rhCTLA4Ig对烧伤创面异基因移植皮肤存活期的影响

目的 探讨重组CTLA4Ig蛋白延长烧伤创面异基因移植皮肤存活情况。方法 大鼠背部烧伤创面移植人断层皮肤，观察术后不同时间给予不同剂量rhCTLA4Ig对移植皮肤存活情况的影响。结果 rhCTLA4Ig能一定剂量依赖性延长大鼠烧伤创面移植人断层皮肤的存活时间，且存活时间及病理学检查均发现术后24h给药较术后立即给药效果更好。结论 重组CTLA4Ig可用于延长烧伤创面异基因移植皮肤的存活期。     

小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1促进骨髓移植后的造血重建

目的：观察骨髓基质细胞系QXMSC1在骨髓移植后早期能否加速造血重建。方法：用脾克隆形成单位（CFU-S）测定QXMSC1对造血干细胞的影响。计数每根股骨有核细胞数，用半固体琼脂克隆形成法测定粒单系祖细胞（CFU－GM），微量甲基纤维素法测定红系祖细胞（CFU-E及BFU－E）。结果：QXMSC1细胞可明显增加CFU－S克隆数。在骨髓移植后第10天，QXMSC1可增加骨髓有核细胞数，增加CFU－GM、CFUE克隆数。移植后第20天，这些作用更明显，且对BFU-E也有明显的刺激作用。结论：骨髓基质细胞系QXMSC1与骨髓细胞共移植可明显促进骨髓移植后早期造血功能重建。     

诱导大鼠免疫耐受的初步实验研究

目的:观察异基因脾细胞经门静脉途径输注诱导受体免疫耐受的效果,以及联合使用塞尼哌后的效果.方法:将供体SD大鼠的脾细胞经门静脉途径输注给受体Wistar大鼠,一周后把SD大鼠的皮肤移植到相应的Wistar大鼠上.移植前联合使用塞尼哌.观察术后移植皮肤的存活时间和受体外周血淋巴细胞CD25 的表达水平. 结果:门静脉耐受诱导后移植皮肤的平均存活时间(MST)为(15.8±2.1)d,较对照组长(P＜0.01);随移植皮肤存活时间的延长,外周血淋巴细胞的CD25 表达水平呈下降趋势.但使用塞尼哌后MST未延长.结论:经门静脉途径输注异基因脾细胞能够诱导受体产生免疫低应答状态,联合使用塞尼哌未能加强免疫耐受的诱导效果.     

FTY720对小鼠异基因骨髓移植后急性GVHD的预防作用

目的 评估FTY720对小鼠异基因骨髓移植诱发急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用。方法36只受体BALB／c小鼠,接受直线加速器一次性全身照射后4～6h内,经尾静脉注射供体小鼠骨髓和脾脏细胞。受体小鼠分为移植方式对照组（A组）和异基因移植治疗组（B组）;同时A组分未移植组（A1）、同基因移植组（A2）和异基因移植对照组（A3）,B组分CsA5mg／kg组（B1）,FTY7200．3mg／kg组（B2）和FTY7201mg／kg组（B3）。移植后受体小鼠,根据生存时间、体重变化和病理组织学检查,评估各组aGVHD严重程度。结果 异基因移植各组在移植后第7d造血开始恢复,第14d流式细胞仪检测显示异基因骨髓细胞已植入,病理组织学检查A3组发生重度aGVHD;与B1和B2组比较,B3组aGVHD严重程度最低。结论小鼠异基因骨髓移植后给予FTY720具有预防aGVHD作用．以剂量为1mg／kg时作用显著。     

