坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构变化

背景高速弹丸致伤坐骨神经后,其远隔部位的腰段脊髓会发生何种组织损伤效应?目的研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构改变.设计以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究.单位一所军医大学医院的野战外科研究所.材料实验于2001-05/2002-12在野战外科研究所靶道实验室完成.选择SPF日本大耳白兔65只,雌雄不拘,体质量2.5～3.0kg,由第三军医大学大坪医院动物医学实验中心提供.按随机数分为正常对照组5只、火器伤组30只、切割伤组30只,火器伤组和切割伤组观察时相点为伤后1,3 d,1,2,4,12周,每时相点5只动物.方法火器伤组致伤弹丸为0.38 g钢珠,装药量0.65 g,致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经.主要结局观察光电镜下观察伤后1,3 d,1,2,4,12周时腰段脊髓的病理改变.结果火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化,切割伤组则未见这些病理改变.结论火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重,运动神经元存活数量显著减少.     

坐骨神经震荡伤后腰髓一氧化氮及凋亡相关蛋白表达的变化

目的：探讨坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓一氧化氮(carbon monoxide，NO)含量和一氧化氮合酶(nitricoxide synthase，NOS)活性及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化及在细胞凋亡发生中的作用。方法：65只大耳白兔分为正常对照、高速弹丸震荡伤组(震荡伤组)和切割伤组。震荡伤组致伤靶点为兔右大腿外侧坐骨神经体表投影线中点，切割伤组在同一致伤水平切断坐骨神经。行腰段脊髓细胞凋亡定性定量检测、Bcl-2和Bax表达半定量分析、脊髓NO含量和NOS活性检测。结果：震荡伤组伤后1，2周可见脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)阳性运动神经元和胶质细胞，伤后3d，1，2周脊髓NO含量和NOS活性升高；伤后1dBcl-2高表达，伤后3dBax高表达。结论：震荡伤组细胞凋亡发生早、数量多，NO和NOS及Bcl-2、Bax表达变化与其发生有一定关系。     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构变化

背景:高速弹丸致伤坐骨神经后,其远隔部位的腰段脊髓会发生何种组织损伤效应?目的:研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构改变.设计:以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究.单位:一所军医大学医院的野战外科研究所.材料:实验于2001-05/2002-12在野战外科研究所靶道实验室完成.选择SPF日本大耳白兔65只,雌雄不拘,体质量2.5～3.0kg,由第三军医大学大坪医院动物医学实验中心提供.按随机数分为正常对照组5只、火器伤组30只、切割伤组30只,火器伤组和切割伤组观察时相点为伤后1,3 d,1,2,4,12周,每时相点5只动物.方法:火器伤组致伤弹丸为0.38 g钢珠,装药量0.65 g,致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经.主要结局观察:光电镜下观察伤后1,3 d,1,2,4,12周时腰段脊髓的病理改变.结果:火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化,切割伤组则未见这些病理改变.结论:火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重,运动神经元存活数量显著减少.     

坐骨神经震荡伤后腰髓一氧化氮及凋亡相关蛋白表达的变化

目的:探讨坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓一氧化氮(carbonmonoxide,NO)含量和一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)活性及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化及在细胞凋亡发生中的作用。方法:65只大耳白兔分为正常对照、高速弹丸震荡伤组(震荡伤组)和切割伤组。震荡伤组致伤靶点为兔右大腿外侧坐骨神经体表投影线中点,切割伤组在同一致伤水平切断坐骨神经。行腰段脊髓细胞凋亡定性定量检测、Bcl-2和Bax表达半定量分析、脊髓NO含量和NOS活性检测。结果:震荡伤组伤后1,2周可见脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)阳性运动神经元和胶质细胞,伤后3d,1,2周脊髓NO含量和NOS活性升高;伤后1dBcl-2高表达,伤后3dBax高表达。结论:震荡伤组细胞凋亡发生早、数量多,NO和NOS及Bcl-2、Bax表达变化与其发生有一定关系。     

