温阳振衰颗粒对肾间质纤维化模型大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响

目的 观察温阳振衰颗粒对肾间质纤维化大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响,从NLRP3/Caspase-1通路探讨其干预机制。方法 50只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、抑制剂组和温阳振衰颗粒组,每组10只。以结扎并剪断左侧输尿管建立肾间质纤维化大鼠模型,分别予相应药物干预,连续14 d。试剂盒检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）含量,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织转化生子因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达,Western blot和RT-PCR检测肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素（IL）-18、IL-1β蛋白和mRNA表达,免疫荧光双染法检测细胞焦亡。结果 与假手术组比较,模型组大鼠SCr、BUN含量显著增加（P<0.01）,肾小管扩张,炎性细胞浸润,间质纤维化明显,肾组织TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白和mRNA表达显著升高（...     

红萸饮对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/Caspase-1/ASC细胞焦亡通路的影响

目的：探析红萸饮对溃疡性结肠炎（UC）小鼠细胞焦亡通路的调控机制。方法：将40只C57/BL6小鼠随机分为正常组、模型组、红萸饮组（1.5g/kg）和美沙拉秦组（0.50g/kg）,采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液1周的方法造模。造模后正常组和模型组予蒸馏水,红萸饮组和美沙拉秦组予相应药物灌胃7d,期间观察小鼠体质量、粪便等一般情况及疾病活动指数评分（DAI）;HE染色观察结肠黏膜变化;微板法测定结肠组织中乳酸脱氢酶（LDH）水平;ELISA法检测血清中IL-18和IL-1β的含量;TUNEL荧光法检测结肠组织细胞凋亡水平;免疫组化法检测通路蛋白（ASC、Caspase-1、NLRP3）变化;Western blot法检测焦亡关键蛋白（IL-1β、IL-18、GSDMD）的表达。结果：与正常组比较,造模后动物体质量降低,DAI评分上升,结肠黏膜损伤严重,结肠组织蛋白上清中LDH含量显著升高（P<0.01）,血清炎症因子（IL-1β、IL-18）含量均显著增加（P<0.01）,TUNEL染色阳性明显,结肠组织焦亡通路蛋白（ASC、Caspase-1、NLRP3）表达量均显著增...     

基于IL-1β探讨矢志方对高尿酸血症小鼠肾组织OAT1/3表达的影响

目的 基于炎症因子白细胞介素（IL）-1β观察矢志方对高尿酸血症（HUA）小鼠肾组织有机阴离子转运蛋白1/3(OAT1/3)表达的影响,探讨其作用机制。方法 32只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、非布司他组和矢志方组,每组8只。正常组予生理盐水灌胃,其余各组予氧嗪酸钾250 mg/kg灌胃制备HUA小鼠模型。非布司他组和矢志方组造模同时分别按6 mg/kg、562.5 mg/kg灌胃相应药物,正常组和模型组予生理盐水灌胃,连续2周。HE和Masson染色观察肾组织病理变化,Western blot和免疫荧光染色检测肾组织IL-1β、OAT1、OAT3及肝细胞核因子（HNF）1α、HNF4α表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠肾小管管壁变薄,管腔扩张,炎性细胞浸润,肾间质纤维组织增生,肾组织IL-1β蛋白表达显著升高（P<0.001）,OAT1、OAT3、HNF1α、HNF4α蛋白表达显著降低（P<0.01,P<0.001）;与模型组比较,矢志方组小鼠肾小管管壁变薄、管腔扩张、纤维组织增生有所减轻,炎性细胞浸润减少,肾组织IL-1β蛋白表达显著降低（...     

