寿胎丸对母胎界面Thl/Th2细胞因子和妊娠结局的影响

目的:通过研究寿胎丸对小鼠反复自然流产模型Th1/Th2型细胞因子表达及妊娠结局的影响,探讨寿胎丸在诱导母一胎免疫耐受中的作用机制。方法:设立正常妊娠组(CBA/J×BALB/c)与反复自然流产组(CBA/J×DBA/2),将反复自然流产组孕鼠按怀孕先后顺序随机分为模型组,寿胎丸低、中、高剂量组,从妊娠第1天开始给药,孕14 d后处死孕鼠,计算各组胚胎吸收率,ELISA检测蜕膜及胎盘组织共培养上清细胞因子IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-α的含量。结果:模型组的胚胎吸收率模型高于正常妊娠组,寿胎丸中、高剂量能显著降低反复自然流产孕鼠的胚胎吸收率,寿胎丸低、中、高剂量组均可降低反复自然流产小鼠母胎界面IFN-γ和TNF-α的表达,差异具有统计学意义(P0.05),与正常妊娠组比较,差异无统计学意义;寿胎丸中、高剂量组可升高反复自然流产小鼠母胎界面IL-4,IL-10的表达,差异具有统计学意义(PO.05),与正常妊娠组比较,差异无统计学意义。结论:寿胎丸保胎机制可能是通过调节母-胎界面局部Thl/Th2型细胞因子的表达,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏倚,诱导母-胎免疫耐受,维持妊娠。     

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响

目的:分析寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响,从分子水平探讨寿胎丸安胎的作用机制.方法:50只雌性CBA/J小鼠分别与20只雄性DBA/2和5只雄性BALB/C小鼠按2∶1合笼交配,建立复发性流产模型40只与正常妊娠模型10只.将复发性流产CBA/J×DBA/2孕鼠按妊娠先后顺序随机分为模型组(10只)、寿胎丸低剂量组(10只,3g·kg·d-1)、寿胎丸中剂量组(10只,6g·kg·d-1)和寿胎丸高剂量组(10只,12g·kg·d-1),从妊娠第1天开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,计算各组胚胎丢失率.采用双向电泳结合质谱技术分离和鉴定各组小鼠蜕膜差异表达的蛋白质,并利用生物信息学资源对所鉴定蛋白质的功能进行分析.结果:寿胎丸高、中剂量组胚胎丢失率较模型组均明显降低(p＜0.01),寿胎丸低剂量组胚胎丢失率有所降低,但与模型组相比差异无统计学意义;建立了模型组、正常组、寿胎丸高、中、低剂量组小鼠蜕膜组织的2-DE图谱,通过比较各组双向凝胶电泳图谱的差异,发现并鉴定了30个可能与复发性流产及寿胎丸干预相关的蛋白质,这些蛋白质的功能涉及绒毛外滋养细胞的侵袭、蜕膜组织血管的重建及蜕膜细胞的凋亡等.结论:寿胎丸能够降低复发性流产小鼠胚胎丢失率,具有显著的安胎作用;复发性流产是由多种蛋白质参与的复杂过程,寿胎丸可调节复发性流产小鼠蜕膜组织多种蛋白质的表达,该复方具有多靶点的作用特点.     

正交试验优选减味寿胎丸总黄酮提取工艺

目的：确定减味寿胎丸总黄酮的最佳提取工艺。方法：以芦丁为对照品,利用比色法测定寿胎丸提取液中的总黄酮含量,采用单因素考察及正交试验设计法优选减味寿胎丸中总黄酮的回流提取工艺参数。结果：芦丁对照品在0.112-0.56mg/mL内线性良好（r=0.9998）,回流提取减味寿胎丸总黄酮的最佳条件：乙醇浓度为60%,料液比为1∶10,回流提取2次,每次提取时间为0.5h。结论：本提取工艺简单、合理、稳定,重复性好,可为减味寿胎丸总黄酮提取工艺的确定提供参考依据。     

寿胎丸对反复自然流产小鼠SOCS1基因表达和妊娠结局的影响

目的：探讨寿胎丸对反复自然流产小鼠母胎界面组织SOCSImRNA表达和妊娠预后的影响。方法：采用CBA／J×BALB／c建立正常妊娠模型，CBA／J×DBA／2建立反复自然流产模型，将反复自然流产模型随机分为4组，分别为模型组，寿胎丸低、中、高剂量组，灌胃给药14天后处死小鼠，计算胚胎吸收率，应用半定量RT—PCR法检测小鼠蜕膜与胎盘组织SOCS1mRNA的表达。结果：模型组和寿胎丸低剂量组的胚胎吸收率高于正常组（P〈0．05），寿胎丸中、高剂量组胚胎吸收率低于模型组和寿胎丸低剂量组（P〈0．05），与正常妊娠组没有明显差异（P〉0．05）。SOCSlmRNA在各组均有表达，模型组SOCSlmRNA比正常妊娠组明显升高（P〈0．05），寿胎丸各剂量组SOCS1mRNA表达明显低于模型组（P〈0．05），与正常妊娠组无明显差异（P〉0．05）。结论：寿胎丸可能通过提高反复自然流产小鼠SOCS1mRNA的表达水平，以调控Th1向Th2分化,改善妊娠预后。     