MnTBAP对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的：观察锰卟啉（MnTBAP）在大鼠急性脊髓损伤后对脂质过氧化水平,细胞凋亡,脊髓组织变化及运动功能的影响,探讨其对急性脊髓损伤后的保护性作用。方法将60只SD大鼠随机分成3组：假手术组,损伤组（SCI组）及治疗组。应用改良的Allen法,制成脊髓损伤模型。假手术组仅予椎板切除处理;治疗组注射MnTBAP（10mg/kg）;损伤组仅腹腔注射等量生理盐水。各组分别于术后不同时间点检测SOD,MDA的含量,并采用TUNEL法计算细胞凋亡率;术后第l周至第8周,每周采用改良BBB评分对动物进行行为学检查;术后4周行HE染色,观察脊髓组织形态学变化。结果与损伤组比较, MnTBAP治疗组伤段脊髓组织SOD含量显著增加（P〈0.01）,相反,MDA含量明显减少（P〈0.05）。损伤后第3、7、14天治疗组凋亡细胞率明显低于损伤组（P〈0.05）;自第1周开始MnTBAP治疗组BBB评分明显高于损伤组（P〈0.05）。4周后HE染色示损伤组脊髓大量瘢痕连接,结构紊乱,局部伴明显空洞形成,神经元胞体萎缩变形,神经纤维排列紊乱。而MnTBAP组脊髓组织空洞显著较小,周围存在较多的神经元细胞,液化坏死现象及炎症细胞较少。结论 MnTBAP可以发挥SOD活性,降低SCI早期脊髓脂质过氧化反应,减少脊髓MDA水平及凋亡率,有效减轻脊髓继发损伤,从而达到对大鼠脊髓损伤后的神经保护性作用。     

坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中bcl-xl基因的表达及变化

目的：凋亡可能为大鼠坐骨神经损伤所致脊髓神经细胞损害的一种重要病理改变，而bcl-xl基因有抗细胞凋亡的作用，为此观察坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中bcl-xl表达变化。方法：幼年、成年、老年Wistar大鼠各144只，各年龄组大鼠分别随机分为对照组(18只)和实验组(126只)。实验组切除2mm右侧坐骨神经，用硅胶管连接近、远侧神经残端，硅胶管内注人生理盐水15μL。实验组和对照组分为术后1，3d，1，2，4，8，12周组。利用免疫组织化学、Westem blotting检测脊髓bcl-xl的分布与表达强度变化，流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果：对照组脊髓凋亡细胞成年及老年＜3％、幼年＞3％，实验组伤侧脊髓老年及幼年组于伤后3d，成年组于伤后1周凋亡细胞百分率升高，幼年及成年组凋亡细胞百分率2周达高峰(P＜O．05或O．01)，8，12周凋亡细胞百分率逐渐下降，老年凋亡细胞百分率高水平持续至伤后12周。与同龄对照组及未伤侧比较，各年龄对照组损伤后3d，1，2周，伤侧6cz．列表达减弱(P＜O．05)，伤后4周恢复正常，老年组8周。幼年及成年组8周。12周bcl-xl表达较未伤侧及对照组显著增高(P＜O．05或O．01)。各年龄组未伤侧与对照组比较，bcl-xl凋亡细胞百分率差异无显著性意义(P＞O．05)。结论：坐骨神经损伤后早期各年龄组神经元bcl-xl表达减弱，后期可通过促进抗凋亡基因bcl-xl的产生来减少凋亡的发生，其作用在幼年组、成年组较强，老年组较弱。     

瑞芬太尼后处理对兔缺血再灌注损伤脊髓的影响

目的：探讨瑞芬太尼后处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的作用。方法选取36只雄性日本大耳白兔随机分为3组,每组12只,分别为假手术对照组（S组）、缺血/再灌注损伤组（C组）、瑞芬太尼后处理组（R组）。再灌注24 h后处死动物,取L3～5组织标本,原位细胞凋亡法测定细胞凋亡的情况,电镜下观察病理学结果,羟胺法测定脊髓组织超氧化物歧化酶（SOD）含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量。结果缺血再灌注后24 h,与S组比较,C组凋亡细胞明显增多（P＜0.05）,脊髓组织病理学损伤程度明显加重,脊髓MDA含量明显增加,SOD含量明显降低（P＜0.05）;与C组比较,R组脊髓组织病理学损伤程度明显减轻,凋亡细胞明显减少（P＜0.05）,脊髓MDA含量明显降低,SOD含量明显增加（P＜0.05）。结论瑞芬太尼能减轻兔脊髓缺血再灌注损伤,抑制神经细胞凋亡坏死,具有脊髓保护作用。     

坐骨神经切断后脊髓神经细胞的凋亡变化

目的：研究一侧坐骨神经切断后，脊髓第7腰段的神经细胞的凋亡变化。方法：用DNA原位末端标记法。结果：在坐骨神经切断1d后脊髓后角内的神经胶质细胞开始出现凋亡，到第2天达到最大值，白质内的胶质细胞也发生凋亡；脊髓灰质后角感觉神经元的凋亡指数大于前角运动神经元的凋亡指数。结论：坐骨神经切断后的第1天脊髓神经细胞发生凋亡，传入神经元的凋亡大于传出神经元的凋亡，神经胶质细胞在细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