张明昊，张童，郭申，赵绅，杜婧雯，俎兆轩，丁妍妍

目的基于NOD 样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/Gasdermin D （GSDMD）通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导J774A.1 巨噬细胞焦亡的调控 机制。方法将分化完全的J774A.1 巨噬细胞分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、 MCC950（NLRP3 特异性抑制剂）组,每组6 个复孔。除空白血浆组外,其余各组以100 mg·L-1 ox-LDL 诱导细 胞,构建细胞焦亡模型。空白血浆组、模型组、MCC950（50 μmol·L-1）组以含10%空白血浆进行培养,左归降 糖舒心方含药血浆组用10%含药血浆培养细胞24 h。采用CCK-8 法测定各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑 制率;采用LDH 释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;采用ELISA 法及免疫荧光法检测细胞白细胞介 素（IL）1β、IL-18 含量及蛋白表达情况;采用Western Blot 法检测NLRP3、Caspase-1 及GSDMD 蛋白表达。 结果与空白血浆组比较,模型组细胞的IL-18、IL-1β 含量及LDH 释放率明显增高（P＜0.01）,IL-1β、IL-18 及NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白表达明显上调（P＜0.01）。与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细 胞的IL-18、IL-1β 含量及LDH 释放率明显下降（P＜0.01）,IL-1β、IL-18 及NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋 白表达明显下调（P＜0.01）。结论左归降糖舒心方含药血浆能够抑制ox-LDL 诱导的J774A.1 巨噬细胞焦亡状 态及炎性反应,其作用机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD 通路,下调细胞炎性因子IL-18、IL-1β 表达 有关。     

益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）细胞焦亡通路,探讨益气养阴活血方防治糖尿病肾病（DKD）肾脏损伤的可能作用机制。方法 随机将50只雄性SD大鼠分为正常组8只、造模组42只。造模组高糖高脂饮食6周后予一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组（8.33 mg·kg^-1）、益气养阴活血方低、高剂量组（11、22 g·kg^-1）。连续灌胃6周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）及24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均显著升高（P<0.01）,肾组织病变程度严重,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各药物组FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）,肾组织病变程度得到改善,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,以益气养阴活血方高剂量组效果最佳。结论 益气养阴活血方可通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制细胞焦亡,缓解DKD大鼠炎症反应,减轻肾脏病理损伤。     

黄芪甲苷调控MAP3K8介导的细胞焦亡及巨噬细胞极化交互作用防治动脉粥样硬化的机制

目的：探讨MAP3K8介导的细胞焦亡及巨噬细胞极化的交互作用在动脉粥样硬化（AS）中的作用及黄芪甲苷干预作用。方法：10只C57BL/6J小鼠为正常组,普通饲料饲养,40只APOE基因敲除小鼠给予高脂饲料喂养复制AS模型,并随机分成模型组,黄芪甲苷低、高剂量组（低、高剂量组）及MAP3K8抑制剂组（抑制剂组）,每组10只。喂养12周后,各组小鼠分别给予对应的药物进行干预,4周后戊巴比妥钠麻醉小鼠后,剥离主动脉组织,采用HE法观察主动脉形态学变化,扫描电镜法观察主动脉细胞焦亡情况,Western Blot及RT-PCR法检测小鼠主动脉巨噬细胞焦亡及极化相关蛋白及mRNA表达情况。结果：与正常组比较,模型组小鼠主动脉斑块明显,肌层结构紊乱,细胞焦亡水平显著升高,MAP3K8、p-NF-κB p65、p-JNK、NLRP3、ASC、AIM2、IL-18、IL-1β、Caspase-1、Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达水平及TNF-α、MIP1α、IL-18、IL-1β、STAT1 mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,TGF-β、IL-4、IL-10、Arg-1、STA...     

滋肾丸对糖尿病肾病小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化的影响

目的 研究滋肾丸（ZSW）对糖尿病肾病（DN）小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化（EMT）的作用及机制,为ZSW治疗DN提供科学依据。方法 自发性糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组（1.0 mg·kg^-1）及ZSW高、中、低剂量（6.0,3.0,1.5 g·kg^-1）组,非糖尿病db/m小鼠为正常组。模型组和正常组给予等体积去离子水灌胃,其余各组使用相应药物干预12周。每2周检测尾静脉空腹血糖（FBG）;每4周检测尿白蛋白/肌酐（ACR）,N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）和胱抑素C（CysC）;给药12周后摘眼球取血,血清检测尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）;光镜及投射电镜观察肾组织病理学改变;免疫组化法观察分析肾小管上皮EMT标志物表达强度;原位末端标记法（TUNEL）染色观察分析肾小管上皮细胞的核损伤水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EMT标志物、核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体相关蛋白及焦亡相关炎症因子的蛋白表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测上述蛋白的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著升高,肾组织出现病理损伤,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度、蛋白及mRNA表达显著改变,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率、肾组织焦亡相关炎症因子和NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,ZSW及达格列净组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著降低（P<0.01）,肾组织病理损伤不同程度减轻,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度显著改变（P<0.01）,蛋白及mRNA表达不同程度改变（P<0.05,P<0.01）,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率及肾组织焦亡相关炎症因子的蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）,NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达不同程度降低（P<0.05,P<0.01）。结论 ZSW抑制肾小管上皮细胞焦亡及EMT,可能是其治疗DN的作用机制。     