寿胎丸对自然流产小鼠母胎界面SOCS3基因表达影响

目的：探讨寿胎丸对SOCS3基因表达的影响。方法：设立正常妊娠与反复自然流产模型，并将反复自然流产模型小鼠随机分为4组，分别为模型组、寿胎丸低剂量组、寿胎丸中剂量组、寿胎丸高剂量组，应用半定量RT—PCR法检测孕14天自然流产模型蜕膜与胎盘组织SOCS3mRNA的表达。结果：SOCS3在各组均有表达，但模型组的SOCS3表达明显低于正常组（P〈0．05）。寿胎丸中、高剂量组的SOCS3基因表达高于模型组（P〈0．05），与正常妊娠组无明显差异（P〉0．05），寿胎丸低剂量组与模型组无明显差异（P〉0．05）。结论：寿胎丸可能通过提高反复自然流产小鼠模型SOCS3基因的表达水平，以诱导Th2优势表达，以达到治疗反复自然流产的目的。     

寿胎丸对复发性流产模型小鼠胚胎有氧糖酵解关键酶及相关蛋白表达的影响

目的 探讨寿胎丸治疗复发性流产（RSA）的可能作用机制。方法 雌性CBA/J小鼠随机分为正常组、模型组、地屈孕酮组和寿胎丸组，每组14只。正常组雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/c小鼠合笼交配；其余3组为雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠合笼交配建立RSA小鼠模型。寿胎丸组雌鼠从合笼前14天到妊娠第6天或第14天给予寿胎丸1.66 g/（kg·d）灌胃；地屈孕酮组妊娠第1天到妊娠第6天或第14天给予地屈孕酮片0.33 g/（kg·d）灌胃，正常组和模型组雌鼠给予0.4 ml蒸馏水灌胃。各组在妊娠第6天时随机选取8只雌鼠取胚胎组织，检测胚胎组织糖酵解关键酶己糖激酶2 (HK2)、M2-型丙酮酸激酶（PKM2）、乳酸脱氢酶A (LDHA) mRNA和蛋白表达，检测葡萄糖转运体1 (GLUT1)、单羧酸转运体4 (MCT4)和G蛋白偶联受体81 (GPR81)蛋白表达水平。剩余6只雌鼠在妊娠第14天注射台盼蓝染色剂，计算胚胎丢失率。结果 妊娠第14天，正常组雌鼠胚胎丢失率为6.12%，模型组小鼠胚胎丢失率为33.33%，差异有统计学意义（P<0.05）；地屈孕酮组和寿胎丸组胚胎丢失...     

肾虚黄体-抑制大鼠流产模型补肾安胎药效的初步评价

探讨应用寿胎丸对肾虚黄体一抑制（病证结合模型）大鼠流产模型补肾安胎药效的影响。方法：应用羟基脲和米非司酮（RU486）稳定复制SD大鼠肾虚一黄体（病证结合）大鼠流产模型;采用寿胎丸对其进行干预,肉眼观察子宫病变,记录胚胎数,计算流产率;化学发光法检测血清雌二醇（E2）、孕酮（P）的水平。结果：寿胎丸能够明显降低大鼠的流产率、增加胚胎数;提高血清E2及P水平。结论：寿胎丸对肾虚黄体一抑制（病证结合模型）大鼠流产模型具有良好的改善作用,可通过提高激素水平,增强黄体功能,维持妊娠,起到补肾安胎的作用。     