神经丝蛋白在猪胸腰段脊髓火器贯通伤后的早期表达

目的：建立家猪胸腰段脊髓火器贯通伤模型和改良Allen’s打击伤后全瘫模型，观察伤后神经丝蛋白的早期表达。方法：实验于2005—05／08在解放军第一七五医院实验室完成。取健康雄性家猪20只，单纯随机分为3组：①火器伤组（n=9）：在全麻状态下制作胸腰段（L1～L2）脊髓火器伤模型，分为伤后1，3，6h3个时间处死（n=3）。②打击伤组（n=9）：L1节段脊髓行改良Allen’s打击，致伤力为500g&;#183;cm，处死时间同前。③空白对照组（n=2）：只麻醉，不造模，伤后6h处死。各组在伤后相应时间点取脊髓标本（火器伤组取近伤段，打击伤组取伤点），进行神经丝蛋白的免疫组化染色，观察其阳性表达的吸光度（A）值；在伤后6h火器伤组和打击伤组分别在脊髓伤点、近伤段（距伤点1～3cm脊髓）、中伤段（距伤点3～7cm脊髓）及远伤段（距伤点近头侧10～12cm处的胸髓）取材，观察神经丝蛋白的A值。 结果：经补充20只猪进入结果分析。①空白对照组神经丝蛋白的A值为91．1&;#177;3．01，打击伤组脊髓损伤后1，3，6h神经丝蛋白的A值均高于火器伤组（45．7&;#177;2．59，39．5&;#177;2．48，34．6&;#177;4．06；31．8&;#177;．66，27．4&;#177;1．99，20．8&;#177;1．69），且两组神经丝蛋白的表达随着时间延长而下调（P〈0．001）。②伤后6h打击伤组仅在伤点和近伤段神经丝蛋白的A值低于空白对照组（P〈0．05），而火器伤组各部位神经丝蛋白的A值低于空白对照组（P〈0．05）。 结论：和脊髓打击伤相似，脊髓火器伤后神经细胞的破坏与修复并存，有一定的时空性，且与损伤程度有关。受伤后1h即可发现神经元细胞的破坏、崩解，但脊髓火器伤的波及范围较打击伤更为广泛。     

硬脊膜切开与低温灌洗联合应用在保护脊髓功能中的价值

目的：研究和探讨联合应用硬脊膜切开和低温灌洗对损伤脊髓的保护性作用。方法：96只家兔，随机平均分为4组（A、B、C、D）。全部动物行背侧显露T12－L1假硬脊膜，B、C、D、组均按Allen有氏法于暴露的硬脊膜背侧施54J势能造成脊髓损伤，尔后B组，即刻缝合切口；C组：单纯氏温灌洗治疗，D组：硬脊膜切开＋低温灌洗治疗，务段的脊髓含不量和细胞凋亡的检测，组织病理学观察，后肢神经功能测定等。结果：D组术后各时相指标均优于B组同时相（P＜0．01），C组伤段脊髓水肿，细胞凋亡率和后肢神经功能测定值与B组同时相相比分别在伤后24h,72h,7d及以后的时相上无统计学意义（P＞0．05）。C、D两组间的病理学变化在伤后24h相近，但至伤后7d、3周时C组的组织变化持续转差，结论：硬脊膜切开与低温灌洗的联保应用能够减轻损伤段脊髓的组织学变化并可促进神经功能的恢复。     

神经妥乐平对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后早期应用神经妥乐平对相应脊髓运动神经元的保护作用。方法将108只雄性SD大鼠随机分为A组、B组和C组,每组36只,所有大鼠均行双侧坐骨神经切断后立即行神经外膜端-端吻合术。A组为对照组;B组术后予神经妥乐平治疗;C组术后予生理盐水治疗。按术后1d、4d、9d、14d、21d和28d6个时间点取L₄～L₆脊髓作Bcl-2、Bax免疫组化检测,以及TUNEL检测。结果B组术后9d、14d、21d的Bcl-2/Bax值较A、C组增高;B组与A、C组相比,9d的TUNEL阳性细胞数量有显著性差异(P<0.05),14d的TUNEL阳性细胞达高峰,其中B组的TUNEL阳性细胞数量少于A组和C组(P<0.05～0.01)。结论大鼠坐骨神经切断外膜端-端吻合术后,神经妥乐平可以一定程度地保护脊髓前角运动神经元避免其过度凋亡。     

