艾灸不同腧穴对KOA大鼠不同组织TNF-α、MMP-13表达的影响

目的 观察艾灸不同腧穴对膝骨性关节炎（KOA）大鼠血清及关节软骨与滑膜TNF-α、MMP-13表达的影响,探讨艾灸不同腧穴对KOA大鼠的特异性调节作用。方法 将大鼠随机分为空白组（Con）、模型组（KOA）、模型+足三里艾灸组（ST36）、模型+阳陵泉艾灸组（GB34）、模型+犊鼻艾灸组（ST35）,每组8只。选择关节腔注射MIA溶液的方法制备KOA模型。ST36、GB34、ST35组每日艾灸30 min,7天为1个疗程,共3个疗程。分析各组大鼠的机械刺激痛阈值（MWT）,番红固绿染色及OARSI评分,血清、关节软骨与滑膜的TNF-α、MMP-13的表达情况。结果 与Con组比,KOA组足底机械痛阈值下降,OARSI评分、血清与关节软骨和滑膜TNF-α以及血清、关节滑膜MMP-13的表达均明显升高（P<0.001,P<0.05）。与KOA组比,3个治疗组足底机械痛阈值上升,OARSI评分、血清TNF-α和MMP-13、软骨TNF-α均降低（P<0.001,P<0.05）,软骨MMP-13无明显变化（P>0.05）;ST36组滑膜TNF-α和MMP-13低表...     

益肾活络逐痛汤对膝骨关节炎大鼠软骨损伤及骨微结构的影响

目的 探讨益肾活络逐痛汤对膝骨关节炎大鼠软骨损伤和骨微结构的作用及机制。方法 通过剪断大鼠右后膝关节前交叉韧带建立膝骨关节炎大鼠模型,假手术组只切开皮肤不剪断前交叉韧带,将造模成功的大鼠分为模型组、塞来昔布组及益肾活络逐痛汤低、中、高剂量组,各给药组灌胃给予相应剂量药液,假手术组和模型组灌胃给予生理盐水。给药前后测定大鼠行为学变化。给药结束后,检测大鼠血清IL-6、TNF-α水平,HE染色、甲苯胺蓝染色、番红固绿染色及Mankin评分评价关节软骨损伤情况,免疫组化染色分析关节软骨COL-Ⅱ、MMP-13、p-p38和NF-κB p65蛋白表达,Micro-CT分析骨微结构。结果 益肾活络逐痛汤可改善膝骨关节炎大鼠行为学变化(P<0.05,P<0.01);降低血清IL-6、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01);降低软骨组织MMP-13、p-p38和NF-κB p65蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高COL-Ⅱ蛋白表达(P<0.01);升高软骨下骨BMD、Tb.Th、Tb.N、BV/TV值(P<0.05,P<0.01)...     

积雪草苷对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响及机制研究

目的:探讨积雪草苷(ASS)对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤和骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)信号通路的影响。方法:采用前交叉韧带切断术(ACLT)加内侧半月板切除术(MMx)诱导建立膝骨关节炎大鼠模型,建模后分为KOA组、ASS低剂量组(ASS-L组,16 mg/kg)、ASS高剂量组(ASS-H组,32 mg/kg)、ASS+si-NC组(32 mg/kg ASS+100 ng LV-si-NC载体)、ASS+si-OPG组(32 mg/kg ASS+100 ng LV-si-OPG载体),另设假手术(Sham)组,每组12只。给予相应的药物干预2周后,通过机械缩爪阈值(PWT)和热缩爪潜伏期(PWL)评估大鼠疼痛行为,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红(HE)和番红O/固绿染色观察关节软骨组织病理学变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测软骨组织基质金属蛋白酶(MMP-13)、Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、聚集蛋白聚糖(Agg...     