中藏医名方六味锦鸡儿汤散降尿酸作用机理研究

目的：探讨藏药六味锦鸡儿汤散对高尿酸血症（HUA）大鼠尿酸代谢及肾脏炎症的调控作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为对照组（A），模型组（B），别嘌醇组（C），六味锦鸡儿汤散高（D）、中（E）、低（F）剂量组，每组8只。除A组外，各组采用灌胃氧嗪酸钾（1.5 g/kg）、腺嘌呤（0.1 g/kg）造模4周，造模成功后D(1.6 g/kg)、E(0.8 g/kg)、F(0.4 g/kg)组采用六味锦鸡儿汤散水煎液进行灌胃，C组灌胃别嘌醇（30 mg/kg）,A组、B组灌胃生理盐水（10 mL/kg），治疗6周后，麻醉大鼠，收集样本，采用生化检测血清SUA、Cr、BUN含量及XO活性，WB检测肾脏GLUT9、URAT1、OAT1、OAT3、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达情况。结果：B组在SUA、Cr、BUN及血清XO活性水平上较A组显著升高（P<0.05）,D、E、F组较B组显著降低（P<0.05）;B组肾脏GLUT9、URAT1蛋白相对表达量较A组显著升高（P<0.05），经治疗显著降低（P<0.05）;B组肾脏OAT...     

六味补气方对慢性阻塞性肺疾病细胞焦亡的 干预作用及机制研究

目的 研究六味补气方对慢性阻塞性肺疾病（COPD）细胞焦亡的影响。方法 按照随机数字表法将大鼠分为正常对照组、模型组、桂龙咳喘宁组和六味补气方低、中、高剂量组,每组10只。采用烟熏加脂多糖（LPS）气管滴入的方法建立COPD大鼠模型。药物干预后,检测大鼠肺功能;支气管肺组织形态学改变;同时检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）和Gasdermin D-N端（GSDMD-N）的改变;肺泡灌洗液（BALF）中炎症因子白介素18（IL-18）、白介素1β（IL-1β）水平;肺组织活性氧（ROS）水平;肺组织NLRP3、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白表达以及mRNA水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺功能降低（P<0.01）,肺组织损伤,细胞膜破裂,IL-18、IL-1β和ROS水平升高（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD、和ASC蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组比较,各用药组肺功能改善,肺组织损伤和细胞焦亡减轻,IL-18、IL-1β和ROS水平下降（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD和ASC蛋白表达和mRNA水平降低（P<0.01）,其中以六味补气方高剂量组改变最为显著。结论 六味补气方可降低COPD大鼠IL-18、IL-1β和ROS水平,减轻气道炎症和氧化应激,阻抑肺组织损伤和细胞的焦亡,增加肺功能,其机制可能是通过调控ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

犀角地黄汤加减方抑制焦亡相关蛋白减轻脓毒症致急性肺损伤机制研究

目的 探讨犀角地黄汤加减方通过抑制焦亡相关蛋白减轻脓毒症小鼠肺损伤的机制。方法 将小鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型,于造模后12 h处死小鼠,双抗体夹心酶联免疫吸附法测定小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平,留取完整左肺组织行病理切片,评估肺损伤情况,留取右肺组织提取RNA和蛋白,RT-PCR、Western blotting定量检测肺组织中NF-κB、NLRP3和Caspase-1、GSDMD的表达。结果 与模型组比较,抑制剂组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平显著降低（P <0.01）,肺组织中Caspase-1、GSDMD基因和蛋白的表达下调,差异均具有显著统计学意义（P <0.01）;与模型组相比,中药组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平显著降低（P <0.01）,肺损伤减轻,肺组织中NF-κB、NLRP3和Caspase-1、GSDMD基因和蛋白的表达下调,差异均具有统计学意义（P <0.01）,且中药高、低剂量组间的差异有统计学意义（P &l...     

