海藻-甘草反药组合在海藻玉壶汤抗丙硫氧嘧啶致甲状腺肿大中的作用研究

目的:探讨海藻-甘草剂量为《中华人民共和国药典》 2015年版规定高限剂量2倍的条件下,海藻-甘草反药组合在海藻玉壶汤抗丙硫氧嘧啶(PTU)致大鼠甲状腺肿大中的作用。方法:Wistar雄性大鼠84只,按体质量随机分为对照组、模型组、阳性药组(优甲乐)、海藻玉壶汤全方组(简称"全方组")、海藻玉壶汤去海藻组(简称"去海藻组")、海藻玉壶汤去甘草组(简称"去甘草组")、海藻玉壶汤去海藻及甘草组(简称"去藻草组"),每组12只。造模期间,除对照组外,其余各组大鼠灌胃给予PTU (10 mg·kg~(–1)),每日1次,共14 d。模型制备成功后,对照组与模型组大鼠灌胃给予去离子水,阳性药组大鼠给予优甲乐(20μg·kg~(–1)),其余各给药组给予相应中药煎液(给药剂量为全方组12.06 g·kg~(–1)、去海藻组9.9 g·kg~(–1)、去甘草组10.26 g·kg~(–1)、去藻草组8.1 g·kg~(–1)),每日给药1次,持续28 d。治疗期间,每隔1 d,除对照组外,其余各组大鼠均灌胃给予PTU以维持模型稳定,剂量依前。给药结束后计算各组大鼠的甲状腺系数;光镜下观察甲状腺组织形态;放射免疫法检测血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)水平。结果:与对照组比较,各组大鼠甲状腺系数显著升高(P0.01);与模型组比较,各中药煎液给药组大鼠甲状腺系数显著降低(P0.01)。光镜下观察大鼠甲状腺组织形态,结果显示,与对照组比较,模型组与阳性药组变化最为显著,甲状腺组织小叶排列紊乱,结构不清,细胞核数目增多(P0.05),上皮细胞增生肥大,细胞直径增加(P0.05),滤泡腔大小不一,形状各异,面积显著减小(P0.05),其余各给药组大鼠甲状腺组织的病变均有一定减轻,其中全方组大鼠甲状腺组织形态与对照组最为接近。与对照组比较,模型组大鼠血清中T3、T4水平显著降低(P0.05),TSH水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,阳性药组、全方组大鼠血清T3、T4水平显著升高(P0.05),TSH水平有降低趋势,但差异无统计学意义。结论:海藻玉壶汤全方及去掉1味或2味反药组合能回调甲状腺肿大大鼠甲状腺系数,改善甲状腺组织病理形态及恢复血清中激素水平,且全方组优于全方去掉1味或2味反药组,由此说明,海藻-甘草反药组合是海藻玉壶汤中关键的药对,对于甲状腺肿大的治疗缺一不可。     

海藻玉壶汤中海藻与甘草不同比例配伍对甲状腺肿大模型大鼠药效及其机制探讨

目的通过观察海藻与甘草不同比例配伍的海藻玉壶汤对丙硫氧嘧啶造成的甲状腺肿大大鼠模型生物效应的影响,筛选出海藻与甘草配比起效的适宜条件,并对其作用机制进行初步探讨。方法将海藻与甘草按照2因素7水平的均匀设计实验原则设置不同配伍比例的海藻玉壶汤,Wistar大鼠120只,随机分为10组,采用ig丙硫氧嘧啶14 d复制动物模型,造模后各组ig给药28 d,实验结束后测定大鼠甲状腺质量,测定血清中三碘甲腺原氨酸(T3)、四碘甲腺原氨酸(T4)、促甲状腺激素(TSH)等甲状腺激素水平,RT-PCR法测定大鼠甲状腺中甲状腺过氧化物酶(TPO)和甲状腺球蛋白(Tg)的m RNA表达。结果海藻玉壶汤中海藻与甘草不同配比在不同程度上均有调节甲状腺激素水平、改善丙硫氧嘧啶所致的甲状腺肿大作用。与模型组比较,配比5组(0.135∶8.32)较模型组TPO m RNA的表达显著升高。海藻玉壶汤配比1组(14.522∶6.24)、5组、6组(29.040∶4.16)的Tg m RNA水平较对照组显著升高。结论海藻玉壶汤中海藻与甘草不同配比在不同程度上均能抑制丙硫氧嘧啶所导致的甲状腺肿大,以配比1组、3组(19.363∶0.54)、6组表现最为明显,其作用机制可能涉及刺激TPO与Tg基因转录的增强。配比1组与配比5组具有促进这种代偿增强的作用,在某种程度上对甲状腺激素水平的恢复起到积极的作用。     