基于p38 MAPK信号通路探讨苍膝通痹胶囊对KOA大鼠关节软骨的保护作用

目的:观察苍膝通痹胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:将60只4周龄SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为空白组,模型组,二甲基亚砜(DMSO)组,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组,每组10只。除正常组外,其余各组采用改良Hulth法建立KOA模型,造模成功后,苍膝通痹胶囊组每日给予0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊溶液灌胃,SB203580组每日给予0.015 g·kg~(-1)的SB203580溶液灌胃,苍膝通痹胶囊联合SB203580组组每日给予含0.015 g·kg~(-1)SB203580及0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊的混合溶液灌胃,DMSO组给予1%DMSO溶液灌胃,模型组和空白组给予生理盐水灌胃,用药干预4周后处死、取材。苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-tine PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨组织中p38 MAPK信号通路中相关因子p38,p-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA及蛋白的表达水平,免疫组化法检测p-p38的定位表达。结果:与正常组比较,模型组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著上调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著下调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著上调(P0.01);与模型组比较,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著下调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著上调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著下调(P0.01)。结论:苍膝通痹胶囊可有效保护KOA大鼠软骨组织,其机制可能与靶向阻断p38 MAPK信号通路有关。     

独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠软骨细胞代谢，BMP-7及SIRT1表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨细胞代谢、骨形成蛋白-7(BMP-7)及沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)的影响,为独活寄生汤的临床应用补充理论依据。方法:采用Hulth法建立KOA模型大鼠,模型成功后采用酶原消化法培养KOA软骨细胞;另将40只大鼠分为独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg~(-1))及硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖胶囊0.3 g·kg~(-1)),灌胃14 d后处死取血清;将培养细胞分为正常组、模型组、独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组(对应剂量组大鼠血清培养)及硫酸氨基葡萄糖胶囊组(硫酸氨基葡萄糖组大鼠血清培养);采用结晶紫法检测各组软骨细胞增殖能力;采用荧光原位末端转移酶标记法(TUNEL)法检测各组软骨细胞凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组软骨细胞中基质金属蛋白酶-13(MMP-13),MMP-3,Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ),聚集蛋白聚糖(Aggrecan),BMP-7及SIRT1 mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞中MMP-13,MMP-3,ColⅡ,Aggrecan,BMP-7及SIRT1的表达。结果:(1)与正常组软骨细胞比较,模型组细胞增殖能力明显降低,与模型组细胞比较,独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组软骨细胞增殖能力提高(P0.01);(2)与正常组软骨细胞比较,模型组细胞凋亡数量明显增加,与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组细胞凋亡数量明显降低(P0.01);(3)与正常组软骨细胞比较,模型组细胞MMP-13,MMP-3表达升高,ColⅡ,Aggrecan,BMP-7及SIRT1下降(P0.01);与模型组比较,低剂量组细胞中MMP-13,MMP-3 mRNA及蛋白表达无明显变化;硫酸氨基葡萄糖组及中、高剂量组细胞中MMP-13,MMP-3 mRNA及蛋白表达明显下降,且剂量越高上述蛋白及mRNA表达越低;硫酸氨基葡萄糖组及低、中、高剂量组细胞中ColⅡ,Aggrecan,BMP-7及SIRT1表达升高,且随剂量的增高而升高(P0.01)。结论:独活寄生汤含药血清可通过增加KOA软骨细胞内BMP-7及SIRT1的表达,增加KOA软骨细胞合成代谢、抑制分解代谢,从而起到抑制KOA软骨细胞凋亡,促进软骨细胞再生的作用,进而起到治疗KOA的目的。     

太白通络凝胶膏对兔膝骨关节炎炎性因子及关节软骨的影响

目的:分析太白通络凝胶膏对膝骨关节炎兔软骨细胞凋亡的抑制作用及炎性因子表达水平的影响,并探讨其作用机理。方法:采用改良Hulth法制备膝骨关节炎兔模型,ELISA检测兔关节液IL-6、IL-1β、TNF-α含量变化情况;免疫组化检测关节软骨中MMP-13、TGF-β1、Col-Ⅱ表达水平;取兔膝关节软骨制作石蜡切片,并用苏木精-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝(TB)染色,用改良Mankins标准进行评分。结果:太白通络凝胶膏可降低兔膝关节液中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平,差异有统计学意义(P0.05)。太白通络凝胶膏可提高兔膝关节软骨组织中TGF-β1、Col-Ⅱ的表达水平,降低MMP-13表达水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论:太白通络凝胶膏能降低兔膝关节液及关节软骨中IL-6、IL-1β、TNF-α、MMP-13的表达,促进TGF-β1、Col-Ⅱ的表达,缓解膝关节软骨细胞的凋亡,从而对关节软骨起到保护及修复的作用。     

