肝脏移植再灌注损伤早期NF-κB活性的影响及意义

目的观察肝脏移植后再灌注早期血液核转录因子-κB（NF-κB）活性、TNF-α、肝酶学指标的关系,探讨再灌注早期再灌注损伤的机制。方法对20例肝硬化晚期病人（实验组）接受肝移植术前1h,供肝恢复血供后1、2、4及6h抽取患者外周血进行肝酶学检查,用Westernblot技术检测外周血中NF-κBP65表达,用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定外周血中TNF-α表达水平,同时与10例健康成人（对照组）外周血肝酶学指标、NF-кBP65和TNF-α水平对比。结果肝移植术后早期外周血肝酶学指标在4h达到高峰,4h后呈现下降趋势,NF-κBP65和TNF-α的表达水平在2h达到峰值,且均高于移植术前和对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论NF-кBP65及TNF-α在肝移植术后早期高表达,同时伴有肝脏损伤酶学指标反应性上调,表示肝移植术后肝脏炎症通路活跃,可能和缺血后再灌注有关。     

人IκBαM真核表达载体的构建及其对大鼠肝移植缺血再灌注中ICAM-1的影响

目的构建人IκBαM真核表达质粒,探讨人IκBαM对大鼠肝移植缺血再灌注中ICAM-1的影响。方法应用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBαM,定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体。将SD大鼠原位肝移植模型分4组：组Ⅰ为假手术组（行游离肝脏手术）,组Ⅱ为空白对照组（行大鼠原位肝移植手术）,组Ⅲ为PcDNA3.0空载体转染组（移植前两天行人PcDNA3.0转染供肝）,组Ⅳ为PcDNA3.0-IκBαM转染组（移植前两天行人PcDNA3.0-IκBαM转染供肝）。分别于术后2h、12h、24h和3d取材。应用免疫组化、RT-PCR测定肝组织中ICAM-1的表达,同时检测各时点肝脏酶学的变化。结果经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;PcDNA3.0-IκBαM转染组与组Ⅱ、组Ⅲ相比：免疫组化示ICAM-1于移植后12h、24h的表达差异具有显著性;术后12hICAM-1mRNA的表达水平具有显著性差异;肝脏受损指标（ALT）在各时点差异具有显著性,尤其在术后12h最为显著（P〈0.05）。各移植组与Ⅰ组差异有显著性,（P〈0.05）。结论真核表达质粒PcDNA3.0-IκBαM构建成功,IκBαM通过抑制ICAM-1的表达减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤。     

NF-κB活性对重症急性胰腺炎中腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：探讨在大鼠重症急性胰腺炎（SAP）发病中腹腔巨噬细胞（PMA）炎症介质产生和释放的机制.方法：36只SD大鼠随机分为假手术组和SAP组.通过逆行胰管注射40g/L牛黄胆酸钠建立大鼠SAP模型.分别在3,6,12h剖杀大鼠.常规分离PMA并培养24h,通过凝胶电泳迁移分析法检测PMA中核转录因子-κB（NF-κB）的活性,采用酶联免疫吸附法检测细胞培养液及血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的水平.组间差异采用单因素方差分析进行统计学分析,P〈0.05为具有显著性差异.结果：建模后3,6,12h时,NF-κB活性假手术组为6.26±0.79,7.01±0.49,6.79±0.94;SAP组为11.94±1.33,23.23±1.22,32.97±1.81.SAP组PMA细胞培养液及血清中TNF-α,IL-1β水平与NF-κB活性变化一致.在各时间点,SAP组PMA中NF-κB活性,细胞培养液及血清中TNF-α,IL-1β水平均高于假手术组（P〈0.01）.结论：NF-κB可以启动PMA中炎症介质的产生和释放,从而参与SAP的发生和发展.     

