早产儿视网膜病变动物模型的简易制备

目的:采用经济,简易的方法制备早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)的可量化动物模型.方法:新生鼠仔44只称重随机分为2组,实验组于出生后7d置于75%±1%氧箱内饲养5d然后回到正常空气饲养5d,对照组于正常环境饲养.ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变,组织切片HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数,免疫组化法观察视网膜各层血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:持续高浓度氧使鼠仔视网膜血管收缩变窄甚至闭塞,视网膜中央部大片无灌溉区,相对缺氧使视网膜大血管明显扩张、迂曲,大量结构异常的新生血管形成.实验组平均每个切面突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(32.800 0±0.767 8)个,对照组平均为(2.750 0±0.716 4)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.01);对照组VEGF染色较实验组减弱.结论:该模型可重复性强、稳定性高、可定量研究.是研究早产儿视网膜病新生血管发生机制及相关治疗的合适模型.     

临床用氧对新生鼠视网膜发育的影响

目的 研究不同临床用氧方式对新生鼠视网膜血管发育的影响以及相应视网膜血管内皮生长因子(VEGF) 的表达以探讨ROP发病机制,为早产儿临床合理用氧提供实验依据.方法 新生7 d Wistar鼠仔150只,按不同吸氧方式称质量随机分为5组.实验组1: FiO2由75%分5 d逐渐降低直至停氧(每天下降幅度约为10%);实验组2:吸入氧浓度( FiO2 )5 d逐渐由30%升高至75%后突然中断吸氧.实验组3:持续吸75%高氧5 d后骤然停氧;实验组4:持续吸75%高氧5 d后分5 d逐渐降低FiO2 直至停氧;对照组:置于同实验条件下的空气中饲养.视网膜铺片(ADP酶染色法)了解视网膜血管形态改变;眼球切片(HE法)观察视网膜血管的增生和发育情况;免疫组化法观察5组标本视网膜各层VEGF的表达,并进行视网膜组织内VEGF的含量,血管内皮细胞核两者之间相关性分析.结果 ①视网膜铺片和眼球切片HE染色显示实验组2、3视网膜存在缺氧并出现异常新生血管生成的类似ROP表现.②免疫组化结果显示缺氧后视网膜组织内VEGF的表达明显增加,主要分布在视网膜节细胞层和内核层的毛细血管内皮细胞细胞质和细胞核中.视网膜新生血管芽细胞核数(以与内界膜相关联的突破内界膜的内皮细胞核数C表示)与视网膜组织VEGF含量呈正相关(r=0.807,P＜0.01).结论 吸入高浓度氧后突然停氧可严重影响新生鼠视网膜血管的发育,产生类似早产儿视网膜病的病变.因此临床上应严密监测用氧情况,采取逐渐降低氧浓度的吸氧方式.     

高浓度氧诱导增殖性视网膜病变动物模型的构建及判断

【目的】探讨一种经济实用的增殖性视网膜病变动物模型的构建及判断方法。【方法】将鼠龄为 2d的SD幼鼠 2 0只随机分为对照组和实验组 ,实验组动物置于 80 %高浓度氧环境中饲养 1 0d后转至自然空气中继续饲养 ,而对照组动物则一直置于自然空气中饲养。在鼠龄 2 0d时无痛处死幼鼠 ,取眼球作病理切片 ,计数其视网膜新生血管芽细胞核 ,比较分析其结果。【结果】实验组视网膜新生血管芽细胞核数目达到 (1 91 1± 1 5 7)个 ,远远高于对照组的 (37 2± 2 3 5 )个 ,二者存在着非常显著的差别 (P <0 0 1 )。【结论】高浓度氧能短时间内有效诱导SD新生幼鼠视网膜新血管芽的生长 ,成功构建增殖性视网膜病变动物模型 ;病理组织切片是一个经济有效的判断增殖性视网膜病变构建成功与否的方法。     