寿胎丸对复发性流产大鼠子宫蜕膜组织AQP表达的影响

目的:研究寿胎丸对复发性流产(RSA)大鼠子宫蜕膜组织中各型水通道蛋白(AQP)表达的影响,初步筛选与RSA相关的水通道蛋白亚型,阐述其可能的安胎机制。方法:选择健康SPF级SD大鼠,将雌鼠与雄鼠2∶1合笼,按妊娠顺序随机分为寿胎丸高、中、低剂量组,地屈孕酮组,模型组及正常妊娠组。除正常妊娠组,其余各组孕鼠在妊娠第1～9天每天下午予羟基脲片水溶液灌胃(450 mg/kg),妊娠第10天早上予米非司酮片水溶液灌胃(4.0 mg/kg)。另外,妊娠第1～9天每日上午,寿胎丸高、中、低剂量组分别予寿胎丸中药液灌胃(2.0、1.0、0.5 g/kg);地屈孕酮组予地屈孕酮水溶液灌胃(3.02 mg/kg);模型组和正常妊娠组予等量0.9%氯化钠注射液灌胃。各组孕鼠均于末次给药24 h后断颈处死,无菌条件下解剖孕鼠取子宫蜕膜组织,采用蛋白印迹法检测各组孕鼠子宫蜕膜组织AQP的表达情况。结果:寿胎丸高、中、低剂量组及地屈孕酮组孕鼠流产率均较模型组降低,差异有统计学意义(P0.05);蛋白印迹结果显示,与正常妊娠组相比,模型组孕鼠子宫蜕膜组织中AQP0、AQP12呈高表达,AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP6、AQP8、AQP9、AQP10、AQP11呈低表达,差异有统计学意义(P0.05),AQP7呈低表达,差异无统计学意义;进行药物干预后,与模型组相比,寿胎丸高、中、低剂量组及地屈孕酮组孕鼠蜕膜组织中AQP0表达水平降低,AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP6、AQP8、AQP9、AQP10、AQP11表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05),AQP12表达无统计学意义。结论:寿胎丸能促进胚胎发育,有效降低RSA孕鼠的胚胎吸收率,可能通过下调蜕膜组织中AQP0的表达,上调AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP6、AQP8、AQP9、AQP10、AQP11的表达,调节母胎界面水液平衡维持妊娠。     

寿胎丸对控制性超促排卵模型小鼠围着床期蜕膜TWEAK/Fn-14表达的影响

目的 研究寿胎丸对控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation, COH)模型小鼠内膜容受性、植入胚胎数及围着床期蜕膜TWEAK/Fn-14动态表达的影响。方法 将ICR系小鼠分为对照组、COH模型组、寿胎丸组。COH模型建立：曲普瑞林+尿促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素(曲普瑞林+HMG+HCG),3组小鼠分别于孕3、5、7天处死，取子宫，HE染色观察子宫内膜形态、腺体和血管，免疫组化法检测着床窗口期子宫内膜TWEAK、Fn-14的分布，RT-PCR、Western-blot检测TWEAK、Fn-14 mRNA和蛋白表达水平，孕第9天计算植入胚胎数。结果 模型组植入胚胎数显著低于对照组，寿胎丸处理后显著提高COH模型组小鼠植入胚胎数(P<0.05);HE染色显示，模型组小鼠子宫内膜厚度、腺体面积、血管数较对照组显著降低(P<0.05),寿胎丸干预后各指标显著升高(P<0.05);免疫组化结果显示，TWEAK主要分布于子宫腔上皮、腺上皮和基质细胞，Fn-14则主要表达与腔上皮和腺上皮细胞；RT-PCR及Western-blot结...     

五味子提取物对苯并(a)芘暴露后早孕期大鼠胚胎血管内皮生长因子及受体表达的影响

目的:通过分析血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及胎盘生长因子(PLGF)在妊娠前苯并(a)芘(BaP)暴露致早孕期大鼠胚胎中的表达,探讨Bap对胎盘血管生成的毒性作用,以及五味子提取物改善胚胎血供、促进胎盘血管再生的作用。方法:将75只SD雌鼠随机分为空白对照组、BaP模型组、五味子低剂量组、五味子中剂量组、五味子高剂量组,每组15只。BaP模型组予BaP [2 mg/(kg·d)],五味子低、中、高剂量组分别予低、中、高剂量五味子提取物[40、200、1000 mg/(kg·d)]和BaP [2 mg/(kg·d)],空白对照组予等体积生理盐水。给药15 d后制备孕鼠模型,于妊娠第9天处死孕鼠,酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)检测大鼠胚胎组织中VEGFA、VEGFR1、VEGFR2及PLGF的表达。结果:BaP模型组大鼠胚胎中VEGFA、VEGFR1、VEGFR2及PLGF水平显著低于空白对照组(P0.05或P0.01);五味子高、中、低剂量组大鼠胚胎中VEGFA、VEGFR1、VEGFR2及PLGF水平均高于模型组(P0.01或P0.05)。结论:妊娠前苯并(a)芘暴露可对早孕期大鼠产生胚胎毒性,影响胚胎血供,造成胚胎血管生成障碍;五味子提取物可能是通过改善胚胎血供,修复胎盘血管损伤、促进胎盘血管再生来发挥对胚胎的保护作用。     