氧化苦参碱通过抑制心肌细胞焦亡改善脂多糖诱导的心肌损伤北大核心

目的:探讨氧化苦参碱对脂多糖(LPS)诱导心肌损伤的保护作用及对心肌细胞焦亡的影响。方法:将50只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林(25 mg/kg)阳性对照组及氧化苦参碱低(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,每组10只。各给药组予相应剂量药物灌胃,正常对照组和模型组予相应体积生理盐水灌胃,1次/d,共8 d。第8天给药1 h后腹腔注射LPS建立小鼠心肌损伤模型。采用心脏超声监测小鼠心功能;HE染色观察小鼠心脏组织病理学变化;免疫组织化学染色观察Cleaved Caspase-1表达;ELISA检测小鼠血清IL-18、TNF-α含量;Western Blot检测小鼠心脏组织中焦亡通路关键蛋白(NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β)表达。体外实验采用LPS作用原代大鼠心肌细胞12 h,给药组以相应药物预保护1 h,MTT法检测细胞活力;Calcein-AM/PI染色观察心肌细胞焦亡;Western Blot检测焦亡相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,体内实验中模型组小鼠出现心功能障碍,心脏组织出现炎性细胞浸润,血清炎症因子含量及焦亡相关蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);体外实验中,模型组心肌细胞活力显著降低,焦亡相关蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,体内实验中氧化苦参碱能改善心肌损伤小鼠心功能,减少心脏组织炎性细胞浸润,降低血清炎症因子含量及焦亡关键蛋白表达(P<0.05或P<0.01);体外实验中,氧化苦参碱能提高心肌细胞活力,降低焦亡相关蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:氧化苦参碱可改善LPS诱导的心肌损伤,其作用机制可能与抑制心肌细胞焦亡有关。     

降尿酸方对高尿酸血症大鼠肾损伤及肾组织EZH2表达的影响

目的观察降尿酸方对高尿酸血症大鼠肾损伤及zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)表达的影响,并探讨其作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、降尿酸方组和别嘌醇组,每组10只。采用氧嗪酸钾(1 500 mg/kg)灌胃制备高尿酸血症大鼠模型,降尿酸方组和别嘌醇组分别予降尿酸方16 g/kg、别嘌醇25 mg/kg灌胃,正常组和模型组予生理盐水灌胃。12周后检测大鼠血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(SUA)、24 h尿蛋白(UTP),HE和Masson染色观察肾组织病理变化,TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,免疫组化检测肾组织Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、CleavedCaspase-3、EZH2蛋白表达,Westernblot检测肾组织CleavedCaspase-3、Bax、Bcl-2、EZH2、组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、SUA和24hUTP水平明显升高(P<0.05),肾小管管腔扩张伴炎性细胞浸润,肾间质纤维化,凋亡细胞明显增加,肾组织ColⅠ、C...     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

目的 探讨灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)细胞焦亡信号通路的影响。方法 将50只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、倍他乐克组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹低剂量组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹高剂量组（1.8 mg/kg）,每组10只,连续灌胃3周,末次给药24 h后行急性心肌梗死造模手术,假手术组只穿线不结扎。造模24 h后取材检测相关指标。利用TTC染色测量大鼠心肌梗死面积,采用苏木精-伊红（HE）、铁-苏木素（Heidenhain）染色观察心肌组织病理改变,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血清白介素（IL）-1β、IL-18水平,采用Western Blot检测大鼠心肌组织NLRP3、Caspase-1水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠均出现不同程度的心肌梗死范围（P<0.01）,心肌组织发生炎症反应、心肌缺血情况,大鼠血清IL-1β、IL-18水平升高（P<0.01）,心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平升高（P<0.01）;...     

降尿酸方对尿酸性肾病大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的 观察降尿酸方对尿酸性肾病（UAN）大鼠肾脏细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌醇组和降尿酸方组,每组8只。采用氧嗪酸钾（1 500 mg/kg）和腺嘌呤（100 mg/kg）混合灌胃制备UAN大鼠模型,造模同时别嘌醇组和降尿酸方组分别予别嘌醇（25 mg/kg）和降尿酸方（16 g/kg）灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续4周。HE染色观察肾组织病理变化,六胺银染色检测肾组织尿酸盐结晶含量,透射电镜观察肾小管上皮细胞超微结构,Westernblot检测肾组织p53、Caspase-3、Bax蛋白表达,免疫荧光检测肾组织Bcl-2蛋白表达,TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾小管管壁变薄,管腔扩张,有炎症细胞浸润,肾小管损伤评分明显增加（P<0.001）,尿酸盐结晶含量明显增加（P<0.001）,肾小管上皮细胞损伤,p53、Caspase-3、Bax蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达有降低趋势,肾小管上皮细胞凋亡率明显升高（P<...     