新生鼠视网膜中TGF-β1表达的影响研究

目的比较TGF-β1在不同氧环境饲养新生鼠视网膜中的表达变化,揭示TGF-β1与早产儿视网膜病变发病的关系.方法60只7日龄C57BL/6J鼠仔随机分为三组,对照组饲养于空气中;实验组1饲养于75%氧箱中5天后改为空气饲养;实验组2氧箱中的氧浓度逐日从30%升高至75%后再逐日下降至空气饲养.分别于第3、8、14天行视网膜铺片ADP染色观察视网膜血管变化;14天时采用免疫组化法检测视网膜TGF-β1表达,RT-PCR法检测TGF-β1 mRNA表达.结果实验组1和实验组2新生鼠视网膜血管缩窄.第14天时,实验组1周边视网膜血管密度增加,TGF-β1表达呈阳性改变,TGF-β1 mRNA表达高于对照组和实验组2(P>0.05);实验组2周边视网膜血管未见明显异常改变,TGF-β1表达呈阴性改变,TGF-β1 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05).结论 TGF-β1参与早产儿视网膜病变的发病过程,吸入氧浓度波动较大时视网膜表达TGF-β1增加,并产生类似于早产儿视网膜病变的改变.     

血管抑素抑制鼠视网膜微血管内皮细胞增生及视网膜新生血管形成的研究

目的　探讨血管抑素蛋白对体外培养的鼠视网膜微血管内皮细胞 (REC)生长的抑制作用及其抑制视网膜新生血管形成的效果。方法　从血浆中分离血管抑素。原代培养鼠视网膜微血管内皮细胞 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法检测不同浓度的血管抑素对其生长的抑制作用。高浓度氧诱导C57BL/ 6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。将 30只小鼠分为 5组 :正常组 ;高氧对照组 ;实验Ⅰ组 (血管抑素浓度 15 0 μg/ μl) ;实验Ⅱ组 (血管抑素浓度 2 0 0 μg/ μl) ;实验Ⅲ组 (血管抑素浓度 30 0μg/ μl) ,计数各组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数 ,并加以比较。 结果　血管抑素在体外能显著抑制视网膜微血管内皮细胞增殖 ,其半数有效剂量 (ED50 )约为 130 μg/ml。吸入高氧的鼠不论是对照组还是血管抑素治疗组每只眼均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞 ,发生率为 10 0 %。实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与高氧对照组相比小鼠视网膜新生血管细胞核数分别减少了 4 2 %、5 7%、82 %。结论　血管抑素在体外能有效地抑制视网膜微血管内皮细胞增殖。血管抑素能有效抑制高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成     

增殖期糖尿病性视网膜病变全视网膜光凝疗效观察

据统计 ,近年我国糖尿病患者患病率逐年增加 ,而糖尿病性视网膜病变也相应增加 ,其中增殖期糖尿病性视网膜病变占 6 1%。 2 0 0 1年 3月至 2 0 0 2年 6月 ,我院对增殖期糖尿病性视网膜病变患者行全视网膜光凝治疗 ,现将治疗结果报告如下。1　临床资料1 1　一般资料　增殖期糖尿病视网膜病变患者共 2 3例 4 2只眼 ,其中只有视网膜上新生血管或视盘上新生血管者 2 8只眼 (占 6 6 7% ) ,视盘上及视网膜上同时存在新生血管的 12只眼 (占 2 8 6 % )。发生新生血管性青光眼 2只眼 (占 4 8% )。其中有 11只眼有玻璃体出血 ,待玻璃体出血基本吸收…     

视网膜新生血管模型中CD105的表达

目的:通过高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型,观察CD105在视网膜新生血管中的表达.方法:取出生后7 d的C57BL/6J小鼠40只,随机分为正常对照组和高氧组,每组20只.采用高氧诱导视网膜新生血管建立动物模型,H-E染色观察小鼠视网膜新生血管的情况,免疫组化方法观察CD105在小鼠视网膜中的表达.结果:H-E染色结果表明,小鼠视网膜新生血管模型建立成功.高氧组小鼠CD105显著表达,积分光密度为(9 985.63±1 016.28)/鼠,阳性染色面积为(14 246.61±6 052.29) μm2/鼠,而正常对照组仅有微弱表达[积分光密度为(1 625.36±638.44)/鼠,阳性染色面积为(3 619.31±1 760.03) μm2/鼠],两组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:CD105在视网膜新生血管形成中可能有一定作用,其检测对于视网膜新生血管的定性、定量评估及治疗具有一定临床意义.     