减味寿胎丸对自然流产模型小鼠子宫蜕膜组织中FOXO3及PR蛋白表达的影响

目的 探讨减味寿胎丸治疗自然流产的可能作用机制.方法 实验分为正常妊娠组、流产模型组、地屈孕酮组、减味寿胎丸组,每组6只雌鼠.正常妊娠组交配小鼠品种为CBA/J雌性×BALB/C雄性,其余各组交配小鼠品种为CBA/J雌性×DBA/2雄性构建的小鼠自然流产模型.将小鼠雌、雄按1∶1比例进行配种,次日早上查看雌鼠阴栓,看到...     

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织Tf表达的影响

目的 探讨寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织转铁蛋白(Transferrin,Tf)表达的影响.方法 CBA/J×BALB/C建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立复发性流产模型,将复发性流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为四组,分别为模型组、寿胎丸高剂量组、寿胎丸中剂量组和寿胎丸低剂量组,从妊娠第1天开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,采用免疫组化与蛋白印迹方法检测各组蜕膜组织Tf的表达.结果 模型组与正常组相比,蜕膜Tf表达明显降低,差异有显著统计学意义(P＜0.01);寿胎丸高剂量组与模型组相比,蜕膜Tf表达升高,差异有显著统计学意义(P＜0.01);寿胎丸中、低剂量组与模型组相比,蜕膜Tf表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 寿胎丸通过上调复发性流产小鼠蜕膜组织Tf的表达,从而实现维持妊娠,这可能是其安胎的作用机制之一.     

寿胎丸对RSA模型小鼠子宫蜕膜Annexin A_2及TTR表达影响的研究

目的:分析寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响。方法:建立复发性流产模型。CBA/J×BALB/C建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立复发性流产模型,将复发性流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸高剂量组、寿胎丸中剂量组和寿胎丸低剂量组,从妊娠第1 d开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,采用蛋白印迹和免疫组化方法检测差异蛋白质Annexin A2及TTR的蛋白表达。结果:小鼠模型组与正常组相比,蜕膜Annexin A2表达明显降低,TTR表达明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.01);寿胎丸高、中、低剂量组与模型组相比,蜕膜Annexin A2表达均升高,寿胎丸高剂量组蜕膜TTR表达升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:寿胎丸通过上调Annexin A2、TTR蛋白的表达,从而实现维持妊娠,降低胚胎丢失率,这可能是其安胎的作用机制之一。     

寿胎丸对大鼠卵巢移植术后各级卵泡及黄体的影响

目的:观察寿胎丸对大鼠卵巢移植术后各级卵泡及黄体的影响。方法:将210只Wistar雌性大鼠随机分为7组,每组30只,即自体移植模型组、自体移植+寿胎丸组、异体移植模型组、异体移植+寿胎丸组、异体移植+环孢A(CsA)组、异体移植+CsA+寿胎丸组和正常对照组。各组大鼠于移植术后7、14、21、28、35天分批处死,每次6只。取左侧卵巢,HE染色,光镜下计数整张切片中的各级卵泡和黄体数量。结果:移植后7天,异体移植+寿胎丸组的原始卵泡数比异体移植模型组多(P0.05),异体移植+CsA+寿胎丸组的原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数与黄体数在移植后多个时点均比异体移植模型组多(P0.05)。结论:寿胎丸有抗异体卵巢移植排斥反应的作用。     

寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育毒性的研究

目的 探讨寿胎丸对SD孕鼠胚胎-胎仔发育的毒性,对其生殖安全性进行研究. 方法采用寿胎丸不同剂量对SD孕鼠体内染毒,观察其吸收胎、畸胎等,并观察胎仔内脏、骨骼及胎仔体质发育等异常状况.结果 其不同剂量对孕鼠胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率影响,以及对胎仔内脏、骨骼和体质发育影响,与溶剂对照比较均未见明显差异.结论 寿胎丸药液在本研究所确定的50 g/kg 剂量浓度以下,初步认为对健康育龄SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育无明显毒性.     