基于均匀设计的海藻玉壶汤中海藻、甘草不同比例配伍对甲状腺肿大大鼠模型心、肾功能影响的实验研究

目的:通过海藻与甘草不同比例配伍的海藻玉壶汤对甲状腺肿大大鼠模型心、肾功能相关指标的检测,筛选海藻与甘草反药组合配伍使用的宜忌条件。方法:按"973"项目组规定的SOP,将海藻与甘草按照2因素7水平的均匀设计实验原则设置不同配伍比例,观察海藻与甘草不同配比的海藻玉壶汤对甲状腺肿大大鼠模型肌酐、尿素氮、肌酸激酶、乳酸脱氢酶以及心、肾组织病理形态的影响。结果:模型组及给药组的肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)含量均未见明显异常,与模型组比较,配比六组(29.04∶4.16)、七组(24.20∶10.40)血清中血钾水平显著升高,血钠水平显著降低(P<0.05);心肌酶水平的变化,阳性药组及各给药组CK水平较模型组显著降低(P<0.05),且降低程度有一定的随着海藻用量的增加而减弱的趋势。配比二组(9.68∶12.49)、三组(19.36∶0.54)、阳性药组具有一定程度的病理形态的改变,但各给药组未表现出较模型组加重的趋势。结论:含海藻与甘草不同配伍比例的复方海藻玉壶汤对甲状腺肿大大鼠模型的心、肾功能无明显影响,是否属于毒性作用有待进一步验证。     

补益强心片对慢性心力衰竭大鼠的保护作用

目的研究补益强心片对慢性心力衰竭大鼠的保护作用。方法 60只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组及补益强心片低、中、高剂量组(0.18、0.36、0.72 g/kg),结扎心脏左冠状动脉前降支的方法建立慢性心力衰竭模型。灌胃给药4周后,超声仪检测血流动力学参数(LVEDd、LVESd、LVEF),ELISA检测BNP、ANP水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、caspase-3、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与模型组比较,补益强心片组血流动力学参数显著改善(P<0.05,P<0.01),BNP、ANP水平,细胞凋亡率,Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论补益强心片对慢性心力衰竭大鼠具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制凋亡有关。     

海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响

目的 观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法 将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组（20 μg·kg^-1）、海藻玉壶汤（HYT）组（12.06 g·kg^-1）、HYT去海藻（HYT-H）组（9.90 g·kg^-1）、HYT去甘草（HYT-G）组（10.26 g·kg^-1）、HYT去海藻甘草（HYT-HG）组（8.10 g·kg^-1）、海藻甘草（HG）组（3.96 g·kg^-1）,空白组给予去离子水灌胃,其余各组灌胃丙硫氧嘧啶（PTU）复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性药,其余各中药组给予相应药液灌胃,在末次给药后12 h进行取材。检测各组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）水平;肝脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）的水平;苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝组织Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、核因子E₂相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、p53、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织氧化应激相关信号通路Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清ALT水平、肝脏组织中MDA和ROS含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,SOD、GSH-Px活性显著降低（P<0.01）,Keap1 mRNA表达显著升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,HYT组大鼠血清AST、ALT、ALP水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,肝脏组织中MDA和ROS含量显著降低（P<0.01）,SOD、GSH-Px活性显著升高（P<0.01）,Keap1、p53、Caspase-3 mRNA表达显著降低（P<0.01）,Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,海藻甘草反药组合于HYT中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激产生了不同的影响,含有海藻和甘草的HYT对甲状腺肿大模型大鼠肝脏起到了一定的保护作用,效果优于HG组、优甲乐组及各拆方组,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路以减轻肝脏氧化应激,抑制p53/Caspase-3信号通路以减少肝细胞凋亡有关。     