FTY720对小鼠异基因骨髓移植后急性GVHD的预防作用

目的评估FTY720对小鼠异基因骨髓移植诱发急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用.方法 36只受体BALB/c小鼠,接受直线加速器一次性全身照射后4 ～ 6 h内,经尾静脉注射供体小鼠骨髓和脾脏细胞.受体小鼠分为移植方式对照组(A组)和异基因移植治疗组(B组);同时A组分未移植组(A1)、同基因移植组(A2)和异基因移植对照组(A3),B组分CsA 5 mg/kg组(B1),FTY720 0.3 mg/kg组(B2)和FTY720 1 mg/kg组(B3).移植后受体小鼠,根据生存时间、体重变化和病理组织学检查,评估各组aGVHD严重程度.结果异基因移植各组在移植后第7 d造血开始恢复,第14 d流式细胞仪检测显示异基因骨髓细胞已植入,病理组织学检查A3组发生重度aGVHD;与B1和B2组比较,B3组aGVHD严重程度最低.结论小鼠异基因骨髓移植后给予FTY720具有预防aGVHD作用,以剂量为1 mg/kg时作用显著.     

抗ICOS单抗与小剂量环孢素A联用对大鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的：探讨抗可诱导共刺激分子（inducible costimilator,ICOS）单克隆抗体与小剂量环孢素A（cyclosporine,CsA）联用对同种异基因大鼠心脏移植后移植物生存质量和慢性排斥反应的影响。方法：建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,术后随机分为同基因移植对照组和同种异基因移植试验组,其中试验组根据术后处理不同又分为安慰剂组、常规剂量CsA组、抗-ICOS-单抗组、小剂量CsA组和抗-ICOS-单抗联合小剂量CsA组,观察各组大鼠移植心脏的存活时间及移植心组织病理学变化,对移植心长期存活（〉100d）的受体,应用流式细胞仪检测其外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。结果：单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长（P〈0.05）;抗-ICOS-单抗联用小剂量CsA组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长（P〈0.05）;与安慰剂组相比,单用抗-ICOS-单抗组移植心脏存活时间差异无统计学意义（P〉0.05）。移植心长期存活受体中,与常规剂量CsA组比较,联合治疗组移植心慢性排斥损伤明显减轻,而外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例有显著升高（P〈0.05）。结论：抗ICOS单抗加小剂量CsA联合免疫治疗,可有效延长大鼠移植心存活时间和减轻慢性排斥反应,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的高水平表达与诱导移植耐受、抑制慢性排斥反应有重要关联。     

重组人白细胞介素18对小鼠骨髓细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的：探讨重组人白细胞介素18（rhIL-18）对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响,为rhIL-18用于临床移植免疫提供理论基础。方法：受体鼠（BALB／c）接受9．0Gy剂量的X-射线照射之后,通过其尾静脉注射供体鼠（C57BL／6）的骨髓细胞和脾细胞,并于移植的-2～＋2d腹腔注射rhIL-18。移植后观察受体鼠的临床症状和存活状况,同时检测其肝脏、结肠和耳朵的病理变化。结果：移植后aGVHD期内,用rhIL-18治疗的受体鼠GVHD症状积分较未接受rhIL-18治疗的受体鼠低（P ＜ 0．05）,肝脏和结肠的病理变化轻（P ＜ 0．05）,短期存活时间延长（P ＜ 0．05）,但对长期生存率无明显影响。结论：受体鼠早期接受rhIL-18治疗,可在移植后aGVHD期内降低aGVHD的病变程度,为rhIL-18在临床上预防和治疗aGVHD提供了实验依据。     

雷公藤氯内酯醇对大鼠异位心脏移植免疫抑制作用的实验研究

本研究应用纯系大鼠（Ｌｏｕ→Ｆ３４４）心脏移植模型，比较分析了ＣｓＡ和不同剂量Ｔ４治疗组的移植心脏存活时间、病理损害计分以及移植受体大鼠脾单个核细胞ＩＬ－２生成活性和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平，证实Ｔ４可明显延长移植心脏存活时间和减少移植排异反应程度。此研究结果表明Ｔ４具有较强的抗移植排异作用。     