基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响

目的基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL-1β、TNF-α水平;Western blot及RT-PCR检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF-κB p65入核表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α水平上升(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达上调(P0.05,P0.01),CollagenⅡ蛋白及mRNA表达下调(P0.01),NF-κB p65入核表达升高(P0.05)。与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL-1β、TNF-α水平降低(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达下调(P0.05,P0.01),NF-κB p65入核表达降低(P0.05,P0.01);散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P0.05,P0.01)。结论散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF-κB p65入核表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL-1β、TNF-α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展。     

火针对膝骨关节炎模型大鼠血清IL-1β、TNF-α、MMP-13表达的影响

目的 观察火针对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响。方法 将36只SD大鼠分为造模组23只和空白组13只,建立KOA模型。造模组和空白组随机抽取3只比较Mankin’s评分进行造模鉴定。将造模组剩余20只大鼠随机分为模型组和火针组,每组10只。火针组进行火针治疗,隔天1次,治疗4周。治疗前后对3组大鼠进行改良Lequesne MG行为学评分评估,治疗后检测3组大鼠血清IL-1β、TNF-α、MMP-13含量。结果 与空白组比较,造模组Mankin’s评分明显升高（P <0.05）。治疗前造模组改良Lequesne MG行为学评分高于空白组（P <0.05）;治疗后火针组Lequesne MG行为学评分低于模型组（P <0.05）。治疗后火针组血清IL-1β、TNF-α、MMP-13表达低于模型组（P <0.05）。结论 火针能通过降低血清IL-1β、TNF-α、MMP-13表达减轻软骨损伤。     

火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎鼠关节形态及软骨LOXL2的影响

目的:探讨火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)大鼠行为学、关节形态及软骨中赖氨酰氧化酶相关蛋白2(LOXL2)影响性。方法:选择30只健康雄性大鼠,10只作为对照不作任何处理。20只大鼠建立KOA模型,成模后随机分成2组,分别予普通针刺和火针膝周密刺,1次/3 d,连续6次。观察各组大鼠Leauesne MG评分、关节软骨细胞情况,外周血及关节软骨转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、LOXL2水平变化。结果:治疗后火针组Leauesne MG评分中的局部疼痛刺激反应、步态、关节活动范围、关节肿胀度较对照组、模型组差异有统计学意义(P<0.05)。血清及关节软骨MMP-3、TGF-β1、TNF-α含量水平显著低于模型组(P<0.05),LOXL2显著高于模型组(P<0.05)。火针组电镜下软骨细胞形状规则、细胞核完整且饱满,微绒毛少量存在,内质网丰富,有散在的染色质。结论:火针膝周密刺能减轻K0A关节软骨损伤,降低炎性反应,改善软骨LOXL2水平,这可能是火针治疗KOA一个作用机制。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨加味二仙颗粒治疗KOA的作用

