新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Caspase-1mRNA的表达变化

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后Caspase 1mRNA的表达变化。方法　制备新生大鼠左脑HIBD模型 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定HIBD 12、2 4、72 ,96h不同时点脑皮质Caspase 1mRNA的表达 ,同时观察光镜下神经元坏死情况。结果　假手术对照组有少量Caspase 1mRNA表达 ,HIBD 12hCaspase 1mRNA的表达仍较少 ,与对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,HIBD 2 4～ 96hCaspase 1mRNA的表达逐渐增多 ,达高峰 ,同其他各组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 )。光镜下HIBD 2 4～ 96h神经元坏死明显加重。结论　新生大鼠HIBD可诱导Caspase 1mRNA的表达 ,可能参与了新生儿HIBD的形成。     

缺氧缺血后新生鼠脑组织caspase-3mRNA表达变化及其意义

目的　观察新生大鼠缺氧缺血后脑组织caspase 3mRNA表达动态变化 ,进一步探讨缺氧缺血诱导新生鼠神经元凋亡的机制及意义。方法　制备新生鼠HIBD模型 ,随机分为假手术对照组、HIBD 6h、2 4h、3d、5d组 ,每组 5只动物。应用RT PCR方法测定了大鼠脑组织caspase 3mRNA的表达。结果　 7日龄Wistar大鼠假手术对照组即有一定水平caspase 3mRNA表达 ,HIBD 6h组表达增加(与对照组比较有显著性差异 ,P <0 0 5 ) ,HIBD 2 4h其表达呈高峰 ,此后逐渐下降 ,HIBD 5d仍维持较高水平 (与HIBD 6h相比有显著性差异 ,P <0 0 1)。结论　缺氧缺血可诱导新生鼠脑组织caspase 3mRNA表达 ,其过度表达在HIBD后神经元凋亡的调控中起一定作用 ,针对caspase 3的治疗对策为围生期缺氧缺血脑损伤打开了新视窗     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织MMP-9和TIMP-1表达的动态变化研究

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的发生机制.方法 建立新生大鼠HIBD模型,随机分为假手术组及HIBD 6 h、12 h、24 h、48 h、72 h组,每组6只.观察脑组织大体病理学改变.采用Real-time Q-PCR方法测定大鼠脑组织MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达.结果 (1)新生大鼠HIBD后12～48 h脑水肿明显,可见点状软化坏死灶.(2)假手术组大鼠MMP-9 mRNA表达水平极低,HIBD组大鼠在缺氧缺血6 h表达开始增高,24 h达高峰,此后渐渐下降,但72 h仍维持较高的水平,与假手术组相比差异有非常显著性(P＜0.01).(3)假手术组大鼠TIMP-1 mRNA表达水平极低,HIBD组大鼠在经历缺氧缺血6、12、24h,TIMP-1 mRNA表达水平有微弱升高,与假手术组相比差异有显著性(P＜0.05),但48 h后TIMP-1 mRNA表达下降到假手术组水平(P＞0.05).(4)MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值在假手术组接近1:1,HIBD组缺氧缺血12 h后比值升高,在48 h达到高峰,72 h有所下降,但仍高于假手术组(P＜0.01).结论 新生大鼠HIBD后可诱导MMP-9 mRNA表达,而MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达的失衡可能参与了HIBD的发病过程.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠c-fos蛋白表达的意义

目的观察新生大鼠脑缺血时c-fos蛋白在海马区的表达特点，探讨c-fos蛋白表达与缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的关系。方法48只7日龄新生SD大鼠随机分为对照组6只和实验组42只。给动物吸入含有920mL／L氮气和80mL／L氧气混合气体建立新生大鼠HIBD动物模型，分别在脑损伤后不同时间点（0．5、2、4、12、24、48、72h）断头处死动物，取海马组织，用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及c-fos蛋白表达情况。结果海马区c-fos蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现，2h达到高峰，持续至4h渐减低并持续至72h，各时间点阳性凋亡细胞的出现与c-fos蛋白呈负相关（r=-0．57P〈0．05）。结论c-fos蛋白强表达于HIBD新生大鼠的海马缺血区和缺血周边区的神经元，与神经元的存活或死亡有一定联系。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化