异基因脾细胞诱导大鼠免疫耐受实验研究

目的比较异基因脾细胞经受体门静脉和口服两种途径输注诱导免疫耐受的效果。方法将供体SD大鼠的脾细胞经门静脉或经口服途径输注给受体Wistar大鼠,1周后把SD大鼠的皮肤移植到相应的Wistar大鼠上。观察术后移植皮肤的存活时间,受体外周血淋巴细胞CD25的表达水平和外周血T淋巴细胞亚群,以判断耐受水平。结果移植皮肤的平均存活时间(MST)在门静脉耐受诱导组为15·8±2·1天,口服耐受诱导组为13·0±1·3天,均较对照组长(P<0·01);组间MST比较门静脉耐受诱导组比口服耐受诱导组长(P<0·01);随各组移植皮肤存活时间的延长,外周血淋巴细胞的CD25表达水平呈下降趋势;外周血T淋巴细胞亚群呈现CD4+T细胞下降,CD8+T细胞上升,CD4/CD8比值减少的趋势。结论经门静脉途径输注异基因脾细胞诱导的免疫耐受效果比经口服途径好。     

CD154胞外区基因局部修饰对大鼠移植肾存活的影响

目的观察CD154胞外区基因局部修饰大鼠供肾对延长移植肾存活的效能.方法以CD154基因重组腺病毒为载体,将CD154胞外区基因转入BN大鼠供肾,以Lewis大鼠为受体,行同种肾移植为转染组,并以未转染BN供肾移植给Lewis受体为对照组;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.结果转染组移植肾存活(28±7.3) d,较对照组移植肾存活时间(8.6±1.2)d明显延长;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低.结论 CD154基因局部转染可明显延长移植肾存活时间.     

骨髓间充质干细胞对急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓移植后GVHD和GVL的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病(GVL)的影响。方法:以ALL小鼠为动物模型,对其进行al-lo-BMT的同时,静脉输注经体外培养的供鼠BMMSC,同时设立单纯allo-BMT对照组。流式细胞仪检测受鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的差异;记录受鼠存活时间;观察受鼠发生GVHD一般反应及病理学变化。结果:BMMSC减少受鼠CD4+T细胞数量的同时增加CD8+T细胞的数量;明显延长ALL小鼠allo-BMT后的生存时间;推迟GVHD发生的时间。结论:BMMSC与allo-BMT联合移植具有一定的GVL;BMMSC能抑制ALL小鼠allo-BMT后GVHD的发生,但同时具有一定程度的GVL。     

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的：建立一个德定可靠的异基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT）急性移植物抗宿主病（acute graft-vetsus-host disease,aGVHD）动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法：以雄性C57BL／6（H-2b）为供鼠,雌性BALB／C（H-2d）为受鼠,受鼠致死性全身照射（total body irradiation,TBI）（8.0Gy）预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75％的小鼠长期存活（〉30d）。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内（8-15d）观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论：建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。     

多途径联合诱导器官移植耐受和促进免疫功能重建

器官移植是治疗终末器官功能衰竭的主要方法,由于组织配型和高效免疫抑制剂的应用,急性排斥的发生率已大大降低,但目前慢性排斥仍无有效的控制方法,致使器官移植患者的长期(5～10年或更长)存活率明显偏低,而移植患者终身使用免疫抑制剂使感染、肿瘤的发病率增高,不但增加患者经济负担,而且严重影响患者的生活质量.通过诱导免疫耐受(移植耐受)的方法是解决移植排斥,避免上述问题的理想方法.     