含不同品种海藻与甘草反药组合的海藻玉壶汤对甲状腺肿大大鼠模型的影响

目的比较不同剂量(接近临床常用剂量)的海藻和甘草对甲状腺肿大大鼠的治疗作用,并探讨海藻的不同品种对治疗作用机制的影响。方法大鼠连续灌服丙硫氧嘧啶14天复制甲状腺肿大模型,并将其分为空白组、模型组、阳性对照组、海藻(海蒿子)玉壶汤高剂量组、海藻(海蒿子)玉壶汤中剂量组、海藻(海蒿子)玉壶汤低剂量组、海藻(羊栖菜)玉壶汤高剂量组、海藻(羊栖菜)玉壶汤中剂量组、海藻(羊栖菜)玉壶汤低剂量组,共9组。除空白组外,其余各组大鼠每日灌服丙硫氧嘧啶1次,质量浓度为1 mg/(mL·100 g),连续灌服14天。14天后,空白组和模型组每天灌服等量的生理盐水,其余各组灌服相应药物,体积均为1 mL/100 g,连续给药28天,期间为了稳定模型,每隔1天灌服丙硫氧嘧啶1次,剂量与之前一致。给药结束后,计算各组大鼠甲状腺系数,并测定甲状腺激素三碘甲状腺原氨酸(three iodine thyroid 3,5,3’-triiodothyronine,T_3)、四碘甲状腺原氨酸(thyroxine,T_4)、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_3)、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxine,FT_4)、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)、促甲状腺激素释放激素(thyrotropin-releasing hormone,TRH)水平。结果 (1)各给药组T_3水平较模型组不同程度升高,其中羊高组略优于海高组,且均分别优于各中、低剂量组(P0.05或P0.01);(2)各给药组在FT_3水平上均体现出向正常转归的趋势,其中海高组优于阳性药组及其他各组(P0.05或P0.01);(3)与模型组相比,海低组及羊栖菜各组的TSH水平均有显著的下降趋势(P0.01),且效果均优于阳性药组,其中羊高组效果最佳。结论含不同品种海藻的海藻玉壶汤对由甲状腺肿大引起的各种甲状腺激素水平的变化均有一定程度的恢复作用,其中以海藻玉壶汤(海蒿子)高剂量组、海藻玉壶汤(羊栖菜)高剂量组效果为佳。     

针刺对脑卒中模型大鼠认知功能障碍影响及其与PI3K/Akt信号转导通路关系

目的:分析针刺对脑卒中模型大鼠认知功能障碍影响及其与磷酸酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号转导通路联系。方法:选取SPF级雄性大鼠30只,随机数字表法将大鼠分成3组,分别为针刺组、模型组和正常组,针刺组、模型组大鼠制备大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,成功造模后电针仪对针刺组大鼠行针刺治疗,模型组与正常组不进行任何处理。观察大鼠神经功能评分、脑梗死面积、脑组织细胞凋亡率、脑组织PI3K、Bcl-2、p-Akt、t-Akt、Bax蛋白表达及Bax、Bcl-2及Bc1-2/Bax mRNA表达。结果:和正常组相比,模型组大鼠脑梗死面积增大;和模型组相比,针刺组大鼠脑梗死面积减少,差异有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠凋亡阳性细胞比例升高;和模型组相比,针刺组大鼠凋亡阳性细胞比例降低,差异均有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠Bax蛋白表达升高,PI3K、Bcl-2、p-Akt蛋白表达降低;和模型组相比,针刺组大鼠Bax蛋白表达降低,PI3K、Bcl-2、p-Akt蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠Bax mRNA表达升高,Bcl-2及Bc1-2/Bax mRNA表达降低;和模型组相比,针刺组大鼠Bax mRNA表达降低,Bcl-2及Bc1-2/Bax mRNA表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:针刺脑卒中大鼠可显著改善其认知功能障碍,加速神经功能恢复,作用机制可能将PI3K/Akt路径激活,对神经细胞凋亡抑制有联系。     

敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、单次给药组、两次给药组,每组10只。各给药组每日予大补脾汤灌胃,空白对照组和模型组予等量生理盐水灌胃。2周后,模型组、单次给药组、两次给药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射,空白对照组不予照射。照射后,两次给药组继续每日予大补脾汤灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水。2周后处死所有大鼠,ELISA检测大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量,Western blot及免疫组化检测大鼠右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达,qPCR检测大鼠右肺组织PI3K、Akt mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显增加(P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Aktm RNA表达明显升高(P0.01);与模型组比较,单次给药组和两次给药组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显减少(P0.05,P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论大补脾汤对放射性肺损伤大鼠具有保护作用,其机制与抑制PI3K、Akt磷酸化,调控PI3K/Akt信号通路相关。     

康心饮对缺血性心肌病大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的观察康心饮对缺血性心肌病(ICM)大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响,探讨其对ICM的作用及可能机制。方法 66只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、卡托普利组及康心饮低、中、高剂量组,每组11只。采用左前降支结扎法制备缺血性心肌病模型。模型组予生理盐水10 m L/(kg·d)早晚灌胃,卡托普利组予卡托普利2.86 mg/(kg·d)早晚灌胃,康心饮低、中、高组分别予康心饮9.2、18.4、36.8 g/(kg·d)早晚灌胃,给药2周。TUNEL法检测心肌凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K、Akt、FoxO1蛋白表达,RT-PCR检测PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌凋亡增多(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达量升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达量下降(P0.01),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白和PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均下降(P0.05);与模型组比较,康心饮组低、中、高剂量和卡托普利组心肌凋亡均明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(均P0.05),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白及PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均升高(P0.01),且康心饮高剂量组和卡托普利组优于康心饮低、中剂量组(P0.05)。结论康心饮可能通过激活PI3K/Akt/FoxO1信号通路,抑制ICM心肌细胞凋亡。     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

基于PI3K-Akt-eNOS通路探讨松果菊苷对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的基于PI3K-Akt-eNOS通路探讨松果菊苷(ECH)对脊髓损伤(SCI)大鼠的神经保护作用并探讨其机制。方法大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、松果菊苷干预组、PI3K抑制剂LY294002组和松果菊苷干预+PI3K抑制剂LY294002组。采用改良的Allen法建立SCI大鼠模型。通过脊髓运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能,HE染色观察脊髓组织病理变化,TUNEL检测脊髓组织细胞凋亡率,试剂盒检测血清一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,qRT-PCR法检测各组脊髓组织eNOS和iNOS mRNA表达水平,Western blotting法检测脊髓组织Bax、Bcl-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。结果与假手术比较,脊髓损伤组大鼠BBB评分、血清NO和eNOS水平、脊髓组织eNOS m RNA以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著降低(P 0.05),血清iNOS水平、脊髓组织细胞凋亡数、iNOS m RNA、Bax蛋白表达均显著升高(P 0.05)。与脊髓损伤组比较,松果菊苷干预组大鼠BBB评分、血清NO和eNOS水平、脊髓组织e NOS mRNA以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著升高(P 0.05),血清iNOS水平、脊髓组织细胞凋亡数、iNOS mRNA、Bax蛋白表达均显著降低(P 0.05)。PI3K抑制剂LY294002组和松果菊苷干预+PI3K抑制剂LY294002组两组大鼠各检测指标差异均无统计学意义(P 0.05)。结论 ECH可能通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路对SCI大鼠发挥神经保护作用。     

基于PI3K-Akt-FoxO信号通路的四物汤对小鼠骨髓基质细胞凋亡的影响

目的观察四物汤对小鼠骨髓基质细胞OP9细胞凋亡和PI3K-Akt-FoxO信号通路分子及靶基因Bim基因表达的影响,以及使用PI3K选择性抑制剂LY294002阻断PI3K-Akt-FoxO信号通路后四物汤对上述指标的影响。方法流式细胞术检测四物汤对OP9细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测PI3K、Akt、FoxO、Bim mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹法检测PI3K、Akt、p-Akt、FoxO、p-FoxO、Bim蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,四物汤组的细胞凋亡率显著降低(P0.01);PI3K、Akt mRNA表达量显著上升(P0.01,P0.05),FoxO、Bim mRNA表达量显著下降(P0.01);PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO蛋白表达水平显著上调(P0.01,P0.05,P0.01,P0.05),FoxO、Bim蛋白表达水平显著下调(P0.01)。相较于四物汤组,LY294002+四物汤组凋亡率明显上升(P0.01);PI3K、Akt mRNA表达量显著降低(P0.01),FoxO、Bim mRNA表达量显著升高(P0.01);PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO蛋白表达水平明显下调(P0.01),FoxO、Bim蛋白表达水平明显上调(P0.01)。结论四物汤可能通过激活PI3K-Akt-FoxO信号通路,下调Bim基因表达,从而抑制小鼠骨髓基质细胞凋亡。     