芪地糖肾方对糖尿病肾病足细胞焦亡及MAPK14/RELA/Caspase-8信号通路的影响

目的 探讨芪地糖肾方（QDTS）调控糖尿病肾病（DN）足细胞焦亡的分子机制。方法 体内实验将db/db小鼠分为模型组、芪地糖肾方（3.34 g·kg^-1）和缬沙坦胶囊（10.29 mg·kg^-1）组,db/m小鼠作为正常组,每组8只,连续干预8周。末次给药后处死小鼠,观察小鼠肾脏病理变化及焦亡活性指标NOD样受体蛋白3（NLRP3）、Gasdermin D蛋白（GSDMD）和白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白表达水平。体外实验将小鼠足细胞分为正常糖组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖）,高糖组（35 mmol·L^-1葡萄糖）,二甲基亚砜（DMSO）组（35 mmol·L^-1葡萄糖+200 mg·L^-1 DMSO）和QDTS组（35 mmol·L^-1葡萄糖+200 mg·L^-1芪地糖肾方冻干粉）,干预48 h后检测足细胞中NLRP3、GSDMD和IL-1β蛋白的表达水平。使用网络药理学方法构建QDTS治疗DN的药物-成分-靶标-疾病交互网络,分析其调控足细胞焦亡的关键信号通路并在体内、体外实验进行验证。结果 与正常组比较,模型组小鼠肾小球肥大,肾小球基底膜增厚,部分节段伴有明显足细胞足突融合,小鼠肾脏中NLRP3、GSDMD和IL-1β蛋白表达升高,小鼠肾脏中丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A（RELA）和胱天蛋白酶-8（Caspase-8）蛋白表达升高（P<0.05）;与模型组比较,QDTS组小鼠肾脏病理损伤明显减轻,QDTS组和缬沙坦组小鼠肾脏中NLRP3、GSDMD和IL-1β蛋白表达降低（P<0.05）,QDTS组和缬沙坦组小鼠肾脏中MAPK14、RELA、Caspase-8蛋白表达降低（P<0.05）。网络药理学结果显示QDTS调控DN细胞焦亡的靶点有16个,其中MAPK14、RELA和Caspase-8是关键靶点。与正常糖组比较,高糖组小鼠足细胞中NLRP3、GSDMD和IL-1β蛋白表达升高（P<0.05）,小鼠足细胞中MAPK14、RELA和Caspase-8蛋白表达升高（P<0.05）;与高糖组比较,QDTS组小鼠足细胞中NLRP3、GSDMD和IL-1β蛋白表达降低（P<0.05）,QDTS组小鼠足细胞中MAPK14、RELA和Caspase-8蛋白表达降低（P<0.05）。结论 QDTS减轻DN足细胞损伤与其调控MAPK14/RELA/Caspase-8信号通路,抑制足细胞焦亡有关。     

外感清热解毒方对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨外感清热解毒方对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠的影响及作用机制。方法：20只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、外感清热解毒方组、miR-495抑制剂组。气管滴注LSP（5 mg/kg）成功复制ALI大鼠模型，给予相应干预。定量PCR检测大鼠肺组织miR-495水平；苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理改变；酶联免疫吸附试验检测肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-18、IL-10炎症介质和髓过氧化物酶（MPO）活性；蛋白质免疫印迹法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关微粒蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、GSDMD蛋白表达。结果：与对照组比较，模型组大鼠肺组织miR-495表达下调（P<0.05），出现病理损伤，BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量升高，IL-10含量下降，MPO活性增强；肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（均P<0.05）。与模型组和miR-495抑制剂组比较，外感清热解毒方组大鼠肺组织miR-495表达上调（P<0.05），病理损伤减轻，BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量下降，IL-10含量升高，MPO活性减弱；NLRP3、ASC表达下调（均P<0.05），Caspase-1表达差异无统计学意义（P>0.05）。除对照组外，均可见GSDMD蛋白切割，外感清热解毒方组蛋白切割表达水平明显低于模型组和miR-495抑制剂组。结论：外感清热解毒方对ALI大鼠具有保护作用，其机制可能与调控miR-495/NLRP3/GSDMD信号通路，减轻炎症反应，抑制细胞焦亡有关。     