脂多糖预处理对大鼠肝移植缺血再灌注期肝脏NF-κB活性和ICAM-1/LFA-1分子表达的影响

目的:探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)预处理对大鼠肝移植缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤中肝脏核因子-κB(Nu clear factor-κB,NF-κB)活性和细胞间粘附分子-1/淋巴细胞功能相关抗原(Intercellular adhension mokule-1/Lymphocytefunction associated antingen-1,ICAM-1/LFA-1)分子表达的影响及意义.方法:雄性SD大鼠,分为假手术组(sham组)、原位肝移植组(OLT组)和原位肝移植+LPS预处理组(LPS组).Sham组只开腹分离肝十二指肠切带,OLT组和LPS组按两袖套法进行肝移植.Sham组于分离肝十二指肠韧带后O、60、180min、OLT组和LPS组于门静脉血流恢复后0、60、180 min分别测定各时相点肝组织NF-κB活性、ICAM-1/LFA-1分子表达及血清ALT、AST水平.结果:再灌注后0、60、180 min,OLT组与LPS组的NF-KB活性、ICAM-1/LFA-1分子表达均高于sham组(P<0.01);再灌注后0 min,OLT组与LPS组的NF-κB活性、ICAM-1/LFA-1分子表达和ALT、AST水平差异无统计学意义(P>0.05);再灌注60、180 min,OLT组的NF-κB活性,ICAM-1/LFA-1分子表达,ALT、AST水平均明显高于LPS组(P<0.01).结论:大鼠肝移植再灌注期内毒素信号转导通路的NF-κB活性增强,上调ICAM-1/LFA-1分子表达对移植肝造成损害;脂多糖预处理可有效抑制大鼠肝移植I/R中肝脏NF-KB活性、F调ICAM-1/LFA-1分子表达,对大鼠移植肝的缺血再灌注损伤有明显保护作用.     

谷氨酰胺对肝移植大鼠肠黏膜NF-κB、ICAM-1、TNF-α表达的影响

目的 研究谷氨酰胺(Glutamine,Gln)对原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)大鼠肠黏膜内核转录因子-κB(NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 选择健康雄性Wistar大鼠70只,按随机数字表法分为对照组(n=10)、原位肝移植组(OLT组,n=30)和原位肝移植+Gln组(EEN组,n=30);对照组只分离肝十二指肠韧带,OLT组和EEN组按改良的两袖套法进行原位肝移植.EEN组受体在术前3d、术后3h开始给予肠内营养混悬液能全力+谷氨酰胺灌胃,OLT组及对照组受体仅给予肠内营养混悬液.对照组分离肝十二指肠韧带12 h后,OLT组和EEN组肝移植后12、24、72 h分别取回肠肠壁组织免疫组化测定肠组织NF-κB与ICAM-1的表达,荧光定量PCR(fluorescence quantitive-polymerase chain reaction,FQ-PCR)测定肠黏膜TNF-α mRNA表达、HE染色观察回肠组织的病理改变,测定微绒毛长度.结果 与对照组比较OLT组和EEN组肝移植后12、24、72 h,NF-κB、ICAM-1、TNF-αmRNA表达明显升高,肠黏膜损害明显加重,差异有统计学意义(P＜0.01);而肝移植后12、24、72 h EEN组与OLT组比较,NF-κB、ICAM-1、TNF-α mRNA表达明显下降,肠黏膜损害明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠原位肝移植可引起肠组织中NF-κB活化,ICAM-1、TNF-α表达上调导致肠黏膜屏障损伤,Gln能抑制肝移植大鼠肠黏膜NF-κB活性,减少ICAM-1、TNF-α的表达而起到肠黏膜保护作用.     

他莫昔芬对大鼠脊髓损伤后炎性反应及细胞凋亡的影响

目的检测他莫昔芬对脊髓损伤大鼠核因子kappa B抑制蛋白激酶复合体/核因子kappa B（IKK/NF-κB）通路及细胞凋亡的影响,研究其神经保护机制。方法将51只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为3组（每组17只）：假手术组（仅行椎板切除术）、对照组（脊髓损伤后硬膜下注射2%二甲基亚砜5 m L/kg）和他莫昔芬组[脊髓损伤后硬膜下注射他莫昔芬5 mg/kg（溶于2%二甲基亚砜1 mg/m L）]。改良Allen法（25 g·cm）制作T12节段脊髓损伤模型。术后24 h采用免疫印迹法（Western blot）检测损伤节段脊髓核因子kappa B p65（NF-κB p65）、磷酸化核因子κB抑制因子α（p I-κBα）和活性半胱天冬酶-3（caspase-3）表达水平,应用Gel Pro Analyser 4.0定量灰度值（OD）;比色法检测脊髓组织中髓过氧化物酶（MPO）活性。统计方法采用单因素方差分析和Bonferrni检验。结果与假手术组相比,对照组和他莫昔芬组术后24 h炎症相关指标NF-κB p65[（0.31±0.03）比（3.17±0.12）比（1.55±0.07）,P〈0.05]、p I-κBα[（0.12±0.01）比（0.98±0.05）比（0.53±0.03）,P〈0.05]的表达水平及MPO活性较高[（0.06±0.01）U/mg比（0.64±0.03）U/mg比（0.35±0.02）U/mg,P〈0.05],但他莫昔芬组低于对照组,组间差异有统计学意义（P〈0.05）;此外,凋亡相关的活性caspase-3在假手术组表达水平极低,另外两组则明显升高,其中对照组升高更为显著[（0.08±0.01）比（1.03±0.05）比（0.36±0.02）,P〈0.05]。结论他莫昔芬能够调控脊髓损伤部位的细胞凋亡,并减轻炎性反应,从而发挥神经保护作用。     