益气养阴方对cDDP诱导卵巢颗粒细胞凋亡线粒体途径的影响

目的:探讨益气养阴方对顺铂(c DDP)诱导的大鼠卵巢颗粒细胞(GC)凋亡线粒体途径的影响。方法:采用c DDP诱导建立GC细胞凋亡模型,用低、中、高剂量(10.5,21,31.5 g·kg-1)益气养阴方含药血清干预,另设空白组,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位(MMP)和钙离子(Ca2+)荧光强度;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mRNA表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶(PI3K-Akt)表达。结果:与空白组比较,模型组GC凋亡率显著增加,MMP下降,Ca2+荧光强度升高,细胞死亡的B淋巴细胞瘤-2基因抑制剂(Bad),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA表达均显著上调,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA则显著下降;PI3K,p-Akt蛋白表达显著下调(P0.05);中、高剂量组MMP显著升高,Ca2+浓度下降,Bad,Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA表达上调;PI3K和p-Akt蛋白表达显著上调(P0.05)。结论:益气养阴方抑制c DDP诱导的GC凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/Akt,上调抗凋亡因子Bcl-2,抑制下游促凋亡因子Bad,Caspase-9,Caspase-3等表达;稳定MMP,减少Ca2+内流等有关。     

海藻-甘草反药配伍致大鼠肾毒性的机制探讨

目的探索海藻-甘草反药配伍致大鼠肾毒性的内在机制。方法大鼠随机分为对照组、海藻组、甘草组、海藻-甘草配伍组,经过连续ig给药4周的多次给药毒性实验,检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、醛固酮、皮质醇及电解质水平,并进行肾脏组织病理学检查;用UPLC-TQ/MS法同时检测甘草中的6种主要成分在肾组织的分布情况;Western blotting法检测11β-类固醇脱氢酶(HSD11B2)在肾组织中的蛋白表达水平。结果与对照组相比,海藻组大鼠的血清生化指标无明显变化,甘草组的血清中醛固酮水平显著降低(P0.05),BUN、Scr显著升高(P0.01);海藻-甘草组的血清中醛固酮、K+、Cl-水平显著降低(P0.05、0.01),而BUN、Scr、皮质醇水平显著升高(P0.05、0.01)。病理组织学检查表明,甘草组大鼠的肾脏组织有轻微的炎细胞浸润,海藻-甘草组有明显的炎细胞浸润并伴有蛋白管型。海藻-甘草组大鼠的肾脏组织中的甘草次酸分布明显高于甘草组(P0.05)。与对照组相比,甘草组、海藻-甘草组大鼠的肾组织HSD11B2蛋白表达水平均显著降低(P0.05、0.01),而海藻-甘草组更为显著。结论通过增加甘草次酸在大鼠肾脏组织的积蓄,抑制肾脏组织中的HSD11B2的表达,造成醛固酮-皮质醇系统紊乱,可能是海藻-甘草反药组合产生肾毒性的主要机制。     

1-磷酸鞘氨醇通过PI3K/Akt信号通路对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的调控作用研究