目的 了解缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的变化.方法 通过结扎7 日龄新生大鼠一侧颈总动脉,吸入低浓度氧复制缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的动物模型,并没假手术对照(NC)组,两组分别于HIBD后1 h、4 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d取心脏组织,应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,SP法检测心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 NC组偶见心肌阳性凋亡细胞1～4个/mm~2,各时间点阳性细胞数差异无统计学意义(F=0.5,P>0.05).HIBD组12 h心肌阳性凋亡细胞开始增多,为(14.40±3.21)个/mm~2;72h达高峰,为(26.80 ±2.28)个/mm~2,12～72 h各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05);7 d阳性细胞数减少,但仍高于NC组.NC组大鼠心肌组织Bax呈阳性表达,Bcl-2呈弱阳性表达.HIBD组Bax于24 h开始增高.72 h表达最明显,7 d时表达有所降低,24 h～7 d表达高于NC组(P<0.05);Bel-2于24 h表达开始增高,以后缓慢增高,72 h达高峰,24 h～7 d较NC组表达增高,差异有统计学意义(P<0.05).HIBD组Bcl-2/Bax比值逐渐降低.Bax、Bcl-2的表达与凋亡细胞数之间均星直线正相关(r=0.921、0.980,P均<0.01).Bcl-2/Bax的比值与凋亡细胞数无相关性(r=0.702,P>0.05).结论 HIBD新生大鼠心肌细胞存在凋亡,心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达增加,且与心肌细胞凋亡有关.     

钙蛋白酶抑制剂3对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨钙蛋白酶抑制剂3（MDL 28170）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用及机制。方法将新生7dSD大鼠随机分为对照组、HIBD组及钙蛋白酶抑制剂．3治疗组（MDL组）,分别于HI后6、24、72h取材,采用实时荧光定量PCR技术检测μ-calpain mRNA变化,免疫印迹法检测μ-calpain及caspase-3活性蛋白表达,TUNEL法观察大脑皮质凋亡细胞数;并计数HI后24h海马CA1区神经元死亡数。结果脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA在6h即增高,24h达到高峰（P〈0．05）;μ-calpain蛋白质的活化片段76000与总片段80000比值6h即高于对照组（P〈0．05）,24h达到高峰（P〈0．01）,72h仍处于较高水平（P〈0．05）;caspase-3活性蛋白质在HI后24h达到高峰（P〈0．01）,72h降至对照组水平（P〉0．05）;损伤侧大脑皮质凋亡细胞随着时间延长逐渐增多,24h达到高峰,72h与对照组差异仍有统计学意义（P〈0．01）;24h时HIBD组CA1区神经元死亡数显著高于对照组（P〈0．01）。予MDL 28170干预后,MDL6h及24h组μ-calpain及caspase-3活性蛋白质表达、凋亡细胞数均较同时间点HIBD组减少（P〈0．05）,同时24h CA1区神经元死亡数明显减少（P〈0．05）;MDL28170虽然能降低μ-calpain mRNA的表达量,但与HIBD组相比差异不明显（P〉0．05）。结论HI后μ-calpain基因及蛋白质表达增加,参与了HIBD的发生;钙蛋白酶抑制剂-3可通过抑制μ-calpain及caspase-3蛋白质表达,对抗细胞坏死和凋亡,发挥脑保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠基质金属蛋白酶-9和紧密连接蛋白occludin的表达变化