丹参对大鼠肝缺血后再灌注损伤的保护作用

目的 通过检测丹参对大鼠肝缺血再灌注损伤后核因子-Kappa B(NF-κB)、细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的影响,观察丹参对大鼠肝缺血后再灌注损伤的保护作用.方法 按Nauta等方法制备大鼠肝脏缺血再灌注模型,随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、丹参预处理组(P组),分别于肝缺血再灌后2、8、24 h取材,用免疫组化方法检测肝组织NF-κB、ICAM-1的表达,测肝组织中髓过氧化酶(MPO)浓度评价肝组织中中性粒细胞浸润情况,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平及做光镜、电镜检查反映肝组织细胞损伤程度.结果 I/R组NF-κB A值于再灌注2h(0.418 4±0.039)明显升高,8h(0.308 4±0.028)、24h(0.240 ±0.032)逐渐下降.ICAM-1 A值也于再灌注2h(0.367±0.034)升高,8h(0.451±0.031)达高峰,24h(0.293±0.025)下降.MPO、ALT、AST变化与ICAM-1类似.在P组上述各指标在各时间点均较I/R组低(P<0.05),但较S组高(P<0.05).ALT、MPO、NF-κB和ICAM-1之间的变化均具有正相关(P<0.01);光镜、电镜观察各组之间也具有明显区别.结论 大鼠肝缺血再灌注时刺激NF-κB、ICAM-1的表达参与肝脏缺血再灌注损伤的发生过程,丹参能显著降低缺血再灌注时肝组织中NF-κB、ICAM-1的表达,并有效改善肝缺血再灌注损伤.     

盐酸戊乙奎醚抑制白细胞介素-1β诱导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1及其机制的研究

目的探讨盐酸戊乙奎醚（PHC）抑制白细胞介素-1β（IL-1β）诱导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及其作用机制。方法体外培养A549细胞株,分别用培养液（A组）、PHC（B组）、IL-1β（C组）和IL-1β＋PHC（D组）处理,NF-κB DNA结合活性试剂盒检测刺激后1 h NF-κB DNA结合活性;反转录-聚合酶链反应检测刺激后4 h ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法检测刺激后24 h ICAM-1蛋白表达。结果 IL-1β刺激后,C组NF-κB DNA结合活性、ICAM-1 mRNA和蛋白明显升高（P〈0.01）,D组NF-κB DNA结合活性、ICAM-1 mRNA和蛋白高于A组（P〈0.05）,但低于C组（P〈0.05）,PHC预处理能抑制IL-1β诱导的NF-κB DNA结合活性、ICAM-1 mRNA和蛋白表达升高。结论 PHC可抑制IL-1β诱导A549细胞分泌ICAM-1,其机制可能通过抑制NF-κB激活。     

