。结果 NGF组LLSs的平均面积较空白对照组明显增加(P<0.01)。NGF中和抗体+NGF组LLSs的平均面积较对照IgG+NGF组明显减少(P<0.01);NGF中和抗体组LLSs的平均面积较对照IgG组亦明显减少(P<0.01)。NGF可激活HUVECs的JNK信号通路,SP600125可显著减少NGF诱导的LLSs形成(P<0.01)。PD98059及SB203580对NGF诱导的LLSs形成均无明显影响(P>0.05)。结论NGF能促进HUVECs在体外形成LLSs,可能与激活JNK信号通路有关。