锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究

目的　观察不同锌摄入水平对应激大鼠海马脑区不同金属硫蛋白亚型表达的影响。方法　将Wistar雄性大鼠随机分为 8组 :正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组 ,分别给予正常饲料、缺锌饲料和补锌饲料 ,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量。动物喂饲 1周后开始束缚应激 ,持续 4周。以血红蛋白镉饱和法测定脑组织金属硫蛋白含量 ,分离海马提取总RNA ,以RT PCR检测金属硫蛋白亚型MT -1mRNA和MT -3mRNA。结果　缺锌动物出现血锌含量明显降低 ,脑组织金属硫蛋白含量和海马金属硫蛋白mRNA的表达均出现降低 ,但其表达在缺锌应激组动物仍有明显升高 ;而补锌动物金属硫蛋白的表达有所增加 ,补锌应激组动物的表达增加更加明显。缺锌和缺锌应激组动物的血浆皮质醇、IL -1、IL- 6和NO水平也较其它组显著升高。结论　缺锌可降低动物脑和海马组织中金属硫蛋白的表达 ,但缺锌动物在接受应激刺激后 ,金属硫蛋白的表达仍可明显增加 ;而补锌可增加金属硫蛋白的表达 ,补锌应激使脑组织中金属硫蛋白的表达升高更为显著 ;应激对动物的损伤作用与其锌营养状况有关 ,缺锌可降低机体对应激的抵抗能力。     

锌对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响

目的:观察不同锌摄入水平对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为8组:正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组,分别给予正常、缺锌和补锌饲料,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量。动物喂饲1w后开始束缚应激,持续4w。分别以蛋白印迹法和RT-PCR测定海马、皮质、间脑和嗅球金属硫蛋白含量以及MT-1mRNA和MT-3mRNA的表达;并以ELISA法检测血浆IL-6和IL-1的含量。结果:缺锌动物的血锌含量明显降低,缺锌应激动物不同脑区金属硫蛋白及其亚型mRNA的表达均较缺锌动物明显升高,但其增加幅度低于其它应激组;而补锌应激动物的表达增加幅度最大。缺锌组和各应激组动物的血浆皮质醇、IL-1、IL-6水平出现显著升高。另外,金属硫蛋白在不同脑区的表达水平不同:海马>嗅球>皮质>间脑。结论:不同锌营养状况可影响心理应激动物不同脑区金属硫蛋白的表达,海马脑区表达水平较高可能与海马在应激反应中的重要作用相关联。糖皮质激素及IL-6、IL-1等细胞因子可能对金属硫蛋白的表达发挥了诱导作用。     

金属硫蛋白与应激

金属硫蛋白是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白。它与应激及应激性疾病关系密切。本文从生理因素、创伤与感染、心理因素、化学因素等四个方面综述了各类应激对金属硫蛋白的诱导；并论述了金属硫蛋白对应激的保护作用及其要机理的研究近况。     

慢性束缚应激致抑郁小鼠海马锌指蛋白A20表达的变化

目的观察慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)对小鼠行为学的影响及海马锌指蛋白A20变化,为阐明应激致抑郁的发病机制提供实验依据。方法通过CRS建立应激致抑郁动物模型,8w后测定动物体质量,并检测小鼠悬尾不动时间、自主活动运动速度、糖水偏爱分数等行为学指标;ELISA法检测海马组织TNF-α和IL-6含量;实时荧光定量PCR法和蛋白印迹检测海马A20 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,8w CRS暴露后,小鼠体质量明显降低;自发活动的平均速度和糖水偏爱分数明显降低,而悬尾不动时间显著延长;小鼠海马组织内TNF-α和IL-6的含量显著增加;海马组织内A20mRNA和蛋白的表达量显著降低。结论 CRS导致小鼠抑郁样行为学改变可能与神经炎症和A20表达降低相关。[营养学报,2019,41(2):189-192]     