目的:观察1-磷酸鞘氨醇通过磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol-3-OH kinase,PI3K)/蛋白激酶B (Protein kinase B,Akt)信号通路对冠心病(Coronary heart disease,CHD)大鼠心肌细胞凋亡的调控作用。方法:将45只清洁级Wistar雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组和1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)组,每组各15只。模型组和S1P组诱导CHD模型。模型诱导成功1周后,进行尾静脉注射给药。S1P组按1.0 mg/kg剂量给予S1P,假手术组和模型组分别给予等体积的生理盐水,每周1次,连续给药4周。采用TTC染色法测定各组大鼠的心肌梗死面积,使用TUNEL染色方法观察计算各组大鼠心肌细胞的凋亡指数,通过Western blot检测PI3K/Akt信号通路中相关蛋白PI3K、Akt及凋亡因子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)的表达情况。结果:TTC染色检测结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠均出现大面积的心肌梗死(P<0.01);与模型组比较,S1P组大鼠心肌梗死面积显著减小(P<0.01)。TUNEL染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡数量明显增加,其凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组比较,S1P组大鼠心肌细胞的凋亡指数显著降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,各组间PI3K、Akt蛋白表达量无显著性差异(P>0.05);与假手术组比较,模型组心肌细胞内p-PI3K、p-Akt的表达量显著下降(P<0.01),Caspase-3的表达水升高(P<0.05);与模型组比较,S1P组p-PI3K、p-Akt的表达水平显著增加(P<0.01)。Caspase-3的表达水平降低(P<0.05)。结论:S1P可能是通过调节PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达来有效抑制CHD大鼠心肌细胞凋亡的。     

海藻玉壶汤加减甘草-海藻反药药对不同组方中11种活性成分在正常大鼠体内的药动学比较研究

海藻玉壶汤是含有甘草-海藻反药药对的古代名方之一,用于治疗各种甲状腺疾病,其临床应用较为广泛。该文采用UPLC-TQ-MS对大鼠灌胃给药不同组方海藻玉壶汤中血中11种生物活性成分进行测定,同时比较不同组方之间11种活性成分药动学差异,探讨了海藻玉壶汤与甘草-海藻反药药对的相互影响。首次建立了甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、贝母素甲、贝母素乙、甘草酸、甘草素、佛手柑内酯、川陈皮素、蛇床子素与甘草次酸同时测定的UPLC-MS/MS含量测定方法。结果发现,海藻可提高甘草酸的峰浓度,海藻玉壶汤中其他组分可能促进甘草中黄酮类成分在正常大鼠体内的吸收,却抑制了皂苷类成分的吸收,加快甘草中某些皂苷类成分的代谢;甘草与海藻反药药对可提高橙皮苷、佛手柑内酯、川陈皮素、蛇床子素与贝母素甲的生物利用度,减慢柚皮苷与贝母素甲的消除。     

基于PI3K/Akt信号通路探索益气活血祛风通络法治疗糖尿病肾病的作用机制

目的基于PI3K/Akt信号通路探索益气活血祛风通络法治疗糖尿病肾病的分子机制。方法 40只GK大鼠,随机分为模型组、假手术组、益气活血组、祛风通络组、益气活血祛风通络(全方)组,每组8只。糖尿病肾病模型通过高脂高糖喂养加单肾切除术复制。益气活血组、祛风通络组、全方组分别给予益气活血颗粒、祛风通络颗粒、益气活血祛风通络颗粒,模型组、假手术组给予纯净水。干预8周,观察大鼠在干预后肾脏的病理改变以及24小时尿蛋白变化,同时肾脏组织的pPI3K、p-Akt和PTEN的表达情况采用Western blotting以及免疫组化法检测,PI3K mRNA、Akt mRNA以及PTEN mRNA的表达水平采用RT-PCR法检测。结果 HE染色结果显示,中药干预的大鼠肾小管上皮细胞空泡变性程度、纤维化以及肾小球硬化比模型组以及假手术组要轻,且在肾间质纤维化方面,全方组要好于益气活血组以及祛风通络组;PASM染色和Masson染色阳性率均显示益气活血组、祛风通络组、全方组阳性率明显低于模型组(P0.01),但全方组阳性率与益气活血组以及祛风通络组无统计学差异(P0.05);益气活血组、祛风通络组、全方组的24小时尿蛋白在中药干预后明显减少,而且与模型组对比具有显著性的差异(P0.01)。Western blotting结果显示,中药干预的三组pPI3K、p-Akt的表达明显高于模型组(P0.01),而PTEN的表达显著低于模型组(P0.01)。免疫组化结果显示,p-PI3K、p-Akt在药物干预的三组表达显著低于模型组(P0.05);PTEN在祛风通络组以及全方组的表达显著低于模型组(P0.01),在活血化瘀组表达水平与模型组差异无统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示PI3K mRNA、Akt mRNA在中药干预的三组均明显低于模型组(P0.05),而PTEN mRNA的表达水平则显著高于模型组(P0.01)。结论益气活血、祛风通络法治疗糖尿病肾病均可以起到降低蛋白尿、减轻肾间质纤维化以及延缓肾小球硬化的作用,二者结合在延缓肾间质纤维化方面效果更好,三者作用分子机制均可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关,且祛风通络法及益气活血祛风通络法抑制效果要略强于单独益气活血法。     