抑郁症患者血清TNF-α、IL-8、ICAM-1、 NF-κB 水平及其意义

目的 探讨抑郁症患者血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）、细胞间 黏附分子（ICAM-1）、核因子-κB（NF-κB）水平及其意义。方法 选择2016 年1 月-2017 年12 月在 该院就诊的抑郁症患者80 例作为抑郁症组,健康体检者80 例作为对照组。采用酶联免疫吸附实验测定血 清TNF-α、IL-8、ICAM-1、NF-κB 水平。采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评定患者的抑郁情绪。 结果 抑郁症组患者血清TNF-α、IL-8、ICAM-1、NF-κB 水平和HAMD 评分高于对照组（P <0.05）; 治疗后血清TNF-α、IL-8、ICAM-1、NF-κB 水平和HAMD 评分低于治疗前（P <0.05）。抑郁症患者血 清TNF-α、IL-8、ICAM-1、NF-κB 水平与HAMD 评分呈正相关（P <0.05）。抑郁症患者血清TNF-α、 IL-8、ICAM-1 与NF-κB 水平呈负相关（P <0.05）。结论 抑郁症患者血清TNF-α、IL-8、ICAM-1、 NF-κB 水平升高,炎症反应参与抑郁症的发病过程。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠缺血再灌注肝脏NF-κB表达的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对大鼠缺血再灌注（I/R）诱导的急性肝损伤（AHI）大的保护作用及对NF-κB表达的影响。方法30只大鼠随机均分成三组：a组假手术组（Sham）：仅开腹,不阻断肝血流;b组I/R组;c组干预组（NAC）。b、c组均阻断肝大部血流后恢复灌注,其中c组于阻断血流前1 h,腹腔注射NAC（500 mg/kg）。各组大鼠于再灌注3 h后开腹,采血,切取肝左中叶常规病理检测：免疫组化染色（ABC法）检测NF-κB在肝组织中的表达。结果I/R组大鼠血清ALT与AST的活性、中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophil,PMN）计数及NF-κB表达比均明显高于S组（P〈0.01）,肝脏在光镜与电镜下的显微与超微结构损伤明显;NAC组的各项指标均明显好于I/R组（P〈0.01）,但差于S组（P〈0.01）。结论I/R大鼠肝脏组织内NF-κB的表达增加,NAC可通过抑制NF-κB的激活减轻急性肝损伤的炎症程度。     

环氧合酶-2 和核因子-κB 在脓毒症大鼠肝损伤中的表达

目的 探讨环氧合酶2（COX-2）和核因子-κB（NF-κB）在脓毒症大鼠的肝组织炎性反应中的表达及其相互关系.方法 随机选择54只200～220 g成年Wistar大鼠分为3组,假手术A组（实验开始前2h腹腔内注射生理盐水,麻醉后行开腹手术,不做模型诱导,n=6）;脓毒症模型B组[实验开始前2h腹腔内注射生理盐水,麻醉后盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）建立腹腔感染模型,n=24]; NS398干预C组（CLP建立腹腔感染模型,实验开始前2h腹腔内注射NS398 10 mg/kg,n=24）.以CLP法建立动物模型,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测COX-2 mRNA在肝脏组织的表达,免疫组织化学法（Elisa）测定NF-κB在肝细胞中表达,并检测肝脏功能,如谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和肝脏大体标本及病理变化.结果 ①COX-2 mRNA在A组呈低表达（1040.82±2.77）,各时点C组较B组明显降低.②肝细胞中NF-κB在A组表达较低[3 h：（0.60±0.54）,6 h：（0.60±0.54）,12 h：（0.60±0.54）,24 h：（0.60±0.54）],脓毒症后其表达明显增高[3 h：（2.60±0.55）,6 h：（7.20±1.09）,12 h：（12.20±0.32）,24 h：（6.40±0.73）];在同一时点比较,B组低于C组[3 h：（1.60±1.89）,6 h：（6.60±0.79）,12 h：（9.20±2.68）,24 h：（4.80±1.60）]（P＜0.05）.③Pearson相关分析,COX-2 mRNA与NF-κB呈直线正相关（r=0.685,P=0.002）.④脓毒症后肝脏转氨酶明显增高[ALT：3 h：（174.00±18.73）U/L,6 h：（204.67±23.59）U/L,12 h：（311.00±44.53）U/L,24 h：（506.67±24.79）U/L;AST：3 h：（619.67 ±145.81）U/L,6 h：（594.00±34.59）U/L,12 h：（1027.66 ±136.21）U/L,24 h：（1518.33 ±139.38）U/L],NS-398干预后降低[ALT：3 h：（105.33±18.01）U/L,6 h：（157.00±32.36）U/L,12 h：（101.00±16.52）U/L,24 h：（93.33±10.41）U/L;AST：3 h：（217.00±26.21）U/L,6 h：（461.33±22.01）U/L,12h：（322.00±72.33）U/L,24 h：（268.00±98.57）U/L],C组与B组差异有统计学意义（P＜0.05）,提示经干预肝脏病理损伤减轻.结论 COX-2在脓毒症后引起的肝损伤中占有重要地位,NS-398通过特异性抑制COX-2来抑制肝细胞中NF-κB的表达,从而减轻肝细胞损伤.     