大鼠组织中金属硫蛋白测定方法的建立及应用

本文用纯化的金属硫蛋白（ＭＴ）作为标准品，用镉饱和法测定大鼠组织中ＭＴ的含量，并进行了回收率测定和精密度检验。结果表明，此方法测定组织中ＭＴ可得到准确的结果。（１）以标准ＭＴ加入量对实际测定镉计算的ＭＴ含量作图，可见有良好的直线关系（ｒ＝０．９９３１，Ｐ〈０．０１）。（２）标准回收率范围为９７．６％￣１０８．０％。（３）对同一样品进行１０次测定，其变异系数为３．８％。（４）实际测定中创伤应激大鼠肝     

糖尿病肾病大鼠金属硫蛋白的表达及意义

目的 探讨金属硫蛋白（metallothionein，MT）在糖尿病肾病大鼠肾脏组织中的表达及意义。方法 链脲佐菌素（STZ）尾静脉注射诱导糖尿病肾病，分别在诱导2，4，8，16周杀鼠，取血及肾脏进行研究，生化方法检测血、尿各项生化指标．免疫组化方法观察肾脏MT-1蛋白表达，RT-PCR观察MT-1 mRNA及氧化、炎症、纤维化相关细胞因子mRNA表达。结果 随着糖尿病病程进展．大鼠表现血糖、血肌酐、尿蛋白及肾重与体重比逐渐增高，病理学检查见糖尿病8周组大鼠肾脏肾小管纤维结缔组织增生明显．16周组大鼠肾脏显示明显纤维化。免疫组化研究发现在正常组大鼠肾脏有少量MT-1表达，糖尿病肾病大鼠肾脏MT-1表达明显增多．差异有统计学意义（P〈0．05）．且随病程而逐渐增加。RT-PCR结果显示．16周糖尿病大鼠肾脏MT-1、TNF-α、MIP-1、COX2、TGF-β．PAI-1．Col-3等mRNA表达均出现明显上调（P〈0．05）。结论 MT-1在糖尿病大鼠肾脏表达增高是糖尿病肾病病变过程中的一种变化趋势，可能与细胞因子、抗氧化作用有关，推测是细胞的重要防御机制之一。     

兔肝金属硫蛋白亚型的提纯与鉴定

兔肝金属硫蛋白亚型的提纯与鉴定张亨山１赵金垣１陈晓龙２张振龙２王春荣２倪道明２史德林２黄文萱２马东星１刘宏１金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）自３０多年前被发现与定名以来，现已知其普遍存在于动、植物和微生物体内，含有丰富的半胱氨酸，可结...     

锌营养对大鼠应激反应及金属硫蛋白的影响

目的：在心理应激条件下，观察大鼠组织中金属硫蛋白（MT）水平的变化及其与锌营养状况的关系。方法：60只雄性Wistar大鼠随机分为6组：缺锌组（ZD）、喂对组（PF）、对照组（CT），以及相应的3个应激组（SZ、SP、SC）。以光－电刺激方法建立心理应激动物模型，观察应激对皮质醇激素、锌和金属硫蛋白的影响。结果：应激诱导动物脑和肝脏MT含量增加，而血浆锌出现不同程度下降。缺锌动物血锌浓度降低，肝脏和脑中金属硫蛋白的含量减少，而其整体应激反应强度增加。结论：维持良好的锌营养状况有助于诱导整体和脑组织产生应激蛋白，并提高机体对心理应激的适应能力。     

锌对小鼠肝金属硫蛋白合成的影响

本文研究了小鼠在宽的剂量范用内（１０，２０，４０，８０，１００，１２０，１４０，１６０，１８０，２００ｍｇ／ｋｇｂｗ）口服锌（Ｚｎ）盐时，对肝金属硫蛋白（ＭＴ）合成的影响。结果显示：因服用过量Ｚｎ（２＋），按剂量──效应关系发生肝ＭＴ的诱导合成，而且在肝Ｚｎ浓度和肝ＭＴ浓度之间存在正向关系。表明Ｚｎ是一个ＭＴ的诱导剂。在口服Ｚｎ８０～１００ｍｇ／ｋｇ的剂量范围时，无论是肝ＭＴ水平或肝Ｚｎ水平均有明显的改变。提示：在Ｚｎ诱导ＭＴ合成中，存在一个敏感的剂量范围。     