早产儿视网膜病变动物模型的制作

目的:探讨一种早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)动物模型的制作方法。方法:生后7d的健康C57BL/6J小鼠40只随机分为正常对照组和高氧组,每组20只。正常对照组于正常空气环境中饲养;高氧组将生后7 d小鼠放氧箱5 d后,回到正常空气环境中饲养。两组小鼠均在出生后17 d处死,摘取右眼制作标本,采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目来判断ROP模型的制作是否成功。结果:HE染色:正常对照组切片中很少见到突破视网膜内界膜长入玻璃体的血管内皮细胞核,平均每张切片中新生血管内皮细胞核数为(1.71±0.472)个。高氧组可见较多突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核,平均每张切片中新生血管内皮细胞核数是(25.56±2.442)个,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本实验采用的高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型与早产儿视网膜病相似,可重复性高,并可进行定量研究,是研究ROP发病机制及治疗比较理想的动物模型。     

曲安奈德抑制早产儿视网膜病变视网膜新生血管的实验研究

目的:早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)是一种严重影响早产儿生存质量的疾病,目前对ROP的防治研究着重于抑制视网膜新生血管的形成,本实验通过建立高氧诱导的早产儿视网膜病变的动物模型,探讨长效糖皮质激素类药物曲安奈德在抑制视网膜新生血管方面的作用。方法:选择鼠龄为7 d的C57 BL/6 J幼鼠60只,分为大、小剂量治疗组和正常及高氧对照组。大、小剂量治疗组一眼玻璃体腔内分别注射曲安奈德5μl及2.5μl,对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(BSS)作为对照。血管灌注法视网膜铺片,观察视网膜血管情况;视网膜组织切片HE染色观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目。结果:高氧环境对照组与正常环境对照组相比,视网膜有大量新生血管形成,说明高氧诱导的早产儿视网膜病变动物模型制作成功;药物治疗组与高氧对照组相比视网膜血管分布规则、密度减少,且突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少(P<0.001)。大、小剂量治疗组相比差异不明显(P>0.05),视网膜组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。结论:曲安奈德有抑制视网膜新生血管形成的作用。     

VEGF和IGF-1在代谢性酸中毒诱导的新生大鼠视网膜细胞中的表达

目的 了解代谢性酸中毒诱导新生大鼠视网膜病变的发展进程,探讨其发生与血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样细胞生长因子-1(IGF-1)的关系. 方法模型组新生Sprague-Dawley大鼠80只,从出生后第2天开始按535 mg穔g-1的剂量管饲NH4Cl(质量浓度为50 mg穖l-1),每天2次,连续7d,然后进入恢复期;另选未行管饲的80只新生大鼠作为对照组.两组大鼠分别于出生后第3、5、8、10、13、20天处死.取出双眼进行视网膜铺片和二磷酸腺苷酶染色,对视网膜血管进行评估; 视网膜切片经常规HE染色定量反映视网膜血管增生情况;用免疫组化方法进行VEGF和IGF-1测定. 结果模型组大鼠在出生后第3、5、8、10、13、20天新生血管(NV)发生率分别为0、7%、24%、59%、23%、0.HE染色可见实验组10 d龄鼠有较多突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核,平均每张切片有(14.67±2.16)个.而对照组未见或极少见突破内界膜的血管内皮细胞核,每张仅(0.87±0.75)个,两者比较差异有统计学意义(t＝18.47,P＜0.000 1).出生后第10、13天,模型组鼠VEGF的蛋白水平比对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).出生后第8天,模型组大鼠视网膜IGF-1的蛋白水平比对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05). 结论代谢性酸中毒可能损害了正在发育的视网膜血管而引起新生血管;视网膜新生血管的发生与VEGF和IGF-1的异常表达有关.     