人心房利钠肽对机械通气肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65表达的影响

目的 探讨人心房利钠肽（hANP）对大鼠机械通气性肺损伤（VILI）时炎症因子和NF-κB p65表达的影响.方法 采用高气道压机械通气模式制备VILI模型.雄性SD大鼠30只随机分为空白对照组（TV组）、机械通气肺损伤组（HV组）和人心房利钠肽组（HV＋hANP组）.HV＋hANP组于机械通气30 min后静脉注射hANP 0.1 g/（kg·min）,机械通气4h时处死大鼠.免疫蛋白印迹法测定肺组织NF-κB p65的表达;酶联免疫吸附法测定肺组织TNF-α和IL-lβ的含量;计算肺组织湿/干重比（W/D）.结果 与TV组相比,HV组、HV＋hANP组肺组织TNF-α[（519.22±35.31）、（283.54±24.16）ng/L]和IL-lβ[（751.82±65.35）、（316.29±25.65）ng/L]含量明显上升（P＜0.05）,NF-κB p65[（238±24）、（178±14）]表达明显增加,肺组织W/D[（9.7±1.2）、（6.4±0.9）]明显升高（P＜0.05）;与HV组相比,HV＋ hANP组肺组织TNF-α和IL-lβ含量明显降低（P＜0.05）,NF-κB p65表达明显抑制,肺组织W/D降低（P＜0.05）.结论 hANP通过抑制肺组织NF-κB p65表达,减轻肺部炎症反应,从而减轻大鼠机械通气所致肺损伤.     

内毒素预处理对内毒素血症大鼠肝TLR-4、NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的 观察内毒素预处理对内毒素血症大鼠肝Toll样受体4(TLR-4)、核因子-κB(NF-κB)和白细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨内毒素预处理对内毒素血症肝损伤的保护作用及机制.方法 采用直接注射内毒素脂多糖(LPS,10 mg/kg体重)的方法建立大鼠急性内毒素血症模型,实验动物随机分成3组:生理盐水对照组(N组);内毒素脂多糖(LPS)组(L组)和LPS预处理组(P组),其中P组在制模前分别经腹腔注射LPS 0.25、0.50 mg/kg体重.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TLR-4 mRNA表达,免疫印迹法(Western blot)检测肝组织NF-κB表达,免疫组化法检测肝组织ICAM-1表达,取肝脏(肝左上叶)用10%的中性甲醛固定观察肝脏病理形态.结果 内毒素血症时,肝脏组织TLR-4、NF-κB和ICAM-1水平明显增加,显著高于N组(P＜0.05),而经内毒素预处理的模型动物肝脏组织TLR-4、NF-κB和ICAM-1水平明显降低(P＜0.05),P组肝脏组织病理学改变较L组减轻.结论 内毒素预处理能够减轻内毒素血症导致的肝损伤,其机制可能与抑制TLR-4信号传导通路及减少单核巨噬细胞内NF-κB和ICAM-1的表达有关.     

不同剂量氯化镧对氧化铝陶瓷颗粒诱导RAW264.7细胞产生炎症反应的保护作用

目的观察不同剂量氯化镧（LaCl3）对氧化铝（Al2O3）陶瓷颗粒诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7产生炎症反应的作用效果,为研究LaCl3在Al2O3陶瓷颗粒诱导无菌性松动中的作用提供理论基础。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7。根据培养液的不同分成8组：空白对照组（培养基中不含LaCL3和Al2O3）、Al2O3组（含1 mg/mL Al2O3）、LaCl3＋Al2O3组（加入1 mg/mL Al2O3后分别加入2.5、10、100μmol/L LaCl3）以及LaCl3组（含2.5、10、100μmol/L LaCl3）。分别采用ELISA、RT-PCR及Western blotting法检测炎症因子白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白的表达。结果 ELISA检测结果显示：与空白对照组比较,Al2O3组和100μmol/L LaCl3组IL-1和TNF-β的蛋白分泌量均显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与Al2O3组比较,Al2O3＋2.5μmol/L LaCl3组、Al2O3＋10μmol/L LaCl3组均显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;2.5和10μmol/L LaCl3组均明显低于100μmol/L LaCl3组,差异也有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR和Western blotting检测结果显示IL-1β、TNF-α、NF-κB mRNA以及NF-κB蛋白表达的变化趋势与ELISA检测结果一致。结论 10μmol/L LaCl3可在一定程度上抑制巨噬细胞IL-1β和TNF-α的分泌。LaCl3的炎症抑制作用可能与NF-κB信号转导通路的抑制有关。     