目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA及紧密连接(tightjunction,TJ)蛋白occludin mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用和意义.方法 36只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为对照组及HIBD 3h、6h、24h、48h、72h组,每组6只.观察HIBD后结扎侧大脑半球的大体形态变化,同时采用Real-time Q-PCR方法测定脑皮层组织MMP-9 mRNA和occludin mRNA的表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后24～48 h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2)对照组大鼠MMP-9 mRNA表达水平极低(0.793 3±0.0859),在HIBD 3h组其表达开始增高(1.153 3±0.1291),24h达高峰(3.488 3±0.1759),72h仍维持较高的水平(1.6250±0.1157),与对照组比较,HIBD各时间点MMP-9 mRNA的表达均明显升高,差异有显著性(P＜0.05).(3)对照组大鼠occludin mRNA表达水平较高(21780±0.0773),在HIBD 3h组其表达开始降低(1.718 6±0.1168),24h降至最低(0.9066±0.0602),72h仍维持较低水平(1.5966±0.0799),与对照组比较,HIBD各时间点occludin mRNA的表达均明显降低,差异有显著性(P＜0.05);(4)缺氧缺血后各时间点MMP-9mRNA的表达与occludin mRNA的表达呈负相关(γ=-0.815,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后MMP-9表达升高,TJ蛋白occludin表达减少,提示它们可能参与了HIBD的发病过程.     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡影响

目的研究参附注射液对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠海马神经元凋亡的影响。方法实验分成两部分：1.流式细胞术检测缺氧缺血（HI）前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元凋亡率;2.免疫组织化学测HI前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bcl-2、Bax蛋白表达。建立新生大鼠HIBD模型。每组实验随机分为4组：假手术组（S）,9 g/L盐水对照组（C）,参附预处理组（P）,参附治疗组（SF）。结果SF和P组海马神经元凋亡情况明显低于C组（P〈0.01,〈0.05）,且Bcl-2表达显著增多（P〈0.05,〈0.01）,而Bax表达明显下调（P〈0.05,〈0.01）。结论参附注射液可明显上调新生大鼠HIBD后海马神经元Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少HIBD新生大鼠海马神经元凋亡发生。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的 研究Rho GDP解离抑制因子(Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)mRNA 及Bcl-2 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用和机制.方法 30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD 6 h和48 h组,每组10只.采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real-time RT-PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2) HIBD6 h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为(1.40±0.12)％.HIBD 48 h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到( 15.86±0.98)％.缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平较高(4.12±0.74、2.55±0.65),在HIBD 6 h后二者表达开始下降(3.19±0.77、1.96±0.36),48 h降低更加明显(1.04±0.18、1.06±0.17),与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2 mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)缺氧缺m后各时间点RhoGDI2 mRNA的表达和Bcl-2 mRNA的表达呈正相关(r=0.831,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平降低,提示Rh0GDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生.     

缺氧缺血性脑损伤新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶活性变化

目的　研究缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶 (COX)活性变化。方法　50只 3d新生猪随机分为实验组和对照组 (假手术组 )。实验组制成HIBD模型后置空气中 ,根据在空气中放置时间分 4组 (0h组 ,2 4h组 ,48h组 ,72h组 ) ,每组 10只。每只新生猪分离左侧海马皮层线粒体 ,用分光光度计测定其COX活性 ;采用SDS -PAGE分析线粒体蛋白改变。结果　 1.0h组COX活性与对照组无显著性差异(P >0 .0 5) ,再灌注时开始下降 ,2 4h组活性最低 (P <0 .0 5) ,然后逐渐回升 ,但 72h组仍未恢复至对照水平(P <0 .0 5)。 2 .SDS -PAGE示 2 4h组、48h组和 72h组线粒体蛋白成分和结构与对照组比较有明显差异。结论　HIBD后再灌注线粒体COX活性下降 ,线粒体蛋白成分和结构发生明显变化 ,此为线粒体能量代谢障碍的直接原因 ,也是HIBD中线粒体对神经元凋亡起关键作用的理论基础。     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型脑组织神经细胞凋亡及超氧化物歧化酶和脂质过氧化物的影响