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨加味二仙颗粒治疗绝经期膝骨关节炎的作用。方法:将SD雌性大鼠分为假手术组、模型组、西乐葆组、加味二仙颗粒高、中、低剂量组,采用双侧卵巢切除8周后膝关节腔注射木瓜蛋白酶结合L-半胱氨酸复制大鼠绝经后KOA模型。造模后每天灌胃给药1次,4周后检测大鼠血清雌二醇(E2)水平和相关基因蛋白的表达并观察膝关节组织病理变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清E2水平显著下降(P<0.01),关节软骨Wnt-4及β-catenin mRNA表达显著升高、GSK-3βmRNA表达显著降低(P<0.05),膝关节软骨表面粗糙,软骨层明显变薄;与模型组对比,加味二仙颗粒组大鼠E2水平有明显提高(P<0.01),膝关节软骨Wnt-4及β-catenin mRNA表达显著降低(P<0.05),Ⅱ型胶原密度升高,MMP-13密度降低,膝关节软骨表面回复平整,软骨细胞数量较多且密集规整。结论:加味二仙颗粒能够提高体内E2水平,通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响软骨细胞影外基质降解和软骨细胞凋亡,从而保护膝关节软骨,发挥治疗绝经期膝骨关节炎的作用。     

基于LXRs/NF-κB信号通路对A型滑膜细胞的调控探讨壮骨健膝方的作用机制北大核心CSCD

目的观察壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的兔A型滑膜细胞肝X受体(LXRs)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨壮骨健膝方治疗膝骨关节炎(KOA)滑膜炎症的机制。方法制备壮骨健膝方含药血清并采用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-MS/MS)进行质量控制(龙胆苦苷885 ng/mL、阿魏酸185 ng/mL)。将兔A型滑膜细胞随机分为空白组和LPS组,LPS组经LPS诱导后建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后随机分为模型组、壮骨健膝方组、LXRα抑制剂组、核受体辅助抑制因子(N-CoR)抑制剂组,分别予以10%空白血清、10%含药血清、10%含药血清+LXRα抑制剂、10%含药血清+N-CoR抑制剂,空白组予10%空白血清干预。干预24 h后,收集各组细胞及上清液,Western Blot、RT-qPCR检测各组细胞中LXRα、N-CoR、P50、P65蛋白及m RNA的表达,ELISA检测各组上清液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及MMP-13含量。结果与空白组比较,模型组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均升高(P<0.01),LXRα、N-CoR蛋白与mRNA表达下降(P<0.01)。与模型组比较,壮骨健膝方组P50和P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P<0.01),LXRα、N-CoR蛋白与mRNA表达升高(P<0.01);LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P<0.01,P<0.05)。与壮骨健膝方组比较,LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组LXRα、N-CoR蛋白及mRNA表达下降(P<0.01),P50、P65蛋白及mRNA表达升高(P<0.01,P<0.05),两组IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13含量升高(P<0.01,P<0.05)。结论壮骨健膝方可通过上调LXRα和N-CoR蛋白及mRNA表达,下调P50、P65蛋白及mRNA表达,从而抑制LXRs/NF-κB信号通路的传导,减少下游炎症相关指标IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13的分泌,最终达到控制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