电磁脉冲对大鼠海马突触可塑性相关蛋白表达的影响

目的研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)照射后大鼠海马组织中突触可塑性相关蛋白的表达情况。方法以EMP 6×104V.m-1照射Wistar大鼠,用Western blot蛋白印迹法检测海马组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经细胞黏附分子(neural celladhesion molecule,NCAM)的表达。结果EMP照射后6 h,海马BDNF的表达与对照组相比增长了25.8%(P<0.05),之后呈缓慢回降趋势;照射后7 d再度升高,与对照组相比增长了32.2%,(P<0.05)。EMP照射后6~12 h,海马NCAM的表达与对照组相比增长了8.1%(P<0.05),3 d后回降,与对照组相比减少了10.8%(P<0.05),照射后7 d再度升高,与对照组相比增长了14.1%,(P<0.05)。结论EMP照射后早期,海马BDNF和NCAM的上调,可能介导了突触可塑性的正向改变。     

电磁辐照对海马病理形态学及相关因子表达的影响

目的对比性研究3种波段电磁辐射、对大鼠海马脑区的损伤病理及相关因子表达情况,为防治措施提供生物学依据。方法126只大鼠随机分为对照组(C)、高功率S波段微波辐照组(S)、高功率X波段微波辐照组(X)、电磁脉冲辐照组(E),C组给予伪照射、余3组分别给予100 mW.cm-2、100 mW.cm-2及6×104V.m-1,辐照后6 h、1 d、3 d、7 d、14 d、28 d活杀,海马组织经HE染色及甲苯胺兰染色后光镜观察病理学改变;SP免疫组织化学染色法检测GFAP、IL-1β、iN-OS的表达;应用图像分析仪进行定量检测。结果辐照后6 h~7 d各辐照组海马神经元变性和凋亡。辐照后3 d,E、S、X组尼氏体积分光密度(IOD)分别为4.44±0.83、2.70±0.76、2.22±0.69,明显低于C组(13.76±4.88,P<0.01)。辐照后6 h各照射组海马神经元超微结构呈缺血性改变、辐照后3 d出现空泡和次级溶酶体,血管间隙增宽水肿;辐照后3 d,S、X组的IL-1β(IOD)分别为1.29±0.71、1.22±0.43,明显高于C组(0.96±0.29,P<0.01)。iNOS分别为1.44±0.60、1.87±0.52、1.69±0.43,明显高于C组(0.65±0.25,P<0.01)。GFAP分别为0.14±0.07、0.16±0.07、0.16±0.07,明显低于C组(0.19±0.09,P<0.05或p<0.01)。结论本实验条件下,3种波段电磁辐照皆可导致大鼠海马组织损伤,GFAP、IL-1β、iNOS因子参与了电磁辐照所致损伤的病理过程;高功率微波作用较电磁脉冲明显,,而X的作用又较S明显。     

心理应激时大鼠海马神经元的钙状态变化及锌的作用研究

目的 :　研究不同锌营养水平的大鼠在应激条件下的行为变化 ,观察海马细胞内游离钙 ([Ca2 + ]i)及活性钙调素 (Ca M)水平改变 ,以探讨其可能机制。方法 :　大鼠按体重随机分为缺锌组 (ZD)、缺锌应激组 (SZD) ,对喂组 (PF)、对喂应激组 (SPF) ,对照组 (CT)、对照应激组(SCT)。实验进行 1 w后 ,各应激组大鼠接受不规则光 -电刺激 ,2 5 min/ d连续 1 5 d后进行行为测定 ;分别用 Fura-2 / AM双波长荧光法和流式细胞术测定动物海马细胞 [Ca2 + ]i和活性 Ca M水平。结果 :　单纯缺锌大鼠在旷场中的中央格停留时间延长 ,修饰次数减少 ,海马细胞静息 [Ca2 + ]i浓度升高而 Ca M水平下降 ;与相应非应激组比较 ,各应激组大鼠在旷场中的水平和垂直运动减少 ,海马细胞 [Ca2 + ]i含量升高 ,以缺锌应激组最为明显 ;活性钙调素水平则呈相反变化。结论 :　光电应激导致实验大鼠在旷场中行为异常 ,并因机体缺锌而加重 ;推测海马细胞内 Ca2 + -Ca M体系的变化可能是其机制之一     