尿激酶联合黄芪对环孢素A大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB表达的影响及意义

目的探讨尿激酶（uPA）联合黄芪（AM）对环孢素A（CsA）大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB（NF-κB）表达的影响及意义。方法采用1：7服灌胃CsA（25mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）制备大鼠慢性肾纤维化模型,将大鼠随机分为5组：对照组、模型组、uPA组、AM组及联合治疗组,4周末取标本。HE染色观察肾脏组织结构变化;采用试剂盒测定肾组织羟脯氨酸的含量;应用免疫荧光观察P-p65的表达及定位;采用Western印迹法检测大鼠肾组织P—065、p65、IκBα和IκBβ的蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组肾小管损伤程度加重,羟脯氨酸含量增加,肾组织中NF-κB活化显著增强,p65由细胞质转移至细胞核,P-p65表达显著上调,IκBα降解明显增加（P均〈0．05）。与模型组相比,各治疗组肾小管损伤程度减轻,羟脯氨酸含量减少,P-p65表达被显著抑制,IκBα降解减少（P均〈0．05）,且联合组的治疗效果更显著。IκBβ的蛋白表达水平各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NF-κB信号通路介导了肾脏纤维化的发生发展,uPA与AM能减轻肾脏纤维化,这可能与其能抑制NF-κB通路激活有关。     

肠道微生态对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎基质金属蛋白酶-3调控作用的研究

目的探讨肠道微生态对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导大鼠结肠炎基质金属蛋白酶-3（MMP3）基因表达的调控作用。方法将动物随机分为正常组、模型组、金双歧组3组。采用TNBS法制备大鼠结肠炎模型。造模后金双歧组予以金双歧2g/d经口灌服,1次/d,于第8天评价各组大鼠疾病活动指数（DA1）和组织学损伤评分;ELISA法检测结肠组织TNF-α、IL-10含量;免疫组织化学法检测NF-κB p65的表达;实时荧光定量PCR（RT-PCR）法测定MMP3-mRNA的表达。结果相比模型组,金双歧组大鼠结肠粘膜DAI[（5.90±1.67）比（9.20±1.75）]和组织学损伤评分[（4.80±1.25）比（7.10±0.99）],TNF-α含量[（503.98±126.63）pg/m1比（657.54±149.60）pg/ml],NF-κB p65的表达[（3.90±2.02）比（6.10±1.79）],MMP3-mPNA的表达[（3.56±2.13）比（16.53±13.80）]均降低（P均〈0.01或P〈0.05）,而IL-10含量[（95.57±27.71）pg/ml比（42.92±23.74）pg/ml]增高（P〈0.01）;NF-κBp65的表达与MMP3-mRNA表达呈显著正相关（相关系数γ=0.669,P〈0.05）。结论金双歧对TNBS诱导大鼠实验性结肠炎有明显的抗炎效果,其作用机制可能是通过下调MMP3-mRNA的表达、抑制NF-κB活性、平衡细胞因子网络等实现的。     