补肾活血汤含药血清干预体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化及补肾活血汤联合骨髓间充质干细胞治疗大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的:观察补肾活血汤含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)成软骨分化的作用,及补肾活血汤联合BMSC治疗大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用。方法:从4周龄SD大鼠股骨中分离培养BMSC,以8周龄SD大鼠制备补肾活血汤含药血清和空白血清。选择体外培养的第3代BMSC,分为3组,分别加入含10%空白血清的DMEM培养液(空白组)、含10%空白血清的DMEM培养液及基础诱导液(诱导组)、含10%补肾活血汤含药血清的DMEM培养液及基础诱导液(含药血清组),干预后分别进行甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色,并以Real-time PCR法检测各组细胞中Ⅱ型胶原mRNA、聚集蛋白聚糖mRNA的水平。取18只8周龄SD大鼠,随机分为模型组、BMSC组及联合组,每组6只。通过切断右前交叉韧带对各组大鼠进行KOA造模。造模术后1周,向BMSC组与联合组大鼠右侧膝关节腔内注射5×10~6个·m L^-1BMSC-PBS溶液(每次0.1 m L,每周1次),向模型组大鼠右侧膝关节腔注射等量PBS溶液;联合组在关节腔注射的基础上每天以补肾活血汤灌胃(每次4 m L,每天1次)。干预8周后处死大鼠,取右侧膝关节软骨及软骨下骨组织,HE染色后在光学显微镜下观察。结果:干预7 d后,含药血清组细胞甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞质呈蓝紫色;空白组和诱导组染色均为阴性。干预14 d后,含药血清组染色进一步加深,染色面积增大,呈明显的紫蓝色;空白组染色为阴性,诱导组可见少量蓝紫色染色。干预7 d、14 d后,Ⅱ型胶原免疫组化染色结果显示,空白组细胞均未见明显阳性染色,诱导组及含药血清组细胞胞浆和细胞间质内呈棕黄色或棕褐色染色,其中干预14 d后含药血清组细胞内染色深于诱导组。干预7 d后,3组大鼠BMSC中Ⅱ型胶原mRNA水平、聚集蛋白聚糖mRNA水平比较,组间差异均有统计学意义(1.02±0.23,1.33±0.11,2.11±0.23,F=47.181,P=0.000;1.03±0.32,1.36±0.16,1.93±0.10,F=26.508,P=0.000)。含药血清组的Ⅱ型胶原mRNA水平、聚集蛋白聚糖mRNA水平均高于空白组和诱导组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),诱导组的Ⅱ型胶原mRNA水平、聚集蛋白聚糖mRNA水平均高于空白组(P=0.017;P=0.029)。药物干预8周后,模型组大鼠膝关节软骨表面粗糙,破坏严重,可见明显纤维增生;BMSC组软骨可见部分修复,表面仍较粗糙,细胞纤维化不明显;联合组关节软骨面光滑,软骨表面磨损不明显,无软骨表面纤维化。结论:补肾活血汤含药血清能有效促进体外培养的大鼠BMSC向软骨细胞分化;补肾活血汤灌胃联合BMSC膝关节腔内注射能有效防治KOA大鼠膝关节软骨破坏。     

低频超声促透威灵仙对早期兔膝骨关节炎的干预作用及机制研究

目的观察低频超声促透威灵仙治疗新西兰白兔膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法将新西兰白兔30只随机分为正常组、假手术组、模型组、威灵仙外敷组、超声透水组、超声促透威灵仙组,每组5只。采用切断膝关节前交叉韧带方法造成典型的KOA模型,各组不同干预后,采用KOA程度指数(Lequesne指数)评价兔KOA严重程度,大体观察,甲苯胺蓝染色、HE染色及软骨病理(Mankin′s)评分观察组织病理变化,ELISA法检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α水平;Western Blot法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Wnt3、β-连环蛋白(β-catenin)及Ⅱ型胶原的表达。结果以威灵仙有效成分常春藤皂苷元浓度为参考标准,超声输出功率为30 W时促透效果最好。与模型组比较,威灵仙外敷组和超声促透威灵仙组Lequesne指数有明显下降,软骨组织Mankin′s评分亦显著降低(P0.05);血清IL-1β和TNF-α含量均明显减少,且超声促透威灵仙组更低(P0.05);超声促透威灵仙干预后,膝关节软骨中MMP-13、β-catenin表达显著减少,Ⅱ型胶原的表达有一定的上升,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论超声电导仪在输出功率为30 W时促透治疗KOA的效果最佳,超声促透威灵仙干预的机制可能与其抑制Wnt 3/β-catenin信号通路及其靶基因MMP-13的表达有关。     

强骨宝对去卵巢大鼠疲劳性损伤诱发膝骨关节炎关节软骨的修复作用

目的：观察强骨宝对去卵巢大鼠疲劳性损伤诱发膝骨关节炎（KOA）的作用,以探讨该方对关节软骨的保护机制。方法：将24只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组及强骨宝组,每组8只。空白对照组不进行手术干预,模型组及强骨宝组均采用去卵巢联合跑台运动构建KOA模型。术后连续灌胃30d,于第30天灌胃后行大鼠膝关节MRI影像学检测并取材。采用HE染色及Mankin评分观察、评价膝关节病理学改变,ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及软骨寡聚基质蛋白（COMP）含量,Western blot法检测关节软骨中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-7(ADAMTs-7)的表达情况。结果：与模型组比较,强骨宝组MRI关节液信号减弱,且无关节囊局部信号增强情况;强骨宝组软骨表面更加平滑,潮线层次清晰,炎症细胞浸润减少;关节软骨Mankin评分显著降低（P<0.01）;血清中IL-1β、TNF-α、COMP含量均显著下降（P<0.01）;关节软骨中MMP-3、ADAMTs-7蛋白表达显著降低（P<0.0...     