表没食子儿茶素没食子酸酯对束缚应激大鼠行为学表现的影响

目的观察绿茶多酚(GTPs)单体成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对束缚应激大鼠行为学表现的影响。方法 40只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照(CT)组、束缚应激(ST)组、GTPs干预应激(GST)组和EGCG干预应激(EST)组。以束缚制动的方法建立应激动物模型,GTPs和EGCG以灌胃方式给予,实验周期30d。通过旷场实验及避暗实验检测大鼠的认知行为和学习记忆能力;分别以放免法、双抗夹心ELISA法检测血浆中皮质醇和神经递质含量。结果与CT组相比,ST组在旷场中的潜伏期延长,穿格数明显减少;GST组和EST组与ST组相比有显著性差别。避暗实验显示,与CT组相比,ST组潜伏期显著降低,电击次数出现明显增加,而GST组与EST组潜伏期比ST组显著增长,电击次数显著降低。此外,ST组血浆皮质醇水平明显增加,多巴胺和5-羟色胺水平降低;而GST组与EST组与ST组相比,皮质醇水平降低,多巴胺及5-羟色胺含量升高;EST组比GST组总的行为表现稍好。而且动物的行为表现与血浆皮质醇和神经递质含量之间存在相关关系。结论束缚应激引起动物行为学表现异常,应激激素分泌增加。而适量补充EGCG可改善应激大鼠的行为学表现,提高应激机体的自主活动和探究行为以及学习记忆能力。[营养学报,2013,35(2):167-171]     

微波辐照对大鼠海马NMDA受体NR1和NR2B亚基基因及蛋白表达的影响

目的从功能亚基NR1和调节亚基NR2B基因及蛋白表达方面探讨了NMDA受体在微波辐照所致的学习记忆功能障碍中的作用。方法采用平均功率密度为65 mW.cm-2的微波,全身1次辐照大鼠20 min,在辐照后不同时相点,用RT-PCR和Western-blot技术分别检测NMDA受体NR1和NR2B亚基在基因及蛋白表达水平上的变化。结果微波辐照后3 h、24 h、3 d,大鼠海马脑区NMDA受体重要功能亚基NR1基因表达分别比对照组下降了21.1%(P<0.05)、14.2%(P<0.05)、30.3%(P<0.01),NR1蛋白表达分别比对照组下降40.6%、55.7%、60.7%;调节亚基NR2B蛋白表达分别比对照组下降38.7%、26.5%、78.4%。结论微波辐照后,大鼠海马脑区NMDA受体重要功能亚基NR1基因和蛋白表达下调,调节亚基NR2B蛋白表达下调,由此可导致NMDA受体数量减少和自身调节功能下降,进而可能影响LTP的诱导能力和学习记忆功能。     

槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢组的影响

目的探讨槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢的影响。方法用无血清培养液原代培养大鼠肝细胞,以H2O2诱导氧化应激。培养细胞分为空白对照组(仅用培养液培养)、槲皮素组(以20μmol/L槲皮素处理肝细胞24h)、H2O2组(以8.8mmol/LH2O2作用6h诱导细胞产生氧化应激)、槲皮素+H2O2组(先用20μmol/L槲皮素预处理24h后,再用8.8mmol/LH2O2诱导氧化应激)4组。实验结束后,收集各组培养液,离心,以核磁共振谱仪检测培养液中代谢物的变化情况。结果与空白对照组比较,最显著的变化包括:(1)槲皮素和槲皮素+H2O2组二甲胺含量增加;(2)H2O2、槲皮素和槲皮素+H2O2组乙酸含量增加,丙酮酸含量减少。其次的变化包括:(1)槲皮素组乳酸减少,谷胺酰胺增加;(2)H2O2组乳酸、牛磺酸增加,组氨酸减少;(3)槲皮素+H2O2组乳酸、牛磺酸和谷胺酰胺增加,组氨酸减少。结论槲皮素可通过加速糖酵解、促进脂肪酸氧化供能发挥抗氧化应激作用,对某些含氮化合物的代谢也具有调节作用。     