血管内皮生长因子在早产儿视网膜病变动物模型中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)、视网膜新生血管形成中的表达规律.方法:①动物模型制作:将生后7d的健康C57BL/6 J小鼠20只随机分为正常对照组和高氧组,每组10只.正常对照组于正常空气环境中饲养,不做任何处理;高氧组将生后7d小鼠连续放氧箱5d后回到正常空气环境中饲养.两组小鼠均在出生后17 d处死,摘取右眼制作标本,采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目来判断ROP模型的制做是否成功.②将生后7d的健康C57BL/6 J小鼠64只随机分为正常对照组和高氧组,每组32只,两组均分别于生后12、14、17、19 d各处死8只,摘取右眼制作标本,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子蛋白的表达情况.结果:①HE染色:正常对照组切片中突破视网膜内界膜长入玻璃体的血管内皮细胞核数平均为(1.71±0.472),高氧组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数为(25.56±2.442),两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).②免疫组织化学法见VEGF的表达主要位于视网膜内界膜附近,神经节细胞层,内核层.高氧组视网膜中VEGF的表达12 d最低,14 d已增高,17 d时达到高峰,19 d下降,对照组12～19 d波动不明显.结论:①本实验采用的高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型与早产儿视网膜病变发病原因相似,可重复性高,可进行定量研究,是研究ROP比较理想的动物模型.②VEGF在早产儿视网膜病变模型中的形成过程中,早期高氧使VEGF下调,引起血管退化,而随后的缺氧又使VEGF上调,导致视网膜新生血管形成.因此,VEGF的异常表达,是视网膜新生血管形成的主要原因.     

小鼠视网膜新生血管模型的简易制备

目的:采用简便易行的方法制备小鼠视网膜新生血管动物模型。方法:新生小鼠20只随机分为两组,实验组于出生后第7~12 d置于75%氧箱内饲养,对照组于正常环境饲养。至第17 d时处死小鼠,摘取眼球,固定切片,行苏木精-伊红(H-E)染色,计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数,免疫组化法观察视网膜各层血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:实验组平均每个切面突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(25.70±4.90)个,对照组平均为(0.85±1.02)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.01);对照组VEGF染色较实验组减弱。结论:该方法能建立稳定的视网膜新生血管动物模型。     

曲安奈德对核因子-κB、血管内皮生长因子在大鼠视网膜新生血管中表达的影响

目的:探讨曲安奈德对核因子-κB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠视网膜新生血管病变中表达的影响。方法:选择7 d SD幼鼠40只,其中30只大鼠建立氧诱导的视网膜新生血管病变模型,10只置于正常环境中。30只大鼠中20只大鼠出氧箱后给予玻璃体腔内注射曲安奈德1μl(0.04 mg),对侧眼注射平衡盐溶液(balanced saltsolution,BSS)作为对照,分为高氧+药物治疗组和高氧+BSS液对照组,每组20只眼;另10只大鼠作为高氧对照组。视网膜组织切片HE染色,免疫组织化学法检测NF-κB及VEGF的表达。结果:高氧+药物治疗组与高氧对照组及高氧+BSS组相比,新生血管内皮细胞核数目明显减少(P0.01),高氧+药物治疗组的NF-κB及VEGF的表达均低于高氧对照组及高氧+BSS组(P0.05)。VEGF表达升高的同时,NF-κB的表达呈升高趋势。结论:曲安奈德明显抑制NF-κB及VEGF的表达,即有抑制新生血管形成的作用,NF-κB与VEGF的表达呈正相关,在新生血管形成过程中起协同作用。     

Akt抑制剂对氧诱导视网膜新生血管形成的作用

目的:观察Akt抑制剂对低氧环境下视网膜新生血管形成的抑制作用,探讨Akt活性的抑制对于新生血管抑制的作用。方法:将鼠龄为7 d的C56BL/6J小鼠14只置于浓度为(75±2)%高氧舱环境中生活5 d,然后返回正常氧环境中。14只小鼠于出氧舱后当日被随机平均分为实验组和对照组各7只,实验组小鼠玻璃体腔内注射1.5μl Akt抑制剂,对照组小鼠玻璃体腔内注射1.5μl PBS。在P17,实验组和对照组小鼠FITC-Dextran左心室造影视网膜铺片了解视网膜的血管形态的改变以及小鼠组织学切片观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。结果:视网膜铺片结果显示实验组与对照组相比较,视网膜可见新生血管芽,但是新生血管丛数量及面积明显减少,荧光渗漏明显减轻,但无灌注区无明显的减小;组织学切片结果表明与对照组相比较,Akt抑制剂注射实验组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量明显减少,实验组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量为(14±3.0)个,对照组为(55±3.0)个,差异具有统计学意义(P=0.001)。结论:在缺氧环境下运用Akt抑制剂能够抑制视网膜新生血管的发生,但Akt抑制剂不减少无灌注区的面积。     