目的探讨高压氧(HBO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型脑组织神经细胞凋亡和超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(MDA)的影响。方法新生7d龄健康SD大鼠随机分为4组:空白对照组(n=68),假手术组(分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤,n=66),HIBD组(模型制作采用经典的Rice法,n=60),HBO组(HIBD后行HBO治疗,1h/次/d,最长治疗7d,n=66)。TUNEL试剂盒检测脑组织凋亡的神经细胞,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力(nU/ml)和化学比色法测定MDA含量(μmol/L)。结果(1)缺氧缺血后不同时间HIBD组皮质和海马神经细胞凋亡明显增多,24h达高峰后逐渐下降;HBO组凋亡细胞数较HIBD组明显减少,但仍较空白对照组和假手术组高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)缺氧缺血后HIBD组SOD含量下降,HBO治疗后SOD的含量较HIBD组升高,且随着治疗时间的延长SOD的水平逐渐升高,24h达高峰,然后逐渐下降,各组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)缺氧缺血后HIBD组MDA含量明显升高,18至24h达高峰,随着时间的推移逐渐下降;HBO治疗后MDA含量较HIBD组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HBO治疗可减轻HIBD后神经细胞凋亡,机制可能与HBO诱导脑组织SOD的表达,增强组织的抗氧化应激损伤有关。     

AQP-4 mRNA在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达及与脑水肿的关系探讨

目的观察水通道蛋白4 mRNA(aquaporin-4,AQP-4 mRNA)在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达,探讨其变化及与脑水肿发生的可能关系。方法健康7日龄SD大鼠共240只,随机分为对照组120只和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组)120只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后,吸入8%O21h,建立HIBD模型。对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物(各时间点动物24只),进行脑含水量观察,RealtimePCR检测脑组织AQP-4 mRNA表达。结果HIBD组6、24、48h和72h脑组织含水量均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4 mRNA表达在48h内呈下降趋势,72h出现恢复,但仍低于对照组(P<0.05)。结论AQP-4 mRNA在脑组织表达下降可能与脑水肿的发生有关,我们推测AQP-4可能参与了HIBD时脑水肿的调节机制。     

药物干预幼大鼠缺氧缺血性脑损伤与p53蛋白表达的研究

目的通过检测缺氧缺血性脑损伤(HIBD)幼大鼠脑组织中p53蛋白的表达和一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,探讨HIBD的发病机制;了解神经节苷酯(GM1)和胞二磷胆碱干预对HIBD的影响。方法80只Wistar幼大鼠随机分四组;对照组、缺氧缺血组、GM1组、胞二磷胆碱组。17日龄制作HIBD模型,24 h后处死检测脑组织中p53蛋白的表达和NO、NOS、SOD含量及组织形态学的变化。结果缺氧缺血组NO、NOS含量高于其他三组(P<0.05);缺氧缺血组与胞二磷胆碱组SOD含量低于对照组和GM1组(P<0.05);缺氧缺血组p53蛋白表达高于其他三组(P<0.01),GM1和胞二磷胆碱组p53蛋白表达高于对照组(P<0.01);组织形态学改变显示,缺氧缺血组变性、坏死严重,GM1组与胞二磷胆碱组次之,对照组正常。结论NO和自由基引起的组织损伤可能诱导p53蛋白表达导致HIBD。GM1和胞二磷胆碱能改善脑组织NO、NOS、SOD含量和p53的表达,提示GM1和胞二磷胆碱对HIBD有一定的保护作用。     

Therapeutic effect of placenta-derived mesenchymal stem cells on hypoxic-ischemic brain damage in rats

Background

Oxidative stress is involved in the development of hypoxic-ischemic brain damage (HIBD). In this study, we investigated the therapeutic effects of placenta-derived mesenchymal stem cells (PD-MSCs) and explored the NF-E2-related factor-2/heme oxygenase-1 (Nrf2/HO-1) signaling pathway in treating HIBD.

Methods

P7 rats were subjected to hypoxic-ischemic brain injury and randomly divided into four groups (control, HIBD, HIBD+PD-MSCs, and HIBD+fibroblasts). Forty-eight hours after the induction of HIBD, 5×10⁵ of PD-MSCs were injected into cerebral tissue in the HIBD+PD-MSCs group, while the same dose of fibroblasts were injected in the HIBD+fibroblasts group. Morris Water Maze, gross and pathological changes were tested at P28. The level of malondialdehyde (MDA) was detected in rats’ hippocampus. RT-PCR and western blot analysis were used to evaluate the changes of Nrf2/HO-1.