间充质干细胞在致敏受者造血干细胞移植中的作用

【目的】 本实验拟研究骨髓间充质干细胞(MSC)在致敏受者造血干细胞移植中的作用?【方法】 体外分离BALB/c小鼠骨髓细胞,通过贴壁培养方法获得MSC,应用流式细胞仪检测细胞表面分子标记?通过异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型;绿色荧光染料标记骨髓MSC,分别移植到非致敏及致敏受者体内,并于移植后不同时间点检测MSC的归巢情况?致敏BALB/c小鼠经照射预处理,联合应用同基因MSC与异基因骨髓细胞移植,每日观察小鼠的生存情况?【结果】 体外培养第4代MSC表现为长梭形,阴性表达造血细胞表面分子而阳性表达粘附分子?动物体内实验发现移植后第48小时,MSC在非致敏受者体内主要归巢于骨髓,而在致敏受者体内主要归巢于脾脏?造血干细胞移植实验中,致敏小鼠接受同基因骨髓MSC与异基因骨髓细胞移植,结果发现致敏小鼠在移植后第12 ~ 16天全部死亡,生存中位数时间是14 d?【结论】 成功培养小鼠骨髓MSC;移植后MSC在致敏受者体内主要归巢于脾脏组织;联合应用MSC移植并不能有效促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者体内植入?     

骨髓腔内移植对异基因骨髓移植小鼠造血的影响

目的:探讨骨髓腔内骨髓移植(Intrabonemarrowbonemarrowtransplantation,IBMBMT)对异基因骨髓移植小鼠造血功能的影响。方法:将供鼠C57BL/6(H2b)骨髓细胞经微量注射器直接注入到经致死量照射后的受鼠BalB/c(H2d)胫骨骨髓腔。在骨髓移植后1,7,14d分别检测受鼠外周血红细胞、白细胞、血小板;骨髓移植后7,14d分别检测受鼠骨髓中的CFUS。结果:IBMBMT组小鼠移植后7,14d的外周血红细胞、白细胞、血小板、骨髓脾集落形成单位(CFUS)均显著高于传统骨髓移植组(IVBMT)(P<0.01)。结论:IBMBMT较IVBMT更能促进异基因骨髓移植后造血功能重建。     

胸腺内注射异基因骨髓细胞对大鼠异位心脏移植影响的研究

本文采用同种大鼠颈部异位心脏移植模型研究受体胸腺内注射异基因骨髓细胞对移植心脏存活时间的影响及免疫学功能变化。实验分 4组。对照组 (Control组 )、环磷酰胺组 (CP组 )、单纯胸腺内注射异基因骨髓细胞组 (IT组 )、胸腺内注射异基因骨髓细胞辅以短期环磷酰胺组(IT +CP组 )。结果显示 :移植心脏存活时间最长的是IT +CP组为 68 3± 13 4d ,CP组移植心脏存活时间为 18 3± 2 4d ,两组间移植心脏存活时间差异显著 (P <0 0 1) ,而二者分别与Control组比较差异显著 (P <0 0 1,P <0 0 5) ,Control组、IT组移植心脏存活时间较短 ,分别为 8 5±1 4d、 7 8± 1 2d ,受体接受实验处理因素 1个月后免疫功能测定表明 :各组大鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验无明显差异 (P >0 0 5)。IT +CP组大鼠脾细胞对供体脾细胞的单向混合淋巴细胞培养有明显抑制作用 (P <0 0 1) ,对供体靶细胞的细胞介导的细胞毒试验呈明显抑制作用 (P<0 0 1) ,说明受体对供体产生特异性免疫无反应性 ,即免疫耐受。     

异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞的分布

目的:观察异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞(APC)的分布情况。方法:绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H-2b)小鼠作为供体,经5.5Gy×2剂量照射24h的BALB/c(H-2d)小鼠作为宿主,于骨髓移植后21d和35d取出宿主小鼠眼球,分离得到虹膜睫状体,荧光显微镜下观察供体骨髓来源的细胞分布。同时采用免疫组织化学染色方法观察普通和移植后小鼠F4/80阳性细胞在虹膜中的分布规律。结果:异基因骨髓移植后21d和35d,宿主虹膜睫状体内可观察到大量呈树突状形态的绿色荧光细胞,呈“满天星”样散在分布于小鼠虹膜睫状体中,这些细胞F4/80抗体免疫组织化学荧光染色多为阳性。结论:虹膜睫状体中的APC细胞来源于骨髓,且大部分为F4/80阳性细胞;异基因骨髓移植后宿主虹膜睫状体中的APC细胞全部被供体来源的APC细胞取代。     