牛磺酸预处理抑制IRAK-4信号通路对大鼠移植肝脏再灌注损伤的保护机制

目的 观察牛磺酸预处理后SD大鼠移植肝脏的白细胞介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor aasociated kinase-4,IRAK-4)表达水平的变化,探讨牛磺酸预处理抑制肝脏缺血再灌注损害的相关机制.方法 雄性SD大鼠128只,完全随机化分为生理盐水对照组(NS组)和牛磺酸预处理组(TA组),每组64只,用Kamada's袖套法经行肝移植.NS组切取供肝前10 min经腰静脉注射生理盐水1.5 ml,TA组切取供肝前10 min经腰静脉注射牛磺酸(300 mmol/L)1.5 ml.于再灌注后0、60 min及180 min,蛋白免疫印记法及实时荧光定量PCR测定肝组织中IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;凝胶电泳迁移率分析法(EMSA)检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量;全自动血清自动生物化学仪检测血清转氨酶;光镜切片检测肝脏组织学.结果 牛磺酸预处理能明显提高大鼠1周生存率(P＜0.01),改善肝功能,减轻肝组织病理学改变.再灌注后0 min,血清转氨酶、IRAK-4 mRNA与蛋白表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);NS组各项指标水平于再灌注60 min出现峰值,但TA组各项指标水平明显低于NS组(P＜0.01);再灌注后180 min,2组IRAK-4 mRNA与蛋白表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量均较60 min时有所下降,且TA组下降水平较NS组更为明显(P＜0.01).结论 牛磺酸对大鼠移植肝脏的缺血再灌注损伤有明显抑制作用,抑制IRAK-4及其下游的NF-κB、TNF-α表达是牛磺酸预处理减轻肝脏缺血再灌注损害的重要机制之一.     

人IκBα真核表达载体的构建及其在大鼠肝移植缺血-再灌注损伤中的作用

目的:构建人IκBα真核表达质粒,探讨对大鼠肝移植缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:应用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBα,定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体。将SD大鼠原位肝移植模型分为三组:Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为PcDNA3.0空载体转染组,Ⅲ组为PcDNA3.0-IκBα转染组。分别于术后2、12、24和72 h取材。用RT-PCR测定肝组织中核转录因子(NF-κB)p65、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA的表达及肝功能变化。结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;Ⅲ组与Ⅰ组、Ⅱ组相比:NF-κBp65、TNFα、ICAM-1 mRNA的表达水平及肝酶学指标均明显降低(P<0.05)。结论:真核表达质粒PcDNA3.0-IκBα构建成功,IκBα通过抑制NF-κBp65 mRNA的表达及其核移位减轻大鼠肝移植缺血-再灌注损伤。     

曲格列酮对肿瘤坏死因子α诱导肾小球系膜细胞的作用及其机制

目的：探讨曲格列酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小球系膜细胞增殖的影响及机制。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白组,TNF-α组、TNF-α+曲格列酮组,MTT法检测各组系膜细胞的增殖情况,ELISA法测定各组系膜细胞上清液中细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达,免疫组化法测定各组系膜细胞核因子κB (NF-κB)的表达情况。结果 TNFα组肾小球系膜细胞6 h、12 h、24 h和48 h增殖的OD值分别为(0.198±0.025)、(0.241±0.028)、(0.286±0.030)、(0.267±0.042),空白组分别为(0.159±0.021)、(0.161±0.019)、(0.164±0.023)、(0.170±0.020),TTNF-α+曲格列酮组分别为(0.187±0.023)、(0.184±0.017)、(0.172±0.018)、(0.168±0.026),TNF-α组肾小球系膜细胞增殖的OD值明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率为(62.34±10.26)%,空白组为(29.97±4.88)%,TNF-α+曲格列酮组为(45.67±8.36)%,TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率明显高于空白组,而TNF-α+曲格列酮组则明显低于TNF a组,高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度为(967.8±77.4) pg/mL,空白组为(571.2±69.6) pg/mL,TNFα+曲格列酮组为(787.5±81.2) pg/mL,TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,但仍高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进肾小球系膜细胞增殖,促进NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达,曲格列酮能够抑制肾小球系膜细胞增殖,降低NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达。     

严重烧伤大鼠早期NF-κB的活性及作用

目的：探讨严重烧伤后大鼠早期外周血中白细胞核转录因子-κB（NF-κB）的活性变化及作用。方法：48只Wistar大鼠随机分为对照组和烫伤组,采用30%TBSAⅢ度烫伤大鼠模型,观察对照组和烫伤组各时相点（1、8、12、24和48h）外周血中白细胞NF-κB的活性变化和规律,及其与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及细胞黏附分子-1（ICAM-1）的关系。结果：大鼠严重烧伤后外周血中白细胞NF-κB活性较伤前明显增高,伤后1h达到峰值（P〈0.01）;血浆TNF-α和ICAM-1及中性粒细胞数（PMN）均有类似变化,与NF-κB变化呈正相关。结论：烧伤机体早期外周血中白细胞NF-κB活性明显增高,激发机体炎症反应,在烧伤后全身炎症反应综合征的发生和发展中起重要作用。