缺血性视网膜病变中环氧化酶表达的研究

目的研究环氧化酶1、2(Cox1、Cox2)在缺血性视网膜病变中的作用。方法高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。苏木精伊红染色,观察高氧组和正常组视网膜切片新生血管形成,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法半定量测定高氧组和正常组Cox2及Cox1mRNA的表达。结果正常组每只眼视网膜新生血管内皮细胞核的平均数为(0.36±0.67),高氧组每只眼均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞,发生率为100%,每只眼视网膜新生血管内皮细胞核的平均数为(251.23±22.25)。高氧组Cox2表达为正常组的4.6倍(P<0.05),两组Cox1mRNA表达无明显差异(P>0.05)。结论Cox2表达水平的上调可能与视网膜新生血管的形成有关。     

三七总皂苷通过长链非编码RNA对氧诱导视网膜病变小鼠新生血管的抑制作用

目的:在氧诱导的新生小鼠视网膜病变模型(OIR)中,观察三七总皂苷调节长链非编码RNA(lncRNAs)对视网膜新生血管的抑制作用及可能机制。方法:60只7日龄(P7)的C57BL/6J小鼠双盲法分成4组:A组,正常对照组;B组,OIR组;C组,三七总皂苷组;D组,磷酸盐缓冲液(PBS)组。B、C、D三组建立OIR模型,C组玻璃体腔注射三七总皂苷1μL,D组注射PBS 1μL。视网膜铺片观察视网膜新生血管情况。HE染色计数新生血管内皮细胞核数、免疫组织化学检测VEGF的表达。Real-time PCR检测视网膜组织lncRNA表达水平的变化。Western Blot分析VEGF、Fgf2蛋白表达变化。结果:三七总皂苷组可见极少量的视网膜增生血管,新生血管内皮细胞核数明显减少(P<0. 05)。注射三七总皂苷后lncRNA XLOC＿150632、XLOC＿150636表达明显下调(P<0. 05),XLOC＿122045、XLOC＿100454、XLOC＿170009、XLOC＿122042表达明显上调(P<0. 05)。VEGF和Fgf2的蛋白表达明显减少。结论:三七总皂苷可调节lncRNAs抑制OIR新生小鼠视网膜新生血管的形成。     

雌激素对高氧诱导新生鼠视网膜病变中血管生成和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨雌激素对高氧诱导新生鼠视网膜病变中血管生成和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法将Wistar新生鼠随机分为4组：正常对照组、高氧诱导组、高氧对照组和高氧雌激素组。采用高氧诱导法建立早产儿视网膜病变模型,对后两组分别皮下注射17β-雌二醇及磷酸盐缓冲溶液,视网膜苏木素-伊红染色,计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数;免疫组织化学染色,观察视网膜中TNF-α的表达。结果在第5天,各组视网膜切片中突破内界膜的新生血管内皮细胞核数及视网膜TNF-α的表达与正常对照组比较,无明显变化;在第10天,高氧诱导组和高氧对照组视网膜突破内界膜的新生血管内皮细胞核数明显增多,高氧雌激素组则明显减少。免疫组织化学显示高氧诱导组和高氧对照组视网膜中TNF-α的表达增强,而高氧雌激素组则明显减弱。结论在高氧诱导新生鼠视网膜病变中,TNF-α在视网膜上的表达增强,雌激素可抑制视网膜新生血管形成,对TNF-α的抑制可能是其机制之一。     