抵挡汤对高糖环境下泡沫细胞焦亡炎症级联反应的作用机制

目的 基于泡沫细胞焦亡探讨抵挡汤对其高糖环境下炎症级联反应的影响。方法 采用氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL，100 mg·L^-1）诱导泡沫细胞焦亡模型，设置正常组（5.5 mmol·L^-1 葡萄糖）、泡沫细胞组（100 mg·L^-1 ox-LDL）、高糖组（33.3 mmol·L^-1葡萄糖）、抵挡汤组（10%含药血清）、核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）抑制剂（MCC950，10 nmol·L^-1）组。分别采用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验观察细胞膜损伤情况，免疫荧光法检测胱天蛋白酶-1（Caspase-1）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测焦亡通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1、消化道皮肤素D（GSDMD）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）的表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-18、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-1α（IL-1α）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放情况。结果 与正常组比较，泡沫细胞组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达显著上调（P<0.01），炎症因子IL-1β、IL-18、MCP-1、IL-1α、TNF-α释放显著增加（P<0.01）；与泡沫细胞组相比，高糖组NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达显著上调（P<0.01），IL-1β、IL-18、MCP-1、IL-1α、TNF-α释放显著增加（P<0.01），抵挡汤及NLRP3抑制剂MCC950均可抑制高糖导致的NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达的增加，显著降低IL-1β、IL-18 、MCP-1、IL-1α、TNF-α的释放（P<0.01）。结论 抵挡汤可通过抑制高糖环境下NLRP3/Caspase-1通路诱导的泡沫细胞焦亡，减轻炎症级联反应。     

黄芩素调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡减轻小鼠急性肺损伤作用

目的 探究黄芩素对急性肺损伤（acute lung injure,ALI）小鼠的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）焦亡通路的调控作用。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Caspase-1抑制剂VX-765（30 mg/kg）组和黄芩素低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,15 mg/kg）,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予黄芩素或VX-765（30 mg/kg）干预。造模24 h后,检测小鼠肺湿干质量比以评价肺肿胀;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织中巨噬细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-18、IL-1α和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;采用Western blotting检测肺组织NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达。人源单核细胞白血病THP-1细胞加入100 nmol/L佛波酯诱导24 h,贴壁后随机分为对照组、模型组、VX-765（500 nmol/L）组和黄芩素低、中、高剂量（3、10、30 μmol/L）组,除对照组外,采用1 μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）刺激THP-1细胞建立细胞炎症模型,给予黄芩素或VX-765干预,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和IL-1α水平;LDH试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用膜联蛋白-V-PE（Annexin-V-PE）/7-氨基放线菌素（7-aminoactinomycin,7-AAD）试剂盒评价细胞焦亡情况;Western blotting检测细胞NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达。结果 在ALI小鼠模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组小鼠肺肿胀程度明显减轻（P<0.01）,肺组织损伤评分显著降低（P<0.01）,肺组织中巨噬细胞炎性病变得到缓解,血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-1α水平明显降低（P<0.05、0.01）,肺组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01）。在细胞炎症模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组THP-1细胞IL-1β、IL-18、IL-1α分泌量显著降低（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达水平明显降低（P<0.05、0.01）,NLRP3炎症小体组装明显被抑制（P<0.05、0.01）,LDH释放量及细胞焦亡率显著降低（P<0.01）。结论 黄芩素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,从而改善LPS诱导的小鼠ALI。     

槐绛方调控NLRP3/Caspase-1通路抗溃疡性结肠炎损伤的机制研究

目的 探讨槐绛方对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3，NLRP3）/半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）通路的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组以及槐绛方低、中、高剂量（0.2、0.4、0.8 g/kg）组，对照组给予正常饮用水，其余各组自由饮用3%葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）水溶液诱导UC模型，连续7 d。造模同时各给药组灌肠不同剂量槐绛方，对照组和模型组灌肠等体积0.9%氯化钠溶液，每日记录各组小鼠体质量、便血、便形等症状改变，并进行疾病活动指数（disease activity index，DAI）评分，采用苏木素-伊红（HE）染色评估小鼠结肠黏膜组织病理改变，ELISA法检测结肠组织中白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平，Western blotting法检测结肠组织中NLRP3、Caspase-1、Gasdermin D（GSDMD）蛋白表达。结果 与模型组比较，槐绛方明显减缓小鼠体质量下降，有效减轻小鼠结肠炎症状，降低炎症因子（TNF-α、IL-1β）和焦亡相关蛋白（NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N）表达（P<0.05、0.01），对UC损伤有较好的改善作用，且呈剂量相关性。结论 槐绛方具有改善UC小鼠炎症状态、恢复结肠形态、抑制细胞焦亡作用，其作用机制与调控NLRP3/Caspase-1通路密切相关。