Results

The HIBD group showed significantly longer escape latency and a lower frequency of original platform crossing in the Morris Water Maze compared with the control group. Rats receiving PD-MSCs showed significant improvement of HIBD. The pathological changes were evident after HIBD, but ameliorated in the PD-MSCs group. Compared with the control group, HO-1 and Nrf2 were up-regulated at gene and protein levels in the HI brain, beginning at 6 hours and peaking at 48 hours (P<0.05). The expression of HO-1 and Nrf2 in the PD-MSCs treatment group was more pronounced than in the HIBD group (P<0.01). PD-MSCs also decreased MDA production in the brain tissue.

Conclusion

These results demonstrate that PD-MSCs have neuroprotective effect during the treatment of HIBD and that the mechanism may be partly due to alleviating oxidative stress.

     

白藜芦醇甙对新生大鼠HIBD后脑组织细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 探讨白藜芦醇甙(PD)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响.方法 7日龄SD大鼠54只随机分为假手术组、HIBD自然恢复组和PD治疗组,采用经典的Rice方法制备HIBD动物模型,用免疫组织化学方法观察各组大鼠脑皮质微血管内皮ICAM-1的表达.结果 假手术组少许脑...     

外源性端粒酶逆转录酶基因转染对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的 探讨端粒酶逆转录酶（TERT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后细胞凋亡的影响。方法 将72只新生大鼠分为假手术组、空质粒组、HIBD组和TERT组。用改良Rice法制备新生大鼠HIBD模型。采用苏木精-伊红染色法观察脑组织病理改变。空质粒组和TERT组分别于术后0.5 h,经侧脑室注射pcDNA3.1空质粒或TERT真核表达质粒pcDNA3.1-TERT。采用Western blot法检测各组大鼠脑组织TERT、凋亡诱导因子（AIF）和活化型半胱氨酸蛋白酶3（CC3）的蛋白表达水平;采用TUNEL法检测各组神经细胞凋亡情况。结果 与假手术组相比,HIBD组、空质粒组和TERT组大脑皮层中TERT蛋白表达增加（P < 0.01）;与空质粒组和HIBD组相比,TERT组TERT蛋白表达明显增加（P < 0.01）。与假手术组相比,空质粒组和HIBD组AIF和CC3蛋白表达、细胞凋亡指数均显著增加（P < 0.01）;与空质粒组和HIBD组相比,TERT组AIF和CC3蛋白表达、细胞凋亡指数均明显减少（P < 0.01）。结论 TERT可抑制缺氧缺血诱导的神经细胞凋亡,在新生大鼠HIBD中具有一定的神经保护作用。     

新生鼠缺氧缺血再灌注后海马p-CREB c-fos表达的变化(英文)

目的：探讨新生鼠脑缺氧缺血再灌注后的神经保护机制。方法：7d龄SD新生鼠7窝(每窝选用8只,共56只),随机分为假手术对照组、缺氧缺血脑损伤组。经弹性管穿线阻断右颈总动脉3h,低氧(8％O_2和92％N_2混合气)1h,制备HIBD模型。3h后剪开扎线予再灌注,彩色多普勒监测右侧颈总动脉血流。免疫组化检测磷酸化的CREB和c-fos在不同时间点(再灌注3h,6h,12h,24h,48h,72h和7d及假手术后24h)海马区的表达。Thionin染色观测神经元凋亡情况。结果：HIBD再灌注3h,24h新生鼠右侧海马p-CREB表达达高峰,7d后下降至假手术组水平;c-fos表达6h达高峰,24h稍降,48h又升高,7d后显著降低但仍高于对照组(P< 0.01)。Thionin染色发现:再灌注24h右侧海马CA1区已有明显的凋亡,但7d后神经元无明显丢失。结论：缺氧缺血再灌注后CREB磷酸化可能经信号转导调节c-fos的表达,这对保护损伤侧海马锥体神经元,尤其是敏感的CA1区神经元是非常重要的。[中国当代儿科杂志,2003,5(1):12-16]