miR-20a-5p调节VEGF通路在氧诱导视网膜病变小鼠模型中的作用机制

目的探讨微小RNA(miR)-20a-5p调节血管内皮生长因子(VEGF)通路在氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠中的作用机制。方法实验分为正常组、模型组、高氧对照组、miR-20a-5p高表达组,每组24只。除正常组外,其余组小鼠在出生后第7天置于氧浓度(75.00±2.00)%氧箱中建立OIR小鼠模型,连续高氧环境5 d后置于常氧中饲养。高氧环境结束前1 d,高氧对照组玻璃体腔内注射1μL磷酸缓冲盐溶液(PBS),miR-20a-5p高表达组玻璃体腔内注射1μL miR-20a-5p激动剂(miR-20a-5p agomir)(1μmol/L),模型组不进行任何处理。正常组一直置于空气中正常饲养。高氧结束后各组小鼠正常空气再饲养5 d进行实验。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测视网膜组织miR-20a-5p、VEGF、血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1、VEGFR-2表达情况;视网膜铺片观察视网膜血管形态;苏木精-伊红(HE)染色计数视网膜新生血管内皮细胞核情况;免疫组化检测视网膜组织中VEGF阳性细胞情况。结果模型组和高氧对照组在出生第17天自视盘向周围发出的放射状大血管迂回、不规则扩张,出现大量新生血管,且新生血管结构及分布紊乱,周边毛细血管网闭塞; miR-20a-5p高表达组相较模型组和高氧对照组在出生第17天自视盘向周围发出的放射状大血管迂回不明显,血管不规则扩张现象减轻,新生血管明显减少。与正常组相比,模型组、高氧对照组视网膜组织中miR-20a-5p水平降低(P0.05),视网膜血管内皮细胞核数量、VEGF蛋白阳性面积百分比、视网膜组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2 mRNA表达水平升高(P0.05);分别与模型组、高氧对照组相比,miR-20a-5p高表达组视网膜组织中miR-20a-5p水平升高(P0.05),视网膜血管内皮细胞核数量、VEGF蛋白阳性面积百分比、视网膜组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2mRNA表达水平降低(P 0.05)。结论升高miR-20a-5p可抑制VEGF通路从而减少OIR小鼠视网膜血管新生,实现对OIR小鼠视网膜的保护。     

alpha-晶体蛋白在氧诱导小鼠视网膜病变中的表达

目的:建立氧诱导视网膜病变小鼠动物模型,研究alphaA-和alphaB-晶体蛋白在其视网膜组织中的mRNA定量表达及定位分布特点。方法:选取34只C57/BL小鼠于出生后7 d(P7)置于(75±5)%高氧状态下饲养5 d,后回到正常环境中;另选取34只同日龄幼鼠作为正常对照组。采用荧光素血管灌注及视网膜铺片法观察视网膜血管形态;并行Real time RT-PCR检测alphaA-和alphaB-晶体蛋白mRNA在氧诱导模型鼠和正常视网膜组织中表达水平,免疫荧光方法检测这两种晶体蛋白在视网膜组织中的定位分布情况。结果:实验组鼠的视网膜血管形态特征为相对低氧状态下5 d后(P17)在其视网膜中周部有血管区和无血管区交界处大量新生血管形成,出现周边渗漏。实验组alphaA-晶体蛋白mRNA在视网膜组织中的表达为先降低后升高的趋势,差异具有统计学意义(F=220.378,P<0.01);实验组alphaB-晶体蛋白的表达呈现逐渐升高的趋势,但差异无统计学意义(F=0.895,P>0.05)。两种alpha-晶体蛋白阳性细胞均表达在神经节细胞、内核及外核细胞层。结论:在氧诱导视网膜病变小鼠视网膜组织中,alphaA-和alphaB-晶体蛋白在视网膜组织中表达具有时空依赖性。     

地塞米松抑制视网膜新生血管及血管内皮生长因子表达的实验研究

目的:研究地塞米松(Dexamethasone)在小鼠血管增生性视网膜病变中不同时期的给药效果,及其与血管内皮生长因子(VEGF)的相互作用。方法:将20只7 d龄C57BL/6J幼鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、早治疗组和晚治疗组。除对照组外,均建立高浓度氧气诱导的C57BL/6J幼鼠增殖性视网膜病变模型。后2组分别于出生后第7d和第12d起连续5d皮下注射地塞米松注射液(0.5mg/kg.d-1)。17d龄时取幼鼠双眼球作普通病理切片及免疫组化检测,分别检测视网膜新生血管芽内皮细胞核数目及VEGF的表达。结果:模型组视网膜新生血管芽内皮细胞核数目及VEGF的表达较正常对照组明显增加(P<0.01);早治疗组与晚治疗组的视网膜新生血管芽内皮细胞核数目和VEGF表达,较模型组均明显减少(P<0.01);早治疗组较晚治疗组也明显减少(P<0.01)。结论:在氧诱导的血管增生性视网膜病变模型中,地塞米松可以抑制视网膜新血管形成和VEGF的表达,而且病变早期应用地塞米松治疗效果明显优于晚期。