寿胎丸对反复自然流产模型小鼠子宫蜕膜蛋白表达的影响

目的从分子水平探讨寿胎丸安胎的作用机制。方法 CBA/J×BALB/C建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立复发性流产模型,将复发性流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为模型组和寿胎丸高、中、低剂量组,从妊娠第1日开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,采用免疫组化方法检测差异蛋白质热休克蛋白27、α-烯醇化酶、转铁蛋白、膜联蛋白 A2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组子宫蜕膜热休克蛋白27、α-烯醇化酶表达明显升高,转铁蛋白、膜联蛋白A2表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,寿胎丸高、中、低剂量组蜕膜热休克蛋白27、α-烯醇化酶表达均降低,膜联蛋白A2表达均升高,寿胎丸高剂量组子宫蜕膜转铁蛋白表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01);寿胎丸中、低剂量组蜕膜转铁蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论寿胎丸通过上述蛋白的表达,从而实现维持妊娠,降低胚胎丢失率,这可能是其安胎的作用机制之一。     

补肾安胎冲剂对流产大鼠细胞因子TNF-αI、L-4的影响

目的：研究补肾安胎冲剂对流产大鼠的保胎机理。方法：将孕鼠随机分为正常组（A组）、模型组、寿胎丸组、补肾安胎冲剂高剂量及低剂量组、黄体酮组（B～F组）6组别自妊娠第1天起灌服生理盐水、寿胎丸、补肾安胎冲剂高低剂量及肌注黄体酮,孕11天B～F组灌服米非司酮,A组灌服生理盐水,24小时后处死,观察各组大鼠的胚胎数、流产情况,检测腹主静脉血中TNF-αI、L-4的水平。结果：模型组大鼠流产率显著升高,TNF-α值升高I,L-4值降低;补肾安胎低、高剂量组可降低流产率,升高血中IL-4、降低TNF-α的水平。结论：补肾安胎冲剂的保胎作用可能与其纠正Th1/Th2免疫失衡状态及降低流产率有关。     

寿胎丸对肾虚-黄体抑制流产模型大鼠雌激素水平的影响

目的 探讨寿胎丸对肾虚-黄体抑制流产模型(病证结合模型)大鼠雌激素水平的影响.方法应用羟基脲和米非司酮制备SD大鼠肾虚-黄体抑制流产模型.给模型大鼠寿胎丸进行干预,肉眼观察子宫病变,记录胚胎数,计算流产率;化学发光法检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)的水平.结果寿胎丸能明显降低大鼠的流产率,增加胚胎数,提高血清E2和P水平.结论寿胎丸对肾虚-黄体抑制流产模型大鼠具有良好的保胎作用,其通过提高雌激素水平、增强黄体功能,维持妊娠,发挥补肾安胎的作用.     

减味寿胎丸对药源性卵巢功能损伤大鼠干预时机的探讨

目的:基于“治未病”学说,以雷公藤多苷致卵巢功能损伤建立大鼠模型,通过对前、后期干预时机的对比研究,探索最佳用药时机,以期指导临床治疗。方法:选取有正常动情周期SD雌性SPF级大鼠90只,随机分成正常组,前、后期干预模型组,前、后期干预补佳乐组,前、后期干预中药高、低剂量组,每组10只。正常组分别于上午9时及下午3时灌服3mL生理盐水,连续30天;早期干预模型组上午9时灌服GTW,下午3时灌服生理盐水;早期干预用药组上午9时灌服GTW,下午3时灌服减味寿胎丸或戊酸雌二醇,均连续30天。后期干预模型组在定时连续灌服GTW30天后,改予3mL生理盐水,晚期干预用药组改予减味寿胎丸或戊酸雌二醇,均连续30天,共60天。结果:前期干预中药组可使约半数大鼠动情周期恢复;可使FSH、FSH/LH明显降低,E2、AMH、INHB水平明显升高;可使卵巢指数明显升高;后期干预组,未见明显性激素及细胞因子的变化。结论:减味寿胎丸前期干预拮抗修复药源性卵巢功能损伤显效,后期干预无效。     

寿胎丸对肾虚流产动物模型母胎界面Th1／Th2细胞因子的影响

目的：研究寿胎丸对大鼠母胎界面Th1／Th2（辅助性T细胞1／辅助性T细胞2）型细胞因子的影响。方法：将sD大鼠随机分为5组,每组8只。造模组造模,寿胎丸组造模同时每天以4．9g／kg寿胎丸水提浓缩液灌胃给药,黄体酮组造模同时每天以4mg／kg黄体酮隔天注射,米非司酮组仅灌服生理盐水和米非司酮,空白组灌服等容积生理盐水。以ELISA法检测各组大鼠蜕膜组织Th1型（IL-2、IFN-γ）／Th2型（IL-4、IL-10）细胞因子的表达差异。结果：寿胎丸具有纠正肾虚流产大鼠母胎界面中Th1／Th2平衡偏移的作用。结论：寿胎丸可降低母体免疫排斥,增强了母胎免疫保护,最终降低肾虚黄体抑制大鼠的流产率,而达到防治流产的作用。