锌缺乏对生长期雄性大鼠海马泛素C末端水解酶L1表达的影响

[目的]观察缺锌对生长期大鼠海马泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)表达的影响。[方法]将SD大鼠随机分为正常组、缺锌配喂组和缺锌组,正常组喂饲常锌饲料(32.5mg/kg),缺锌配喂组喂饲高锌饲料(73.5mg/kg),缺锌组喂饲缺锌饲料(1.2mg/kg)。饲养4周后处死动物,取海马组织,RT-PCR法检测UCH-L1mRNA的表达水平,Westernblot法检测UCH-L1蛋白的表达水平。[结果]与正常组和缺锌配喂组比较,缺锌大鼠海马中UCH-L1mRNA和蛋白的表达水平均显著下调。[结论]缺锌大鼠海马UCH-L1的表达异常,可能是缺锌导致认知损伤的重要机制之一。     

补充烟酰胺对束缚应激大鼠旷场行为的影响

目的:研究不同烟酸营养状况对应激大鼠行为的影响。方法:100只雄性Wistar大鼠按体重分为10组:对照组、对喂组、缺乏组、低剂量烟酰胺(NAM)补充组和高剂量NAM补充组及此5组对应的21 d束缚应激组。测定大鼠24h尿N1-甲基烟酰胺(NMN)排泄量、旷场行为、血浆皮质醇、NO和肝脏NOS含量。结果:应激大鼠24h尿N1-甲基NMN排泄量减少。烟酸缺乏和应激都可阻碍大鼠体重增加。对照组和低剂量NAM补充组大鼠在旷场实验中的潜伏期相对较短。应激大鼠血浆皮质醇和NO含量比对照组高;高剂量NAM补充组大鼠的血浆皮质醇含量较低。补充NAM大鼠肝脏NOS含量较高。结论:束缚应激可增加大鼠烟酸消耗;适量补充NAM有助于提高大鼠的应激适应性。     

+Gz暴露对大鼠脑海马热休克蛋白70 mRNA表达的影响

目的观察不同 Gz暴露对大鼠脑海马HSP70 mRNA表达水平的影响,探讨 Gz暴露致脑损伤的机制。方法100只SD大鼠随机分为对照组, 2 Gz暴露组, 6 Gz暴露组, 10Gz暴露组。各组大鼠在G暴露后的5 h1、0 h1、d、2 d4、d处死,采用原位分子杂交方法观察大鼠脑海马部位HSP70 mRNA表达水平。结果 2 Gz、 6 Gz、 10 Gz 3种水平 Gz暴露组在暴露后5 h,HSP70 mRNA表达水平均开始增加,3种水平 Gz暴露组阳性细胞数分别为27.6±4.0、51.4±6.0和14.1±2.7,均显著高于对照组(1.2±1.6,P<0.01);在10 h时达峰值,3种水平 Gz暴露组阳性细胞数分别为33.8±4.3、69.4±7.9和20.8±4.7,均显著高于对照组(2.2±2.3,P<0.01);4 d时基本恢复正常,3种水平 Gz暴露组阳性细胞数分别为1.0±1.2、5.6±3.2和0.6±0.9。在同一时间点上, 6 Gz组HSP70 mRNA表达水平最高,10 h时的阳性细胞数为69.4±7.9; 10 Gz组最低,10 h时的阳性细胞数为20.8±4.7。结论 Gz暴露对大鼠脑海马部位HSP70 mRNA表达水平有显著的影响。