直流电对鼠坐骨神经横断致L4-6脊髓前角运动神经元凋亡及bax基因表达的影响

目的 :观察直流电对鼠坐骨神经横断后脊髓运动神经元凋亡及bax表达的影响。方法 :将鼠右侧坐骨神经自梨状肌下缘 0 .5cm处切断 ,实验组在相应的脊髓节段立即置入直流电刺激器 ,对照组置入无输出电流的电刺激器 ,手术后 1、4、7、14、2 8d处死动物 ,切取L4— 6段脊髓 ,对右侧脊髓阳性运动神经元计数 ,应用免疫组化技术 ,对右侧脊髓bax表达阳性运动神经元计数。结果 :坐骨神经切断后 4、7、14d ,实验组脊髓Tunel染色阳性运动神经元数明显少于对照组 ,术后 4、7、14、2 8d ,实验组脊髓bax阳性运动神经元数明显少于对照组。结论 :直流电刺激对坐骨神经切断引起的脊髓运动神经元凋亡的预防作用与直流电刺激抑制神经元的bax表达有关。     

大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡

目的探讨成年大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡。方法选取健康成年雄性Wistar大鼠35只,随机分为假手术组(5只)和实验组(30只)。实验组再分为六个小组,每组5只。实验组于伤后3天,1周,2周,4周,6周和8周6个时间点取材。应用TUNEL法和免疫组化染色法检测神经细胞的凋亡及脊髓Bcl-2、Bax蛋白表达。结果大鼠坐骨神经切断后3天即可见脊髓内TUNEL阳性细胞,2周表达到达高峰,此后表达量逐渐下降;大鼠坐骨神经切断3天后凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax出现表达,2周时达高峰,8周时仍有表达。Bcl-2/Bax值2周时最低,以后逐渐增大,Bcl-2/Bax值越小凋亡的细胞越多。结论大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段内存在神经细胞的凋亡,Bcl-2和Bax比值的变化是神经凋亡的重要指标。     

苦参碱对小鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的影响

目的探讨BALB/c小鼠坐骨神经损伤后应用苦参碱后对坐骨神经相应脊髓节段中gap-43的表达变化。方法健康成年BALB/c小鼠320只,单侧坐骨神经切断吻合后,随机分组给药,不同时间获取L4-6脊髓节段,用Real time-PCR检测坐骨神经相应脊髓节段gap-43的表达变化,同时进行髓鞘LFB染色观察坐骨神经的恢复情况。结果 Real time-PCR结果显示高剂量和中剂量组12h,24h3d5d1w,2w,4w,gap-43表达量明显高于低剂量组和空白对照组,8w各组比较无明显差异。LFB染色表明高中剂量组坐骨神经恢复情况明显优于低剂量组和对照组。结论坐骨神经损伤后应用苦参碱对坐骨神经脊髓相应节段细胞中gap-43的活化起到促进作用,减少炎症细胞的浸润从而达到促进神经再生的目的。     

Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响。方法：将48只大鼠制备为压迫性脊髓损伤模型。分为单纯损伤组24只及实验组(应用zVAD-fmk)24只。损伤后8h、3及7d对脊髓损伤区进行HE、细胞凋亡的检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化。同时采用BBB评分和斜板试验观察脊髓神经功能恢复情况。结果：2组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。实验组凋亡的细胞数减少。免疫组化检测Caspase-3表达降低，神经功能增强。结论：Caspase阻滞剂zVAD-fmk能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在两侧断端的表达变化及其意义。方法采用Trizol一步法提取坐骨神经总RNA,取少量作紫外扫描分析和琼脂糖电泳分析,切断SD大鼠左侧坐骨神经,不同时间、半定量RT-PCR方法,观察两侧断端GDNFmRNA的表达变化。结果坐骨神经切断前,GDNFmRNA在两侧坐骨神经微量表达,为(6.5±1.3)%,坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加,伤后1d(7.8±1.9)%,伤后7d(10.3±2.1)%,伤后14d(11.9±2.3)%,伤后28d(12.3±2.4)%,近断端表达逐渐减少,伤后1d(5.8±1.3)%,伤后7d(4.0±1.0)%,伤后14d(3.6±1.1)%,伤后28d(3.1±1.0)%。伤后1d与伤前比较(P>0.05,t=1.193,0.879),伤后7,14,28d与伤前比较(P<0.01,t=3.762,3.565,5.059,4.083,5.164,4.905)。结论GDNF在损伤信号的刺激下表达急剧增加,起到修复神经元的作用,为外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。