基于网络药理学和实验验证瘿肿消软膏“火郁发之”治疗甲状腺肿的分子机制

目的 基于网络药理学和实验验证探讨瘿肿消软膏治疗甲状腺肿的分子作用机制。方法 采用TCMSP、TCMID、BATMAN-TCM、TCM-MESH数据库筛选出瘿肿消软膏的有效活性成分及作用靶点。借助GeneCards、OMIM、Pharm GKB和Drug Bank数据库获取甲状腺肿疾病靶点。将药物靶点与疾病靶点映射后筛选出交集靶点,再将交集靶点构建PPI网络并筛选出核心靶点,对其进行GO和KEGG富集分析,选取丙硫氧嘧啶（PTU）致甲状腺肿大鼠模型进行实验验证。结果 本研究共获得瘿肿消软膏靶标314个,甲状腺肿疾病基因847个,映射后得到78个瘿肿消软膏与甲状腺肿交集基因。GO富集分析得到449条显著富集结果,KEGG富集分析发现118条通路,包括PI3K-Akt、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、肿瘤坏死因子（TNF）等信号通路。动物实验结果显示,与模型组相比,瘿肿消软膏各剂量组和LT4组大鼠甲状腺组织PI3K/Akt/m TOR信号通路基因表达降低（P<0.05或P<0.01）,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达降低（P<0.01）,VEGF及PCN...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨茯苓杏仁甘草汤抗动脉粥样硬化巨噬细胞凋亡的作用机制

目的 探讨茯苓杏仁甘草汤对内毒素(lipopolysaccharide, LPS)联合氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的干预作用。方法 构建巨噬细胞凋亡模型，检测巨噬细胞凋亡率、细胞Bax与Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平、PI3K、Akt蛋白磷酸化水平，检测茯苓杏仁甘草汤对上述指标的影响，及PI3K抑制剂LY294002干预后上述指标的变化。结果 茯苓杏仁甘草汤降低Bax与Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平比值，升高PI3K、Akt蛋白磷酸化水平，其作用受到LY294002抑制。结论 茯苓杏仁甘草汤抑制巨噬细胞凋亡，其机制与激活PI3K/Akt信号通路有关，为临床治疗巨噬细胞凋亡相关心血管疾病提供了实验依据。     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注侧皮质区细胞凋亡及p-Akt (Ser473)表达的影响

目的 观察葛根素(Pue)对大鼠脑缺血再灌注缺血半暗带侧皮质区神经细胞凋亡及p-Akt(Ser473)表达的影响,进一步探讨Pue的神经保护机制。方法 48只实验大鼠随机分为4组：假手术组、缺血再灌注组、Pue组及Pue+LY组。应用栓线法建立大鼠脑缺血再灌注模型,Pue组及Pue+LY组分别予Pue及Pue+特异性PI3K激酶抑制剂LY294002进行干预。于缺血1h再灌注24h行神经功能缺损评分,TTC染色测量梗死面积,Tunel法检测细胞凋亡数目,免疫组化检测p-Akt(Ser473)表达,并进行图像分析。结果 Pue组较缺血再灌注组神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),凋亡细胞数显著下降(P<0.05),p-Akt(Ser473)表达显著升高(P<0.05);Pue+LY组较Pue组神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),凋亡细胞数显著增加(P<0.05),p-Akt(Ser473)表达显著降低(P<0.05)。结论 激活PI3K/Akt信号通路可能是Pue减少神经细胞凋亡、起到神经保护作用的机制之一。