吴门芪藤汤对佐剂性关节炎大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡的影响

目的观察吴门芪藤汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡的影响及其可能机制。方法从40只雄性健康SD大鼠中选30只建立AA模型,并随机分为模型组、阳性药组、中药组,每组10只;其余10只为空白组。造模成功后第2 d开始给药,模型组、空白组均予0.9%氯化钠注射液10 mL/kg灌胃;阳性药组予美洛昔康片10 mL/kg(3.4 mg/kg)灌胃;中药组予吴门芪藤汤10 mL/kg(24 g生药/kg)灌胃。每日灌胃1次,灌胃周期21 d。观察实验过程中各组大鼠一般状态变化;测定大鼠血清炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及基质金属蛋白酶3(MMP-3)含量;观察各组大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织病理学变化;比较各组大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数变化;观察各组大鼠膝骨关节滑膜组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达水平。结果与空白组比较,其他各组大鼠10～14 d后开始出现多发性的关节炎症,病变累及到未注射弗氏完全佐剂的大鼠膝骨关节及足爪,表现为关节局部程度不同的红、肿、热及功能障碍。随着病程延长,多发性关节炎可反复出现,部分大鼠可在病程不同时期于耳、尾部出现数量不等、程度不一的红斑、炎性小结,并有脱毛、鼻黏膜充血、渗血、精神萎靡等关节外症状。与模型组比较,阳性药组、中药组大鼠关节炎症状明显减轻。模型组大鼠IL-1β、TNF-α及MMP-3水平均较空白组升高(P0.05),说明造模成功。阳性药组、中药组IL-1β、TNF-α及MMP-3水平均低于模型组(P0.05)。中药组IL-1β高于阳性药组(P0.05)。模型组大鼠膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数均高于空白组(P0.05)。阳性药组、中药组膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数均低于模型组(P0.05)。阳性药组与中药组膝骨关节滑膜、软骨组织细胞凋亡指数组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组膝骨关节滑膜组织中JNK蛋白表达水平上调(P0.05)。中药组膝骨关节滑膜组织中JNK蛋白表达水平低于模型组和阳性药组(P0.05)。结论吴门芪藤汤可能通过抑制JNK信号通路,减少炎症介质释放,降低炎性刺激,从而抑制膝骨关节滑膜、软骨细胞过度凋亡,减轻膝骨关节炎症状。     

祛寒逐风颗粒对骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的:观察祛寒逐风颗粒对膝骨性关节炎(KOA)大鼠炎症反应和NF-κB介导NLRP3炎性小体活化的影响。方法:建立骨性关节炎大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、祛寒逐风颗粒组(3,6,9 g/kg)和阳性药组,测量大鼠机械性痛阈值和膝关节直径,采用酶联免疫吸附实验测量大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6的含量变化,采用RT-PCR法测量大鼠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA含量,采用苏木精-伊红染色和阿尔新蓝染色观察组织的病理学变化,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17的蛋白水平。结果:与模型组比较,祛寒逐风颗粒组和阳性药组大鼠的机械性痛阈值增大,膝关节直径变小,血清中IL-1β、TNF-α和IL-6含量减少,组织中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平下调,软骨损伤和纤维化缓解,软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17蛋白表达下调。结论:祛寒逐风颗粒可能通过抑制NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化显着改善KOA大鼠的炎症反应并缓解疼痛,对骨关节炎发挥治疗作用。     