深冻同种异体骨移植联合骨髓单核细胞移植治疗骨肿瘤性骨缺损

目的：评价骨肿瘤病变切除后应用深低温冷冻同种异体骨移植联合自体骨髓单核细胞移植修复骨缺损的治疗效果;方法：回顾性分析2004年1月至2009年1月在我院骨科骨肿瘤病变的124例患者,其中采用同种异体骨联合自体骨髓单核细胞移植植骨61例（联合骨髓单核细胞移植组）;单纯同种异体骨植骨63例（单纯植骨组）;结果：联合骨髓单核细胞移植组移植骨界限模糊时间和消失时间均短于单纯植骨组。术后6、12、24个月时联合骨髓单核细胞移植组骨密度明显高于单纯植骨组。结论：同种异体骨联合自体骨髓单核细胞移植,组织抗原性减弱,能明显促进骨融合和骨缺损的愈合。     

N-乙酰半胱氨酸对负载主要组织相容性抗原的树突状细胞生物学特性的影响

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对负载同种异基因MHC抗原的树突状细胞(DC)生物学特性的影响。方法用GM-CSF IL-4定向诱导BALB/c小鼠骨髓细胞分化为DC,观察在负载MHC抗原时加入NAC对DCI-Ad和CD86mRNA的表达和刺激T细胞增殖能力的影响,及其延长同种异基因小鼠皮肤移植物存活时间的效果。结果在NAC作用下,负载MHC抗原的DCI-Ad和CD86mRNA表达水平降低;经NAC处理后,负载MHC抗原的DC刺激T细胞增殖的能力降低;小鼠皮肤移植术前用经NAC处理的负载供者MHC抗原的DC注射到受者体内,可延长移植皮片存活时间。结论NAC可抑制同种异基因MHC抗原对DC的促成熟作用,有利于诱导小鼠皮肤移植免疫耐受。     

间充质干细胞联合NK细胞输注抑制DC减轻aGVHD

【目的】 观察骨髓MSC联合NK细胞输注对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的影响,初步探讨其作用机制?【方法】 分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,体外培养MSC;取C57BL/6小鼠脾脏细胞,磁珠分选NK细胞;建立C57BL/6→BALB/c小鼠异基因骨髓移植模型,接受移植小鼠随机分为4组,每组10只小鼠,MSC和NK细胞移植组,MSC移植组,NK细胞移植组和培养基对照组?根据aGVHD分值,肝?脾?小肠aGVHD病理损害和平均存活时间,评价aGVHD的程度?ELISA法检测小鼠血清中IFNγ和IL-12的含量?流式细胞术检测受鼠脾脏细胞CD11c和CD86的表达情况?【结果】 根据GVHD分值,肝?脾?小肠aGVHD病理损害和平均存活时间综合评价,与培养基对照组比较,MSC联合NK细胞移植组,MSC移植组和NK细胞移植组,发生aGVHD的程度均减轻,以MSC联合NK细胞移植组减轻最为明显?IFNγ的含量,NK细胞组明显高于MSC联合NK细胞移植组,MSC移植组和培养基对照组?IL-12的含量,MSC联合NK细胞移植组低于NK细胞移植组和培养基对照组,MSC移植组低于培养基对照组?脾脏DC细胞的含量,MSC联合NK细胞移植组未成熟DC(CD11c+CD86-)和成熟DC(CD11c+CD86+)均低于MSC移植组,NK细胞组和培养基对照组?【结论】 MSC联合NK细胞输注降低DC细胞数量,减轻aGVHD,延长小鼠生存时间?