加味阳和汤含药血清联合转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

目的 探究加味阳和汤含药血清联合转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响。方法 全骨髓贴壁培养法分离培养SD大鼠BMSCs,并进行流式细胞术鉴定;CCK-8实验筛选出加味阳和汤含药血清促进BMSCs增殖的最佳有效浓度;将第3代BMSCs分为空白对照组、加味阳和汤含药血清组(含药血清组)、TGF-β1组(阳性对照组)、加味阳和汤含药血清联合TGF-β1组(联合组),诱导分化21 d后,阿利新蓝染色检测软骨特异性基质蛋白糖胺聚糖生成;RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨分化标记基因SOX-9、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的基因蛋白表达。结果 (1)阿利新蓝染色显示,空白对照组未见明显软骨特异性基质蛋白糖胺聚糖(呈蓝色)产生,其余3组可见明显糖胺聚糖生成,其中联合组效果最佳;(2)与空白对照组比较,Aggrecan、ColⅡ及SOX-9的基因蛋白表达均明显升高(P<0.05),其中联合组效果最佳(P<0.01),且明显优于含药血清组和阳性对照组。结论 加味阳和汤含药血清在一定浓度范围...     

独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的?观察独活寄生汤（DHJSD）对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠中Wnt/β-连环蛋白（β- catenin）信号通路相关蛋白表达的影响，探讨DHJSD治疗骨关节炎（OA）的机制。方法?选取32只SD大鼠，按随机数字表法分为DHJS组、模型（M）组、硫酸氨基葡萄糖（GS）组和正常（NC）组。除NC组外，其余3组予双膝关节腔内注射0.2 mL 4%木瓜蛋白酶法建立KOA模型。造模后DHJS组予DHJSD灌胃，GS组予GS灌胃，NC、M组给予等体积纯净水灌胃。连续给药8周后进行双膝关节X线扫描，观察大鼠膝关节影像学变化并评分，ELISA法检测血清基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、白介素-1β（IL-1β）含量，HE染色、番红O固绿染色法观察膝关节软骨病理改变并进行Mankin评分，采用实时聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）及免疫组化法检测软骨组织中Wnt/β- catenin通路相关蛋白的mRNA及蛋白表达水平。结果?与NC组比较，M组大鼠膝关节间隙狭窄，软骨层损耗，X线评分、Mankin评分升高（P<0.05），DHJS组和GC组上述改变减轻，X线评分及Mankin评分下降（P<0.05）；DHJS组血清及软骨MMP-13含量减少（P<0.05）；下调软骨β-catenin、Wnt3a mRNA水平以及β-catenin、IL-1β蛋白表达水平（P<0.05），上调骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）mRNA 和蛋白表达水平（P<0.05）。结论?DHJSD能通过下调Wnt3a/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平，抑制MMP-13表达、促进BMP-2表达，从而改善大鼠KOA的影像学及病理学改变，发挥软骨保护作用。     

仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎大鼠关节软骨损伤的修复作用及机制研究

目的观察仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨损伤的修复作用并探讨其机制。方法 SD大鼠100只,根据体质量随机分成5组:对照组、模型组、仙鹿健骨汤各剂量组;模型组、仙鹿健骨汤各剂量组构建KOA大鼠关节软骨损伤模型,并于造模成功第1天开始给予相应药物灌胃,持续给予3个月,对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠注射液。试验结束后,测定大鼠膝骨性骨关节炎软骨Mankin′s评分、p38m RNA、NF-κB mRNA、p38、NF-κB、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白水平。结果与对照组比较,模型组、仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-кB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P 0.05);与模型组比较,仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显降低(P 0.05),且随着仙鹿健骨汤给药剂量的增加,KOA软骨Mankin′s评分、p384、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P 0.05)。结论仙鹿健骨汤能明显减轻软骨细胞损伤程度,对KOA关节软骨损伤具有一定程度的修复作用,其机制与仙鹿健骨汤组能通过抑制炎症信号通路p38、NF-κB m RNA、蛋白表达水平的表达进而抑制细胞因子MMP-9、MMP-13、IL-1β的表达有关。